Memoria para optar al título de Bioquímica / La función del ovario es regulada por dos ejes: El Hipotálamo-Pituitaria-Ovario (HPO) y el Sistema Nervioso Simpático (SNS). Hoy se sabe que la regulación ejercida por el SNS, a través del nervio ovárico superior (SON) es tan importante como la vía endocrina regulada por el eje HPO. Es más, durante el envejecimiento reproductivo y en algunas condiciones patológicas, la vía simpática toma un rol protagónico. En la actualidad, la mujer posterga la maternidad hacia el periodo de subfertilidad lo que hace necesario investigar los procesos que ocurren a nivel local en el ovario durante este periodo con el propósito de aumentar el éxito de los programas de fertilización in vitro y/o bien retrasar el inicio de la subfertilidad. En el periodo de subfertilidad la actividad del SNS se encuentra espontáneamente aumentada, lo que se ha correlacionado con alteraciones en el desarrollo folicular y disminución de la fertilidad. En estudios en modelo de rata fértil, donde se induce un aumento de la actividad simpática, se ha demostrado que se altera la funcionalidad ovárica y que la simpatectomía quirúrgica permite revertir este efecto. Por otro lado, se ha demostrado que el ovario de rata fértil, tiene cierta plasticidad, dada por su capacidad de recuperar la inervación a los 28 días después de la simpatectomía. Sin embargo, se desconoce si durante el periodo de subfertilidad (8-12 meses de edad de la rata) el ovario aún conserva esta capacidad. Teniendo en consideración estos antecedentes es que se ha planteado la siguiente hipótesis: “El ovario recupera la inervación simpática después de la simpatectomía bilateral del nervio ovárico superior durante el periodo de subfertilidad de la rata”. El objetivo general de este trabajo fue evaluar la recuperación de la inervación simpática en el ovario en ratas de 5 meses (periodo óptimo de fertilidad) y de 9 meses de edad (periodo de subfertilidad), tras la denervación quirúrgica bilateral del SON. Para ello se plantearon los siguientes objetivos específicos: 1) Evaluar la recuperación de la inervación simpática mediante la determinación de los niveles de NA y NGF en el ovario a los 14 y 28 días post-simpatectomía, tanto en el período fértil como subfértil y 2) Evaluar la relación entre NGF y E2 en el proceso de reinervación mediante la determinación de los niveles séricos del estrógeno a los 14 y 28 días post-simpatectomía del ovario en período fértil y subfértil. Adicionalmente, se registró el peso y ciclicidad estral de las ratas para evaluar otros posibles efectos de la cirugía. Los resultados mostraron que la denervación no afectó la ciclicidad estral de la rata ni los niveles séricos de E2 determinados a los 14 y 28 días post cirugía, en el periodo fértil y subfértil, pero sí hubo variaciones en el contenido de NA y NGF ováricos, aunque de manera diferencial dependiendo del periodo estudiado. A ambas edades, en los grupos sonx14 (14 días post denervación), se observó una disminución importante en el contenido de NA (cercana al 60 %), sin embargo, mientras el grupo sonx28 de 5 meses de edad recuperó el contenido de la catecolamina en torno al 90%, el grupo de 9 meses de edad sólo recuperó el 60%, en comparación a sus respectivos grupos sham. En cuanto a NGF, en las ratas fértiles se observó una tendencia al aumento en el grupo sonx14, mientras que en las ratas subfértil hubo un aumento significativo en el grupo sonx28. El análisis de los resultados, sugiere que en edad fértil (5-6 meses de edad de la rata), el ovario es capaz de recuperar la inervación y que el proceso tomaría alrededor de 28 días, pero durante el periodo subfértil (9-10 meses de edad de la rata), el ovario responde tardíamente a la denervación, permaneciendo la interrogante de si una eventual reinervación ocurre y en caso de efectuarse si es total o parcial / The function of the ovary is regulated by two axes: The Hipothalamus-Pituitary-Ovary (HPO) and the Sympathetic Nervous System (SNS). Today, it is known that the regulation exerted by the SNS, through the Superior Ovarian Nerve (SON) is as important as the endocrine pathway regulated by the HPO axis. Moreover, during the reproductive aging and in some pathological conditions, the ovarian sympathetic system takes a protagonist role. Currently, women postpone motherhood to the period of subfertility which makes it necessary to investigate the processes that occur at the local level in the ovary during this period in order to increase the success of in vitro fertilization programs and/or delay the onset of subfertility. In the period of subfertility the activity of the SNS is spontaneously increased, which has been correlated with alterations in the follicular development and decrease in fertility. Studies in fertile rat model, where an increase in sympathetic activity is induced, it has been demonstrated that ovarian functionality is altered and the surgical sympathectomy allows to reverse this effect. On the other hand, it has been shown that the fertile rat ovary has a certain plasticity, given its ability to recover the innervation 28 days after the sympathectomy. However, it is unknown if during the period of subfertility (8-12 months of age of the rat) the ovary still retains this capacity. Taking this background into consideration, the following hypothesis has been stated:”The ovary recovers sympathetic innervation after bilateral sympathectomy of the superior ovarian nerve during the period of subfertility in the rat”. The aim of this work was to evaluate the recovery of sympathetic innervation in the ovary in rats of 5 months old (optimal fertility period) and 9 months old (subfertility period), after bilateral denervation of the SON. For this, the following specific objectives were proposed: Determine at 14 (sonx14) and 28 (sonx28) days post-sympathectomy: 1) the recovery of sympathetic innervation by determining the levels of NA and NGF in the ovary and, 2) the possible relationship between NGF and E2 in the reinnervation process by determining the serum levels of the estrogen. Additionally, the weight and cyclicity of the rats were recorded to evaluate other possible effects of the surgery. The results showed that the denervation did not affect the estrous cyclicity of the rat, nor the plasma levels of Estradiol determined at 14 and 28 days after surgery in the fertile and subfertile periods. But there were variations in the content of NA and NGF ovarian, although differentially depending on the period studied. At both ages, in the groups sonx14 (14 days after denervation), a significant decrease in NA content was observed (close to 60%), however while sonx28 group of 5 months old recovered the content of catecholamine around the 90% , the group of 9 months old only recovered the 60% compared to their respective sham groups . As to NGF in the fertile rats a tendency to increase was observed in the sonx14 group, while in the subfertile rats there was a significant increase in the sonx28 group. The analysis of the results suggest that in fertile age (5-6 months of age of the rat), the ovary is able to recover the innervation and that the process would take around 28 days, but during the subfertile period (9-10 months of age of the rat), the ovary responds late to the denervation, remaining the question of whether an eventual reinnervation occurs and if is carried out totally or partially / Fondecyt 1120147

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El hiperadrenocorticismo dependiente de hipófisis o Enfermedad de Cushing en caninos, es una enfermedad endocrina que afecta a perros de mediana a avanzada edad y que es consecuencia de la cronicidad de niveles excesivos de cortisol producidos por la corteza adrenal. Se produce por una hiperestimulación de la glándula, comandada por una hipersecreción de ACTH a nivel hipofisiario. Estos pacientes habitualmente padecen comorbilidades debido a patologías de mayor frecuencia en canes seniles y/o a las complicaciones del hipercortisolismo. El tratamiento más ampliamente aceptado es el farmacológico, que tradicionalmente buscó disminuir los niveles de cortisol producidos en la glándula adrenal sin controlar el tamaño del tumor, con los riesgos de daño cerebral que ello implica. En esta línea, la farmacoterapia aún vigente es el mitotano, trilostano y ketoconazol, siendo el trilostano el que presenta un mayor uso debido a que proporciona una esperanza de vida, al menos igual al mitotano, y una menor prevalencia de efectos adversos. Adicional a esta opción terapéutica, en los últimos 10 años la investigación científica ha buscado fármacos que actúen a nivel central y que controlen tanto el tamaño del tumor como los niveles de cortisol. De este modo se intenta mejorar el pronóstico aumentando la sobrevida, disminuyendo la presentación de efectos adversos y la probabilidad de presentar signos neurológicos. Es así como actualmente existen estudios que proponen el uso de ácido retinoico, cabergolina y pasireotida, la cual además ha sido estudiada conjuntamente al uso de fármacos de acción adrenal. Estas drogas si bien requerirán de mayores estudios en el área, debido a la baja presentación de efectos adversos en perros y los prometedores resultados obtenidos, se vuelven una opción terapéutica a considerar. Finalmente, de acuerdo con la información recopilada en este trabajo sobre cada droga, respecto a sus pros y contras, se propone un algoritmo de tratamiento para la Enfermedad de Cushing, que involucre la presencia de comorbilidades y que sirva de orientación a la hora de decidir un tratamiento médico. Éste debe incluir la instrucción del propietario respecto a riesgos de la terapia y debe considerar que, ante la inexperiencia y conocimiento limitado de cada droga, el tratamiento debe ser prudente en términos de dosis y monitoreo de un paciente crónico. / Canine pituitary dependent hyperadrenocorticism or Cushing's disease is an endocrine disorder of the middle-aged or older dogs. It is consequence of the excessive levels of cortisol produced chronically by adrenal cortex. It is produced because of the gland hyperstimulation, commanded by an hypersecretion of ACTH by pituitary gland. These patients frequently suffer comorbidities due to other pathologies, presented mostly in older dogs or by complications of hypercortisolism. The most widely accepted treatment for Cushing's disease is the pharmacological, which traditionally sought to reduce the levels of cortisol produced in the adrenal gland without controlling the size of the tumor, with the risks of brain damage involved. In this line, pharmacotherapy still in use is mitotane, trilostane and ketoconazole, being trilostane the one that presents a greater use because it provides a life expectancy, at least equal to mitotane, and a lower prevalence of adverse effects. In addition to this therapeutic option, in the last 10 years, scientific researching sought to medications which acts at pituitary level and that are able to control both, tumor size and cortisol levels. In this way, researchers are trying to improve the prognosis, increase the survival, reduce the presentation of adverse effects and the probability of presenting neurological signs. This is how there are currently studies that propose the use of retinoic acid, cabergoline and pasireotide. In the case of pasireotide it has also been studied concomitantly with the use of adrenal action drugs. This line of treatment although it will require more studies in the area, due to the low occurrence of adverse effects in dogs and the promising results obtained, they become a therapeutic option to consider. Finally, according to the information collected in this work about each drug, a treatment algorithm for Cushing's disease is proposed, which involves the presence of comorbidities and serves as a guide when deciding on a medical treatment. This should include the instruction of the owner regarding risks of the therapy and should consider the inexperience and limited knowledge of each drug, for which treatment should be prudent in terms of dose and monitoring of a chronic patient.

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: A superovulação é uma biotécnica utilizada nos programas de transferência de embrião e proporciona diversos benefícios devido ao maior número de ovulações por ciclo. Entretanto, os protocolos superovulatórios na espécie equina ainda não são utilizados rotineiramente, pois apresentam resultados inconsistentes relacionados a baixa taxa de recuperação embrionária frente ao número de ovulações, estando muito aquém do esperado quando comparado a espécie bovina. Atualmente, sabe-se que uma das possíveis causas responsáveis por este fato pode estar relacionada pela formação de grandes coágulos de sangue obstruindo a fossa da ovulação, dificultando assim a captação do oócito para o interior da tuba uterina. Desta forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da utilização de dois tipos de anticoagulantes parenterais (heparina não fracionada - HNF e heparina de baixo peso molecular - HBPM) em éguas superovuladas com extrato de pituitária equina (EPE), sobre a posterior taxa de recuperação embrionária. Foram utilizados quatro ciclos estrais de 11 éguas, sendo subdivididos em quatro grupos: Grupo 1 (G1) utilizado como controle; Grupo 2 (G2) receberam 25 mg de EPE intramuscular (IM) a cada 12 horas sendo a primeira e a terceira administração associada a 5 mg de dinoprost-trometamina (IM) e solução fisiológica 0,9% única aplicação 35 horas após indução da ovulação; Grupo 3 (G3) foi utilizado mesmo protocolo superovulatório, sendo substituído a solução fisiológica por um dos anticoag... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Superovulation is a biotechnic from embryo transfer programs providing several benefits due to the higher number of ovulations per cycle. However, superovulation protocols in the equine species are not yet routinely used, as they present inconsistent results related to the low embryonic recovery rate concerning the number of ovulations, being far below expectations when compared to the bovine species. Currently, one of the possible causes responsible for this fact may be related to the development of large blood clots obstructing the ovulation fossa, making it difficult to capture the oocyte into the fallopian tube. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of two types of parenteral anticoagulants (unfractionated heparin - HNF and low molecular weight heparin - LMWH) on equine pituitary extract (EPE) superovulated mares of embryonic recovery. Four estrous cycles of 11 mares were used and subdivided into four groups: Group 1 (G1) as a control; Group 2 (G2) received 25 mg intramuscular EPE (MI) every 12 hours being the first and third administration associated with 5 mg dinoprost-tromethamine (IM) and 0.9% saline only application 35 hours after ovulation induction; Group 3 (G3) in the same superovulation protocol, replacing the physiological solution with one of the anticoagulants, Sodium Heparin 450 IU / kg / IV, and Group 4 (G4) where the mares were superovulated by the same protocol mentioned above and received 1 mg. / Kg / IV of Enoxaparin Sodium. All animals were... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre