El transporte existente entre la madre y feto es vital para el desarrollo de éste. La preeclampsia (PE) es una enfermedad que afecta múltiples funciones, entre ellas la de transporte. Hasta la fecha se han realizado pocos estudios sobre las alteraciones del transporte en la placenta con PE. El objetivo del presente estudio es comparar las corrientes totales en el ovocito de Xenopus laevis transplantado con membrana apical (MVM) proveniente de Sincicitrofoblasto (STP) normal y preeclámptico, donde el responsable de estas corrientes es el maxi-canal de cloruro, para así contribuir a establecer un modelo de transporte transplacentario en el embarazo normal y sus alteraciones en la preeclampsia. Se obtuvieron corrientes superiores en ovocitos inyectados con MVM preeclámptica, seguidas por las corrientes evocadas en ovocitos inyectados con MVM normal y las más bajas corrientes fueron obtenidas por los controles, evidenciando incorporación funcional de los canales exógenos y sugiriendo una alteración en los canales provenientes de la placenta preeclámptica.

El objetivo principal de esta tesis consistió en optimizar y validar un protocolo de maduración in vitro (MIV) de ovocitos profase I (PI), con el fin de obtener mayor proporción de ovocitos maduros en las técnicas de reproducción asistida (TRA). Las condiciones de cultivo son claves en el proceso de MIV ovocitaria y los medios empleados deben proporcionar los requisitos energéticos y metabólicos necesarios. En este estudio se analizó la eficacia de distintos medios comerciales de cultivo embrionario, así como la influencia de componentes suplementados en la maduración de ovocitos PI denudados procedentes de ciclos estimulados. El trabajo de tesis se desarrolló en dos fases experimentales: 1) En la primera parte del estudio se valoró la tasa de maduración, potencial de activación y capacidad de desarrollo embrionario hasta blastocisto de los ovocitos metafase II (MII) obtenidos de cada grupo. Nuestros resultados confirman que los ovocitos PI son capaces de progresar en la meiosis hasta MII de manera similar en los diferentes sistemas de cultivo estudiados. Además, los ovocitos maduros obtenidos adquirieron similar capacidad de estímulo de activación partenogenota, independientemente del medio de incubación. No obstante, la competencia de desarrollo embrionario de los ovocitos madurados in vitro en medio SAGE 1-STEP es significativamente superior que aquellos cultivados el CCM y Sydney IVF Blastocyst médium. También se determinó la influencia de la posición de la vesícula germinal (VG) en la maduración ovocitaria, siendo favorable la localización periférica. En cambio, no se observó ningún efecto en función de la presencia/ausencia de células de la granulosa del cúmulo en la maduración ovocitaria. 2) En la segunda fase de estudio, se estudió la calidad de los ovocitos tras la MIV en base a la estructura del huso meiótico mediante marcaje inmunocitoquímico. No se encontró variación en la conformación del huso y la distribución de cromosomas en la placa metafásica según el medio comercial utilizado.

Durante la fertilización el núcleo del espermatozoide queda inmerso en el citoplasma del ovocito, y seguidamente, se transforma en el pronúcleo masculino. La formación del pronúcleo masculino se refiere al proceso de recambio de las proteínas básicas (polipéptidos especializados) que compactan el DNA (cromatina espermática) por histonas de tipo somático y/o embrionarias. Éste recambio es un prerequisito para que la interacción (recombinación) entre ambos genomas parentales ocurra a fin de generar una cromatina potencialmente activa. De forma habitual, estos cambios bioquímicos que se producen durante la remodelación de la cromatina espermática son referidos al proceso de descondensación del núcleo espermático.En particular, la remodelación de la cromatina del espermatozoide de Xenopus laevis ha sido ampliamente estudiada. En ovocitos y huevos de Xenopus se ha demostrado que la nucleoplasmina (NPL) es responsable de remover y recambiar las proteínas específicas (X e Y) del núcleo espermático por las histonas somáticas H2A y H2B siendo el resultado la reconstitución de una cromatina somática en el pronúcleo masculino. Por otro lado, la NPL es activa en remodelar la cromatina de los espermatozoides de diversas especies, tales como: Drosophila, algunos invertebrados marinos (es el caso de Mytilus y Spisula), peces (Salmón y Caballa), e incluso es capaz de remodelar la cromatina del espermatozoide humano. En Drosophila, Mytilus y Spisula se han identificado las proteínas responsables de la descondensación de la cromatina espermática de sus respectivas especies. La caracterización de éstas proteínas establece similitud con la NPL de Xenopus y por esta razón han sido referidas como NPL-like. Sobre estos antecedentes se ha planteado que la NPL de Xenopus tendría un rol funcional universal y sería el modelo de molécula responsable de la remodelación de la cromatina del espermatozoide.Dependiendo de la naturaleza de las proteínas específicas o especializadas que se asocian al DNA para su compactación; la cromatina espermatica puede organizarse entre dos tipos extremos: como núcleohistona (las proteínas especializadas son histonas o histonas modificadas) o como núcleoprotamina (las proteínas especializadas son del tipo de las protaminas). Entre estos dos tipos, la cromatina espermática puede organizarse en una amplia variedad de formas considerando que los polipéptidos especializados corresponde a un grupo de proteínas diversas; éstos tipos de cromatina podrían ser referidos a un amplio grupo intermedio. Considerando éste breve análisis sobre la organización de la cromatina espermática es evidente que el modelo de la remodelación de la cromatina espermática mediada por la NPL o NPL-like ha sido planteado sobre la remodelación de la cromatina espermática del tipo núcleoprotamina. Un antecedente adicional se refiere al hecho que la NPL es muy poco eficiente en remodelar la cromatina espermática de Rana catesbeiana, la cual corresponde a un tipo de cromatina organizada como núcleohistona. En base a estas consideraciones, el objetivo de está Tesis fue determinar la presencia de una molécula tipo NPL en los ovocitos de Holothuria tubulosa (Echinodermata), la cromatina espermática de ésta especie se organiza en forma de núcleohistona con la presencia adicional de una proteína específica denominada 0. La hipótesis general que se plantea es que los mecanismos y las moléculas responsables de la remodelación de la cromatina espermática deben ser diferentes dependiendo del tipo de organización de la cromatina del espermatozoide.Los resultados demuestran que los extractos de ovocitos de Holothuria tubulosa exhaustivamente fraccionados no contienen NPL o NPL-like. Pero alternativamente identificamos y caracterizamos en forma parcial una proteína que funcionalmente in-vitro es responsable de la remoción de la proteína específica 0 del núcleo espermático, y en ésta situación produce descondensación de la cromatina del espermatozoide. Ésta proteína ha sido denominada PR0 por su actividad funcional como proteína que remueve la 0 espermática. Por otro lado, la NPL de Xenopus es incapaz de remodelar la cromatina del espermatozoide de Holothuria tubulosa, pero es capaz de remodelar la cromatina espermática que contiene protamina típica (núcleoprotamina). Por lo contrario, la PR0 no remodela la cromatina de tipo núcleoprotamina.La conclusión principal de la Tesis es que el ovocito de Holothuria tubulosa debe poseer un mecanismo de remodelación de su cromatina espermática diferente y alternativo al descrito en Xenopus laevis. Los mecanismos de remodelación de la cromatina espermática podrían estar relacionados con las proteínas especializadas que organizan la cromatina del núcleo del espermatozoide. Por último, la carencia de NPL o NPL-like en los ovocitos de Holothuria tubulosa cuestionan el rol universal asignado a la NPL como molécula responsable de la remodelación de la cromatina del espermatozoide. / The sperm nucleus following fertilization remains into the egg cytoplasm, and subsequently, it results in sperm nuclear decondensation and formation of a functional male pronucleus. This includes the replacement of sperm nuclear basic proteins (specialized polypeptides) involved in DNA condensation in sperm nuclei (spermatic chromatin) by somatic and/or embryonic histones. This event is a prerequisite so that the interaction (recombination) among both parental genomes occurs in order to generate a functional chromatin. In a customary way, these biochemical changes that are produced during the remodeling of the spermatic chromatin are associated to the process of decondensation of the spermatic nuclei.In particular, the remodeling of the sperm chromatin of Xenopus laevis has been widely studied. In oocytes and eggs of Xenopus has been demonstrated that nucleoplasmin (NPL) is responsible for removal and replacement of the specific proteins (X and Y) of the spermatic nuclei by somatic H2A and H2B histones being the result the reconstitution of a somatic chromatin in the male pronuclei. On the other hand, NPL is active in remodeling the sperm chromatin of various kinds, such as: Drosophila, some marine invertebrates (as is the case of Mytilus and Spisula), fish (Salmon and Mackerel), and even it is able to remodel the human sperm chromatin. In Drosophila, Mytilus and Spisula have been identified the responsible proteins for the sperm chromatin decondensation of their respective kinds. The characterization of these proteins establishes similarity with the NPL of Xenopus and for this reason have been considered as NPL-like. On these precedents it has been suggested that the NPL of Xenopus would have a universal functional role and would be the responsible molecule for remodeling the sperm chromatin.Depending on the nature of the specialized or specific proteins that are associated to the DNA packing; the sperm chromatin can be organized in two extreme types: as nucleohistone (the specialized proteins are histones or modified histones) or as nucleoprotamine (the specialized proteins are of the type of the protamines). Among these two types, the spermatic chromatin can be organized in a wide variety considering that the specialized polypeptides correspond to a group of diverse proteins; these types of chromatin could be referred to as a wide intermediate group. Taking into account this short analysis on the organization of the sperm chromatin is evident that the remodeling model of the sperm chromatin mediated by the NPL or NPL-like it has been based on the remodeling of the spermatic chromatin of the type nucleoprotamine. An additional precedent is referred to cause that the NPL is very little efficient in remodeling the sperm chromatin of Rana catesbeiana, the which one corresponds to a form of chromatin organized as nucleohistone.By these considerations, the purpose of this Thesis was determined the presence of a molecule type NPL in the Holothuria tubulosa (Echinodermata) oocytes, the spermatic chromatin of this kind is organized in the form of nucleohistone with the additional presence of a specific protein named 0. The general hypothesis is that the mechanisms and the responsible molecules for the remodeling of the sperm chromatin should be different depending on the type on organization on the sperm chromatin.The results demonstrate that the extracts of Holothuria tubulosa oocytes thoroughly fractioned do not contain NPL or NPL-like. But alternatively we identify and characterize in partial form a protein that functionally in-vitro is responsible for the removal of the specific protein 0 of the spermatic nuclei, and in this situation produces decondensation of the sperm chromatin. This protein has been termed PR0 due to its functional activity as a protein that removes the spermatic 0. On the other hand, the NPL of Xenopus is unable to remodel the sperm chromatin of Holothuria tubulosa, but it is able to remodel the sperm chromatin that contains typical protamine (nucleoprotamine). On the contrary, the PR0 does not remodel the chromatin of the type nucleoprotamine.The essential conclusion of the Thesis is that the Holothuria tubulosa oocyte must possess a remodeling mechanism of its sperm chromatin different and alternative that to described for Xenopus laevis. The remodeling mechanisms of the sperm chromatin could be related to the specialized proteins that organize the sperm chromatin. Finally, the lack of NPL or NPL-like in the Holothuria tubulosa questions the universal role assigned to the NPL as responsible molecule for the remodeling of the sperm chromatin.

Con el presente trabajo se ha pretendido investigar la influencia de diversos factores relacionados con el cocultivo de los gametos porcinos, sobre los resultados de la fecundación" in vitro" (AV), fundamentalmente con la intención de mejorar la eficacia actual del sistema de AV en cuanto a la consecución de embriones viables (fecundaciones monospérmicas). Para ello, se han utilizado 129 hembras porcinas prepúberes a las que se indujo la ovulación mediante un tratamiento con 1250 U.I. de PMSG y 750 U.I. de HCG. El tratameinto empleado resultó eficaz para los fines perseguidos en un 80'62% de las hembras y el número medio de ovocitos recogidos fue de 19'07 + 1'52 por animal, utilizándose un total de 1984 ovocitos.En relación a las condiciones del sistema de fecundación, el primer factor investigado ha sido el tiempo de cocultivo, entendido como tiempo de contacto entre los gametos. En las dos experiencias realizadas, utilizando tiempos de 4, 6 u 8 horas (experiencia la), o de 1, 2, 3 ó 4 horas (experiencia lb), los mejores resultados se obtuvieron tras 4 horas de cocultivo, ya que los porcentajes de penetración de mantuvieron altos con respecto al máximo alcanzado a las 8 horas (82,68 vs. 93,96%), mientras que los de monospermia no disminuyeron excesivamente con respecto a los obtenidos con tiempos de cocultivo menores, teniendo en cuenta que la concentración de espermatozoides empleada fue intencionadamente elevada (12 x 105 esp/ml). El segundo factor analizado fue la concentración espermática. Se utilizaron concentraciones de 3, 6 y 12 x 105 esp vivos/ml, deduciéndose de los resultados que la mayor efectividad en nuestro sistema correspondía a la concentración de 6 x lO 5 esp/ml, ya que los porcentajes de penetración fueron significativamente diferentes a los obtenidos con la concentración espermática más alta (71'62% vs. 76'83%), y los porcentajes de monospermia tampoco se diferenciaron de los obtenidos con la concentración espermática más baja (62'26 vs. 68'08%). El tercer factor estudiado ha sido la influencia de la presencia o ausencia en el medio de cocultivo del "cumulus" expandido que acompaña al ovocito en la ovulación. Por los resultados obtenidos, se puede pensar que la presencia estas células junto con la correspondiente matriz intrecelular de ácido hialúrico es altamente beneficiosa para la mejora del rendimiento de la FIV debido a que los porcentajes de penetración en los ovocitos denudados (53'69 fueron menores (p<0'0l) que los obtenidos en los ovocitos con "cumulus" (69'10%), mientras que los porcentajes de monospermia fueron superios (p < 0'01) en el segundo caso (39'45% vs. 60'97%). Por último, se ha investigado el efecto de la reducción del volumen medio de cocultivo más comúnmente utilizado (2 mI) a otro menor (0'4 n obteniéndose resultados equivalentes en ambos casos para los porcentajes penetración, pero mayores porcentajes de monospermia (p<0'05) con volumen de 0'4 mI (57'53% vs. 78'12%). Del conjunto de los resultados se deduce que los porcentajes de penetración y polispermia en la AV porcina son consecuencia de la influencia de diferentes factores, entre los que se encuentran el tiempo de cocultivo, concentración espermática, la presencia del "cumulus oophorus" y el volumen de medio de cocultivo utilizados. / In the present work, we have investigated the influence of differen factors, related to porcine gametes coculture, on the results of "in vitro" fertilization (IVF). We have try to improve the efficiency of the current system to get viable embryos (monospermic fertilizations). 129 prepuberal gilts have been used after the induction of ovulation by administration of 1250 I.U. of PMSG followed, 55 hours later, by 750 I.U. of HCG. The results showed that the best moment for the recovery of oocytes was 44 h after HCC administration. In the same way, the treatment followed was effective for the required objectives in 80.62% of the studied females and the medium number of recovered oocytes was 19.07 + 1.52 per animal, giving a total number 01 1984 oocytes used. In relation with the conditions of the fertilization system, the first investigated factor was the coculture time, understanding it as contact time between gametes. To study the effect of this factor, two experiences were realized; fot the first one, 4, 6 or 8 hours of coculture time were used (experience lb) The best results were obtained at 4 hours of coculture, because the percentage of penetration was maintained high (82.68%) and, at the same time, the percentage of monospermy increased (p<O.Ol), although the sperm concentration employed was deliberately high (12 x lOS spx/ml). The second investigated factor was the sperm concentration. The results showed that, among the used concentrations (3, 6 and 12 x lO 5 alive spz/ml), the maximum effectiveness in our system was obtained for the concntration of 6 x lOS spz/ml, since the percentage of penetration was not signficatively different of that obtained with the highest sperm concentration The third studied factor was the influence of the presence or absence of the expanded ."cumulus", which is shed with the oocytes at the ovulation, in the coculture medium. The presence of these cells joined with the intercellular matrix of hialuronic acid was highly beneficious for the improvement of the IVF, because of the percentage of penetration with the denuded oocytes (53.69%) was lower (p<0.01) than that obtained with the .cumulus" enclosed oocytes (69.16%), and the percentage of monospermy was higher (p<0.01) at the second case (39.45% vs. 60.97%). Finally, the percentage of penetration and monspermy was investigated using two different coculture medium volume, one the commonly used by other authors (2 ml) and another minor volume (0.4 mI). The results showed that the percentage of monospermy was higher (p<0.01) with the 0.4 mI volume (57.53 vs.78312%). We may deduce from the total results that the percentages of and monospermy in porcine IVF are due to the influence of different factors, some of them being the coculture time, the sperm concentrarían, the presence of "cumulus". and the coculture medium volume.

La interacción entre gametos es crucial para la fecundación. La zona pelúcida (ZP) se considera responsable de bloquear la polispermia, pero in vitro estas funciones no son totalmente eficientes. La polispermia es frecuente en fecundación in vitro (FIV) en porcino y bovino, mientras que la interacción heteróloga espermatozoide-ovocito ha sido demostrada. Los objetivos fueron estudiar el bloqueo de la polispermia para mejorar los resultados de FIV e investigar las interacciones heterólogas entre espermatozoide humano y ovocito porcino. Los resultados demuestran que se produce endurecimiento de la ZP de ovocitos bovinos y porcinos de forma previa a la fecundación, utilizando DTSP o fluido oviductal bovino. Cuando se utilizan estos ovocitos en FIV aumenta la monospermia y el rendimiento final. En las interacciones heterólogas los espermatozoides humanos pueden unirse a ZP porcina y sufren la reacción acrosómica, pero no penetran los ovocitos sin ZP. En ICSI activan el ovocito y forman pronúcleos. / The interaction between gametes is crucial to fertilization. The zona pellucida (ZP) is responsible to block of polyspermy, but in vitro these functions are not efficient. The polyspermy is frequently in bovine and porcine in vitro fecundation. Besides the heterologous interaction between spermatozoa-oocyte had been described. The aims were study the block of polyspermy to improve the output of IVF and research the heterologous interactions between human spermatozoa and porcine oocyte.The results show that there is hardening of bovine and porcine ZP previously at fertilization, in vivo and using DTSP or bovine oviductal fluid. When these oocytes are used in IVF improve the monospermy and the output. In heterologus interactions the human spermatozoa could bind to porcine ZP and it triggers the acrosome reaction, but not penetration in ZP-free oocyte was observed. In ICSI the oocyte activation and

Para reducir la incidencia de las penetraciones polispérmicas en los sistemas de fecundación in vitro porcina (FIV), los objetivos del presente trabajo fueron estudiar: 1) el efecto de tres volúmenes de medio de coincubación (2, 1 y 0'1 ml) y tres números de ovocitos (50, 30 y 15), inseminados con 6 x 105 espermatozoides /ml (primera experiencia) y 2000:1 espermatozoides:ovocito (segunda experiencia); 2) el efecto de la presencia de células del cumulus durante la FIV de ovocitos inseminados con diferentes ratios espermatozoides:ovocito (2000:1; 3000:1; 4000:1, 6000:1 y 8000:1), en 0'1 ml de medio de fecundación, con 30 ovocitos. Ovocitos madurados in vitro y denudados inseminados con 2000 espermatozoides por ovocito fueron el grupo control; y 3) el efecto de tiempos cortos de coincubación ovocitos-espermatozoides durante la FIV (10, 30 y 60 min) sobre la eficiencia de la FIV porcina. / To decrease the high incidence of polyspermy penetration of porcine oocytes fertilized in vitro (IVF), the aim of this study was to evaluate: 1) the effect of three volume of co-incubation medium (2, 1 and 0.1 ml) and three number of oocytes (50, 30 and 15), inseminated with 6 x l05 sperm/ml (first experience) and 2000:1 spermatozoa:oocyte (second experience); 2) the effect of cumulus cells during IVF of oocytes inseminated with different espermatozoa:oocytes rates (2000: 1, 3000: 1, 4000: 1, 6000: 1 and 8000: 1), in 0.1 ml of volume of IVF medium, with 30 oocytes. Denuded matured oocytes inseminated with 2000 spermatozoa:oocyte were the control group; and 3) the effect of short-times that oocytes are exposed to the sperm during IVF (10, 30 and 60 min) on the efficiency of pig IVF.

La transferencia nuclear de células somáticas (SCNT) en la especie porcina se ha convertido en una herramienta muy útil para para la elaboración de modelos genéticos de enfermedades humanas y para el uso en xenotransplantes. Aunque el número de cerdos clonados aumenta cada año, la eficiencia total de esta tecnología es todavía muy baja. Uno de los pasos más difíciles de la SCNT en porcino es la enucleación del ovocito, principalmente debido a que su citoplasma contiene numerosas gotas lipídicas. El principal objetivo de la tesis fue evaluar el efecto de diversas técnicas para visualizar la placa metafásica y el corpúsculo polar sobre la capacidad de desarrollo de ovocitos porcinos madurados in vitro. / Somatic cell nuclear transfer (SCNT) technology in porcine has become a very useful tool for the elaboration of genetic models for human diseases and the use in xenotransplantation. The efficiency of SCNT is still very low, although the number of cloned pigs increases each year. One of the hardest steps of porcine SCNT is the enucleation of the oocyte because its cytoplasm contains many lipid droplets. The main objective of this thesis was to assess the effect of several approaches to visualize the metaphase II plate and the first polar body on the developmental ability of in vitro mature porcine oocytes.

El presente trabajo de tesis consistió en evaluar el efecto de la adición de Cu durante la maduración in vitro (MIV) de ovocitos bovinos y sus consecuencias en el desarrollo embrionario preimplantacional. Para tal fin, se establecieron los siguientes objetivos: 1) evaluar la asociación entre las concentraciones de Cu en licor folicular y en plasma; 2) estudiar el efecto del Cu sobre la MIV; 3) evaluar el efecto del Cu durante la MIV sobre la capacidad de desarrollo embrionario y 4) determinar el efecto del Cu en la MIV con ovocitos desnudos, con células del cúmulus en cocultivo o de COC completos. Para ello se utilizó como modelo experimental la Producción in vitro (PIV) de embriones bovino. La PIV se realizó con ovocitos obtenidos de ovarios bovinos de frigorífico. Los resultados mostraron que: 1) la concentración de Cu en el licor folicular está determinado por el estatus de Cu en el plasma; 2) el agregado de Cu al medio de MIV incrementó la concentración intracelular de GSH-GSSG en el ovocito y las CC, 3) disminuyó la tasa de apoptosis y el daño en el ADN en dichas células. Además, 4) el agregado de Cu incrementó la tasa de blastocistos y mejoró la calidad de los embriones; y 5) la tasa de blastocistos aumentó independientemente de la presencia de CC durante la MIV. En consecuencia, este estudio sugiere que el Cu actuaría como un factor importante durante la maduración del ovocito bovino favoreciendo el desarrollo embrionario temprano. Además, las evidencias obtenidas sugieren la posible existencia de transportadores de Cu en el complejo ovocito-cúmulus de bovino. / This study evaluated the effect of adding copper (Cu) during bovine in vitro maturation (IVM) on preimplantational embryo development. For this purpose, we established the following objectives: 1) Study the relationship between Cu concentrations in follicular fluids and plasma; 2) Study the effect of different Cu concentrations on IVM of bovine oocytes; 3) Study the effect of different Cu concentrations during IVM on subsequent embryo development to the blastocyst stage; and 5) Study the role of cumulus cells (CC) as metabolic bridge between the external medium and the oocyte. For this end, bovine in vitro embryo production (IVP) was used as experimental model, including IVM, in vitro fertilization and in vitro culture of embryos. The IVP was performed using bovine oocytes obtainer from slaughterhouse. The results showed that: 1) Copper concentrations in follicular fluid depend on Cu plasma concentrations, 2) The addition of Cu to IVM medium increased intracellular GSH-GSSG content in oocytes and CC; 3) The rates of apoptosis and DNA damage, in both oocytes and CC, were reduced when Cu was added to IVM medium; 4) The addition of Cu in IVM medium improved the blastocyst rate and embryo quality; and 5) The percentage of blastocysts was enhanced regardless of the presence of CC during IVM. Consequently, this study indicates that Cu acts as an important factor during bovine oocyte maturation promoting early embryo development. Besides, these results suggest that Cu transporters might exist in bovine cumulus-oocyte complex.

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: A superovulação é uma biotécnica utilizada nos programas de transferência de embrião e proporciona diversos benefícios devido ao maior número de ovulações por ciclo. Entretanto, os protocolos superovulatórios na espécie equina ainda não são utilizados rotineiramente, pois apresentam resultados inconsistentes relacionados a baixa taxa de recuperação embrionária frente ao número de ovulações, estando muito aquém do esperado quando comparado a espécie bovina. Atualmente, sabe-se que uma das possíveis causas responsáveis por este fato pode estar relacionada pela formação de grandes coágulos de sangue obstruindo a fossa da ovulação, dificultando assim a captação do oócito para o interior da tuba uterina. Desta forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da utilização de dois tipos de anticoagulantes parenterais (heparina não fracionada - HNF e heparina de baixo peso molecular - HBPM) em éguas superovuladas com extrato de pituitária equina (EPE), sobre a posterior taxa de recuperação embrionária. Foram utilizados quatro ciclos estrais de 11 éguas, sendo subdivididos em quatro grupos: Grupo 1 (G1) utilizado como controle; Grupo 2 (G2) receberam 25 mg de EPE intramuscular (IM) a cada 12 horas sendo a primeira e a terceira administração associada a 5 mg de dinoprost-trometamina (IM) e solução fisiológica 0,9% única aplicação 35 horas após indução da ovulação; Grupo 3 (G3) foi utilizado mesmo protocolo superovulatório, sendo substituído a solução fisiológica por um dos anticoag... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Superovulation is a biotechnic from embryo transfer programs providing several benefits due to the higher number of ovulations per cycle. However, superovulation protocols in the equine species are not yet routinely used, as they present inconsistent results related to the low embryonic recovery rate concerning the number of ovulations, being far below expectations when compared to the bovine species. Currently, one of the possible causes responsible for this fact may be related to the development of large blood clots obstructing the ovulation fossa, making it difficult to capture the oocyte into the fallopian tube. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of two types of parenteral anticoagulants (unfractionated heparin - HNF and low molecular weight heparin - LMWH) on equine pituitary extract (EPE) superovulated mares of embryonic recovery. Four estrous cycles of 11 mares were used and subdivided into four groups: Group 1 (G1) as a control; Group 2 (G2) received 25 mg intramuscular EPE (MI) every 12 hours being the first and third administration associated with 5 mg dinoprost-tromethamine (IM) and 0.9% saline only application 35 hours after ovulation induction; Group 3 (G3) in the same superovulation protocol, replacing the physiological solution with one of the anticoagulants, Sodium Heparin 450 IU / kg / IV, and Group 4 (G4) where the mares were superovulated by the same protocol mentioned above and received 1 mg. / Kg / IV of Enoxaparin Sodium. All animals were... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre