Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6389.pdf: 1676206 bytes, checksum: 4f19f4ec15fdbd8ec8a9618ce747d102 (MD5) Previous issue date: 2014-09-03 / Financiadora de Estudos e Projetos / Fipronil (Fpn) is a phenyl-pyrazolic insecticide widely used for pest control in agriculture and livestock. It can be applied in very low doses as well as very high concentrations for the effective control of insects that show some resistance or tolerance to other families of insecticides. Fpn acts a blockers of chloride channels coupled to GABA and glutamate receptors, the latter are insect-specific targets not present in vertebrates. The aim of this study was to evaluate the possible effects on cardiac function of Hypostomus regani. of acute exposure (96 h) to sublethal concentrations (4.23 μ.Kg-1) of the pesticide Fpn, mixed into an artificial sediment. There was no difference in relative ventricular mass of the control group when compared to the group exposed to the Fpn. Ventricular strips from the Fpn exposed group exhibited showed higher twitch force (TF) and lower relationships between time-dependent variables and TF (time to peak tension - TPT/TF, and time to half relaxation - THR/TF) in response to increases in the frequency of stimulation or elevations of Ca2+ in physiological solution. Additionally, the exposed group maintained TF until a frequency of 2.6 Hz, while the TF of controls was only maintained until 2.0 Hz. Neither group showed potentiation of TF after non-physiological diastolic pause, indicating that the sarcoplasmic reticulum (RS) is not functional for contractility in this species. Corroborating that result, Western blots showed that SERCA2 was not expressed in either experimental group, these results indicate that the Ca2+ provided for ventricular contraction of H. regani is of extracellular origin. The replacement of NaCl with LiCl in saline caused negative inotropy in the exposed group, additionally, increments of Ca2+ caused positive inotropism in this group, indicating that the cardiotonic effect and greater contraction dynamics caused by exposure to Fpn were probably due to an increased expression and / or activity of NCX. Blocking of Na+/K+ pump led to a negative inotropism in both groups, presumably due to an overload of intracellular Ca2+. The cardiac pump capacity (CPC) of the exposed group was higher than the control group at all stimulation frequencies, probably due to increased activity and / or expression of NCX in the Fpn-exposed group. / O fipronil (Fpn) é um inseticida fenil-pirazólico amplamente utilizado para controle de pragas na agricultura e em animais domésticos. Pode ser aplicado desde doses muito baixas até muito altas para controle efetivo de insetos resistentes ou tolerantes a outras famílias de inseticidas. O Fpn atua como bloqueador dos canais de cloreto acoplados aos receptores GABA e aos receptores glutamatérgicos, estes últimos são alvo inseto-específico não presente nos vertebrados. O objetivo do presente estudo foi avaliar os possíveis efeitos da exposição aguda (96 h) em concentrações subletais (4,23μ.Kg-1) do pesticida Fpn, adicionado em sedimento artificial, sobre a função cardíaca in vitro do cascudo Hypostomus regani. Não foi encontrada diferença na massa ventricular relativa do grupo controle quando comparado ao grupo exposto ao Fpn. As preparações ventriculares do grupo exposto ao Fpn apresentaram maiores valores de força de contração (Fc) e menores valores das relações entre os parâmetros tempo-dependentes e a Fc (tempo para o pico de tensão TPT/Fc, e tempo para metade do relaxamento THR/fc) nos protocolos do tempo experimental, incrementos na frequência de estimulação e incrementos de Ca2+ na solução fisiológica. Adicionalmente, o grupo exposto manteve a Fc até a frequência 2,6 Hz, enquanto o grupo controle manteve até a frequência 2,0 Hz. Ambos os grupos não apresentaram potenciação da Fc após pausa diastólica não fisiológica, indicando que o retículo sarcoplasmático (RS) não é funcional para a contratilidade dessa espécie. Corroborando com esse resultado, a técnica de Western Blot revelou que a SERCA2 não foi expressa em ambos os grupos experimentais, tais resultados indicam que o Ca2+ para a contração do ventrículo de H. regani é proveniente do meio extracelular. A substituição do NaCl por LiCl na solução fisiológica causou um inotropismo negativo no grupo exposto, adicionalmente, os incrementos de Ca2+ provocaram um inotropismo positivo no grupo exposto, indicando que o efeito cardiotônico e a maior dinâmica de contração causados pela exposição ao Fpn é devido provavelmente a uma maior expressão e/ou atividade do NCX no grupo exposto. O bloqueio da bomba Na+/K+-ATPase provocou um inotropismo negativo em ambos os grupos, provavelmente devido a uma sobrecarga de Ca2+ intracelular. A capacidade de bombeamento cardíaco (CBC) do grupo exposto foi superior que o grupo exposto em todas as frequências de estimulação, devido a provável maior atividade e/ou expressão do NCX no grupo exposto.

Orientador: Marlene Tiduko Ueta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T04:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Molina_JuliaPereira_M.pdf: 1442066 bytes, checksum: e8ad2a162950fbe267341b74c08ad0f7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Os tripanossomas já foram reportados em diversas espécies de peixes de água salgada e doce, sendo a maioria das espécies descritas com base nas características morfológicas. Tripanossomas parasitos de peixes são heteroxenos e são transmitidos por hirudíneos. Este trabalho tem como objetivos caracterizar a prevalência e densidade da infecção por Trypanosoma sp. presentes no sangue de três espécies de cascudos do rio Mogi Guaçu, Cachoeira de Emas, município de Pirassununga, SP e caracterizar morfologicamente e por técnicas moleculares os exemplares de Trypanosoma encontrados no sangue dos cascudos. Entre fevereiro de 2008 e fevereiro de 2009 foram coletados 256 exemplares de cascudos sendo 60 Hypostomus albopunctatus, 100 Hypostomus regani e 96 Hypostomus strigaticeps. O sangue foi coletado por punção cardíaca e alíquotas de 8?l foram retiradas para confecção de esfregaço em camada delgada, que foram fixados em metanol e corados por Giemsa, para a determinação da positividade e densidade dos tripanossomas. Após a biometria e coleta do sangue os peixes foram marcados e metade foi acondicionada em um tanque de criação do CEPTA/ ICMBIO para verificação da manutenção da infecção e o restante foi devolvido ao rio. A prevalência geral de tripanossomas foi de 47,6 % e densidade média geral de 0,75 parasitas/ µl de sangue. A prevalência ao longo do ano apresentou diferenças significativas apenas para Hypostomus regani (p=0,0054) e Hypostomus strigaticeps (p=0,0007). A densidade média de parasitas não apresentou diferenças significativas entre as três espécies de peixes analisados, assim como a variação mensal da densidade por espécie de peixes. Hirudíneos do gênero Placobdella sp. foram coletados da superfície do corpo e da boca de H regani e H. strigaticeps para extração do DNA, os oligonucleotídeos utilizados (S-1842 e S-1843) amplificaram um fragmento de 1000pb do gene 18S rRNA dos tripanossomas isolados de hirudíneos coletados em H regani e H. strigaticeps. Dos 19 peixes recapturados após dois meses apenas três se mantiveram positivos. Foram medidos 255 tripanossomas sendo 66 de H. albopunctatus, 64 de H. regani e 95 de H. strigaticeps e os valores foram comparados com os de outras espécies de tripanossomas encontradas em peixes do gênero Hypostomus. Os parasitas encontrados nas três espécies de peixes apresentaram características morfológicas semelhantes. Foi estabelecida a frequência de ocorrência de acordo com a variação do comprimento do corpo para evidência de pleomorfismo. Os dados morfológicos mostram que Trypanosoma sp.1 e Trypanosoma sp.2 podem ser considerados de espécies diferentes; as análises evidenciaram a presença de pleomorfismo nos tripanossomas encontrados nas três espécies de peixes. / Abstract: Trypanosomes have been reported in several species of fish that inhabit salt and fresh waters. The majority of these protozoan species are described based on morphologic features. The parasites are heteroxenic and are transmitted by leeches. This work aims to characterize the prevalence and density of infection by Trypanosoma sp. present in the blood of three species of armored catfish collected from Mogi Guaçu river (Cachoeira das Emas, Pirassununga city, SP) and characterize morphologically and by molecular techniques the trypanosomes found in the blood of catfish. Between february 2008 and february 2009, 256 specimens of armored catfish were collected, being 60 Hypostomus albopunctatus, 100 Hypostomus regain, and 96 Hypostomus strigaticeps. The blood was collected by cardiac puncture and a sample of 8µl was removed to realize blood smears on microscope slides. The slides were fixed in methanol and stained with giemsa for posterior analysis on light microscopy for determination of positive presence and density of trypanosomas. After biometric analysis and blood collection fish were marked half of the fish marked were maintened in a tank of CEPTA/ ICMBIO for future verification of the infeccion maintence and the other half were retorned to the river. It was found a prevalence of 47,6% and the average density of 0,75 parasitas/µl of blood. The prevalence during the year presented significative differences only for Hypostomus regani (p=0,0054) e Hypostomus strigaticeps (p=0,0007). The average density of parasites showed no significant differences among the three fish species analyzed and the monthly variation of density per species of fish. Also, leeches of the genus Placobdella sp. were collected from the surface of the body and mouth of armored catfish for DNA extraction. The primers used (S-1842 and S- 1843) amplified a 1000bp fragment of the 18S rRNA gene of trypanosomes isolated from leeches collected in H regani and H. strigaticeps. Of the 19 fish recaptured after two months only three remained positive. Therein, 255 trypanosomes were measured being 66 H. albopunctatus, 64 H. regani and 95 H. strigaticeps and values were compared with those of other parasite species found in different species of fish. The parasites found in the three species of fish presented similar morphological characteristics. The frequency of occurrence was established according to the variation in body length as evidence of pleomorphism. Nevertheless morphological data show that Trypanosoma sp.1 and Trypanosoma p.2 can be considered distinct species, the analysis revealed the presence of pleomorphism in trypanosomes found in the three species of fish. / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia