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Caracterização molecular de proteínas que compõem o complexo spliceosomal em tripanosomatídeos /

Ambrósio, Daniela Luz. January 2008 (has links)
Orientador: Regina Maria Barreto Cicarelli / Banca: Regina Maria Barreto Cicarelli / Banca: Otávio Henrique Thiemann / Banca: Marcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Bruno Dallagiovanna Muñiz / Banca: Maria Célia Bertolini / Resumo: Em tripanosomatideos, o processo de trans-splicing é responsável pelo processamento dos pré-mRNAs policistrônicos, resultando na individualização de cada gene, de modo que cada mRNA contenha a seqüência spliced leader (SL) na extremidade 5'. Esse processo requer a participação das ribonucleoproteínas (snRNPs) U2, U4/U6, U5 e SL RNP, que são constituídas por snRNAs, sete proteínas Sm (comuns a todos) e proteínas específicas de cada partícula. Neste trabalho, a proteína SmD1-PTP tagged foi produzida in vivo em formas procíclicas de Trypanosoma brucei, purificada e as proteínas ligadas a ela foram analisadas por espectrometria de massas (LC/MS/MS), tendo sido identificadas 41 proteínas que interagem com essa partícula, das quais 16 foram anotadas como proteínas conservadas hipotéticas. Dez proteínas conservadas hipotéticas foram PTPtagged para a análise de ligação aos snRNAs (U1, U2, U4, U5, U6 e SL), utilizando a reação de primer extension, após a purificação com beads de IgG e extração do RNA. Dentre as proteínas estudadas, identificou-se um homólogo de proteína específica U1-A, uma proteína Lsm, duas proteínas U5 específicas, uma proteína U4/U6 específica e três proteínas que não se ligam diretamente a esses snRNAs, mas que provavelmente participam do mecanismo como fatores de splicing. / Abstract: In trypanosomatids, the trans-splicing reaction is responsible for the polycistronic pre-mRNA processing to generate individual genes which contain the 5' end spliced leader (SL) sequence. The ribonucleoproteins (snRNPs) U2, U4/U6, U5 and SL RNP, which consist of snRNAs, seven Sm proteins (common for all) and specific proteins for each particle, participate in the process. In this work, the protein SmD1-PTP tagged was produced in vivo in procyclic forms of Trypanosoma brucei, it was purified and the binding proteins were identified by mass spectrometry (LC/MS/MS). It was possible the identification of 41 proteins that interact with this particle. Among them, 16 proteins were annotated as conserved hypothetical proteins. Ten conserved hypothetical proteins were PTPtagged for the snRNAs (U1, U2, U4, U5, U6 e SL) binding analysis using the primer extension reaction, after the IgG purification and RNA extraction. Among the proteins analysed, it was possible the identification of a homolog of the specific protein U1-A, one LSm protein, two U5 specific proteins, one U4/U6 specific protein and three proteins that did not present direct binding with the snRNAs analyzed that do not bind any of these snRNAs directely, but probably participate in the processing as splicing factors. / Doutor
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Caracterização molecular de proteínas que compõem o complexo spliceosomal em tripanosomatídeos

Ambrósio, Daniela Luz [UNESP] 14 November 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-11-14Bitstream added on 2014-06-13T20:01:11Z : No. of bitstreams: 1 ambrosio_dl_dr_arafcf.pdf: 1122454 bytes, checksum: 14732b7e9fd8a09e53fc471391ed5afb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Em tripanosomatideos, o processo de trans-splicing é responsável pelo processamento dos pré-mRNAs policistrônicos, resultando na individualização de cada gene, de modo que cada mRNA contenha a seqüência spliced leader (SL) na extremidade 5´. Esse processo requer a participação das ribonucleoproteínas (snRNPs) U2, U4/U6, U5 e SL RNP, que são constituídas por snRNAs, sete proteínas Sm (comuns a todos) e proteínas específicas de cada partícula. Neste trabalho, a proteína SmD1-PTP tagged foi produzida in vivo em formas procíclicas de Trypanosoma brucei, purificada e as proteínas ligadas a ela foram analisadas por espectrometria de massas (LC/MS/MS), tendo sido identificadas 41 proteínas que interagem com essa partícula, das quais 16 foram anotadas como proteínas conservadas hipotéticas. Dez proteínas conservadas hipotéticas foram PTPtagged para a análise de ligação aos snRNAs (U1, U2, U4, U5, U6 e SL), utilizando a reação de primer extension, após a purificação com beads de IgG e extração do RNA. Dentre as proteínas estudadas, identificou-se um homólogo de proteína específica U1-A, uma proteína Lsm, duas proteínas U5 específicas, uma proteína U4/U6 específica e três proteínas que não se ligam diretamente a esses snRNAs, mas que provavelmente participam do mecanismo como fatores de splicing. / In trypanosomatids, the trans-splicing reaction is responsible for the polycistronic pre-mRNA processing to generate individual genes which contain the 5´ end spliced leader (SL) sequence. The ribonucleoproteins (snRNPs) U2, U4/U6, U5 and SL RNP, which consist of snRNAs, seven Sm proteins (common for all) and specific proteins for each particle, participate in the process. In this work, the protein SmD1-PTP tagged was produced in vivo in procyclic forms of Trypanosoma brucei, it was purified and the binding proteins were identified by mass spectrometry (LC/MS/MS). It was possible the identification of 41 proteins that interact with this particle. Among them, 16 proteins were annotated as conserved hypothetical proteins. Ten conserved hypothetical proteins were PTPtagged for the snRNAs (U1, U2, U4, U5, U6 e SL) binding analysis using the primer extension reaction, after the IgG purification and RNA extraction. Among the proteins analysed, it was possible the identification of a homolog of the specific protein U1-A, one LSm protein, two U5 specific proteins, one U4/U6 specific protein and three proteins that did not present direct binding with the snRNAs analyzed that do not bind any of these snRNAs directely, but probably participate in the processing as splicing factors.
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Do screening ao mecanismo de ação, uma contribuição para a descoberta de ciclopaladados bioativos : a atividade leishmanicida de CP2 e seu efeito inibitório frente à DNA topoisomerase 1B de Leishmania /

Velásquez, Angela Maria Arenas. January 2017 (has links)
Orientadora: Marcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Adelino Vieira de Godoy Netto / Banca: Luiz Ricardo Orsini Tosi / Banca: Pio Colepicolo Neto / Banca: Silvia Reni Bortolin Uliana / Resumo: As leishmanioses são doenças mundialmente distribuídas, encontradas nas áreas tropicais e subtropicais do mundo e que são caudas por protozoários parasitos do gênero Leishmania spp. A pesar dos inúmeros problemas associados aos tratamentos disponíveis (como alta toxicidade dos fármacos, limitada eficácia e casos de resistência haverem surgido), ainda estás doenças são negligenciadas pelas industrias farmacêuticas e pelos governos. Na procura por novos fármacos com amplo espectro de ação e baixa toxicidade, há evidências que sugerem que complexos de metais de transição podem atuar em diversos compartimentos ou organelas dos protozoários, além de apresentar baixa toxicidade no hospedeiro mamífero. No presente trabalho, realizou-se a avaliação leishmanicida in vitro de seis compostos ciclopaladados, [Pd(dmba)(µ-Cl)]2 (CP1), [Pd(dmba)(µ-N3)]2 (CP2), [Pd(dmba)(µ-NCO)]2 (CP3), [Pd(dmba)Cl(isn)] (CP4), [Pd(dmba)(N3)(isn)] (CP5) e [Pd(dmba)(NCO)(isn)] (CP6) e seus correspondentes ligantes livres, Hdmba: N,N-dimetilbenzilamina e isn: isonicotinamida. O composto CP2 inibiou o crescimento das formas promastigotas de Leishmania amazonensis (IC50 = 13,2 ± 0,7 µM), reduz a proliferação das formas amastigotas intracelulares (IC50 = 10,2 ± 2,2 µM) e apresentou um baixo efeito citotóxico frente a macrófagos peritoneais (CC50 = 506,0 ± 10,7 µM). Dados in vitro da atividade anti-T. cruzi e anti-T. brucei, parasitos causadores das doenças de Chagas e do sono, respectivamente, também demonstraram que os compostos ciclopaladados apresentam amplo espectro de ação constituindo-se em excelentes candidatos para o tratamento das doenças negligenciadas em estudo. O composto CP2 apresentou-se para as formas amastigotas intracelulares de L. amazonensis pelo menos 50 vezes mais seletivo e 200 vezes mais seletivo para as amastigotas de T. cruzi vs. células de mamífero... / Abstract: Leishmaniasis are diseases globally distributed in tropical and subtropical areas of the world and Leishmania spp. are the etiological agents of the diseases. Numerous problems associated with available treatments of the disease are still unsatisfactory because currently available drugs are highly toxic, little effectiveness and drug resistance cases have emerged. Furthermore, leishmaniasis are a neglected disease by pharmaceutical industries and governments. In the search for new drugs with a broad spectrum of action and low toxicity, there is evidence to suggest that transition metal complexes can act in several compartments or organelles of protozoa, as well as to present low toxicity in the mammalian host. In this work, we evaluated the leishmanicidal and trypanocidal in vitro activity of six cyclopalladated compounds: [Pd(dmba)(µ-Cl)]2 (CP1), [Pd(dmba)(µ-N3)]2 (CP2), [Pd(dmba)(µ-NCO)]2 (CP3), [Pd(dmba)Cl(isn)] (CP4), [Pd(dmba)(N3)(isn)] (CP5), [Pd(dmba)(NCO)(isn)] (CP6) and the free ligands, Hdmba: N,N- dimethylbenzylamine e isn: isonicotinamide. The cyclopalladated complexes CP2 inhibited the growth of the promastigote forms of Leishmania amazonensis (IC50 = 13,2 ± 0,7 µM), reduced the proliferation of intracellular amastigote forms (IC50 = 10,2 ± 2,2 µM) and showed a low cytotoxic effect against peritoneal macrophages (CC50 = 506,0 ± 10,7 µM). In vitro assays against T. cruzi and T. brucei, parasites that cause Chagas disease and sleeping sickness, respectively, demons... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor
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Determinação da atividade leishmanicida, antiproteolítica e antioxidante de Arrabidaea brachypoda /

Pereira, Ivan de Oliveira. January 2012 (has links)
Orientador: Luis Vitor Silva do Sacramento / Coorientador: Marcos José Marques / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Banca: Sérgio de Albuquerque / Resumo: Infecções causadas por tripanosomatídeos do gênero Leishmania representam um dos maiores problemas de saúde pública mundial, com alta endemicidade, sobretudo em países em desenvolvimento. As substâncias de escolha para o tratamento destas parasitoses, de modo geral, causam notória toxicidade renal e cardíaca, além de induzirem resistência no parasito e muitas vezes apresentarem eficácia insuficiente. As plantas são utilizadas no tratamento e cura de enfermidades desde a antiguidade, quando o homem começou a utilizar a natureza em seu favor. Estas plantas, pela sua riqueza química e farmacológica, têm sido estudadas no intuito de comprovar atividades atribuídas pela crença popular e obtenção de novos compostos ativos. Neste contexto, destaca-se a família Bignoniaceae, típica do Cerrado brasileiro, que compreende mais de cem gêneros, entre eles o gênero Arrabidaea, que é rico em uma considerável diversidade de compostos, porém muito pouco estudado até o momento, especialmente quando se fala da espécie A. brachypoda. Este trabalho visou estudar o extrato das folhas de A. brachypoda e determinar suas atividades leishmanicida, antiproteolítica e antioxidante. Após obtido, por percolação, o extrato hidro-etanólico das folhas de A. brachypoda, este foi fracionado por partição líquido-líquido em hexânico, acetato-etílico, butanólico e aquoso, e analisados por UFLC-MS para determinação das massas moleculares dos principais constituintes de cada fração, em seguida, o extrato bruto e frações foram avaliados quanto a sua atividade leishmanicida in vitro, sua citotoxicidade, e também quanto ao seu potencial inibitório perante proteases obtidas de promastigotas e amastigotas (pool), assim como proteases purificadas (oligopeptidases B e C, Catepsina-L e Cruzaína) e recombinantes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Infections caused by trypanosomatids of the genus Leishmania represent one of the largest global public health problems, with high endemicity, especially in developing countries. The drugs of choice for the treatment of these parasitic infections generally cause notorious heart and kidney toxicity, and induce resistance in parasite and often have insufficient effectiveness. The plants are used in the treatment and cure of illnesses since antiquity, when the man has begum to use nature in his favor. These plants by their chemical and pharmacological wealth, have been studied in order to prove the activities assigned by the popular belief and obtaining new active compounds. In this context, highlight the family Bignoniaceae, typical of the Brazilian Cerrado, which comprises more than a hundred genera, among them the Arrabidaea genus, which is rich in a considerable diversity of compounds, however very little studied so far, especially when talking of the specie A. brachypoda. This work aimed to study the extract from leaves of A. brachypoda and evaluate its leishmanicidal, antiproteolitic and antioxidant activities. After obtained by maceration, the hidro-etanolic extract from leaves of A. brachypoda, this was fractioned by liquid-liquid partition in hexanic, ethyl-acetate, butanolic and watery, and analyzed by HPLC-MS for molecular weights determination of the main constituents from each fraction, then the crude extract and fractions were evaluated on their leishmanicidal activity in vitro, their cytotoxicity, and also regarding its potential as protease inhibitor obtained from amastigotes and promastigotes (pool), as well as purified proteases (oligopeptidases B and C, Cathepsin-L and Cruzain) and recombinants proteases (rCPB2.8, rCPB3.0 and rH84Y), additionally evaluated the antioxidant activity of... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Detecção de tripanosomatídeos em gatos domésticos de região endêmica para leishmaniose visceral por técnicas parasitológicas, sorológicas e moleculares

Alves-Martin, Maria Fernanda January 2017 (has links)
Orientador: Simone Baldini Lucheis / Resumo: A família Trypanosomatidae inclui protozoários flagelados com dois gêneros de importância médica e veterinária: Leishmania, causador das leishmanioses e Trypanosoma, responsáveis pelas tripanossomíases de relevância epidemiológica, ambos com o envolvimento de hospedeiros mamíferos e vetores em seu ciclo de vida. O gato doméstico passou a ser considerado um hospedeiro reservatório de Leishmanias, após comprovação por xenodiagnóstico, da transmissibilidade de formas promastigotas de Leishmania infantum para o vetor flebotomíneo. Devido a inespecificidade dos achados clínicos na Leishmaniose Felina (LF), à semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras comuns em gatos, e à provável resistência felina a infecção, é possível que, dentro de uma área endêmica para leishmaniose ocorra um percentual elevado de indivíduos infectados, mas sem apresentarem sinais clínicos, e a falta de diagnóstico precoce da LF nessas áreas pode implicar com que o animal continue a representar risco potencial de transmissão de leishmanias aos vetores. Assim sendo, pretendeu-se investigar possíveis associações entre sorologia positiva para L. infantum, com o parasitismo tecidual em sangue, órgãos e células conjuntivais de gatos de região endêmica para LV. Foram incluídos neste estudo 36 gatos adultos, cedidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru - São Paulo, com 31 animais apresentando pelo menos um tipo de alteração clínica. A partir dos diagnósticos sorológicos, verificou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanosomatidae family includes flagellate protozoa of two genera of medical and veterinary importance: Leishmania, the causative agent of leishmaniasis and Trypanosoma, responsible for trypanosomiasis of epidemiological relevance, with the involvement of mammalian hosts and vectors in their life cycle. Nowadays, the domestic cat is considered a host reservoir of leishmanias, after proving by xenodiagnosis, the transmissibility of promastigotes of Leishmania infantum to the phlebotomine vector. Due to the lack of specificity of the clinical findings in Feline Leishmaniasis (FL), similar to the clinical aspects of this disease with other common ones in cats, and to the probable feline resistance to infection, it is possible that, within an endemic area for leishmaniasis, a high percentage of individuals with no clinical signs, and lack of early diagnosis of FL in these areas may imply that the animal continues to pose a potential risk of transmission of leishmaniasis to the vectors. Thus, it was intended to investigate possible associations between positive serology for L.infantum, with tissue parasitism in blood, organs and conjunctival cells of cats from endemic region to visceral leishmaniasis. Thirty-six adult cats, assigned by the Zoonoses Control Center (ZCC) of Bauru-SP, with 31 animals presenting at least one type of clinical alteration, were included in this study. From the serological diagnoses, the positivity was verified in 26 animals, and (66.7%) (24/36) were rea... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Determinação da atividade leishmanicida, antiproteolítica e antioxidante de Arrabidaea brachypoda

Pereira, Ivan de Oliveira [UNESP] 20 December 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-20Bitstream added on 2014-06-13T19:04:27Z : No. of bitstreams: 1 pereira_io_dr_arafcf.pdf: 924136 bytes, checksum: 463951dc609df1ae3aa7e71cacf8d713 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Infecções causadas por tripanosomatídeos do gênero Leishmania representam um dos maiores problemas de saúde pública mundial, com alta endemicidade, sobretudo em países em desenvolvimento. As substâncias de escolha para o tratamento destas parasitoses, de modo geral, causam notória toxicidade renal e cardíaca, além de induzirem resistência no parasito e muitas vezes apresentarem eficácia insuficiente. As plantas são utilizadas no tratamento e cura de enfermidades desde a antiguidade, quando o homem começou a utilizar a natureza em seu favor. Estas plantas, pela sua riqueza química e farmacológica, têm sido estudadas no intuito de comprovar atividades atribuídas pela crença popular e obtenção de novos compostos ativos. Neste contexto, destaca-se a família Bignoniaceae, típica do Cerrado brasileiro, que compreende mais de cem gêneros, entre eles o gênero Arrabidaea, que é rico em uma considerável diversidade de compostos, porém muito pouco estudado até o momento, especialmente quando se fala da espécie A. brachypoda. Este trabalho visou estudar o extrato das folhas de A. brachypoda e determinar suas atividades leishmanicida, antiproteolítica e antioxidante. Após obtido, por percolação, o extrato hidro-etanólico das folhas de A. brachypoda, este foi fracionado por partição líquido-líquido em hexânico, acetato-etílico, butanólico e aquoso, e analisados por UFLC-MS para determinação das massas moleculares dos principais constituintes de cada fração, em seguida, o extrato bruto e frações foram avaliados quanto a sua atividade leishmanicida in vitro, sua citotoxicidade, e também quanto ao seu potencial inibitório perante proteases obtidas de promastigotas e amastigotas (pool), assim como proteases purificadas (oligopeptidases B e C, Catepsina-L e Cruzaína) e recombinantes... / Infections caused by trypanosomatids of the genus Leishmania represent one of the largest global public health problems, with high endemicity, especially in developing countries. The drugs of choice for the treatment of these parasitic infections generally cause notorious heart and kidney toxicity, and induce resistance in parasite and often have insufficient effectiveness. The plants are used in the treatment and cure of illnesses since antiquity, when the man has begum to use nature in his favor. These plants by their chemical and pharmacological wealth, have been studied in order to prove the activities assigned by the popular belief and obtaining new active compounds. In this context, highlight the family Bignoniaceae, typical of the Brazilian Cerrado, which comprises more than a hundred genera, among them the Arrabidaea genus, which is rich in a considerable diversity of compounds, however very little studied so far, especially when talking of the specie A. brachypoda. This work aimed to study the extract from leaves of A. brachypoda and evaluate its leishmanicidal, antiproteolitic and antioxidant activities. After obtained by maceration, the hidro-etanolic extract from leaves of A. brachypoda, this was fractioned by liquid-liquid partition in hexanic, ethyl-acetate, butanolic and watery, and analyzed by HPLC-MS for molecular weights determination of the main constituents from each fraction, then the crude extract and fractions were evaluated on their leishmanicidal activity in vitro, their cytotoxicity, and also regarding its potential as protease inhibitor obtained from amastigotes and promastigotes (pool), as well as purified proteases (oligopeptidases B and C, Cathepsin-L and Cruzain) and recombinants proteases (rCPB2.8, rCPB3.0 and rH84Y), additionally evaluated the antioxidant activity of... (Complete abstract click electronic access below)
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Pesquisa de tripanosomatídeos em primatas de cativeiro do Parque Zoológico Municipal de Bauru, São Paulo

Guiraldi, Lívia Maísa. January 2016 (has links)
Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Virgínia Bodelão Richini Pereira / Resumo: A família Trypanosomatidae inclui agentes etiológicos responsáveis por ocasionar doenças em humanos e demais animais, englobando dezenas de protozoários pertencentes a diferentes gêneros, destacando-se os protozoários representantes dos gêneros Leishmania, causadores das leishmanioses e Trypanosoma, causador de tripanosomíase. Enquanto a transmissão das leishmanioses ocorre devido à picada de insetos fêmeas de flebotomíneos pertencentes ao gênero Phlebotomus no Velho Mundo e Lutzomyia no Novo Mundo, a transmissão da tripanossomíase depende da espécie de tripanosoma envolvida na infecção, podendo ocorrer pela picada de insetos adultos do gênero Glossina; pelas fezes de triatomíneos, sobretudo do gênero Triatoma e mecanicamente por moscas hematófagas, principalmente do gênero Stomoxys. Além dos humanos, animais domésticos e silvestres podem atuar como reservatórios de tripanosomatídeos, incluindo os primatas não humanos, os quais estão associados com o ciclo enzoótico das leishmanioses e tripanosomíase, sendo que a infecção natural por protozoários do gênero Trypanosoma e Leishmania em mamíferos selvagens é comum na natureza. O objetivo do trabalho foi pesquisar tripanosomatídeos em primatas de cativeiro procedentes do Parque Zoológico Municipal de Bauru - SP por meio de anticorpos contra o parasito e pela amplificação do DNA do protozoário. Para tanto, foram coletadas amostras de sangue de 39 primatas. A técnica molecular de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foi aplicada na... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The family Trypanosomatidae includes etiological agents responsible for causing diseases in humans and other animals. There are dozens of protozoa belonging to different genres, especially protozoa representatives of Leishmania genre, which causes leishmaniasis and Trypanosoma, responsible for trypanosomiasis. While the transmission of leishmaniasis is due to the bites of female sand flies belonging to the genus Phlebotomus in the Old World and Lutzomyia in the New World, the transmission of trypanosomiasis depends on the species of trypanosome involved in the infection. It may occurs by the bite of adult insects of the genus Glossina or by the feces of insects, especially by the genre Triatoma and mechanically by bloodsucking flies, especially the Stomoxys genre. In addition to humans, domestic and wild animals can act as trypanosomatids reservoirs, including non-human primates, which are associated with the enzootic cycle of leishmaniasis and trypanosomiasis; the natural infection by Trypanosoma and Leishmania protozoa in wild mammals is common in nature. The aim of the study was to investigate trypanosomatids in captive primates coming from Municipal Zoological Park of Bauru by antibodies against the parasite and the amplification of the DNA of the parasite. For this, blood samples were collected from 39 primates. The molecular technique of Polymerase Chain Reaction (PCR) was applied in research for Leishmania braziliensis, Leishmania amazonensis and Leishmania infantum us... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Caracterização da infecção por tripanossomatídeos (Protozoa: Kinetoplastida) presentes em três espécies de cascudo (Pisces: Loricariidae) do Rio Mogi-Guaçu, SP / Characterization of infection by Tripanossomatídeos (Protozoa: Kinetoplastida) present three species of armored catfish (Pisces: Loricariidae) from Mogi-Guaçu river, SP

Molina, Julia Pereira, 1985- 17 August 2018 (has links)
Orientador: Marlene Tiduko Ueta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T04:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Molina_JuliaPereira_M.pdf: 1442066 bytes, checksum: e8ad2a162950fbe267341b74c08ad0f7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Os tripanossomas já foram reportados em diversas espécies de peixes de água salgada e doce, sendo a maioria das espécies descritas com base nas características morfológicas. Tripanossomas parasitos de peixes são heteroxenos e são transmitidos por hirudíneos. Este trabalho tem como objetivos caracterizar a prevalência e densidade da infecção por Trypanosoma sp. presentes no sangue de três espécies de cascudos do rio Mogi Guaçu, Cachoeira de Emas, município de Pirassununga, SP e caracterizar morfologicamente e por técnicas moleculares os exemplares de Trypanosoma encontrados no sangue dos cascudos. Entre fevereiro de 2008 e fevereiro de 2009 foram coletados 256 exemplares de cascudos sendo 60 Hypostomus albopunctatus, 100 Hypostomus regani e 96 Hypostomus strigaticeps. O sangue foi coletado por punção cardíaca e alíquotas de 8?l foram retiradas para confecção de esfregaço em camada delgada, que foram fixados em metanol e corados por Giemsa, para a determinação da positividade e densidade dos tripanossomas. Após a biometria e coleta do sangue os peixes foram marcados e metade foi acondicionada em um tanque de criação do CEPTA/ ICMBIO para verificação da manutenção da infecção e o restante foi devolvido ao rio. A prevalência geral de tripanossomas foi de 47,6 % e densidade média geral de 0,75 parasitas/ µl de sangue. A prevalência ao longo do ano apresentou diferenças significativas apenas para Hypostomus regani (p=0,0054) e Hypostomus strigaticeps (p=0,0007). A densidade média de parasitas não apresentou diferenças significativas entre as três espécies de peixes analisados, assim como a variação mensal da densidade por espécie de peixes. Hirudíneos do gênero Placobdella sp. foram coletados da superfície do corpo e da boca de H regani e H. strigaticeps para extração do DNA, os oligonucleotídeos utilizados (S-1842 e S-1843) amplificaram um fragmento de 1000pb do gene 18S rRNA dos tripanossomas isolados de hirudíneos coletados em H regani e H. strigaticeps. Dos 19 peixes recapturados após dois meses apenas três se mantiveram positivos. Foram medidos 255 tripanossomas sendo 66 de H. albopunctatus, 64 de H. regani e 95 de H. strigaticeps e os valores foram comparados com os de outras espécies de tripanossomas encontradas em peixes do gênero Hypostomus. Os parasitas encontrados nas três espécies de peixes apresentaram características morfológicas semelhantes. Foi estabelecida a frequência de ocorrência de acordo com a variação do comprimento do corpo para evidência de pleomorfismo. Os dados morfológicos mostram que Trypanosoma sp.1 e Trypanosoma sp.2 podem ser considerados de espécies diferentes; as análises evidenciaram a presença de pleomorfismo nos tripanossomas encontrados nas três espécies de peixes. / Abstract: Trypanosomes have been reported in several species of fish that inhabit salt and fresh waters. The majority of these protozoan species are described based on morphologic features. The parasites are heteroxenic and are transmitted by leeches. This work aims to characterize the prevalence and density of infection by Trypanosoma sp. present in the blood of three species of armored catfish collected from Mogi Guaçu river (Cachoeira das Emas, Pirassununga city, SP) and characterize morphologically and by molecular techniques the trypanosomes found in the blood of catfish. Between february 2008 and february 2009, 256 specimens of armored catfish were collected, being 60 Hypostomus albopunctatus, 100 Hypostomus regain, and 96 Hypostomus strigaticeps. The blood was collected by cardiac puncture and a sample of 8µl was removed to realize blood smears on microscope slides. The slides were fixed in methanol and stained with giemsa for posterior analysis on light microscopy for determination of positive presence and density of trypanosomas. After biometric analysis and blood collection fish were marked half of the fish marked were maintened in a tank of CEPTA/ ICMBIO for future verification of the infeccion maintence and the other half were retorned to the river. It was found a prevalence of 47,6% and the average density of 0,75 parasitas/µl of blood. The prevalence during the year presented significative differences only for Hypostomus regani (p=0,0054) e Hypostomus strigaticeps (p=0,0007). The average density of parasites showed no significant differences among the three fish species analyzed and the monthly variation of density per species of fish. Also, leeches of the genus Placobdella sp. were collected from the surface of the body and mouth of armored catfish for DNA extraction. The primers used (S-1842 and S- 1843) amplified a 1000bp fragment of the 18S rRNA gene of trypanosomes isolated from leeches collected in H regani and H. strigaticeps. Of the 19 fish recaptured after two months only three remained positive. Therein, 255 trypanosomes were measured being 66 H. albopunctatus, 64 H. regani and 95 H. strigaticeps and values were compared with those of other parasite species found in different species of fish. The parasites found in the three species of fish presented similar morphological characteristics. The frequency of occurrence was established according to the variation in body length as evidence of pleomorphism. Nevertheless morphological data show that Trypanosoma sp.1 and Trypanosoma p.2 can be considered distinct species, the analysis revealed the presence of pleomorphism in trypanosomes found in the three species of fish. / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

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