A histoplasmose, uma micose sistêmica, é um importante problema de saúde pública, de distribuição mundial e uma infecção muito comum em regiões endêmicas. A infecção é causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum varo capsulatum, que cresce como fungo filamentoso em solo, guano de morcegos e aves, ou como uma levedura parasitária intracelular. A ocorrência de morcegos é relatada em quase todo o mundo e estes contribuem para manutenção deste fungo na natureza. Na cidade de São Paulo, Brasil, morcegos ocorrem em todas as regiões e em várias situações: usando sótãos e forro de telhado como abrigos ou adentrando residências, entre outras. Entre agosto de 2003 a dezembro de 2008, foram encaminhados ao Setor de Micologia do Centro de Controle de Zoonoses da cidade de São Paulo 2427 morcegos. Amostras de fígado e baço desses morcegos foram removidos em condições estéreis e inoculados, ambos, em Agar infusão de cérebro e coração (BHI) e em Agar Sabouraud Dextrose, incubados a 25°C e 37°C. As colônias suspeitas foram reincubadas em Agar Mycosel e identificadas pela morfologia e pela reversão em ML-gema (Mueller Hinton Broth com L-cisteína e gema de ovo) a 37°C. O objetivo deste estudo foi estabelecer a prevalência do H. capsulatum em morcegos presentes na cidade de São Paulo e em outras cidades do Estado. Os 87 isolados de H. capsulatum (3,58%) foram todos de morcegos da família Molossidae, de hábito alimentar insetívoro, pertencentes a quatro gêneros e cinco espécies sendo 74 Molossus molossus, 10 Nyctinomops macrotis, 1 Tadarida brasiliensis, 1 Molossus rufus e 1 Eumops glaucinus. Para 3 espécies (Molossus rufus, Nyctinomops macrotis e Eumops glaucinus) trata-se do primeiro relato. Dos 2427 morcegos, 1728 morcegos eram procedentes da cidade de São Paulo (71,2%) e 699 morcegos eram originários de cidades do Estado de São Paulo (28,8%). Cinco cidades apresentaram espécimes positivos: 70 procedentes da cidade de São Paulo (80,5%) e 17 de outros municípios do Estado (19,5%): 4 de Jundiaí, 10 de Guarulhos, 2 de Osasco e 1 de Mogi Mirim. Para a análise das 61 amostras de fezes de morcegos recebidas, foram utilizadas as técnicas de inoculação em camundongo e semeadura em placa de Petri contendo meio de Agar Mycosel incubadas a 37°C. Uma amostra positiva para H. capsulatum foi isolada do Agar Mycosel. Os resultados mostram que o H.capsulatum esta presente na população de morcegos presentes em áreas urbanas do Estado de São Paulo. Este fato é importante, porque morcegos contaminados podem ser fonte de disseminação e risco para pessoas ou animais adquirirem a infecção. O conhecimento da história natural da histoplasmose em áreas urbanas pode ter um importante papel no estabelecimento de estratégias de prevenção. / Systemic histoplamosis is an important health problem worldwide and a very common infection in endemic areas. Its causative agent, the thermodimorphic fungus Histoplasma capsulatum varo capsulatum, grows in bat guano or bird droppings rich soils as filamentous fungi, or as parasitic intracellular yeast cells in hosts. Bats can be found in almost ali the world and contribute to the maintenance of this fungus in nature. In many cities in Brazil, bats are found in urban areas and in many situations: house basements and/or roofs, fallen in the soil or even inside the houses, among others. Between August 2003 and December 2008, 2,427 bats, 1,728 from São Paulo City (71.2%) and 699 from other cities from São Paulo State, were sent to the Micology Section of Centro de Controle de Zoonoses of São Paulo City. The purpose of this work was to establish the prevalence of H.capsulatum in bats of São Paulo City and other cities from São Paulo State. Samples of spleen and liver from the animais were removed in sterile conditions and inoculated in Brain Heart Infusion Agar and in Sabouraud Dextrose Agar, incubated at 25°C and 37°C. The suspicious colonies were inoculated in Mycosel Agar and were identified by the morphology, as well as by the temperature¬reversion after incubation in ML-egg yolk (Mueller Hinton Broth, with L-cysteine and hen egg yolk) at 37°C. Ali 87 positive samples (3.58%) were isolated from insectivorous bats from Molossidae family, belonging to four genus and five species: 74 samples were from the specie Molossus molossus, 10 from Nyctinomops macrotis, 1 from Molossus rufus, 1 from Tadarida brasiliensis, and 1 from Eumops glaucinus. For three of these species (Nyctinomops macrotis, Molossus rufus and Eumops glaucinus) this is the first report of H. capsulatum isolation. Seventy positive bats were from São Paulo (80.5%), ten from Guarulhos City, four from Jundiaí City, two from Os asco City and one from Mogi Mirim City. Sixty-one samples of feces were analised by mouse inoculation test and inoculation in Petri dishes containing Mycosel Agar. Our results showed that the H. capsulatum is present in bat populations Iiving in urban areas. This is an important fact since H. capsulatum contaminated bats can be a source of contamination for people or animais in contact with them. The knowledge of the natural history of histoplasmosis in urban areas may be important for the establishment of prevention strategies.

A histoplasmose, uma micose sistêmica, é um importante problema de saúde pública, de distribuição mundial e uma infecção muito comum em regiões endêmicas. A infecção é causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum varo capsulatum, que cresce como fungo filamentoso em solo, guano de morcegos e aves, ou como uma levedura parasitária intracelular. A ocorrência de morcegos é relatada em quase todo o mundo e estes contribuem para manutenção deste fungo na natureza. Na cidade de São Paulo, Brasil, morcegos ocorrem em todas as regiões e em várias situações: usando sótãos e forro de telhado como abrigos ou adentrando residências, entre outras. Entre agosto de 2003 a dezembro de 2008, foram encaminhados ao Setor de Micologia do Centro de Controle de Zoonoses da cidade de São Paulo 2427 morcegos. Amostras de fígado e baço desses morcegos foram removidos em condições estéreis e inoculados, ambos, em Agar infusão de cérebro e coração (BHI) e em Agar Sabouraud Dextrose, incubados a 25°C e 37°C. As colônias suspeitas foram reincubadas em Agar Mycosel e identificadas pela morfologia e pela reversão em ML-gema (Mueller Hinton Broth com L-cisteína e gema de ovo) a 37°C. O objetivo deste estudo foi estabelecer a prevalência do H. capsulatum em morcegos presentes na cidade de São Paulo e em outras cidades do Estado. Os 87 isolados de H. capsulatum (3,58%) foram todos de morcegos da família Molossidae, de hábito alimentar insetívoro, pertencentes a quatro gêneros e cinco espécies sendo 74 Molossus molossus, 10 Nyctinomops macrotis, 1 Tadarida brasiliensis, 1 Molossus rufus e 1 Eumops glaucinus. Para 3 espécies (Molossus rufus, Nyctinomops macrotis e Eumops glaucinus) trata-se do primeiro relato. Dos 2427 morcegos, 1728 morcegos eram procedentes da cidade de São Paulo (71,2%) e 699 morcegos eram originários de cidades do Estado de São Paulo (28,8%). Cinco cidades apresentaram espécimes positivos: 70 procedentes da cidade de São Paulo (80,5%) e 17 de outros municípios do Estado (19,5%): 4 de Jundiaí, 10 de Guarulhos, 2 de Osasco e 1 de Mogi Mirim. Para a análise das 61 amostras de fezes de morcegos recebidas, foram utilizadas as técnicas de inoculação em camundongo e semeadura em placa de Petri contendo meio de Agar Mycosel incubadas a 37°C. Uma amostra positiva para H. capsulatum foi isolada do Agar Mycosel. Os resultados mostram que o H.capsulatum esta presente na população de morcegos presentes em áreas urbanas do Estado de São Paulo. Este fato é importante, porque morcegos contaminados podem ser fonte de disseminação e risco para pessoas ou animais adquirirem a infecção. O conhecimento da história natural da histoplasmose em áreas urbanas pode ter um importante papel no estabelecimento de estratégias de prevenção. / Systemic histoplamosis is an important health problem worldwide and a very common infection in endemic areas. Its causative agent, the thermodimorphic fungus Histoplasma capsulatum varo capsulatum, grows in bat guano or bird droppings rich soils as filamentous fungi, or as parasitic intracellular yeast cells in hosts. Bats can be found in almost ali the world and contribute to the maintenance of this fungus in nature. In many cities in Brazil, bats are found in urban areas and in many situations: house basements and/or roofs, fallen in the soil or even inside the houses, among others. Between August 2003 and December 2008, 2,427 bats, 1,728 from São Paulo City (71.2%) and 699 from other cities from São Paulo State, were sent to the Micology Section of Centro de Controle de Zoonoses of São Paulo City. The purpose of this work was to establish the prevalence of H.capsulatum in bats of São Paulo City and other cities from São Paulo State. Samples of spleen and liver from the animais were removed in sterile conditions and inoculated in Brain Heart Infusion Agar and in Sabouraud Dextrose Agar, incubated at 25°C and 37°C. The suspicious colonies were inoculated in Mycosel Agar and were identified by the morphology, as well as by the temperature¬reversion after incubation in ML-egg yolk (Mueller Hinton Broth, with L-cysteine and hen egg yolk) at 37°C. Ali 87 positive samples (3.58%) were isolated from insectivorous bats from Molossidae family, belonging to four genus and five species: 74 samples were from the specie Molossus molossus, 10 from Nyctinomops macrotis, 1 from Molossus rufus, 1 from Tadarida brasiliensis, and 1 from Eumops glaucinus. For three of these species (Nyctinomops macrotis, Molossus rufus and Eumops glaucinus) this is the first report of H. capsulatum isolation. Seventy positive bats were from São Paulo (80.5%), ten from Guarulhos City, four from Jundiaí City, two from Os asco City and one from Mogi Mirim City. Sixty-one samples of feces were analised by mouse inoculation test and inoculation in Petri dishes containing Mycosel Agar. Our results showed that the H. capsulatum is present in bat populations Iiving in urban areas. This is an important fact since H. capsulatum contaminated bats can be a source of contamination for people or animais in contact with them. The knowledge of the natural history of histoplasmosis in urban areas may be important for the establishment of prevention strategies.

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Methodology: It is a descriptive, observational, cross-sectional and retrospective study, with secondary data analysis of records filed in Sector Statistics Division and Medical File (DEAM) of HDT. All confirmed cases of disseminated histoplasmosis (HD) were sample through laboratory testing. Results: This study found a prevalence of 4.2%, which corresponds to 279 cases of AIDS associated HD. Most patients were young adult males, unmarried and with low education, and most from the interior of Goiás and urban area residents. The main occupations/professions exercised by patients were related to construction activities, home activities and rural. Regarding the signs and symptoms the most frequent were: fever (84.2%), cough (63.4%), weight loss (63.1%), dyspnea (56.3%) and asthenia (53.8 %). The diagnosis was made by blood culture (59.5%) and direct examination of peripheral blood (24.8%). Oral candidiasis, cryptococcosis and pneumocystosis were opportunistic infections associated with histoplasmosis found in these patients. Prevalent laboratory findings were hemoglobin < 10 g/dL (61.2%), platelets > 100,000 cells/mm3 (60.6%), creatinine < 1.5 mg/dL (75.9%), aspartate aminotransferase (AST) ≥ 45 UI/L (76.2%), lactate dehydrogenase (LDH) ≥ 480 UI/L (79.1%) and CD4 cell count below 150 cells/mm3 in 85.9% of patients. After diagnosis, 86.7% of patients were treated with amphotericin B, and 70.3% died and the fatality rate presented was 6.45%. When analyzed risk factors associated with death from HD no variable was significant. Conclusion: Histoplasmosis showed high prevalence and lethality in AIDS patients in Goiânia, showing the need to adopt actions to facilitate early diagnosis, proper treatment and thus improved prognosis. / A histoplasmose é uma micose sistêmica considerada um importante problema de saúde pública, especialmente em portadores do vírus da imunodeficiência adquirida (HIV), nos quais a doença está associada com mau prognóstico e alta mortalidade. Possui distribuição mundial, com maior prevalência em zonas tropicais e temperadas, e no Brasil tem sido relatada frequentemente nas regiões Sul e Sudeste. Objetivos: Realizar análise descritiva dos aspectos sociodemográficos, clínicos, laboratoriais e terapêuticos nos pacientes com histoplasmose e aids atendidos entre janeiro de 2000 a junho de 2012, no Hospital de Doenças Tropicais - Dr. Anuar Auad (HDT). Metodologia: Trata-se de um estudo descritivo, observacional, transversal e retrospectivo, com análise de dados secundários dos prontuários arquivados no Setor de Divisão de Estatística e Arquivo Médico (DEAM) do HDT. Foram incluídos na amostra todos os casos confirmados de histoplasmose disseminada (HD) por meio de exame laboratorial. Resultados: Neste estudo foi encontrada uma prevalência de 4,2%, o que corresponde a 279 casos de HD associada a aids. A maioria dos pacientes eram homens adultos jovens, solteiros e com baixa escolaridade, principalmente do interior de Goiás e residentes em áreas urbanas. As principais ocupações/profissões exercidas pelos pacientes foram atividades relacionadas à construção civil, atividades do lar e rurais. Em relação aos sinais e sintomas, os mais frequentes foram: febre (84,2%), tosse (63,4%), perda de peso (63,1%), dispneia (56,3%) e astenia (53,8%). O diagnóstico foi realizado através de hemocultura (59,5%) e exame direto de sangue periférico (24,8%). Candidíase oral, pneumocistose e criptococcose foram infecções oportunísticas encontradas associadas à histoplasmose nestes pacientes. Os achados laboratoriais prevalentes foram hemoglobina < 10 g/dL (61,2%), plaquetas > 100.000 células/mm3 (60,6%), creatinina < 1,5 mg/dL (75,9%), aspartato aminotransferase (AST) ≥ 45 UI/L (76,2%), desidrogenase lática (DHL) ≥ 480 UI/L (79,1%) e contagem de células CD4 inferior a 150 células/mm3 em 85,9% dos pacientes. Após o diagnóstico, 86,7% dos pacientes foram tratados com anfotericina B, dos quais 70,3% evoluíram para óbito com taxa de letalidade de 6,45%. Quando analisados fatores de risco associados ao óbito por HD nenhuma variável foi significativa. Conclusão: A histoplasmose apresentou alta prevalência e letalidade em pacientes com aids em Goiânia, mostrando a necessidade de adotar medidas para facilitar o diagnóstico precoce, tratamento adequado e, consequentemente, melhorar o prognóstico.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A histoplasmose, causada pelo fungo dimÃrfico Histoplasma capsulatum, à a mais prevalente das micoses sistÃmicas nas AmÃricas, sendo frequentemente observada em pacientes com AIDS. Desde o inÃcio da epidemia de HIV, na dÃcada de 80, existe um aumento significativo no nÃmero de casos de histoplasmose no Estado do CearÃ, Nordeste do Brasil. A escassez de dados epidemiolÃgicos dos genÃtipos que circulam na regiÃo Nordeste ressalta a importÃncia de estudos mais detalhados sobre a epidemiologia molecular de H. capsulatum nessa regiÃo. Diferentes tÃcnicas moleculares tÃm sido utilizadas para melhor caracterizar o padrÃo genÃtico de cepas de H. capsulatum circulantes no mundo. Vale ressaltar que, grande parte dos estudos de H. capsulatum à realizada na sua fase leveduriforme, quando expressa as suas caracterÃsticas parasitÃrias. Assim, o uso de tÃcnicas laboratoriais para a conversÃo in vitro para a fase leveduriforme e sua manutenÃÃo à extremamente importante. Diante do exposto, o presente estudo objetivou averiguar a taxa de conversÃo in vitro dos isolados de H. capsulatum em seis meios de cultura diferentes, bem como detectar, atravÃs da tÃcnica de PCR, a presenÃa do gene ryp1, um importante regulador transcricional da conversÃo da fase filamentosa para leveduriforme. AlÃm disso, visou conhecer o perfil molecular de cepas de H. capsulatum, de origem humana e veterinÃria, oriundas do Estado do Cearà e da regiÃo Sudeste do Brasil, atravÃs da tÃcnica de RAPD-PCR e avaliar a diversidade genÃtica da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 desses isolados comparados com isolados de outros paÃses, atravÃs do sequenciamento do DNA ribossÃmico nuclear. No estudo de conversÃo in vitro, todos os meios testados foram capazes de possibilitar a conversÃo de fases, contudo, o meio Ãgar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro mostrou a maior capacidade de conversÃo em relaÃÃo aos outros meios testados. O gene ryp1 foi detectado em 18 cepas de H. capsulatum (de origem humana e animal) e em trÃs espÃcimes clÃnicos positivos para H. capsulatum (sangue total) testados, nÃo sendo detectado, contudo, em isolados de Candida albicans, Paracoccidioides brasiliensis, Sporothrix schenckii e Coccidioides posadasii. A anÃlise da variabilidade genÃtica dos isolados de H. capsulatum, pela tÃcnica de RAPD-PCR, permitiu a detecÃÃo de dois clusters que circulam no Estado do CearÃ. O cluster 1 incluiu cepas das regiÃes Sudeste e Nordeste do Brasil, sendo observado dentro desse cluster a separaÃÃo dos isolados em trÃs subgrupos distintos (subgrupos 1a,1b e 1c). O cluster 2, por sua vez, incluiu somente cepas da regiÃo Nordeste do Brasil. NÃo foram observadas diferenÃas nas caracterÃsticas clÃnicas e epidemiolÃgicas dos indivÃduos cujas cepas pertenciam aos diferentes agrupamentos, obtidos pela tÃcnica de RAPD-PCR. O sequenciamento da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 possibilitou a detecÃÃo de dois clados principais. O clado 1 foi constituÃdo da maioria das cepas analisadas, inclusive as cepas da regiÃo Nordeste e incluiu isolados de localizaÃÃes geogrÃficas distintas. O clado 2, por sua vez, foi constituÃdo exclusivamente de isolados oriundos do Estado do Rio de Janeiro. Portanto, pode-se concluir que o Ãgar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro apresentou maior capacidade de conversÃo das cepas de H. capsulatum em relaÃÃo aos outros meios testados, podendo ser considerado o meio de escolha para conversÃo de cepas de H. capsulatum. Ademais, o gene ryp1 pode ser utilizado para identificar isolados de H. capsulatum, bem como, detectar a presenÃa do fungo em amostras clÃnicas, podendo ser utilizado para diagnÃstico de histoplasmose. Por fim, os isolados de H. capsulatum oriundos do Estado do Cearà podem ser agrupados em dois clusters principais, detectados atravÃs da tÃcnica de RAPD-PCR. AlÃm disso, a anÃlise filogenÃtica da regiÃo ITS1-5.8S-ITS2 revelou que as cepas da regiÃo Nordeste apresentaram diferenÃas genÃticas quando comparadas com as cepas de outras regiÃes brasileiras, ficando agrupadas em um cluster diferente das mesmas. / Histoplasmosis, caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum, is the most prevalent systemic mycosis in the Americas and it is frequently observed in AIDS patients. Since the beginning of the HIV epidemic, there has been a significant increase in the number of histoplasmosis cases in the Cearà state, Northeast Brazil. The lack of epidemiological data of the genotypes circulating in the Northeast region shows the importance of more detailed studies on the molecular epidemiology of H. capsulatum in this region. Different molecular techniques have been used to better characterize the genetic profile of H. capsulatum strains. It is noteworthy that, most studies of H. capsulatum are performed in the yeast phase due to its parasitic characteristics. Thus, the use of laboratory techniques for in vitro conversion and maintenance is extremely important. Given the above, this study aimed to determine the in vitro conversion rate of H. capsulatum isolates in six different culture media, as well as to detect by PCR the presence of ryp1 gene, an important transcriptional regulator of the conversion from filamentous to yeast phase. In addition, it aimed to establish the molecular profile of H. capsulatum strains, from human and veterinary source, from Cearà and Southeast region of Brazil through RAPD-PCR assay and to assess the genetic diversity of the ITS1-5.8S-ITS2 region of these isolates compared with isolates from other countries, through the sequencing of nuclear ribosomal DNA. In the study of in vitro conversion, all tested media allowed the conversion, however, the Sabouraud agar media supplemented with 10% sheep blood showed the highest conversion capacity in relation to the other tested media. The ryp1 gene was detected in 18 H. capsulatum strains (from human and animal source) and in three tested clinical specimens (whole blood), not being detected, however, in isolates of Candida albicans, Paracoccidioides brasiliensis, Sporothrix schenckii and Coccidioides posadasii. The analysis of the genetic variability of the H. capsulatum isolates, by RAPD-PCR assay, allowed the detection of two clusters circulating in the state of CearÃ. The first cluster included strains from Southeast and Northeast regions of Brazil, being observed, within this cluster, the separation of isolates into three distinct subgroups (subgroups 1a, 1b and 1c). The second cluster included only strains from Northeast region of Brazil. There were no differences in clinical and epidemiological characteristics of individuals whose isolates belonged to different groups, obtained by RAPD-PCR. The sequencing of the ITS1-5, 8S-ITS2 region allowed the detection of two major clades. The clade 1 comprised the majority of the isolates tested, including strains from the Northeast, and included isolates from different geographical locations. The clade 2 was composed exclusively of isolates from the state of Rio de Janeiro. Therefore, it can be concluded that the Sabouraud agar supplemented with 10% sheep blood showed higher conversion capacity of H. capsulatum strains compared to the other tested media, and may be considered the medium of choice for converting of H. capsulatum strains. Furthermore, the ryp1 gene can be used to identify and detect H. capsulatum from clinical specimens, may be used for diagnosis of histoplasmosis. Finally, the H. capsulatum isolates from the state of Cearà can be grouped into two main clusters, detected by RAPD-PCR. In addition, phylogenetic analysis of the ITS1-5.8S-ITS2 region revealed that strains from the Northeast presented genetic differences compared with strains from other Brazilian regions, being grouped in a different cluster of them.

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