Submitted by LUIZ EDUARDO CRUZ DOS SANTOS CORREIA null (luiz.edcsc@gmail.com) on 2017-03-21T13:40:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Eduardo.pdf: 1240592 bytes, checksum: ba4f36d46c5fba4f5dd939931b51c4d8 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-03-22T14:38:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 correia_lecs_me_jabo.pdf: 1240592 bytes, checksum: ba4f36d46c5fba4f5dd939931b51c4d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T14:38:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 correia_lecs_me_jabo.pdf: 1240592 bytes, checksum: ba4f36d46c5fba4f5dd939931b51c4d8 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do estudo foi avaliar a endogamia, características reprodutivas e de crescimento de perdizes (Rhynchotus rufescens) em cativeiro. O banco de dados genealógicos era composto pelo registro de 1500 animais nascidos entre 2005 e 2016, no qual avaliou-se os parâmetros populacionais através dos softwares ENDOG v.4.8 e o INBUPGF90. As características reprodutivas e de crescimento avaliadas foram: número de ovos/mês (NO30), peso do ovo (PO), circunferência do eixo longitudinal do ovo (CO), fertilidade, eclodibilidade, qualidade espermática, peso ao nascimento (PN), peso corporal e perímetro de peito (PP) e coxa (PC). A preparação da base de dados e a estatística inicial foram realizadas no software estatístico SAS. O modelo não-linear de Gompertz foi ajustado aos 1300 dados de peso/PP/PC por idade para explicar o crescimento dos animais. Foram criados 8 classes de peso para determinadas idades para análise de variância, sendo elas o peso aos 28 (P28), 56 (P56), 84 (P84), 112 (P112), 140 (P140), 168 (P168), 200 dias (P200) e acima de 300 dias (P>300). Os coeficientes de endogamia (F) calculados pelo ENDOG v.4.8 e INBUPGF90 foram 0,036% e 0,04%, respectivamente. O coeficiente de relacionamento médio (AR), taxa de endogamia (ΔF) e tamanho efetivo com base no ΔF foram de 0,63%, 0,02% e 463,56, respectivamente. O intervalo de geração (IG) médio quando se considera progênies que se tornaram reprodutoras e todas as progênies nascidas foi de 2,39 e 2,17 anos, respectivamente. O número efetivo de fundadores (fe) e ancestrais (fa) na população referência foi de 100 e 93, respectivamente, com 214 indivíduos que explicam a diversidade genética. A média estimada para PO e CO foram 57,3 ± 5,5 g e 15,8 ± 0,65 cm, respectivamente. Foram apresentados 33% de nascimentos, com 44% de fertilidade e 76% de eclodibilidade. Na avaliação do sêmen, os valores médios do volume, concentração espermática, motilidade, vigor, quantidade de defeitos espermáticos e acrossomas não íntegros foram: 64,8 µl, 1600,4 x 106 sptz/ml, 71,2%, 3,5, 39% e 8,4%, respectivamente. Os valores assintóticos e taxas de maturidade estimadas para peso, PP e PC foram respectivamente: 758 g, 23,9 cm, 8,8 cm e 0,0197 g, 0,0164 cm e 0,021 cm. As médias observadas de PN, P28, P56, P84, P112, P140, P168, P200 e P>300 foram 41,2 ± 3,8 g, 139,2 ± 30,9 g, 273,3 ± 60,0 g, 440,1 ± 80,1 g, 558,7 ± 78,7 g, 633,3 ± 71,9 g, 683,8 ± 65,4 g, 724,7 ± 67,6 g e 750,0 ± 82,5 g, respectivamente. As informações desconhecidas de parentesco podem ter influenciado a endogamia. O IG foi grande quando comparado com outras espécies de aves. A pesquisa por fatores como esterilidade de indivíduos e enfermidades deve ser realizada para solucionar a baixa fertilidade. A coleta de sêmen foi possível pelas mesmas técnicas empregadas a outras espécies. Os animais apresentam tempo maior para alcançar o peso adulto quando comparado a outras aves. A mudança de ambiente não apresentou grande influência nos pesos corporais dos animais.

Orientador: Fernando José Zara / Resumo: Os caranguejos aranha pertencentes à superfamília Majoidea possuem grande diversidade de cor, morfologia corpórea e de habitat. A família Mithracidae recentemente foi revisada com base em dados morfológicos e moleculares, sendo assim novos gêneros foram propostos e algumas especiés redistribuídas. O objetivo deste estudo foi descrever a biologia reprodutiva de alguns membros de Mithracidae por meio da ultraestrutura dos espermatozoides e espermatóforos utilizando a microscopia eletrônica de transmissão e varredura, a fim de corroborar hipóteses baseadas em DNA e morfologia existentes para Mithracidae. Assim, os resultados encontrados na espermiotaxonomia mostram que esta é uma ferramenta eficiente para o estabelecimento de relações filogenéticas uma vez que, a morfologia dos espermatozoides, com base no padrão encontrado em Brachyura, permitiu a divisão das espécies entre os gêneros e, desta maneira, corroborou a filogenia molecular mais recente para a família. A histologia do sistema reprodutor masculino e dos receptáculos seminais (RS) de algumas espécies dos gêneros Mithrax, Mithraculus, Damithrax e Omalacantha foi realizada para verificar mecanismos de transferência espermática. A histologia dos receptáculos seminais mostrou que as fêmeas não são formadoras de pacotes espermáticos, já que todo material genético encontra-se misturado no interior do RS, sendo assim impossível identificar se a fêmea copula com mais de um macho. Caso isto ocorra, o esperma é utilizado de mane... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Spider crabs belonging to the superfamily Majoidea possess great diversity of color, body morphology and habitat. The family Mithracidae has recently been revised based on morphological and molecular data, thus new genera have been proposed and some species redistributed. The objective of this study was to describe the reproductive biology of some members of Mithracidae by means of the ultrastructure of spermatozoa and spermatophores using transmission and scanning electron microscopy in order to corroborate the hypotheses based on DNA and morphology existing for Mithracidae. Thus, the results found in spermiotaxonomy show that this is an efficient tool for the establishment of phylogenetic relationships based on the morphology of the spermatozoa, following the pattern found in Brachyura, allowed the division of the species between the genera and, in this way, corroborated the most recent molecular phylogeny for the family. The histology of the male reproductive system and the seminal receptacles (RS) of some species of the genera Mithrax, Mithraculus, Damithrax and Omalacantha were performed to verify mechanisms of sperm transfer. The histology of the seminal receptacles showed that females are not spermpacket forming, since all genetic material is mixed within the RS, thus it is impossible to identify if the female copulates with more than one male. If this occurs, the sperm is used at random during the fertilization process, when the storage organ becomes a large fertiliza... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Erick José Ramo Silva / Resumo: A EPPIN (do inglês, Epididymal peptidase inhibitor), proteína antimicrobiana rica em resíduos de cisteína contendo duas sequências consenso de domínios de inibidores de protease do tipo WFDC e Kunitz, é um alvo farmacológico para o desenvolvimento de novos contraceptivos masculinos devido ao seu papel crítico na motilidade do espermatozoide. O desenvolvimento de fármacos contraceptivos baseados nas funções da EPPIN requer um entendimento mais profundo a respeito dos seus mecanismos fisiológicos e posterior avaliação da eficácia e segurança da potencial droga em modelos pré-clínicos. No presente estudo, investigamos o perfil de expressão da EPPIN em tecidos e em espermatozoides testiculares e epididimários de camundongos e identificamos potenciais proteínas que interagem com a EPPIN no espermatozoide maduro. Para caracterizar o perfil de expressão da EPPIN, processamos órgãos reprodutivos e não-reprodutivos, além de espermatozoides para ensaios de RT-PCR, qPCR, Western blot e imuno-histoquímica/imunofluorescência. Para a identificação dos parceiros de ligação da EPPIN, coletamos espermatozoides do corpo/cauda do epidídimo e incubamos as células com a fração solúvel em tampão fosfato do fluído da glândula seminal dos mesmos animais. Realizamos ensaios de co-imunoprecipitação utilizando anticorpo anti-EPPIN Q20E ou IgG de coelho (controle negativo) para imunoprecipitar a EPPIN e co-imunoprecipitar suas proteínas parceiras, processamos as amostras para digestão de proteínas com t... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: EPPIN (Epididymal peptidase inhibitor), a cysteine-rich antimicrobial protein containing both Kunitz and whey acidic protein (WAP)-type four disulfide core protease inhibitor consensus sequences, is a target for the development of new male contraceptive drugs due to its critical role in sperm motility. The development of contraceptive drugs based on EPPIN functions requires a deeper understanding on its physiological roles and further evaluation of efficacy and safety of the potential drug with preclinical models. Herein, we investigated the expression profile of EPPIN in tissues and in spermatozoa from testis and epididymis and identified potential proteins that interact with EPPIN in mature sperm. To characterize the expression profile of EPPIN, we processed reproductive and non-reproductive organs, as well as spermatozoa for RT-PCR, qPCR, Western blot and immunohistochemistry/immunofluorescence assays. For the identification of potential EPPIN’s partners, we collected spermatozoa from the corpus/cauda epididymis and incubated them with the phosphate-soluble fraction of seminal vesicle fluid from the same animals. Then, we performed co-immunoprecipitation assays using anti-EPPIN Q20E antibody or rabbit IgG (negative control) to immunoprecipitate EPPIN and co-immunoprecipitate its partner proteins, processed samples for trypsin protein digestion and identified tryptic peptides by mass spectrometry (LC-MS/MS). Our results showed that the Eppin is an androgendependent gene, ab... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

L'objectiu d'aquest treball és l'avaluació dels efectes que té el procés de congelació-descongelació en diferents estructures de l'espermatozoide porcí, com ara l'estructura nuclear, la funció mitocondrial i l'estructura subpoblacional espermàtica. En el primer estudi es va comprovar l'efecte de la congelació-descongelació sobre l'estructura nuclear de l'espermatozoide porcí. El procés de congelació-descongelació no va causar trencament de l'ADN però sí que va provocar una desestabilització dels complexes protamina-1-ADN. Aquesta desestabilització ja es va començar a fer evident en les mostres refrigerades a 5 ºC, demostrant que és la fase de refrigeració fins a 5 ºC una de les més letals durant la congelació d'espermatozoides porcins. En el segon treball es van avaluar els canvis que pateix l'estructura subpoblacional mòtil del semen de porc durant el procés de congelació-descongelació, tenint en compte la congelabilitat dels ejaculats, a més de l'activitat mitocondrial i la formació d'espècies reactives de l'oxigen (ROS) d'origen mitocondrial. Així, es van observar 4 subpoblacions mòtils en tots els tractaments (fresc i congelat-descongelat) i totes les congelabilitats (bons, moderats i mal congeladors) estudiades. La resposta de molts dels paràmetres de motilitat estudiats després de la congelació-descongelació, va ser molt diferent en el semen dels mals congeladors en comparació amb els bons congeladors. A més, en l'estudi de l'activitat mitocondrial es va observar que les mostres dels mals congeladors eren les que presentaven una activitat mitocondrial més baixa. Finalment, en el tercer treball es va estudiar l'efecte de la criopreservació sobre la funció mitocondrial de l'espermatozoide porcí. Es va avaluar l'activitat mitocondrial juntament amb el ritme de formació de ROS d'origen mitocondrial, així com l'expressió i la localització de dues proteïnes importants en la funció mitocondrial, la mitofusina-2 (Mfn-2) i l'actina. Es va observar que tant l'activitat mitocondrial com la formació de ROS disminuïen amb la congelació amb un descens inicial en la refrigeració. A més, també es van observar canvis en l'expressió i localització tant de la Mfn-2 com de l'actina, que ja es van fer aparents en la refrigeració. En conclusió, aquests estudis han demostrat que la majoria dels danys provocats pel procés de congelació-descongelació s'inicien durant la refrigeració a 5 ºC, sent aquest pas molt important per a la supervivència espermàtica. El procés de congelació-descongelació provoca desestructuració nuclear, sense arribar a provocar el trencament nuclear, així com canvis en l'estructura de subpoblacions espermàtiques mòtils, sent aquests canvis més evidents en ejaculats amb baixa qualitat en la congelació. Finalment, la congelació-descongelació provoca una disminució de l'activitat mitocondrial deguda a canvis en l'expressió i localització de proteïnes que regulen la funció mitocondrial. / El objetivo de este trabajo es el de evaluar los efectos que tiene el proceso de congelación-descongelación en diferentes estructuras del espermatozoide porcino, como la estructura nuclear, la función mitocondrial y la estructura subpoblacional espermática. En el primer estudio se comprobó el efecto de la congelación-descongelación sobre la estructura nuclear del espermatozoide porcino. El proceso de congelación-descongelación no causó fraccionamiento del ADN, pero sí que provocó una desestabilización de los complejos protamina-1-ADN. Esta desestabilización ya se empezó a hacer evidente en las muestras refrigeradas a 5 ºC, demostrándose que es la fase de refrigeración hasta 5 ºC una de las más letales durante la congelación de espermatozoides porcinos. En el segundo trabajo se evaluaron los cambios que sufre la estructura subpoblacional mótil del semen de cerdo durante el proceso de congelación-descongelación, teniendo en cuenta la congelabilidad de los eyaculados, además de la actividad mitocondrial y la formación de especies reactivas del oxigeno (ROS) de origen mitocondrial. Así, se observaron 4 subpoblaciones mótiles en todos los tratamientos (fresco y congelado-descongelado) y todas las congelabilidades (buenos, moderados y malos congeladores) estudiadas. La respuesta de la mayoría de los parámetros de motilidad estudiados después de la congelación-descongelación, fue muy diferente en el semen de los malos congeladores en comparación con los buenos congeladores. Además, en el estudio de la actividad mitocondrial se observó que las muestras de los malos congeladores eran las que presentaban una actividad mitocondrial más baja. Finalmente, en el tercer trabajo se estudió el efecto de la criopreservación sobre la función mitocondrial del espermatozoide porcino. Se evaluó la actividad mitocondrial juntamente con el ritmo de formación de ROS de origen mitocondrial, así como la expresión y la localización de dos proteínas importantes en la función mitocondrial, la mitofusina-2 (Mfn-2) y la actina. Se observó que tanto la actividad mitocondrial como la formación de ROS disminuían con la congelación con un descenso inicial en la refrigeración. Además también se observaron cambios en la expresión y localización tanto de la Mfn-2 como de la actina, que ya se hicieron aparentes en la fase de refrigeración. En conclusión, estos estudios han demostrado que la mayoría de los daños provocados por el proceso de congelación-descongelación se inician durante la refrigeración a 5 ºC, siendo este paso muy importante para la supervivencia espermática. El proceso de congelación-descongelación provoca desestructuración nuclear, sin llegar a provocar el fraccionamiento nuclear, así como cambios en la estructura de subpoblaciones espermáticas mótiles, siendo estos cambios más evidentes en eyaculados con baja calidad en la congelación. Finalmente, la congelación-descongelación provoca una disminución de la actividad mitocondrial debida a cambios en la expresión y localización de proteínas que regulan la función mitocondrial. / The aim of this work is to evaluate the effects of freezing-thawing process on different structures of porcine spermatozoa, such as nuclear structure, mitochondrial function and spermatic subpopulational structure. In the first study we tested the effect of freezing-thawing on the nuclear structure of porcine spermatozoa. Freezing-thawing did not cause DNA fragmentation, although a clear destabilization of the protamine-1-DNA complexes was apparent. This destabilization started after cooling phase to 5 ºC included in the freezing-thawing procedure. This indicates that this cooling phase is one of the most lethal phases during the freezing-thawing process of porcine spermatozoa. In the second study we evaluated the changes that the boar sperm motile subpopulational structure suffered during the freezing-thawing procedure taking into account the freezability of the ejaculates, as well as the mitochondrial activity and the mitochondrial formation of reactive oxygen species (ROS). We observed 4 motile subpopulations in all the treatments (fresh and frozen-thawed) and all the freezabilities (good, average and bad freezers) studied. The response of the majority of the motility parameters studied after the freezing-thawing was very different in the bad freezers semen compared with the good freezers. Furthermore, in the study of the mitochondrial activity we observed that the bad freezers samples presented the lowest mitochondrial activity. Finally, in the third work we studied the effect of the cryopreservation on the mitochondrial function of porcine spermatozoa. We evaluated the mitochondrial activity together with the rhythm of mitochondrial ROS formation, as well as the expression and localization of two important proteins on the mitochondrial function, mitofusin-2 (Mfn-2) and actin. We observed that mitochondrial activity as well as mitochondrial ROS formation decreased during the freezing with an initial drop in the cooling phase. Furthermore we also observed changes on the expression and localization of Mfn-2 and actin, which became apparent on the cooling phase. In conclusion, this study has demonstrated that the majority of the damage caused by the freezing-thawing process began during the cooling phase to 5 ºC, being this step very important for sperm survival. The freezing-thawing process caused a nuclear destructuration, without causing nuclear fragmentation, as well as changes on the motile sperm subpopulational structure, being these changes more evident on ejaculates with the poorest freezing quality. Finally, freezing-thawing caused a decrease on the mitochondrial activity due to changes on the expression and localization of proteins which regulate mitochondrial function.

La sortida de colesterol juga un paper important en la capacitació i reacció acrosòmica de l'espermatozoide. En aquesta tesi s'ha establert l'efecte de la sortida de colesterol en la "fluïdesa" de la membrana plasmàtica i en la reacció acrosòmica (RA) de l'espermatozoide de boc. La incubació dels espermatozoides en b-ciclodextrina (bCD) 8 mM com a acceptor de colesterol va donar lloc a una sortida de gairebé un 50% del colesterol de les membranes i la RA va ser induïda fins a un 35%. No obstant, quan només era eliminat el 30% de colesterol de les membranes, no s'induïa RA. Aquesta sortida de colesterol no anava acompanyada de sortida de fosfolípids, indicant que s'havia preservat la integritat de les membranes. L'esmentada sortida és molt ràpida, segueix una cinètica exponencial decreixent amb una semivida d'aproximadament 10 min, arribant al nivell asimptòtic al cap d'uns 30 min. Aquesta cinètica contrasta amb la cinètica lenta de la RA; es necessiten gairebé 2 h per assolir el màxim percentatge de RA. Es conclou que la sortida de colesterol, per sí sola, indueix RA.Es va investigar l'efecte de la sortida de colesterol en la "fluïdesa" de membrana d'espermatozoides vius i en liposomes procedents d'extractes lipídics d'espermatozoides. Utilitzant l'anisotropia de fluorescència del 1,6-difenil-1,3,5-hexatriè (DPH) es va estudiar el comportament termotròpic dels lípids de membrana, després d'1 h d'incubació dels espermatozoides en presència o absència de bCD 8 mM. Les dades experimentals es van ajustar a corbes teòriques sigmoidals, la qual cosa ens va permetre determinar acuradament els paràmetres del comportament termotròpic. En el cas dels espermatozoides sencers, es van distingir dues transicions de fase diferents, atribuïbles a diferents dominis lipídics. Així doncs, a les membranes dels espermatozoides coexisteixen regions fluïdes amb regions clarament més rígides. La sortida de colesterol va donar lloc a importants canvis en l'extensió relativa de les dues transicions de fase, indicant un increment de la fluïdesa d'alguns microdominis lipídics de la membrana dels espermatozoides i una reorganització lateral dels dominis lipídics, just abans de l'inici de la RA. Per tal d'establir quins dels macrodominis de la membrana plasmàtica de l'espermatozoide estaven implicats en la sortida de colesterol, es va utilitzar la microscòpia confocal. Mitjançant merocianina 540 com a marcador de fluïdesa, es van determinar quatre patrons de marcatge diferents en la membrana de l'espermatozoide de boc. Aquests quatre patrons tenien en comú un intens marcatge de la peça intermèdia, i es diferenciaven pel seu marcatge en el cap. Els tres patrons majoritaris es caracteritzaven per presentar o bé un marcatge en tot l'acrosoma, o bé un marcatge limitat al segment equatorial, o be un marcatge tant en el segment equatorial com en el segment apical. El patró minoritari es caracteritzava per tenir el postacrosoma més marcat. La sortida de colesterol va fer variar la freqüència d'aquests quatre patrons: va augmentar la freqüència dels patrons que presentaven un marcatge en el segment equatorial i en el segment equatorial i apical. Així doncs, la sortida de colesterol va fer augmentar la fluïdesa de la membrana plasmàtica dels espermatozoides de boc en uns macrodominis ben definits, el segment equatorial i el segment apical. La fluïdesa de la regió postacrosomal va romandre inalterada.Per tal de poder quantificar, a nivell poblacional, els canvis de fluïdesa de membrana dels espermatozoides durant la capacitació, es va utilitzar la citometria de flux. Amb aquesta tècnica es va atribuir al conjunt de la població d'espermatozoides vius un augment de la fluïdesa de membrana, induïda per la incubació en bCD 8 mM durant 1 h. Aquesta fluïdesa es va veure incrementada encara, al cap de 2 h, coincidint amb la RA massiva. / Cholesterol efflux plays an important role in sperm capacitacion and membrane fusion in the acrosome reaction (AR). In this thesis, we established the effect of cholesterol removal from goat spermatozoa on membrane "fluidity" and acrosomal responsiveness. Mature goat spermatozoa were incubated in BSA-free medium in the presence of b-cyclodextrine (bCD) as cholesterol acceptor. After incubation with 8 mM bCD, approximately 50% of cholesterol was released from sperm membranes with no loss in the phospholipid content, indicating membrane preservation, and 35% of AR was induced. However, when only 30% of cholesterol was lost, this moderate cholesterol decrease was unable to initiate AR. Cholesterol desorption was very rapid, following an exponential decay with a half-time of around 10 min, and reaching an asymptotic level at 30 min. This kinetics is in contrast with the slow sigmoidal kinetics of acrosomal responsiveness: around 2 h were required for maximal AR. Our results suggest that cholesterol efflux has a direct influence on the onset of the AR, that is, merely removing cholesterol would trigger the AR. We also investigated the effect of cholesterol removal from mature goat spermatozoa on membrane "fluidity" of live cell membranes and liposomes from sperm lipid extracts. Using steady state fluorescence anisotropy of 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH), we studied the thermotropic behavior of the membrane lipids, after incubation of live sperm for 1 h in BSA-free medium with the presence/absence of 8 mM bCD, as a cholesterol acceptor. Unimodal and bimodal theoretical sigmoids fitted best to the experimental thermotropic profiles of liposomes and whole cells, respectively. In the case of whole sperm, two transitions, attributable to different lipid domains, were clearly separated by using the fitting parameters. So, in sperm membranes fluid domains and rigid domains co-exist. After cholesterol removal, important changes in the relative extension of the two transitions were found, indicating an increase of the "fluidity" of some of the lipid microdomains of sperm membranes and a rearrangement in the lateral domain organization, just before the onset of AR.In order to establish which domains of sperm plasma membrane were implicated in cholesterol loss, we used confocal microscopy. Using merocyanine 540 as a fluidity probe, we found four staining patterns in goat sperm plasma membrane. These patterns were characterized by a strong labelling of the midpiece, and differed by their head labelling. The three most frequent patterns presented a strong labellig in all the acrosome (pattern A) or in only the equatorial region (pattern B) or in the equatorial and apical regions (pattern C). In the less frequent pattern (pattern D) the more intensely labelled region was the postacrosome. Cholesterol efflux modified the frequencies of these four patterns: an increase in the frequencies of patterns B and C at expense of patterns A and D. So, cholesterol desorption increased the fluidity of goat sperm plasma membrane in well defined macrodomains, the equatorial and apical regions. The fluidity of the postacrosomal region remained unchanged.In order to study the distribution of membrane fluidity in a goat sperm population during capacitation, we used flow cytometry. Using this technique the increase in membrane fluidity induced by 1 h of incubation on 8 mM bCD was attributed to the live sperm population. This fluidity was still increased after 2 h of incubation, just when the AR maximum percentage was reached.

L'objectiu primordial d'aquest estudi de tesi doctoral, va ser intentar veure si existia una associació, en espermatozoide humà, en relació amb l'edat de l'individu, respecte de:(1) La incidència de diploidia, disomia pels cromosomes sexuals, i disomia pels cromosomes 6, 9 y 21(2) La incidència d'anomalies estructurals del cromosoma 9(3) El ràtio sexual en espermatozoides normals i portadors d'una anomalia numèrica pels cromosomes 6, 9, 21, o per a qualsevol anomalia estructural del cromosoma 9.S'emprà la tècnica d'hibridació in situ fluorescent (FISH) simultània, amb sondes de DNA específiques per a la regió subtelomèrica 9q (9qter), les regions centromèriques pels cromosomes 6, 9, 21 i X, i una sonda per la regió satèl·lit III del braç llarg del cromosoma Y, en mostres de semen procedents de 18 individus normals sense historial d'exposició a mutàgenos o drogues, d'edats compreses entre els 24 i els 74 anys (mitjana = 48.8 años). S'analizaren un total de 384.141 espermatozoides, contabilizant un mínim de 10.000 espermatozoides per cada donante.Els nostres resultats indiquen un increment linial significatiu del nivel de diploidia (P =0.002), de la freqüència de totes les duplicacions i delecions per a les regions centromèrica i subtelomèrica del cromosoma 9 (P =0.002), de la disomia 9 (P =0.0001), i una significació marginal de la freqüència conjunta del total de disomia dels cromosomes sexuals (P =0.055), en relació amb l'edat. No es va observà cap increment per a les disomies XX, YY, XY, 6 o 21.Es va detectar heterogeneïtat interindividual en les freqüències, però el test estadístic utilizat ens va permetre minimitzar aquest efecte, eliminant tota la sobredispersió atribuible a l'edat, per tal de poder analitzar la relació de la freqüència d'anomalies cromosòmiques amb aquest paràmetre.El percentatge d'increment per a cada període de 10 anys, va ser del 29% per a la disomia del cromosoma 9, del 18.8% per a la diploida, i entre el 14.6% i el 28% per a les anomalies estructurals.No es va observar una segregació preferencial dels cromosomes 6 o 21, ni amb el cromosoma X, ni amb el cromosoma Y. Però sí es va determinar una segregació preferent tant de la disomia 9, com de les anomalies estructurals d'aquest cromosoma, amb el cromosoma X (P = 0.042), resultat que estaria d'acord amb l'elevat percentatge a la població general de dones portadores d'una inversió pericèntrica (inv(9)) d'aquest cromosoma.Els nostres resultats mostren doncs una forta tendència linial entre l'edat de l'individu i les anomalies estructurals i disomia del cromosoma 9, així com per a la diploidia, en espermatozoides humans. / The aim of this Thesis study was to searching if in human sperm there was a relationship of paternal age associated with: (1) The incidence of diploidy and of disomy for the sex chromosomes and for chromosomes 6, 9 and 21(2) The incidence of structural aberrations chromosome 9(3) The sex ratio in both normal spermatozoa and spermatozoa with a numerical aberration for chromosomes 6, 9 and 21, or any structural abnormality of chromosome 9.We used simultaneous fluorescence in situ hybridisation (FISH) with specific probes for probes for the subtelomeric 9q region (9qter), centromeric regions of chromosomes 6 and 9, 21, X, and the satellite III region of the Y chromosome chromosomes, in sperm samples collected from18 healthy donors, with no know exposure to any mutagens or drugs, aged 24 - 74 years (mean 48.8 years). A total of 384,141 sperm were analysed, with a minimum of 10 000 sperm scored for each donor. Our results indicate a significant linear increase of the level of diploidy (P=0.002), in the overall level of duplications and deletions for the centromeric and subtelomeric regions of chromosome 9 (P=0.002), chromosome 9 disomy (P=0.0001), and a marginal significance of total sex chromosome disomy (P=0.055) in relation to age. No increase was observed for disomies XX, YY, XY, 21 or 6. An interindividual heterogeneity in data was detected but, the statistical test employed, allow us to minimize this effect, eliminating all overdispersion due to age, in order to explore the relationship of chromosome abnormalities with this parameter.The percentage of increase for each 10-year period was 29% for chromosome 9 disomy, 18.8% for diploidy, and ranged from 14.6 to 28% for structural aberrations.Chromosomes 6 and 21 did not segregate preferentially with the X or Y chromosomes. But, there was detected a significant segregation of 9 structural chromosome abnormalities and 9 disomy, with X chromosome (P = 0.042), in agreement with the increased percentage in the general population of women carrying a pericentric inversion of this chromosome (inv(9)).Our findings show a strong linear trend association between age and structural aberrations and disomy for chromosome 9, as well as for diploidy in human males. / El objetivo primordial de éste estudio de tesis doctoral fué intentar hallar si existía una asociación, en espermatozoide humano en relación con la edad del individuo, respecto de: (1) La incidencia de diploidía, disomía para los cromosomas sexuales, y disomía para los cromosomas 6, 9 y 21(2) La incidencia de anomalías estructurales del cromosoma 9(3) El ratio sexual en espermatozoides normales y portadores de una anomalía numérica para los cromosomas 6, 9, 21, o para cualquier anomalía estructural del cromosoma 9.Se empleó la técnica de hibridación in situ fluorescente (FISH) simultánea, con sondas de DNA específicas para la región subtelomérica 9q (9qter), las regiones centroméricas para los cromosomas 6, 9, 21 y X, y una sonda para la región satélite III del brazo largo del cromosoma Y, en muestras de semen procedentes de 18 individuos normales sin historial de exposición a mutágenos o drogas, de edades comprendidas entre los 24 y los 74 años (media = 48.8 años). Se analizaron un total de 384.141 espermatozoides, contabilizando un mínimo de 10.000 espermatozoides por cada donante.Nuestros resultados indican un incremento lineal significativo del nivel de diploidía (P =0.002), de la frecuencia de todas las duplicaciones y deleciones para las regiones centromérica y subtelomérica del cromosoma 9 (P =0.002), de la disomía 9 (P =0.0001), y una significación marginal de la frecuencia conjunta del total de disomía de los cromosomas sexuales (P =0.055), en relación con la edad. No se observó ningún incremento para las disomías XX, YY, XY, 6 o 21.Se detectó heterogeneidad interindividual en las frecuencias, pero el test estadístico utilizado nos permitió minimizar éste efecto, eliminando toda la sobredispersión atribuible a la edad, para poder analizar la relación de la frecuencia de anomalías cromosómicas con éste parámetro.El porcentaje de incremento para cada período de 10 años, fue del 29% para la disomía del cromosoma 9, del 18.8% para la diploidía, y entre el 14.6% y el 28% para las anomalías estructurales.No se observó una segregación preferencial de los cromosomas 6 o 21, ni con el cromosoma X, ni con el cromosoma Y. Pero sí se determinó una segregación preferente tanto de la disomía 9, como de las anomalías estructurales de éste cromosoma, con el cromosoma X (P = 0.042), resultado que estaría de acuerdo con el elevado porcentaje en la población general de mujeres portadoras de inversión pericéntrica (inv(9)) de éste cromosoma.Nuestros resultados muestran una fuerte tendencia lineal entre la edad del individuo y las anomalías estructurales y disomía del cromosoma 9, así como para la diploidía, en espermatozoides humanos.

Encara no està clar el risc de recurrència en individus amb descendència aneuploide d'origen patern. S'han estudiat les freqüències de disomia en caps d'espermatozoides en pares amb descendència o avortaments amb la síndrome de Klinefelter (SK). També s'ha analitzat l'efecte de l'edat paterna en els percentatges de disomia en espermatozoides d'aquest individus. Mitjançant l'amplificació de polimorfismes del cromosoma X s'ha pogut determinat l'origen patern del cromosoma X addicional en 18 individus o avortaments amb la síndrome de Klinefelter. S'han estudiat les freqüències de diploïdia i disomia per als cromosomes 6, 13, 18, 21, 22, X i Y mitjançant hibridació in situ fluorescent (FISH) en els espermatozoides dels seus pares. En el 56% dels casos estudiats el cromosoma X addicional era d'origen patern. El grup de pares amb descendència SK d'origen patern presentava un increment estadísticament significatiu de disomia XY comparat amb els pares del grup d'origen matern. Només en els pares del grup d'origen patern s'ha observat una correlació entre edat paterna i freqüència de disomia XY. En canvi, les freqüències de diploïdia i disomia per als autosomes analitzats no eren diferents en el grup d'origen patern respecte als pares del grup d'origen matern. Es pot concloure que la freqüència de disomia XY incrementa amb l'edat paterna avançada només en els pares amb descendència Klinefelter d'origen patern. En una família, es va observar un cromosoma Y en anell al cariotip del nen amb la SK i al seu pare. Aquest és el primer cas descrit de transmissió natural d'un cromosoma Y en anell a la descendència. Per aquest motiu, es va fer un estudi més exhaustiu en aquesta família. Les tècniques de bandes G i FISH ens van indicar un percentatge similar de mosaicisme en pare i fill producte de la pèrdua del cromosoma en anell en mitosi. L'amplificació per PCR del gen SRY i de dos marcadors del cromosoma Y, la FISH amb sondes subtelomèriques per Xp/Yp i Xq/Yq, i la tècnica d'hibridació genòmica comparada (CGH) van indicar la presència de la zona del cromosoma Y compresa entre SRY i el subtelòmer Yq. El resultat de la FISH en espermatozoides de l'individu portador d'un cromosoma Y en anell, van indicar un increment de les freqüències de diploïdia i disomia per als cromosomes 6, 13, 18, 21, 22, XX, XY respecte al grup control. Per tant, un r(Y) amb una petita pèrdua de material genètic pot ser transmès de manera natural de pare a fill amb un comportament mitòtic similar. La presència d'un cromosoma Y en anell a les cèl.lules germinals incrementa el risc de descendència aneuploide, fins i tot per als cromosomes no implicats en la reorganització cromosòmica. / It is still unclear if a recurrence risk would exist in fathers of an aneuploid offspring of paternal origin. We have studied disomy frequencies in spermatozoa from fathers having Klinefelter syndrome (KS) offspring or miscarriages. The effect of paternal age on sperm disomy percentages is also analysed. Parental origin of 18 Klinefelter patients were carried out by amplification of X chromosome polymorphisms. Spermatozoa from their fathers were studied by multicolour fluorescent in situ hybridization (FISH) using probes for chromosomes 6, 13, 18, 21, 22, X and Y. In 56% of KS cases studied the additional X chromosome was of paternal origin. The paternally transmitted KS group of fathers showed significantly higher frequencies for XY disomy sperm as compared to fathers of the maternal origin group. A correlation between paternal age and XY disomy frequencies was only found in the paternally derived cases. In contrast, similar disomy frequencies for all autosomes analysed were found in both groups of fathers. XY disomy frequencies increase with advancing paternal age only in fathers with paternally inherited KS offspring. In one case, a ring Y chromosome was found in the KS son and his father. This is the first reported case of natural transmission of an r(Y). For this reason we amplified the study in this family. G-banding and FISH studies revealed a similar percentage of mosaicism in father and son by mitotic loss of r(Y). SRY gene and Y marker amplification by PCR, FISH with subtelomeric probes for Xp/Yp and Xq/Yq, and comparative genomic hybridization analyses indicated the intactness of the Y chromosome from SRY to subtelomere Yq. FISH analysis of sperm from the father showed significantly higher frequencies for diploidy and for 6, 13, 18, 21, 22, XX, XY disomies than those observed in control donors. An r(Y) with low material loss can be naturally transmitted, showing similar mitotic behaviour in the offspring. The presence of an r(Y) chromosome in germinal cells increased the risk of fathering offspring with numerical abnormalities, even for chromosomes not involved in the arrangement.

Orientador: Fábio Erminio Mingatto / Resumo: Fipronil é um inseticida de amplo-espectro de ação, utilizado para o controle de pragas nas lavouras e de ectoparasitas na medicina veterinária. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos tóxicos do fipronil sobre a fertilidade de ratos machos por meio da avaliação da produção de espermatozoides e de danos oxidativos causados no homogenato de testículos, além de avaliar a ação protetora da vitamina E. Ratos Wistar machos pesando aproximadamente 200 g foram divididos em três grupos (n = 6): controle: DMSO (60%) mais salina (40%) por via intraperitoneal (i.p.); fipronil 5: fipronil dissolvido em DMSO (60%) mais salina (40%) (5 mg/kg de peso corporal i.p.); fipronil 5 + vitamina E: fipronil dissolvido em DMSO (60%) mais salina (40%) (5 mg/kg de peso corporal i.p.) e vitamina E (100 mg/kg de peso vivo via oral).Durante 14 dias os animais foram pesados e cada grupo recebeu seu respectivo tratamento conforme citado, sendo que no 15º dia os animais foram eutanasiados e os testículos e epidídimos foram isolados para realização das seguintes análises: concentração de espermatozoides nos epidídimos, atividade das enzimas glutationa peroxidase (GPx) e catalase (CAT), determinação das concentrações de glutationa reduzida (GSH), grupos tióis de proteínas e malondialdeído (MDA) no homogenato dos testículos. Os dados foram analisados por ANOVA seguido pelo teste de Tukey. O fipronil reduziu significantemente a produção de espermatozoides (P < 0,01) e a vitamina E apresentou efeito prote... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

RÊGO, João Paulo Arcelino do. Proteínas do plasma seminal e das células espermáticas de touros Bos indicus das raças brahman e guzerá associadas com os parâmetros seminais. 2014. 248 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-08T19:23:44Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_jparego.pdf: 4256300 bytes, checksum: ab05da85c9d9b6cb0dae767b2a1693c2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-25T21:40:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_jparego.pdf: 4256300 bytes, checksum: ab05da85c9d9b6cb0dae767b2a1693c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T21:40:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_jparego.pdf: 4256300 bytes, checksum: ab05da85c9d9b6cb0dae767b2a1693c2 (MD5) Previous issue date: 2014 / The aim of this work was to study seminal plasma and whole sperm proteins and their association with sperm morphology and methods of semen collection and cryopreservation in Bos indicus bulls using a proteomics approach . Seminal plasma proteins were separated by two-dimensional electrophoresis or diferential gel electrophoresis and identified by mass spectrometry gel. Firstly, we described the seminal plasma proteome of Bos indicus bulls, identified the Binder of Sperm Proteins as the more abundant proteins in seminal fluid, while the spermadhesins formed the second group with higher expression. Positive and negative associations were found between seminal plasma proteins and the percentage of morphologically normal spermatozoa constituing possible molecular markers of this characteristic. In other hand, differences were identified in ejaculate volume and seminal plasma protein profile of Bos indicus bulls subjected to different methods of semen collection (internal artificial vagina and electroejaculation). Based on the analysis of two-dimensional gels, 22 spots had larger volumes in samples collected by internal artificial vagina, corresponding to 21 proteins. In contrast, 33 spots had larger volumes of samples collected by electroejaculation corresponding to 26 differents proteins. The proteins with great volume in samples obtained by internal artificial vagina and electroejaculation had epididymal and accessory sex glands origin, respectively. In the present study, others associations have been made among protein expression in seminal plasma and sperm cells and semen parameters after cryopreservation in Bos indicus bulls. The animals had not differences between body weight, scrotal circumference and seminal parameters pre-freezing. After cryopreservation, the semen parameters were analyzed by computer system (CASA) and the animals were divided into groups of low and high freezability. In the high freezability group were more expressed three proteins of seminal plasma and five proteins of sperm. For the group of low freezability were more expressed six different seminal plasma proteins. Regression models adopted for the intensities of the spots in the seminal plasma and sperm cells, as well as analysis of protein-protein interactions, indicate that most of the proteins inversely associated with post -thaw sperm viability may be expressed as a response to an oxidative stress and/or microbial attack before the semen cryopreservation of animals with low freezability. These parameters could not be detected by conventional sperm analysis. This results obtened by applying of the proteomics approach, could serve as guideline for future researchs aimed to identifed molecular markers of reproductive processes based on the expression of proteins in seminal plasma and sperm cells of Bos indicus bulls. / O objetivo do presente trabalho foi realizar um estudo sobre as proteínas do plasma seminal e dos espermatozoides e suas associações com morfologia espermática e com métodos de coleta e criopreservação de sêmen de touros Bos indicus das raças Brahman e Guzerá, utilizando uma abordagem proteômica. Foram coletadas amostras de sêmen e as proteínas do plasma seminal foram separadas através de eletroforese bidimensional ou eletroforese bidimensional em gel diferencial e identificadas por espectrometria de massa. O proteoma do plasma seminal dos touros Bos indicus foi descrito identificando as Binder of sperm proteins como as proteínas mais abundantes no fluido seminal, enquanto que as spermadhesins formaram o segundo grupo com maior expressão. Foram encontradas associações positivas e negativas entre as proteínas do plasma seminal e a porcentagem de espermatozoides morfologicamente normais constituindo possíveis marcadores moleculares desta característica. Em outro aspecto, foram identificadas diferenças no volume do ejaculado e no perfil proteico do plasma seminal touros Bos indicus submetidos a diferentes métodos de coleta de sêmen (vagina artificial interna e eletroejaculação). Baseado nas análises dos géis bidimensionais, 22 spots tiveram volumes maiores nas amostras coletadas por vagina artificial interna, correspondendo a 21 proteínas. Em contrapartida, 33 spots correspondendo a 26 proteínas tiveram maiores volumes nos géis de amostras coletadas por eletroejaculação. As principais proteínas com maior expressão em amostras obtidas por vagina artificial interna e eletroejaculação eram de origem epididimária e das glândulas sexuais acessórias, respectivamente. No presente trabalho, ainda foram feitas associações entre a expressão de proteínas no plasma seminal e nas células espermáticas com os parâmetros do sêmen pós-criopreservação em touros Bos indicus da raça Guzerá. Os animais apresentaram, em média, peso corporal, circunferência escrotal e parâmetros seminias pré-criopreservação do sêmen sem diferença estatística. De acordo com os parâmetros espermáticos pós-criopreservação obtidos pelo sistema computadorizado de análise de sêmen os animais foram divididos em grupos de alta e baixa congelabilidade. Três proteínas do plasma seminal e cinco dos espermatozoides foram mais expressas no grupo de alta congelabilidade. Outras seis proteínas do plasma seminal foram mais expressas no grupo de baixa congelabilidade. Os modelos de regressão adotados para as intensidades dos spots do plasma seminal e das células espermáticas, bem como as análises de interações proteína-proteína indicam que a maioria das proteínas inversamente associadas com a viabilidade espermática pós-descongelação pode ser expressa como uma resposta a um estresse oxidativo e/ou ataque microbiano antes da criopreservação de sêmen de animais do grupo de baixa congelabilidade não detectado pelas análises convencionais do sêmen. Através da utilização de uma abordagem proteômica, os resultados encontrados no presente trabalho podem servir de orientação para futuras pesquisas que visem identificar marcadores moleculares de processos reprodutivos baseado na expressão de proteínas no plasma seminal e nas células espermáticas de touros Bos indicus.

OLIVEIRA, Rodrigo Vasconcelos de. Proteínas espermáticas e dinâmica da cromatina em ruminantes: relação com a fertilidade em touros e com o uso de castanha de caju na dieta de ovinos. 2013. 119 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-22T19:42:24Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_rvoliveira.pdf: 1755876 bytes, checksum: 938cdae211bb3c2ecc1a2c8db23536a9 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-27T17:54:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_rvoliveira.pdf: 1755876 bytes, checksum: 938cdae211bb3c2ecc1a2c8db23536a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T17:54:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_rvoliveira.pdf: 1755876 bytes, checksum: 938cdae211bb3c2ecc1a2c8db23536a9 (MD5) Previous issue date: 2013 / The ruminant fertility is influenced by intrinsic sperm factors, like chromatin or proteins. Considering that the reproductive efficiency is dependent on a balanced and feasible nutrition, the cashew nut meal (CNM) is a low cost byproduct that must be analyzed for possible effects on sperm chromatin and proteins.Study 1:. The objectives of study 1 were to determine failures of chromatin condensation, expression levels and cellular localizations of histones; H3.3, H2B and H4, respectively in spermatozoa from low (LF) vs. high fertility (HF) bulls. The data were analyzed by t test and Pearson correlation (P < 0.05). We demonstrated that aniline blue staining was different within LF (1.73 (0.55, 0.19)) and HF Groups (0.67 (0.17, 0.06) (P < 0.0001), which was also negatively correlated with in vivo bull fertility (r = -0.90; P < 0.0001). Although those histones were consistently immune-detectable and specifically localized in bull sperm, this was not different between the two groups. Except H2B variants, H3.3 and H4 showed 100% identity and conserved among bovine, mouse and human. The H2B variants were more conserved between bovine and human than those of mouse. In conclusion, we showed that H2B, H3.3 and H4 were detectable in bull spermatozoa and that sperm chromatin condensation status, changed by histone retention, is related with bull fertility. Study 2: The objectives of study 2 were evaluate the effects of 13% of CNM inclusion in the diet of Morada Nova rams on the semen parameters, chromatin integrity and sperm proteins. Twenty rams were distributed in two equal groups: cashew nut group (CNG) and control group (COG) that received 13% and 0% of CNM in the diet for 90 days, respectively. The groups were compared for live weight, scrotal circumference, seminal parameters, chromatin integrity and sperm protein profile at 0, 45 and 90 days of the experiment. The data were evaluated by GLM for repeated measures (P < 0.05). At 90 days, CNG (69.00% (7.38; 2.33)) presented percentage of motile sperm superior than control group (60,00% (9,43; 2,98)) (P<0.05). There was not effect from the diet with CNM on chromatin integrity. But, the percentages of protein expression from ODF1 and H2B were larger in the CNG (P<0.05). The proteins: ODF1, GPX4, FTL and H2B were negatively correlated with sperm chromatin quality. In conclusion, the cashew nut meal did not affect negatively the semen quality. / A fertilidade em ruminantes é influenciada por fatores intrínsecos espermáticos como a cromatina e as proteínas. Considerando que a eficiência reprodutiva do macho depende de uma nutrição balanceada e viável, o farelo de castanha de caju (FCC) é um subproduto de baixo custo que deve ser analisado quanto a possíveis efeitos na integridade cromatínica e proteica dos espermatozoides. Estudo 1: O estudo 1 teve como objetivos determinar: falhas na condensação da cromatina, níveis de expressão e localização celular das histonas: H3.3, H2b e H4B, respectivamente, em espermatozoides de touros de baixa (BF) e alta fertilidade (AF). Os dados foram avaliados pelo teste t e correlação de Pearson (P < 0,05). Os resultados do teste do azul de anilina foram diferentes entre os grupos BF (1.73 (0.55, 0.19)) e AF (0,67 (0,17, 0,06) (P < 0,0001), os quais também foram negativamente correlacionados com a fertilidade in vivo de touros (r = -0,90; P < 0,0001). Apesar das histonas terem sido consistentemente imunodetectadas e localizadas nos espermatozoides, estas não apresentaram diferenças entre os grupos. As proteínas H3.3 e H4 apresentaram 100% de identidade e foram conservadas entre bovinos, murinos e seres humanos. Entretanto, as variantes H2B foram mais conservadas entre touros e humanos do que entre humanos e camundongos. Em conclusão, as proteínas H2B, H3.3 e H4 foram detectáveis em espermatozoides de touros e a condensação da cromatina espermática, alterada pela retenção de histonas, é relacionada com a fertilidade de touros. Estudo 2: O estudo 2 objetivou avaliar os efeitos da inclusão de 13% de FCC na dieta de carneiros Morada Nova sobre as características seminais, integridade de cromatina e perfil das proteínas espermáticas. Vinte carneiros foram divididos em dois grupos: castanha (GCA) e controle (GCO).que receberam na dieta 13% e 0% de FCC durante 90 dias, respectivamente. Os grupos foram comparados quanto ao peso vivo, circunferência escrotal, parâmetros seminais, integridade de cromatina e perfil das proteínas espermáticas aos 0, 45 e 90 dias de experimento. Os dados foram analisados pelo método GLM para medidas repetidas (P < 0,05). Aos 90 dias o GCA (69,00% (7,38; 2,33) apresentou porcentagem de espermatozoides móveis superior ao GCO (60,00% (9,43; 2,98)) (P<0.05). Não houve efeito da dieta contendo FCC sobre a integridade da cromatina. Porém, os percentuais das proteínas ODF1 e H2B foram mais elevados nos carneiros do GCA (P < 0,05). As proteínas: ODF1, GPX4, FTL e H2B foram negativamente correlacionadas com a qualidade da cromatina espermática. Em conclusão, a inclusão de FCC na dieta de carneiros não afetou negativamente a qualidade seminal.