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Caracterização biológica e molecular do vírus da mancha clorótica de Clerodendrum ( Clerodendrum Chlorotic Spot Virus-CLCSV) / Biological and molecular characterization of Clerodendrum chlorotic spot virus

Renata Takassugui Gomes 30 March 2009 (has links)
O gênero botânico Clerodendrum pertence à família Lamiaceae e compreende várias espécies ornamentais, geralmente trepadeiras, das quais as mais comumente cultivadas são coração-sangrento (C. x speciosum Tiejism. & Binn.) e lágrima-de-Cristo (C. thomsonae Balf.). Manchas cloróticas e necróticas em folhas de coração-sangrento foram observadas pela primeira vez em um jardim de Piracicaba, SP, associadas à infestação com Brevipalpus phoenicis Geijskes (Acari: Tenuipalpidae). Exames de secções de tecidos das lesões foliares ao microscópio eletrônico revelaram ocorrência de efeitos citopáticos do tipo nuclear e concluiu-se que os sintomas eram causados por um vírus transmitido por Brevipalpus (VTB), o qual foi tentativamente designado de mancha clorótica de Clerodendrum (Clerodendrum chlorotic spot virus- ClCSV). O ClCSV é transmitido mecanicamente de coração-sangrento para coração-sangrento e em ensaios preliminares foi transmitido mecanicamente e por Brevipalpus phoenicis para várias outras plantas, além da ocorrência de sua disseminação natural por esses ácaros para outras espécies. Ocorre a infecção sistêmica nas hospedeiras Chenopodium quinoa Will. e C. amaranticolor Coste & Reyn. infectadas com ClCSV caso as plantas sejam mantidas por cerca de 2 semanas entre 28-30 oC. Utilizando-se estas plantas realizou-se a purificação parcial do vírus. Este trabalho apresenta a caracterização biológica e molecular do ClCSV. Os resultados dos testes PTA-ELISA e RT-PCR demonstraram a detecção do ClCSV em diversas hospedeiras, além da análise da reação sorológica e molecular deste vírus com os outros VTBs do tipo nuclear. O seqüenciamento do produto de PCR revelou que as seqüências de nucleotídeos apresentaram similaridade com a polimerase de OFV (Orchid Fleck Virus), outro VTB do tipo nuclear. Além da identificação sorológica do vírus foram realizadas análises morfo-anatômicas para visualização das alterações causadas pelo ClCSV em tecidos de Clerodendrum x speciosum e em hospedeiras infectadas. / The botanical genus Clerodendrum belongs to the family Lamiaceae and includes several ornamental species, usually climbing, and heart-bloody (C. x speciosum Tiejism. & Binn.) and tear-in-Christ (C. thomsonae Balf. ) are among the most cultivated. Necrotic and chlorotic spots on leaves of heart-blood have been observed for the first time in a garden of Piracicaba, associated with an infestation of Brevipalpus phoenicis Geijskes (Acari: Tenuipalpidae). Sections of diseased tissues examined in the electron microscope revealed characteristic cytopathic effects of the nuclear type and concluded that the symptoms were caused by a virus transmitted by Brevipalpus (VTB), tentatively named Clerodendrum chlorotic spot virus (ClCSV). This virus is transmitted through mechanical inoculation from heart-bloody to heart-bloody and in preliminary tests mechanically and by mites for several other plants, in addition to the natural occurrence of its spread to other species. Systemic infection occurs in the host Chenopodium quinoa Will. and C. amaranticolor Coste & Reyn. infected with ClCSV if the plants are kept at 28-30°C for about 2 weeks. These plants were used for partial purification of vírus. This study presents the biological and molecular characterization of ClCSV. Through the PTA-ELISA and RT-PCR tests was possible to detect the ClCSV in different host, in addition to the analysis of serological and molecular reaction of this virus with other type of nuclear VTBs. From the sequencing of the PCR product was obtained from nucleotide sequences that showed similarity to the polymerase of OFV (Orchid Fleck Virus), another type of nuclear VTB. Morpho-anatomical analysis were performed to see the changes caused by ClCSV in tissues of Clerodendrum x speciosum and other infected hosts. It was possible to observe the occurrence of hypertrophy, cell plasmolisis and the reduction of starch grains in the áreas injured in all plants infected by ClCSV.
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Anatomia e perfil químico da salsaparrilha comercializada no estado de São Paulo / Anatomy and chemical profile of sarsaparilla commercialized in pharmaceutical stores and natural products stores of state of São Paulo

Soares, Marli Kasue Misaki 31 January 2013 (has links)
A atual Política Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos prevê investimentos em pesquisa e desenvolvimento para suprir a necessidade da indústria nacional em adquirir a matéria prima para a produção de novos fitoterápicos de maneira segura e controlada. As espécies do gênero Smilax, conhecidas popularmente como salsaparrilha, são empregadas na medicina popular como fortificante, antirreumático e antissifilítico e são vendidas em farmácias, casa de ervas e mercados públicos sem que exista um controle de qualidade de sua origem e eficácia. Além disso, a procedência do material é baseada principalmente no extrativismo. O controle de qualidade das drogas vegetais deveria ter uma base mais segura de identificação das drogas através da caracterização e definição de particularidades anatômicas e químicas. Este estudo teve como objetivo apresentar a quantidade, o valor, o modo de preparo, utilização e a procedência da salsaparrilha comercializada no Estado de São Paulo, bem como analisar a anatomia e o perfil químico de 44 amostras de salsaparrilha comercializada. Amostras de raiz foram submetidas às técnicas convencionais de microscopia de luz e eletrônica de varredura. Também foram realizados testes histoquímicos. Para determinar o perfil químico por Cromatografia em Camada delgada (CCD), foram realizados extratos etanólicos de amostras de raízes. O perfil químico do material comercializado foi comparado com o perfil das espécies de Smilax previamente identificadas (S. goyazana A. De Candolle, S. rufescens Grisebach, S. brasiliensis Sprengel, S. campestris Grisebach, S. cissoides Martius ex Grisebach, S. fluminensis Steudel, S. oblongifolia Pohl ex Grisebach e S. polyantha Grisebach). A quantidade média de salsaparrilha comercializada nas farmácias (400g) e nas casas de ervas (20Kg) é elevada se for considerado o fato de que as raízes não são procedentes de cultivo. Embora tenha sido observada grande semelhança entre a estrutura anatômica das amostras de salsaparrilha comercializadas e a estrutura já descrita na literatura para as espécies de Smilax, houve diferenças em relação à organização do floema, à presença de séries de idioblastos contendo ráfides na medula, à ausência de idioblastos fenólicos na medula e presença de metaxilema no centro da estrutura. O teste histoquímico confirmou a presença de amido em todas as amostras comerciais. As análises em CCD dos extratos etanólicos das amostras comerciais evidenciaram diversas manchas com tonalidades variando de amarelo a verde. Além disso, as manchas apresentaram componentes de mesmo Fator de retenção (Rf), indicando semelhança química entre as diversas amostras. No entanto, o padrão de distribuição de manchas, bem como o Rf das amostras comerciais diferiu daqueles obtidos para as oito espécies de Smilax, os quais foram muito similares entre si. / The current National Policy on Herbal Medicine provides investments in drug research and development to supply the need of national industry to acquire the raw material for production new herbal medicines in a safe and controlled way. The species of Smilax, popularly known as sarsaparilla, are used in folk medicine to be effective as tonic, antirheumatic and antisyphilitic properties and they are commercialized in pharmaceutical stores, natural products stores and public markets in Brazil with no quality control of its origin and efficacy. In addition, these plants are still harvested in extractive way. The quality control of herbal drugs should have more secure identification of drugs through the characterization and definition of anatomical and chemical peculiarities. This study aims to present the quantity, value, method of preparation, use and origin of the commercialized sarsaparilla in cities from the São Paulo state and to investigate the anatomy and chemical profile of 44 samples of the commercialized sarsaparilla. Root samples were processed and analyzed using conventional light and scanning electron microscopy techniques. Usual histochemical tests were also performed. Chemical profiles of samples were analyzed by thin layer chromatography (TLC) using ethanolic extracts of the roots. The chemical profile of the commercialized material was compared with profiles of previously identified species of Smilax (S. goyazana A. De Candolle, S. rufescens Grisebach, S. brasiliensis Sprengel, S. campestris Grisebach, S. cissoides Martius ex Grisebach, S. fluminensis Steudel, S. oblongifolia Pohl ex Grisebach and S. polyantha Grisebach). The average amount of sarsaparilla sold in pharmaceutical stores (400g) and natural products stores (20kg) is high if one considers the fact that the roots are not found under cultivation. Although there was a great similarity between the anatomical structure of commercialized sarsaparilla and the structure already described in literature for the Smilax species, there were found some differences in the organization of the phloem, the occurrence of series of idioblasts containing raphides in the pith, the absence of phenolic idioblasts in the pith and the presence of metaxylem in the center of the organ. The histochemical tests confirmed the presence of starch in all commercialized samples. Chemical profile showed several spots with colors ranging from yellow to green. Moreover, the spots showed the same components retention factor (Rf), indicating chemical similarity between the different samples. However, the distribution pattern of spots, Rf value of commercial samples differed from the eight species of Smilax, which were very similar to each other.
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Anatomia e perfil químico da salsaparrilha comercializada no estado de São Paulo / Anatomy and chemical profile of sarsaparilla commercialized in pharmaceutical stores and natural products stores of state of São Paulo

Marli Kasue Misaki Soares 31 January 2013 (has links)
A atual Política Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos prevê investimentos em pesquisa e desenvolvimento para suprir a necessidade da indústria nacional em adquirir a matéria prima para a produção de novos fitoterápicos de maneira segura e controlada. As espécies do gênero Smilax, conhecidas popularmente como salsaparrilha, são empregadas na medicina popular como fortificante, antirreumático e antissifilítico e são vendidas em farmácias, casa de ervas e mercados públicos sem que exista um controle de qualidade de sua origem e eficácia. Além disso, a procedência do material é baseada principalmente no extrativismo. O controle de qualidade das drogas vegetais deveria ter uma base mais segura de identificação das drogas através da caracterização e definição de particularidades anatômicas e químicas. Este estudo teve como objetivo apresentar a quantidade, o valor, o modo de preparo, utilização e a procedência da salsaparrilha comercializada no Estado de São Paulo, bem como analisar a anatomia e o perfil químico de 44 amostras de salsaparrilha comercializada. Amostras de raiz foram submetidas às técnicas convencionais de microscopia de luz e eletrônica de varredura. Também foram realizados testes histoquímicos. Para determinar o perfil químico por Cromatografia em Camada delgada (CCD), foram realizados extratos etanólicos de amostras de raízes. O perfil químico do material comercializado foi comparado com o perfil das espécies de Smilax previamente identificadas (S. goyazana A. De Candolle, S. rufescens Grisebach, S. brasiliensis Sprengel, S. campestris Grisebach, S. cissoides Martius ex Grisebach, S. fluminensis Steudel, S. oblongifolia Pohl ex Grisebach e S. polyantha Grisebach). A quantidade média de salsaparrilha comercializada nas farmácias (400g) e nas casas de ervas (20Kg) é elevada se for considerado o fato de que as raízes não são procedentes de cultivo. Embora tenha sido observada grande semelhança entre a estrutura anatômica das amostras de salsaparrilha comercializadas e a estrutura já descrita na literatura para as espécies de Smilax, houve diferenças em relação à organização do floema, à presença de séries de idioblastos contendo ráfides na medula, à ausência de idioblastos fenólicos na medula e presença de metaxilema no centro da estrutura. O teste histoquímico confirmou a presença de amido em todas as amostras comerciais. As análises em CCD dos extratos etanólicos das amostras comerciais evidenciaram diversas manchas com tonalidades variando de amarelo a verde. Além disso, as manchas apresentaram componentes de mesmo Fator de retenção (Rf), indicando semelhança química entre as diversas amostras. No entanto, o padrão de distribuição de manchas, bem como o Rf das amostras comerciais diferiu daqueles obtidos para as oito espécies de Smilax, os quais foram muito similares entre si. / The current National Policy on Herbal Medicine provides investments in drug research and development to supply the need of national industry to acquire the raw material for production new herbal medicines in a safe and controlled way. The species of Smilax, popularly known as sarsaparilla, are used in folk medicine to be effective as tonic, antirheumatic and antisyphilitic properties and they are commercialized in pharmaceutical stores, natural products stores and public markets in Brazil with no quality control of its origin and efficacy. In addition, these plants are still harvested in extractive way. The quality control of herbal drugs should have more secure identification of drugs through the characterization and definition of anatomical and chemical peculiarities. This study aims to present the quantity, value, method of preparation, use and origin of the commercialized sarsaparilla in cities from the São Paulo state and to investigate the anatomy and chemical profile of 44 samples of the commercialized sarsaparilla. Root samples were processed and analyzed using conventional light and scanning electron microscopy techniques. Usual histochemical tests were also performed. Chemical profiles of samples were analyzed by thin layer chromatography (TLC) using ethanolic extracts of the roots. The chemical profile of the commercialized material was compared with profiles of previously identified species of Smilax (S. goyazana A. De Candolle, S. rufescens Grisebach, S. brasiliensis Sprengel, S. campestris Grisebach, S. cissoides Martius ex Grisebach, S. fluminensis Steudel, S. oblongifolia Pohl ex Grisebach and S. polyantha Grisebach). The average amount of sarsaparilla sold in pharmaceutical stores (400g) and natural products stores (20kg) is high if one considers the fact that the roots are not found under cultivation. Although there was a great similarity between the anatomical structure of commercialized sarsaparilla and the structure already described in literature for the Smilax species, there were found some differences in the organization of the phloem, the occurrence of series of idioblasts containing raphides in the pith, the absence of phenolic idioblasts in the pith and the presence of metaxylem in the center of the organ. The histochemical tests confirmed the presence of starch in all commercialized samples. Chemical profile showed several spots with colors ranging from yellow to green. Moreover, the spots showed the same components retention factor (Rf), indicating chemical similarity between the different samples. However, the distribution pattern of spots, Rf value of commercial samples differed from the eight species of Smilax, which were very similar to each other.

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