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The mitochondrial genome (kinetoplast or kDNA) of Trypanosoma brucei is highly complex in terms of structure, content and function. It is composed of two types of molecules: 10-50 copies of identical ~23-kb maxicircles and 5,000-10,000 highly heterogeneous 1-kb minicircles. Maxicircles and minicircles form a concatenated network that resembles chainmail. Maxicircles are the equivalent of mitochondrial DNA in other eukaryotes, but 12 out of the 18 protein-coding genes encoded on the maxicircle require post-transcriptional RNA editing by uridylate insertion and removal before a functional mRNA can be generated. The 1-kb minicircles make up the bulk of the kDNA content and facilitate the editing of the maxicircle-encoded mRNAs by encoding short guide RNAs (gRNAs) that are complementary to blocks of edited sequence. It is estimated that there are at least hundred classes of minicircle, each class encoding a different set of gRNAs. At each cycle of cell division the contents of the kDNA genome must be faithfully copied and segregated into the daughter cells. Mathematical modelling of kDNA replication has shown that failure to segregate evenly will eventually result in loss of low copy number minicircle classes from the population. Depending on the type of minicircle that is lost this can result in immediate parasite death or, if the loss occurred in the bloodstream stage, render the cells unable to complete the canonical life-cycle in the tsetse fly vector. In order to investigate minicircle complexity and replication in T. brucei further we i) first established the true complexity of the kDNA genome using a Illumina short read sequencing and a bespoke assembly pipeline, ii) annotated the minicircles to establish the editing capacity of the cells, iii) analysed expression levels of predicted gRNA gene cassettes using small RNA data, and iv) carried out a long term time course to measure how kDNA complexity changes over time and compared this to preliminary model predictions. The structure of this thesis follows these steps. Using these approaches, 365 unique and complete minicircle sequences were assembled and annotated, representing 99% of the minicircle genome of the differentiation competent (i.e. transmission competent) T. brucei strain AnTat90.13. These minicircles encode 593 canonical gRNAs, defined as having a match in the known editing space, and a further 558 non-canonical gRNAs with unknown function. Transcriptome analysis showed that the non-canonical gRNAs, like the canonical set, have 3' U-tails and showed the same length distribution. Canonical and non-canonical sets differ, however, in their sense to anti-sense transcript ratios. In vitro culturing of bloodstream form T. brucei for ~500 generations resulted in loss of ~30 minicircle classes. After incorporating parameters for network size and minicircle diversity determined above, model fitting to longitudinal kDNA complexity data will provide estimations for the fidelity of kDNA segregation. The refined mathematical model for kDNA segregation will permit insight into time constraints for transmissibility during chronic infections due to progressive minicircle loss. It also has the potential to shed light on the selective pressures that may have led to the apparent co-evolution of the concatenated kDNA network structure and parasitism in kinetoplastids.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-12T15:47:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Gustavo Barbosa de Lima PPGG UFPE 2016.pdf: 2227933 bytes, checksum: 03616701d6dbf5994db493d4eb7b243c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T15:47:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Gustavo Barbosa de Lima PPGG UFPE 2016.pdf: 2227933 bytes, checksum: 03616701d6dbf5994db493d4eb7b243c (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / A família de protozoários tripanosomatídeos apresenta características moleculares diferenciadas dos demais eucariotos, onde a regulação da expressão gênica é feita principalmente em nível pós-transcricional. Como em outros eucariotos, acredita-se que a iniciação da tradução seja uma etapa crítica de controle pós-transcricional, onde atuam diferentes fatores de iniciação da tradução (eIFs). Nesta etapa os pontos centrais são o reconhecimento do mRNA maduro e o recrutamento do ribossomo para dar início ao processo, atividades realizadas pelo complexo eIF4F, formado por três subunidades: eIF4E, eIF4A e eIF4G. Nos tripanosomatídeos foram descritos seis homólogos de eIF4E, a proteína de ligação ao cap. Dois destes, EIF4E3 e EIF4E4, participam da formação de complexos envolvidos no processo de tradução e outros dois, EIF4E5 e EIF4E6, participam de novos complexos de função desconhecida. Destes quatro homólogos, o EIF4E4 já foi caracterizado, de forma que o presente trabalho visa contribuir para o entendimento da importância dos demais (EIF4E3, EIF4E5 e EIF4E6) na viabilidade e taxa de crescimento celular de Leishmania sp. Construções gênicas foram geradas de forma a permitir a deleção das duas cópias gênicas de cada proteína por meio da transfecção de Leishmania e seleção com antibióticos. As três proteínas, e mutantes do EIF4E3, foram ainda expressas em parasitas transgênicos para a realização de experimentos de complementação. Os resultados mostram que os baixos níveis de expressão de EF4E5 e EIF4E6 indicam que as três proteínas parecem ser importantes para a viabilidade celular com funções não sobrepostas. Sítios específicos no EIF4E3 foram também identificados de forma isolada como essenciais para a função da proteína e críticos para a sobrevivência do organismo. Os resultados obtidos neste trabalho mostram a importância do estudo do papel destes homólogos de eIF4E na síntese protéica, assim com seu papel na biologia celular de tripanossomatídeos. / The Trypanosomatid of protozoans display distinct molecular features not seen in other eukaryotes, where the regulation of gene expression is mainly performed at the post-transcriptional level. As in other eukaryotes, it is believed that the initiation of translation is a critical stage of post-transcriptional control, where different initiation factors (eIFs) are active. At this stage, critical steps are the recognition of the mature mRNA and the ribosome recruitment to start the process, activities of the eIF4F complex, consisting of three subunits: eIF4E, eIF4A and eIF4G. In trypanosomatids, six homologues of eIF4E, the cap binding protein, have been described. Two of these, EIF4E3 and EIF4E4, participate in the formation of complexes involved in the translation process and two others, EIF4E5 and EIF4E6, participate in new complexes of unknown function. Among these four homologues, EIF4E4 has been better characterized, so that the present work aims to contribute to the understanding of the remaining homologues (EIF4E3, EIF4E5 and EIF4E6) and study their importance for cell viability and growth rate of Leishmania species. Gene constructs were generated to allow deletion of the two gene copies of each protein by transfection of Leishmania cells and selection with antibiotics. The three proteins and EIF4E3 mutants were also expressed in transgenic parasites in order to carry out complementation experiments. The results show low levels of expression of EF4E5 and EIF4E6 and indicate that the three proteins appear to be important for cell viability with non-overlapping functions. EIF4E3 specific residues were also identified which are essential for the protein to the function and critical for the survival of the organism. The results of this study highlight the importance of the study on the role of eIF4E homologues in protein synthesis, as well as their role for the trypanosomatids cell biology.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-12T16:05:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação ADALUCIA DA SILVA PPGG 2016.pdf: 2174365 bytes, checksum: e3305d6246515bbc247cd29783f8b265 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T16:05:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação ADALUCIA DA SILVA PPGG 2016.pdf: 2174365 bytes, checksum: e3305d6246515bbc247cd29783f8b265 (MD5) Previous issue date: 2016-03-07 / FACEPE / Os tripanossomatídeos são parasitas flagelados causadores de diversas doenças humanas e que apresentam algumas características moleculares bem distintas. Nestes organismos, o controle da sua expressão gênica é quase exclusivamente pós-transcricional e dados obtidos até o momento sugerem que a etapa de iniciação da tradução tem um papel importante neste controle. Durante a iniciação da tradução de eucariotos, o complexo trimérico eIF4F (formado pelas subunidades eIF4A, eIF4G e eIF4E) tem uma participação importante no reconhecimento do mRNA, facilitando o recrutamento ribossomal para iniciar a síntese proteica. Múltiplos homólogos das subunidades do complexo eIF4F foram identificados em tripanossomatídeos, mas não foi possível elucidar a função específica de cada um deles. Desta forma, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um ensaio in vivo para a avaliação do efeito da superexpressão desses homólogos de Trypanosoma brucei na tradução de um mRNA repórter, o qual codifica a proteína GFP (green fluorescent protein). Três linhagens repórter foram obtidas (4212, 4213 e 4235) e sete homólogos das subunidades do complexo eIF4F e um de PABP foram testados nestas linhagens. A análise da superexpressão foi feita através de ensaios de Western blot, seus perfis de crescimento foram avaliados por curvas de crescimento e a expressão de GFP foi avaliada através de citometria de fluxo. Os resultados apresentados mostram que as linhagens repórter 4213 e 4235 são viáveis para serem utilizadas na caracterização das proteínas envolvidas no controle da expressão gênica de tripanossomatídeos. Foi observado que as proteínas EIF4E1 e EIF4E2 provocam diminuição do crescimento, enquanto a superexpressão de EIF4E3, EIF4E4, EIF4E4W279A, EIF4G3, EIF4G4 e PABP1 não alteram o crescimento celular dos parasitas. Apesar da detecção de variações na expressão de GFP durante a superexpressão de alguns dos homólogos testados, não foi possível, contudo, confirmar que estas proteínas aumentam ou diminuem a tradução. Ensaios complementares ainda precisam ser feitos para confirmar a real função destes. / The trypanosomatids are flagellated parasites responsible for several human diseases and which display unique molecular characteristics. Control of gene expression in these organisms is almost exclusively post-transcriptional and the data generated so far suggest that the initiation stage of translation plays an important role in this control. During translation initiation in eukaryotes, the trimeric complex eIF4F (formed by the eIF4A eIF4G and eIF4E subunits) has a relevant role in mRNA recognition and facilitates ribosomal recruitment to start the protein synthesis. Multiples homologues for the eIF4F subunits have been identified in trypanosomes, but it has not been possible to elucidate their specific functions. Thus, this study aimed to develop an in vivo assay to evaluate the effect of the overexpression of these Trypanosoma brucei homologues during the translation of a reporter mRNA encoding for the green fluorescent protein (GFP). Three reporter strains were generated (4212, 4213 and 4235) in which seven homologues of eIF4F subunits and one of their PABP partner were overexpressed. Confirmation of overexpression was carried out by Western blot assays, growth profiles were evaluated by cell counting and GFP expression was assessed by flow cytometry. The results generated show that the reporter lines 4213 and 4235 are feasible for use in the characterization of proteins involved in the control of trypanosomatids gene expression. Overexpression of EIF4E1 and EIF4E2 was seen to induce a reduction in cell growth, while EIF4E3, EIF4E4, EIF4E4W279A, EIF4G3, EIF4G4 and PABP1 did not interfere with growh. Despite the detection of variations in GFP expression during overexpression of some of the homologues tested it was not possible to confirm if these proteins increase or decrease translation. Complementary assays still need to be done to confirm the true function of these factors.

Com o objetivo de descobrir moléculas com atividade inibitória contra enzimas alvo de tripanosomatídeos, as estruturas cristalográficas da enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase em complexo com dois análogos de 1,3-bisfosfoglicerato (compostos 30 e 33) foram determinadas por difração de raios X, estudos de modelagem molecular foram realizados e o gene xprt (xantina fosforibosiltransferase) de Leishmania major foi clonado e super-expresso em Escherichia coli, e a enzima correspondente foi purificada e caracterizada cinéticamente. O complexo gGAPDH-33 foi determinado até 2,5A e revelou como esse análogo do intermediário tiocetal se liga na enzima. O modelo final da proteína com o inibidor foi refinado utilizando um conjunto de dados com 97,5% de completeza, com um R final de 0,20. Essa estrutura cristalográfica fornece a primeira evidência experimental do mecanismo flip-flop, que descreve como o substrato se desloca do sítio de ligação do fosfato inorgânico para o sítio do fosfato orgânico. O complexo gGAPDH-30 foi determinado até 2,75A de resolução, a partir de um conjunto de dados com 92,4% de completeza e revela o modo de interação dessa classe de inibidores com a gGAPDH. O modelo final apresenta R igual a 0,19. Essa estrutura foi utilizada para estudos de modelagem molecular que explicam a diferença de atividade dessa classe de inibidores entre a gGAPDH de Trypanosoma cruzi e de Trypanosoma brucei. Com relação a XPRT de L. major, essa enzima apresenta uma grande afinidade por hipoxantina, quando comparada a enzima homóloga de L. donovani. Com a finalidade de tentar entender esse comportamento, estudos de modelagem por homologia estão sendo realizados. / Aiming at discover molecules with good inhibitory activity against tripanosomatides enzymatic targets, the crystallographic structures of glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase in complex with 1,3 bisfosfoglyceric acid analogues (30 and 33)were solved, molecular modeling studies were undertaken and xprt (xanthine phosphorybosil transferase) gene from Leishmania major was cloned and over-expressed in Escherichia coli. The enzyme thus obtained was purified and kinetically characterized. .gGAPDH-33 complex, up to 2,5A resolution revealed the tioketal intermediate binding mode. The final model was refined to R 0.20 from a 97,5% completeness dataset. The crystallographic structure gives, for the first time, experimental evidence for the flip-flop mechanism, which describes how the substrate goes from inorganic-phosphate binding site to substratephosphate binding site. gGAPDH-30 complex, solved to 2,75A resolution, revealed the inhibitor binding mode. The final model has R= 0,19 and was refined from a 92,4% completeness dataset. This structure was used as the framework upon which modeling studies were performed. Modeling results suggest why these inhibitors show a different inhibitory profile against Trypanosoma brucei and Trypanosoma cruzi. L. major XPRT shows a high affinity for hypoxanthine, an alternative substrate, when compared to L. donovani XPRT, aiming at understand this behavior homology modeling studies are currently under progress.

Tripanossomatídeos particularmente os do gênero Phytomonas, podem infectar, frutos, látex, seiva, floema e flores de muitas famílias de vegetais, e foram detectados em insetos fitófagos de seus possíveis vetores em várias regiões do Velho e Novo Continente. Em contraste com a enorme variedade da flora e da fauna entomológica da Amazônia Brasileira, poucas espécies têm sido descritas albergando tripanossomatídeos. Os tripanossomatídeos pertencentes a estes gêneros podem apresentar formas evolutivas típicas que permitem a sua identificação morfológica. No entanto as formas promastigota, existentes tanto no ciclo evolutivo dos gêneros Herpetomonas, Leptomonas e Phytomonas, não permitem a identificação morfológica, sendo necessário parâmetros adicionais para a diferenciação entre os gêneros. A dificuldade do cultivo “in vitro", impede a correta avaliação da presença destes parasitas em insetos e plantas, impossibilitando uma avaliação do universo dos tripanossomatídeos. No presente trabalho foram realizadas 37 coletas de hemípteros adultos, no estado de Rondônia, nas duas estações climáticas regional durante o período de 1998 a 1999. Foram coletados 244 hemípteros pertencentes a 17 espécies diferentes as quais 13 se revelaram portadoras de tripanossomatídeos. Das amostras positivas foram feitos esfregaços em lâminas e corados com Giemsa para posterior análise morfológica e morfométrica. Numa segunda etapa fizemos aplicação do PCR (reação em cadeia da Polimerase) em DNA recuperado de esfregaços em lâminas para pesquisa de tripanossomatídeos de insetos e plantas seguido de hibridação com sonda SL3’ específica para pesquisa do gênero Phytomonas, com vistas a um estudo preliminar da presença de tripanossomatídeos e Phytomonas em Hemípteros Fitófagos no estado de Rondônia sem necessidade de isolamento e cultura axênica dos parasitas. / Tripanossomatids, particularly Phytomonas, may infect the fruit, latex, sap, phloem and flowers of many plant families. These parasites have also been detected in phytofagous insects which are potential vectors in many areas of the Old and New World. In spite of the enormous variety of flora and entomological fauna of the Brazilian Amazon only a few species have been described harbouring tripanossomatids. Some genera of tripanossomatids present typical morphological forms which they can be identified. However, the promastigote form occurs in the genera Herpetomonas, Leptomonas and Phytomonas, so other parameters are needed to separate them. The difficulties of in vitro cultivation also hinders determining the presence of these parasites in both insects and plants, thus making it impossible to estabilish realistic incidence rates of these ubiquitous parasites. In the present study 37collections of adult hemipterans were made in Rondônia State during the different regional seasons of 1998 to 1999. A total of 244 bugs belonging to 17 species were collected of which 13 had trypanosomatid infections. Methanol fixed smears of all the infections were made on glass slides and stained with Giemsa for the morphological studies and morphometric analyses. In a second phase, we used the PCR (Polimerase Chain Reaction) to recover DNA from the methanol fixed smears. The PCR products were hybridized with the SL3’ probe which is specific for Phytomonas. The aim of this preliminary study was to locate trypanosomatids infections in phytophagous Hemiptera captured in Rondônia State and then determine which of these belonged to the genus Phytomonas without the necessity of isolation in culture.

Orientador: Simone Baldini Lucheis / Resumo: A família Trypanosomatidae inclui protozoários flagelados com dois gêneros de importância médica e veterinária: Leishmania, causador das leishmanioses e Trypanosoma, responsáveis pelas tripanossomíases de relevância epidemiológica, ambos com o envolvimento de hospedeiros mamíferos e vetores em seu ciclo de vida. O gato doméstico passou a ser considerado um hospedeiro reservatório de Leishmanias, após comprovação por xenodiagnóstico, da transmissibilidade de formas promastigotas de Leishmania infantum para o vetor flebotomíneo. Devido a inespecificidade dos achados clínicos na Leishmaniose Felina (LF), à semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras comuns em gatos, e à provável resistência felina a infecção, é possível que, dentro de uma área endêmica para leishmaniose ocorra um percentual elevado de indivíduos infectados, mas sem apresentarem sinais clínicos, e a falta de diagnóstico precoce da LF nessas áreas pode implicar com que o animal continue a representar risco potencial de transmissão de leishmanias aos vetores. Assim sendo, pretendeu-se investigar possíveis associações entre sorologia positiva para L. infantum, com o parasitismo tecidual em sangue, órgãos e células conjuntivais de gatos de região endêmica para LV. Foram incluídos neste estudo 36 gatos adultos, cedidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru - São Paulo, com 31 animais apresentando pelo menos um tipo de alteração clínica. A partir dos diagnósticos sorológicos, verificou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanosomatidae family includes flagellate protozoa of two genera of medical and veterinary importance: Leishmania, the causative agent of leishmaniasis and Trypanosoma, responsible for trypanosomiasis of epidemiological relevance, with the involvement of mammalian hosts and vectors in their life cycle. Nowadays, the domestic cat is considered a host reservoir of leishmanias, after proving by xenodiagnosis, the transmissibility of promastigotes of Leishmania infantum to the phlebotomine vector. Due to the lack of specificity of the clinical findings in Feline Leishmaniasis (FL), similar to the clinical aspects of this disease with other common ones in cats, and to the probable feline resistance to infection, it is possible that, within an endemic area for leishmaniasis, a high percentage of individuals with no clinical signs, and lack of early diagnosis of FL in these areas may imply that the animal continues to pose a potential risk of transmission of leishmaniasis to the vectors. Thus, it was intended to investigate possible associations between positive serology for L.infantum, with tissue parasitism in blood, organs and conjunctival cells of cats from endemic region to visceral leishmaniasis. Thirty-six adult cats, assigned by the Zoonoses Control Center (ZCC) of Bauru-SP, with 31 animals presenting at least one type of clinical alteration, were included in this study. From the serological diagnoses, the positivity was verified in 26 animals, and (66.7%) (24/36) were rea... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

This thesis is composed of two topics, for which trypanosomatids and evolution are common denominators. First part deals with phylogenetic relationships among monoxenous trypanosomatids, with emphasis on flagellates parasitizing dipteran hosts, analyzed mainly from biogeographical and evolutionary perspectives. Second part focuses on the trypanosomatid Trypanosoma brucei, causative agent of severe diseases, which serves as a model organism for functional studies of evolutionary conserved mitochondrial proteins, in particular those involved in replication, maintenance and expression of the mitochondrial genome, also termed the kinetoplast. This thesis identified the mtHsp70/mtHsp40 chaperone machinery as an essential component of replication and maintenance of the kinetoplast, and also identified numerous conditions under which mtHsp70 has a tendency to aggregate. Moreover, several conserved proteins, previously identified to be part of the mitochondrial ribosome, were shown to be important for translation of the mitochondrial transcripts.

Submitted by MARIA FERNANDA ALVES MARTIN null (mariafernanda_bio@hotmail.com) on 2017-07-07T21:17:54Z No. of bitstreams: 1 Alves-Martin_MF_Tese de Doutorado 2017.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-07-13T18:56:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alves_martin_mf_dr_bot.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T18:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alves_martin_mf_dr_bot.pdf: 2835852 bytes, checksum: 41eddab14a2ccc5b0f3ac1898bbde518 (MD5) Previous issue date: 2017-06-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Trypanosomatidae inclui protozoários flagelados com dois gêneros de importância médica e veterinária: Leishmania, causador das leishmanioses e Trypanosoma, responsáveis pelas tripanossomíases de relevância epidemiológica, ambos com o envolvimento de hospedeiros mamíferos e vetores em seu ciclo de vida. O gato doméstico passou a ser considerado um hospedeiro reservatório de Leishmanias, após comprovação por xenodiagnóstico, da transmissibilidade de formas promastigotas de Leishmania infantum para o vetor flebotomíneo. Devido a inespecificidade dos achados clínicos na Leishmaniose Felina (LF), à semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras comuns em gatos, e à provável resistência felina a infecção, é possível que, dentro de uma área endêmica para leishmaniose ocorra um percentual elevado de indivíduos infectados, mas sem apresentarem sinais clínicos, e a falta de diagnóstico precoce da LF nessas áreas pode implicar com que o animal continue a representar risco potencial de transmissão de leishmanias aos vetores. Assim sendo, pretendeu-se investigar possíveis associações entre sorologia positiva para L. infantum, com o parasitismo tecidual em sangue, órgãos e células conjuntivais de gatos de região endêmica para LV. Foram incluídos neste estudo 36 gatos adultos, cedidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru - São Paulo, com 31 animais apresentando pelo menos um tipo de alteração clínica. A partir dos diagnósticos sorológicos, verificou-se a positividade em 26 animais, sendo que (66,7%) (24/36) foram reagentes à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), (61,1%) (22/36) animais reagentes ao ELISA e 10 animais não foram reagentes (K=0,64). A observação de formas sugestivas de amastigotas se deu em 12 animais (33,3%), quatro animais (11,1%) e 12 animais (33,3%), a partir das técnicas parasitológicas de esfregaço sanguíneo, imprint de órgãos e histoquímica, respectivamente. O diagnóstico molecular foi realizado com a utilização dos primers ITS-1, ITS-2 e HSP70, cuja detecção molecular pela PCR de sangue se deu em 15 animais (41,6%), pela PCR de tecidos em oito animais (22,2%) e pela PCR de suabes em quatro animais (11,1%). A quantificação da carga parasitária pela qPCR de sangue se deu em nove animais (25%) e pela qPCR de tecidos em dois animais (5,5%). Após o sequenciamento genético, foram identificadas três amostras com Trypanosoma theileri, cinco com Leishmania donovani e uma amostra com Leishmania braziliensis. Dessa forma, verificamos que os gatos avaliados, sorologicamente negativos e positivos apresentaram sinais clínicos, presença do parasito em células e DNA parasitário em sangue e/ou tecidos, atuando como reservatórios de Leishmanias na região estudada. A detecção de tripanosomatídeos em amostras biológicas dos gatos do estudo sugere sua participação na manutenção do parasito no ambiente urbano. / Trypanosomatidae family includes flagellate protozoa of two genera of medical and veterinary importance: Leishmania, the causative agent of leishmaniasis and Trypanosoma, responsible for trypanosomiasis of epidemiological relevance, with the involvement of mammalian hosts and vectors in their life cycle. Nowadays, the domestic cat is considered a host reservoir of leishmanias, after proving by xenodiagnosis, the transmissibility of promastigotes of Leishmania infantum to the phlebotomine vector. Due to the lack of specificity of the clinical findings in Feline Leishmaniasis (FL), similar to the clinical aspects of this disease with other common ones in cats, and to the probable feline resistance to infection, it is possible that, within an endemic area for leishmaniasis, a high percentage of individuals with no clinical signs, and lack of early diagnosis of FL in these areas may imply that the animal continues to pose a potential risk of transmission of leishmaniasis to the vectors. Thus, it was intended to investigate possible associations between positive serology for L.infantum, with tissue parasitism in blood, organs and conjunctival cells of cats from endemic region to visceral leishmaniasis. Thirty-six adult cats, assigned by the Zoonoses Control Center (ZCC) of Bauru-SP, with 31 animals presenting at least one type of clinical alteration, were included in this study. From the serological diagnoses, the positivity was verified in 26 animals, and (66.7%) (24/36) were reactive to the Immunofluorescence Antibody Test (IFAT), (61.1%) (22/36) animals reactives to ELISA test and 10 animals were non-reactive (K = 0.64). The observation of suggestive forms of amastigotes occurred in 12 animals (33.3%), four animals (11.1%) and 12 animals (33.3%), by the parasitological techniques of blood smear, imprint of organs and histochemistry, respectively. Molecular diagnosis was performed using the ITS-1, ITS-2 and HSP70 primers, whose molecular detection by blood PCR was done in 15 animals (41.6%), by tissue PCR in eight animals (22.2 %) and by PCR of conjunctival swabs in four animals (11.1%). Quantification of the parasitic load by blood qPCR occurred in nine animals (25%) and in the qPCR of tissues in two animals (5.5%). After the genetic sequencing, three samples were identified as Trypanosoma theileri, five as Leishmania donovani and one as Leishmania braziliensis. In this way, we verified that the evaluated cats, serologically negative and positive, presented clinical signs, presence of the parasite in cells and parasitic DNA in blood and / or tissues, possibly acting as reservoirs of leishmaniasis in the studied region. The detection of trypanosomatids in biological samples of the studied cats suggests their participation in the maintenance of the parasite in the urban environment. / FAPESP: 2014/15807-0