Introdução: GIST perfazem cerca de 70% dos tumores mesenquimais do trato gastrintestinal. Têm uma incidência de 1 a 2/100.000/ano sendo a forma esporádica observada em adultos, a mais comum. Para o diagnóstico definitivo de GIST é necessária à confirmação imunohistoquímica, sendo que 90 a 95% dos casos são positivos para o marcador CD117. Os GIST apresentam um comportamento biológico incerto e a classificação em categorias de risco (tamanho tumoral e índice mitótico - NIH) tem sido validada em inúmeras séries. Marcadores imuno-histoquímicos prognósticos têm sido pesquisados amplamente principalmente o Ki67 e o p16 INK4A. Estudos genéticos mostram um percentual alto de mutações em GIST, sobretudo para as mutações localizadas no exon 11 do gene c-Kit. Objetivo: caracterizar todos os casos de GIST diagnosticados no Serviço de Patologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre de 01/01/1993 a 31/07/2009 do ponto de vista anatomopatológico, imuno-histoquímico, clínico e molecular. Material e Métodos: os casos foram selecionados a partir do estudo das lâminas no HE e pelo seguinte painel imuno-histoquímico: CD117, CD34, S100, desmina e actina. Foram testados dois marcadores imuno-histoquímicos prognósticos: o Ki67 e o p16 INK4A. Os casos cirúrgicos foram classificados em categoria de risco segundo os critérios de Fletcher e cols. (NIH). O estudo molecular incluiu: extração do DNA, PCR e análise mutacional. Resultados: a série é composta por 45 homens e 40 mulheres com uma média de idade de 58,4 anos. A localização gástrica foi a mais frequente (45,9%) seguida da intestinal (37,6%). O tipo histológico predominante foi o fusocelular presente em 74,1% dos casos. GIST classificados na categoria de risco muito baixo e baixo risco foram 28,2%, na categoria de risco intermediário, 23,9% e na categoria de alto risco, 47,9%. O marcador CD117 (proteína KIT) foi positivo em 97,6% dos casos de GIST. Entre os 85 casos, o marcador p16 INK4A apresentou positividade em 64,7% e Ki67> 3% foi observado em 32,9%. Houve associação significativa entre as categorias de risco classificadas como alto e não alto risco com o Ki67>3% (p = 0,001) e do Ki67 >3% com o índice mitótico (rs=0,526; p<0,001). Em 60 casos foi possível o sequenciamento do exon 11 do gene c-Kit. Foram encontradas 29 mutações para este exon: 12 mutações de ponto, 10 deleções, 04 duplicações e 03 mutações duplas (deleção associada à mutação de ponto). A maioria das mutações foi observada entre os codons 550 e 560, “hot spot” descrito em estudos prévios. A curva de sobrevida mostrou um tempo de seguimento de 2,5 anos (±2,8) e mediana de 1,5 anos, e foi estatisticamente significativa quando associada às metástases (p=0,025) e ao índice mitótico (p=0,002). Os fatores associados com a probabilidade de óbito através da Regressão de Cox foram o índice mitótico e o Ki67 > 3%. Conclusões: os 85 casos de GIST do HCPA foram caracterizados do ponto de vista anatomopatológico, imuno-histoquímico, clínico e molecular. Negatividade para p16 INK4 e Ki67 > 3% mostrou associação com um tempo de sobrevida mais curto. Houve associação entre o Ki67>3% e GIST classificados na categoria de alto risco. Não houve evidência de associação entre as mutações ou os tipos de mutação com as categorias de risco ou com a curva de sobrevida. Das variáveis que compõem a categoria de risco, o índice mitótico apresentou associação significativa com a sobrevida, sendo que os pacientes com mais de 10 mitoses em 50 campos de grande aumento apresentaram maior risco para óbito na análise multivariada. A contagem mitótica e o Ki67 são importantes marcadores prognósticos em pacientes portadores de GIST. / Introduction: Gastrointestinal stromal tumors (GIST) are the most common mesenchymal tumors of the gastrointestinal tract, representing 70% of these neoplasias, having an annual incidence of 1 to 2 /100.000/year. They are mostly sporadic and occurring mainly in adults. GIST are tumors of relative unknown behavior and a score of risk stratification was developed based on two criteria: maximum tumor size and mitotic index according to the National Institutes of Health (NIH) consensus, validated by several authors. Prognostic immunohistochemical biomarkers are mostly investigated, especially Ki67 and p16 INK4A. GIST have a high incidence of mutations affecting mainly exon 11 of the c-Kit gene. Objective: the aim of this work was to study the anatomopathological, immunohistochemical, clinical, and molecular aspects of all GIST diagnosed by the Pathology Service at the HCPA (Hospital de Clínicas - Porto Alegre), from 01/01/1993 to 31/07/2009. Material e Methods: diagnosis of GIST was confirmed after HE analysis and submission to the following immunohistochemical profile: CD117, CD34, S100, desmin and actin. Two prognostic immunohistochemical biomarkers were also analysed: Ki67 and p16 INK4A. Surgical cases were classified according to their risk stratification (NIH). Molecular study included: DNA extraction, PCR and mutational analysis. Results: from a total of 85 cases, 45 were male and 40, female and the mean average age was 58. 4 years. GIST were predominately located in the stomach (48.9%) followed by the small intestine (37.6%). Spindle cell morphology was present in 74.1% of these tumors. According to the NIH classification, 28.2% GIST were classified as very low or low risk category; 23.9% as intermediate risk and 47.9% belonged to the high risk category. CD117 (KIT protein) was expressed in 97.6% of all GIST in this study. From a total of 85 cases, 64.7% showed positivity for p16 INK4A and 32.9% had a Ki67 >3% index. There was a clear association between high risk category and non high risk category with Ki67>3% (p=0,001) and between Ki67>3% and a high mitotic index (>10 mitoses in 50 HPF), rs=0,526; p<0,001. Eighty-three cases were submitted to molecular genetic analysis and 60 samples were successfully amplified and sequenced for exon 11 of the c-Kit gene. Out of the 29 mutations found for this exon 12 were point mutations, 10 were deletions, 04 were duplications and 03 were double mutations (deletion plus point mutation). Most of these mutations were present between codons 550 and 660, “hot spots” described in previous studies. The mean survival follow up period was 2.5 years (±2,8) having a median time of 1.5 years. Survival rates were statistically significant when associated to metastases p=0.025 and to a high mitotic index (p=0.002. The multivariate Cox Regression analysis showed two independent risk factors indicating a poor prognosis: Ki67>3% and a high mitotic index. Conclusions: anatomopathological, immunohistochemical, clinical and molecular aspects of 85 GIST were studied in this series. Negativity for p16 INK4A and a Ki67 >3% were associated to a shorter survival time. Ki67>3% was associated to GIST belonging to the high risk category group. No significant associations were seen concerning presence of mutation or type of mutation in relation to survival rate or risk categories. A high mitotic index (more than 10 mitoses in 50 HPF), one of the NIH risk criteria, was strongly related to a shorter survival time and was also seen as an independent factor for poor prognosis in GIST on multivariate analysis. Mitotic count and Ki67 are important predictors of outcome in patients with GIST.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000403013-Texto+Completo-0.pdf: 1643144 bytes, checksum: 5ccd3fb28b7fe3934f949e3f92a8d4ac (MD5) Previous issue date: 2008 / Four members belong to the erbB family, erbB1, erbB2, erbB3, and erbB4. Several reports have investigated the expression of members from this family, however with only few regarding to the role of erbB3 on non-small cell lung cancer (NSCLC). The aim of this study was to describe the expression frequency of erbB3 protein in NSCLC and evaluate a possible relationship with clinical parameters such as: age, gender, histological subtype, stage, histological grade, and survival. A total of 66 samples were analyzed by immunohistochemistry. ErbB3 expression frequency was detected in 57 samples (86. 4%). No statistical significance was found between expression degree and age, histological subtype, stage, histological grade, and survival. However, when samples were classified into two expression categories (0-75% and 75-100%) a statistic significance was found (P=0. 04) related to grade II (72. 5%). Although we did not found a relation between erbB3 expression and clinical and/or pathological parameters, probably due to the low sample number, it was possible to define that 86. 4% of samples did express the erbB3 protein in at least 25% of the tumor cells. This result agrees with other described in the literature. Investigation of other members belonging to this family in the same sample here evaluated could improve the results obtained since they have been implicated with tumor malignancy and that their role in tumorigenesis is probably associated to a collaborative interaction. / A família erbB é composta por quatro membros: erbB1, erbB2, erbB3 e erbB4. Essa família tem aparecido amplamente em diversos trabalhos, porém, o estudo particular da proteína erbB3 no câncer de pulmão ainda permanece muito restrito. O objetivo desse estudo foi descrever a freqüência de expressão da proteína erbB3 em amostras de câncer de pulmão não-pequenas (NSCLC) células, assim como correlacionar os achados da freqüência de expressão da proteína com as seguintes características clinico-patológicas dos pacientes como: idade, gênero, tipo histológico, estadiamento patológico, grau histológico, óbito e sobrevida. Um total de 66 espécimes foram analisados por imuno-histoquímica. A freqüência de expressão da proteína erbB3 esteve presente em 57 casos (86,4%). Não foi encontrada relação estatisticamente significativa entre a freqüência de expressão da proteína e as variáveis: idade, gênero, tipo histológico, estadiamento, grau histológico, óbito e sobrevida. Entretanto, quando as amostras foram agrupadas em categorias de expressão entre 0 e 75% e 75 e 100% das células tumorais positivas para a proteína erbB3, houve significância estatística com relação ao grau histológico (P=0,04) sendo o de maior freqüência o grau histológico tipo II (72,5%). Embora não tenha sido possível correlacionar a presença da expressão da proteína erbB3 com o prognóstico e os outros parâmetros clínicos, provavelmente devido ao pequeno número de amostras investigadas neste estudo, foi possível observar a presença desta proteína em 86,4% das amostras estudadas, comprovando que, assim como o EGFR e o erbB2, o erbB3 pode ser encontrado no NSCLC de forma bastante pronunciada. É possível que informações relativas à expressão dos outros membros desta família nestas mesmas amostras, possam trazer novas interpretações, lembrando, novamente, que seus membros, já caracterizados como proteínas participantes na oncogênese, atuam de forma sinérgica.

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

MOURÃO, Renata Veras Carvalho. Estudo da relação do infiltrado inflamatório mononuclear e expressão de Ki-67, colágeno tipo IV e laminina em cistos radiculares. 2013. 55 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-10T16:16:51Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_rvcmourão.pdf: 1282049 bytes, checksum: 3750ec775d984e0cf02e33acd4dd7626 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-05-16T13:40:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_rvcmourão.pdf: 1282049 bytes, checksum: 3750ec775d984e0cf02e33acd4dd7626 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-16T13:40:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_rvcmourão.pdf: 1282049 bytes, checksum: 3750ec775d984e0cf02e33acd4dd7626 (MD5) Previous issue date: 2013 / Jawbone cysts are classified as odontogenic and non-odontogenic cysts. The radicular cyst is the most common odontogenic cyst of inflammatory origin, whereas the detigerous cyst is the most common type of developmental odontogenic cyst. These cysts and their variations have different etiopathogenesis and biological behavior, but are equally lytic. The proliferation activity of the epithelial lining and the components of the basement membrane and extracellular matrix constitute targets of research. The aim of this study was to evaluate the relation between mononuclear inflammatory infiltrate and the expression of proliferative immunomarkers (Ki 67), and proteins of basement membrane and extracellular matrix in radicular cysts. In this retrospective observational study, all cases of jawbone cysts that had been recorded in the files of the Department of Pathology and Legal Medicine (FAMED), and of the Laboratory of Oral Pathology (FFOE) of the Federal University of Ceará (UFC) and reviewed. After histological revision, the groups were divided into heavily inflamed radicular cysts (HIRC) (n=17), slightly inflamed radicular cysts (SIRC) (n=9) and dentigerous cysts (DC) (n=9). The presence and intensity of the lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate and the preservation of the epithelial lining were the parameters used to select the cases. Immunohistochemical analyses were performed using the standard streptavidin-biotin-peroxidase method. The primary antibodies used in this study included Ki 67 (Dako®, 1:50), Anti-Collagen Type IV (DBS®, 1:40) and Anti- Laminin (DBS®, 1:20).The immunoexpression of Ki-67 was more intense in the SIRC group compared to the HIRC group and DC. Likewise, the immunoexpression of Anti-Collagem Type IV in the basement membrane of the SIRC group presented a statistically significant difference compared to the HIRC group and DC . The expression of laminin in the basement membrane and in group HIRC and DC was negative and the group of SIRC was weak and punctual. It was concluded that presence and severity of inflammatory content wall of radicular cysts appear to modify the expression of proliferation factors in the coating epithelium and collagen type IV and laminin in the basement membrane but not modific with the behavior of extracellular matrix in radicular cyst. The expression of basement membrane components (laminin and collage type IV) is higher in radicular cyst with mild inflammatory infiltrade. / Os cistos dos ossos maxilares são classificados como odontogênicos e não odontogênicos. Dentre os odontogênicos inflamatórios, destaca-se o cisto radicular, e entre os de desenvolvimento, o dentígero. Estes cistos e suas variantes apresentam etiopatogênese e comportamento biológico diferentes, mas são igualmente líticos. A atividade proliferativa do epitélio de revestimento, dos componentes da membrana basal e da matriz extracelular, possivelmente, interferem nos mecanismos de crescimento, constituindo alvos de pesquisas. Este trabalho teve por objetivo avaliar a relação do infiltrado inflamatório mononuclear com a expressão de marcadores de proliferação (Ki 67) e das proteínas da membrana basal e matriz extracelular nos cistos radiculares. Trata-se de um estudo retrospectivo e observacional tendo sido realizado um levantamento dos casos catalogados no Serviço de Biopsia do Departamento de Patologia e Medicina Legal (FAMED) e no Laboratório de Patologia Bucal (FFOE) (UFC). Após a revisão histológica, os grupos foram divididos em cisto radicular intensamente inflamado (CRII) (n=17), cisto radicular levemente inflamado(CRLI)(n=.9) e cisto dentígero (CD) (n= 9). A presença e intensidade do infiltrado inflamatório histiolinfoplasmocitário e preservação do epitélio de revestimento foram os parâmetros utilizados para seleção dos casos. Os espécimes foram submetidos à reação de imuno-histoquímica por estreptoavidina biotina, utilizando-se os anticorpos Ki 67 (Dako®, 1:50), anti-colágeno IV (DBS®, 1:40) e anti-laminina (DBS®, 1:20). A expressão de Ki 67 foi mais intensa no grupo CRLI, quando comparada ao grupo CRII e CD. A expressão de colágeno tipo IV na membrana basal foi significante no grupo CRLI, quando comparada com o grupo CRII e CD. Já a imunomarcação de matriz extracelular variou de ausente a fraca nos grupos CRII e CRLI, enquanto no CD se exibiu de forma fraca a moderada, sendo esta diferença significativa. A expressão de laminina em membrana basal nos grupos CRII e CD foi negativa e no grupo dos CRLI foi fraca e pontual. Concluiu-se que a presença e a intensidade do conteúdo inflamatório na parede dos cistos radiculares parecem modificar a expressão dos fatores de proliferação no epitélio de revestimento, e colágeno tipo IV e laminina na membrana basal, mas não interferem no comportamento do colágeno IV da matriz extracelular nos cistos radiculares. A expressão de componentes da membrana basal (laminina e colágeno tipo IV) é maior nos cistos radiculares com leve infiltrado inflamatório.

ALMEIDA, Paulo Roberto Carvalho de. Imunoexpressão de ciclooxigenase-2 (COX-2) e caderina-e no câncer gástrico : contribuição ao estudo da progressão tumoral-linfonodal. 2007. 159 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-09-06T11:21:36Z No. of bitstreams: 1 2007_tese_prcalmeida.pdf: 19508867 bytes, checksum: e28fbf1437ddf7b1360c84366e63fca7 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-09-06T12:25:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tese_prcalmeida.pdf: 19508867 bytes, checksum: e28fbf1437ddf7b1360c84366e63fca7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T12:25:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tese_prcalmeida.pdf: 19508867 bytes, checksum: e28fbf1437ddf7b1360c84366e63fca7 (MD5) Previous issue date: 2007 / Both COX-2 and E-Cadherin play important roles in physiological and pathological processes in the stomach, such as control of acid secretion, inflammation and cancer. The aim of this study was to analyze the relationship between COX-2 and E-Cadherin immunoexpression in human gastric adenocarcinomas and respective lymph node metastases and their possible action in tumoral progression. Tissue microarrays were prepared from paraffin embedded samples of 97 primary gastric cancers, included 36 with respective nodal metastases. Cases were classified according to Lauren’s classification as intestinal (n=40), diffuse (n=34), mixed (n=16) and undetermined (n=7). Immunoexpression of COX-2 was evaluated regarding intensity (0-absent; 1-mild; 2-moderate; 3-strong) and extension (0-negative or rare cells; 1-<25%; 2-25-50%; 3-50-75%; 4->75% immunoreactive neoplastic cells). A combined score was calculated (intensity x extension): 0-12. A cut-off of 6 was considered to classify COX-2 expression as low (<6) or high (≥6). E-Cadherin expression was evaluated according to the system proposed by Jawhari et al. (Gastroenterology, 1997) as abnormal patterns of expression: 0-no expression; 1-cytoplasmic expression; 2-heterogeneous expression, both membranous and cytoplasmic) and normal membranous pattern (3). Membranous (scores 2 and 3) and Non-membranous (scores 0 and 1) were too compared. Overall, COX-2 positive and abnormal E-Cadherin expression predominate in all types of primary gastric carcinomas. COX-2 expression was higher in lymph node metastases than in primary tumors, with a significant difference for diffuse carcinoma. A positive relationship was observed between E-Cadherin membranous expression and intestinal tumors, and absence of membranous expression and diffuse ones, which indicates the importance of E-Cadherin to gastric cancer differentiation. Granular (paranuclear) cytoplasmic immunostaining pattern was basically associated with cytoplasmic E-Cadherin expression while homogeneous pattern is frequently seen in cytoplasmic-membranous expression. Diffuse carcinomas show membranar expression more frequently in lymph nodes metastases than in gastric primary tumors in both isolated and grouped cells. The data suggest that mixed carcinoma is a distinct hystotype, based on its peculiar cytoplasmic expression of E-Cadherin shown here and other features of literature. There was no significant association linking COX-2 and E-Cadherin expression to other clinicopathological parameters. The data show that COX-2 and E-Cadherin are important proteins related to tumoral progression in gastric cancer. / COX-2 e Caderina-E participam de forma fundamental na manutenção do estado fisiológico da mucosa gástrica e têm papel essencial na reação inflamatória e reparo, e no câncer. O objetivo deste trabalho é avaliar a expressão das duas proteínas no carcinoma gástrico e metástases linfonodais e suas possíveis participações na progressão tumoral. Foram utilizados 97 casos de gastrectomias por carcinoma gástrico, 36 dos quais com linfonodos disponíveis, dos arquivos do Hospital do Câncer do Ceará. Os casos foram classificados nos tipos intestinal (40 casos), difuso (34), mistos (16) e não-classificados (7 casos) de acordo com a classificação de Lauren (1965). Utilizou-se técnica de tissue microarray associada à imunohistoquímica com anticorpo monoclonal anti-COX-2 e anti-Caderina-E e sistema de detecção universal estreptavidina-biotina-peroxidase. A expressão de COX-2 foi avaliada de acordo com os seguintes escores: Intensidade (I): 0=negativa; 1=discreta; 2= moderada; 3= acentuada; Extensão (E) de células coradas: 1= 0 a 25%; 2= >25 a 50%; 3= >50 a 75%; 4= >75 a 100%. Escore final: I x E, sendo considerados escores < 6 como COX-2 de baixa expressão e escores ≥6 de alta expressão. Classificou-se a expressão de Caderina-E nos escores: 0=negativo; 1=citoplasmática; 2=citoplasmática + membranar; 3= membranar-normal (Jawhari et al., 1997a). Foram comparadas expressão normal e anormal e membranar e não membranar em cada histotipo de carcinoma, na sede primária e linfonodos. Expressão positiva para COX-2 e anormal de Caderina-E predominaram nos diversos histotipos de carcinoma gástrico primário, principalmente difusos e mistos. Observou-se maior expressão de COX-2 nas metástases linfonodais, em relação às lesões primárias, sobretudo nos carcinomas difusos. Carcinomas intestinais estavam associados à expressão membranar de Caderina-E enquanto tumores difusos se relacionaram com ausência de expressão membranar, o que mostra a importância da Caderina-E na diferenciação do câncer gástrico. Carcinomas gástricos apresentam dois padrões de imunomarcação citoplasmática: granular (paranuclear), associado à expressão citoplasmática exclusiva, que prevalece no componente difuso dos tumores mistos, e homogêneo, em todo o citoplasma, correlacionado com expressão citoplasmática-membranar, predominante nos outros histotipos. Carcinomas difusos apresentam expressão membranar de Caderina-E, que se expressa com maior freqüência nas metástases linfonodais do que nas lesões primárias e está presente em grupos celulares infiltrantes e células isoladas, nas duas sedes anatômicas. Os dados sugerem que o carcinoma misto representa histotipo distinto de carcinoma gástrico, baseado nos aspectos peculiares da expressão citoplasmática de Caderina-E aqui mostrados e em outros achados da literatura. Não houve associação estatisticamente significativa entre expressão de COX-2 e de Caderina-E e demais parâmetros clínico-patológicos nesta amostra. Os dados aqui observados sugerem que COX-2 e Caderina-E são importantes proteínas relacionadas com a progressão tumoral-linfonodal no câncer gástrico.

Introdução: GIST perfazem cerca de 70% dos tumores mesenquimais do trato gastrintestinal. Têm uma incidência de 1 a 2/100.000/ano sendo a forma esporádica observada em adultos, a mais comum. Para o diagnóstico definitivo de GIST é necessária à confirmação imunohistoquímica, sendo que 90 a 95% dos casos são positivos para o marcador CD117. Os GIST apresentam um comportamento biológico incerto e a classificação em categorias de risco (tamanho tumoral e índice mitótico - NIH) tem sido validada em inúmeras séries. Marcadores imuno-histoquímicos prognósticos têm sido pesquisados amplamente principalmente o Ki67 e o p16 INK4A. Estudos genéticos mostram um percentual alto de mutações em GIST, sobretudo para as mutações localizadas no exon 11 do gene c-Kit. Objetivo: caracterizar todos os casos de GIST diagnosticados no Serviço de Patologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre de 01/01/1993 a 31/07/2009 do ponto de vista anatomopatológico, imuno-histoquímico, clínico e molecular. Material e Métodos: os casos foram selecionados a partir do estudo das lâminas no HE e pelo seguinte painel imuno-histoquímico: CD117, CD34, S100, desmina e actina. Foram testados dois marcadores imuno-histoquímicos prognósticos: o Ki67 e o p16 INK4A. Os casos cirúrgicos foram classificados em categoria de risco segundo os critérios de Fletcher e cols. (NIH). O estudo molecular incluiu: extração do DNA, PCR e análise mutacional. Resultados: a série é composta por 45 homens e 40 mulheres com uma média de idade de 58,4 anos. A localização gástrica foi a mais frequente (45,9%) seguida da intestinal (37,6%). O tipo histológico predominante foi o fusocelular presente em 74,1% dos casos. GIST classificados na categoria de risco muito baixo e baixo risco foram 28,2%, na categoria de risco intermediário, 23,9% e na categoria de alto risco, 47,9%. O marcador CD117 (proteína KIT) foi positivo em 97,6% dos casos de GIST. Entre os 85 casos, o marcador p16 INK4A apresentou positividade em 64,7% e Ki67> 3% foi observado em 32,9%. Houve associação significativa entre as categorias de risco classificadas como alto e não alto risco com o Ki67>3% (p = 0,001) e do Ki67 >3% com o índice mitótico (rs=0,526; p<0,001). Em 60 casos foi possível o sequenciamento do exon 11 do gene c-Kit. Foram encontradas 29 mutações para este exon: 12 mutações de ponto, 10 deleções, 04 duplicações e 03 mutações duplas (deleção associada à mutação de ponto). A maioria das mutações foi observada entre os codons 550 e 560, “hot spot” descrito em estudos prévios. A curva de sobrevida mostrou um tempo de seguimento de 2,5 anos (±2,8) e mediana de 1,5 anos, e foi estatisticamente significativa quando associada às metástases (p=0,025) e ao índice mitótico (p=0,002). Os fatores associados com a probabilidade de óbito através da Regressão de Cox foram o índice mitótico e o Ki67 > 3%. Conclusões: os 85 casos de GIST do HCPA foram caracterizados do ponto de vista anatomopatológico, imuno-histoquímico, clínico e molecular. Negatividade para p16 INK4 e Ki67 > 3% mostrou associação com um tempo de sobrevida mais curto. Houve associação entre o Ki67>3% e GIST classificados na categoria de alto risco. Não houve evidência de associação entre as mutações ou os tipos de mutação com as categorias de risco ou com a curva de sobrevida. Das variáveis que compõem a categoria de risco, o índice mitótico apresentou associação significativa com a sobrevida, sendo que os pacientes com mais de 10 mitoses em 50 campos de grande aumento apresentaram maior risco para óbito na análise multivariada. A contagem mitótica e o Ki67 são importantes marcadores prognósticos em pacientes portadores de GIST. / Introduction: Gastrointestinal stromal tumors (GIST) are the most common mesenchymal tumors of the gastrointestinal tract, representing 70% of these neoplasias, having an annual incidence of 1 to 2 /100.000/year. They are mostly sporadic and occurring mainly in adults. GIST are tumors of relative unknown behavior and a score of risk stratification was developed based on two criteria: maximum tumor size and mitotic index according to the National Institutes of Health (NIH) consensus, validated by several authors. Prognostic immunohistochemical biomarkers are mostly investigated, especially Ki67 and p16 INK4A. GIST have a high incidence of mutations affecting mainly exon 11 of the c-Kit gene. Objective: the aim of this work was to study the anatomopathological, immunohistochemical, clinical, and molecular aspects of all GIST diagnosed by the Pathology Service at the HCPA (Hospital de Clínicas - Porto Alegre), from 01/01/1993 to 31/07/2009. Material e Methods: diagnosis of GIST was confirmed after HE analysis and submission to the following immunohistochemical profile: CD117, CD34, S100, desmin and actin. Two prognostic immunohistochemical biomarkers were also analysed: Ki67 and p16 INK4A. Surgical cases were classified according to their risk stratification (NIH). Molecular study included: DNA extraction, PCR and mutational analysis. Results: from a total of 85 cases, 45 were male and 40, female and the mean average age was 58. 4 years. GIST were predominately located in the stomach (48.9%) followed by the small intestine (37.6%). Spindle cell morphology was present in 74.1% of these tumors. According to the NIH classification, 28.2% GIST were classified as very low or low risk category; 23.9% as intermediate risk and 47.9% belonged to the high risk category. CD117 (KIT protein) was expressed in 97.6% of all GIST in this study. From a total of 85 cases, 64.7% showed positivity for p16 INK4A and 32.9% had a Ki67 >3% index. There was a clear association between high risk category and non high risk category with Ki67>3% (p=0,001) and between Ki67>3% and a high mitotic index (>10 mitoses in 50 HPF), rs=0,526; p<0,001. Eighty-three cases were submitted to molecular genetic analysis and 60 samples were successfully amplified and sequenced for exon 11 of the c-Kit gene. Out of the 29 mutations found for this exon 12 were point mutations, 10 were deletions, 04 were duplications and 03 were double mutations (deletion plus point mutation). Most of these mutations were present between codons 550 and 660, “hot spots” described in previous studies. The mean survival follow up period was 2.5 years (±2,8) having a median time of 1.5 years. Survival rates were statistically significant when associated to metastases p=0.025 and to a high mitotic index (p=0.002. The multivariate Cox Regression analysis showed two independent risk factors indicating a poor prognosis: Ki67>3% and a high mitotic index. Conclusions: anatomopathological, immunohistochemical, clinical and molecular aspects of 85 GIST were studied in this series. Negativity for p16 INK4A and a Ki67 >3% were associated to a shorter survival time. Ki67>3% was associated to GIST belonging to the high risk category group. No significant associations were seen concerning presence of mutation or type of mutation in relation to survival rate or risk categories. A high mitotic index (more than 10 mitoses in 50 HPF), one of the NIH risk criteria, was strongly related to a shorter survival time and was also seen as an independent factor for poor prognosis in GIST on multivariate analysis. Mitotic count and Ki67 are important predictors of outcome in patients with GIST.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:14:23Z : No. of bitstreams: 1 souza_tfb_me_araca.pdf: 990469 bytes, checksum: 2edda3c74283bbc14ffbed941509caad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a cicatrização óssea de fraturas experimentais do radio de cães, tratadas ou não com o PRP autógeno, por meio de estudos radiográfico, densitométrico e histológico; bem como avaliar a expressão dos fatores de crescimento do PRP. Foram utilizados 21 cães inicialmente agrupados de acordo com o tempo de colheita de biopsia: aos sete dias (n=10) ou 60 dias (n=11) que foram alocados aleatoriamente em dois grupos experimentais: o grupo controle (G-controle, n=11) e o grupo PRP (G-PRP, n=10). Todos os animais foram submetidos à osteotomia e osteossíntese (fixador esquelético externo) do rádio direito, gerando-se um “gap” de 2,0mm, que foi preenchido ou não com PRP. Os estudos radiográficos e densitométricos foram realizados no pós-operatório imediato e até 60 dias de pós-operatório. As avaliações histológicas e imunoistoquímicas foram realizadas aos sete e 60 dias. Os dados encontrados foram tratados estatisticamente (p<0,05). Houve diferença significativa nas avaliações radiográficas e densitométricas entre os grupos. A avaliação histológica evidenciou uma cicatrização óssea mais avançada aos 60 dias no G-PRP e união óssea tardia no G-controle. Houve imunomarcação intensa do PDGF-B e TGF-β no G-PRP aos sete e 60 dias de pós-operatório. Conclui-se, que o PRP pode ser utilizado como terapia adjuvante, pois promoveu melhor cicatrização óssea em fraturas experimentais (“gap” de 2,0mm) do radio de cães tratadas com fixador esquelético externo. Ainda houve maior expressão do PDGF-B e TGF-β nos períodos, precoce e tardio, dos animais tratados com PRP / The present article aimed to assess bone healing of experimental radial fractures, treated or not with autologous PRP, by means of radiographic, densitometric and histological studies and evaluate the expression of growth factors in PRP. Were used 21 dogs initially grouped according to the time of biopsy collection: seven days (n = 10) or 60 days (n = 11) were randomly assigned to two groups: the control group (G-control, n = 11) and the PRP group (G-PRP, n = 10). All animals underwent osteotomy and fixation (external skeletal fixation) of the right radius, generating a gap of 2.0 mm, which was filled or not with PRP. Radiographic and densitometry studies were performed in the immediate postoperative period and to 60 days after the surgery. The histological and immunohistochemical evaluations were performed at seven and 60 days. The data were treated statistically (p <0.05). There were significant differences in densitometric and radiographic evaluations between the groups. Histological evaluation showed a more advanced bone healing at 60 days in G-PRP and bone union late in the G-control. There was intense expression of PDGF-B and TGF-β in G-PRP from seven to 60 days postoperatively. It is concluded that the PRP can be used as adjuvant therapy, because it provided better bone healing in experimental fractures (gap of 2.0 mm) radius of dogs treated with external skeletal fixation. Although there was a higher expression of PDGF-B and TGF-β in periods, early and late, the animals treated with PRP

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.

Introdução: GIST perfazem cerca de 70% dos tumores mesenquimais do trato gastrintestinal. Têm uma incidência de 1 a 2/100.000/ano sendo a forma esporádica observada em adultos, a mais comum. Para o diagnóstico definitivo de GIST é necessária à confirmação imunohistoquímica, sendo que 90 a 95% dos casos são positivos para o marcador CD117. Os GIST apresentam um comportamento biológico incerto e a classificação em categorias de risco (tamanho tumoral e índice mitótico - NIH) tem sido validada em inúmeras séries. Marcadores imuno-histoquímicos prognósticos têm sido pesquisados amplamente principalmente o Ki67 e o p16 INK4A. Estudos genéticos mostram um percentual alto de mutações em GIST, sobretudo para as mutações localizadas no exon 11 do gene c-Kit. Objetivo: caracterizar todos os casos de GIST diagnosticados no Serviço de Patologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre de 01/01/1993 a 31/07/2009 do ponto de vista anatomopatológico, imuno-histoquímico, clínico e molecular. Material e Métodos: os casos foram selecionados a partir do estudo das lâminas no HE e pelo seguinte painel imuno-histoquímico: CD117, CD34, S100, desmina e actina. Foram testados dois marcadores imuno-histoquímicos prognósticos: o Ki67 e o p16 INK4A. Os casos cirúrgicos foram classificados em categoria de risco segundo os critérios de Fletcher e cols. (NIH). O estudo molecular incluiu: extração do DNA, PCR e análise mutacional. Resultados: a série é composta por 45 homens e 40 mulheres com uma média de idade de 58,4 anos. A localização gástrica foi a mais frequente (45,9%) seguida da intestinal (37,6%). O tipo histológico predominante foi o fusocelular presente em 74,1% dos casos. GIST classificados na categoria de risco muito baixo e baixo risco foram 28,2%, na categoria de risco intermediário, 23,9% e na categoria de alto risco, 47,9%. O marcador CD117 (proteína KIT) foi positivo em 97,6% dos casos de GIST. Entre os 85 casos, o marcador p16 INK4A apresentou positividade em 64,7% e Ki67> 3% foi observado em 32,9%. Houve associação significativa entre as categorias de risco classificadas como alto e não alto risco com o Ki67>3% (p = 0,001) e do Ki67 >3% com o índice mitótico (rs=0,526; p<0,001). Em 60 casos foi possível o sequenciamento do exon 11 do gene c-Kit. Foram encontradas 29 mutações para este exon: 12 mutações de ponto, 10 deleções, 04 duplicações e 03 mutações duplas (deleção associada à mutação de ponto). A maioria das mutações foi observada entre os codons 550 e 560, “hot spot” descrito em estudos prévios. A curva de sobrevida mostrou um tempo de seguimento de 2,5 anos (±2,8) e mediana de 1,5 anos, e foi estatisticamente significativa quando associada às metástases (p=0,025) e ao índice mitótico (p=0,002). Os fatores associados com a probabilidade de óbito através da Regressão de Cox foram o índice mitótico e o Ki67 > 3%. Conclusões: os 85 casos de GIST do HCPA foram caracterizados do ponto de vista anatomopatológico, imuno-histoquímico, clínico e molecular. Negatividade para p16 INK4 e Ki67 > 3% mostrou associação com um tempo de sobrevida mais curto. Houve associação entre o Ki67>3% e GIST classificados na categoria de alto risco. Não houve evidência de associação entre as mutações ou os tipos de mutação com as categorias de risco ou com a curva de sobrevida. Das variáveis que compõem a categoria de risco, o índice mitótico apresentou associação significativa com a sobrevida, sendo que os pacientes com mais de 10 mitoses em 50 campos de grande aumento apresentaram maior risco para óbito na análise multivariada. A contagem mitótica e o Ki67 são importantes marcadores prognósticos em pacientes portadores de GIST. / Introduction: Gastrointestinal stromal tumors (GIST) are the most common mesenchymal tumors of the gastrointestinal tract, representing 70% of these neoplasias, having an annual incidence of 1 to 2 /100.000/year. They are mostly sporadic and occurring mainly in adults. GIST are tumors of relative unknown behavior and a score of risk stratification was developed based on two criteria: maximum tumor size and mitotic index according to the National Institutes of Health (NIH) consensus, validated by several authors. Prognostic immunohistochemical biomarkers are mostly investigated, especially Ki67 and p16 INK4A. GIST have a high incidence of mutations affecting mainly exon 11 of the c-Kit gene. Objective: the aim of this work was to study the anatomopathological, immunohistochemical, clinical, and molecular aspects of all GIST diagnosed by the Pathology Service at the HCPA (Hospital de Clínicas - Porto Alegre), from 01/01/1993 to 31/07/2009. Material e Methods: diagnosis of GIST was confirmed after HE analysis and submission to the following immunohistochemical profile: CD117, CD34, S100, desmin and actin. Two prognostic immunohistochemical biomarkers were also analysed: Ki67 and p16 INK4A. Surgical cases were classified according to their risk stratification (NIH). Molecular study included: DNA extraction, PCR and mutational analysis. Results: from a total of 85 cases, 45 were male and 40, female and the mean average age was 58. 4 years. GIST were predominately located in the stomach (48.9%) followed by the small intestine (37.6%). Spindle cell morphology was present in 74.1% of these tumors. According to the NIH classification, 28.2% GIST were classified as very low or low risk category; 23.9% as intermediate risk and 47.9% belonged to the high risk category. CD117 (KIT protein) was expressed in 97.6% of all GIST in this study. From a total of 85 cases, 64.7% showed positivity for p16 INK4A and 32.9% had a Ki67 >3% index. There was a clear association between high risk category and non high risk category with Ki67>3% (p=0,001) and between Ki67>3% and a high mitotic index (>10 mitoses in 50 HPF), rs=0,526; p<0,001. Eighty-three cases were submitted to molecular genetic analysis and 60 samples were successfully amplified and sequenced for exon 11 of the c-Kit gene. Out of the 29 mutations found for this exon 12 were point mutations, 10 were deletions, 04 were duplications and 03 were double mutations (deletion plus point mutation). Most of these mutations were present between codons 550 and 660, “hot spots” described in previous studies. The mean survival follow up period was 2.5 years (±2,8) having a median time of 1.5 years. Survival rates were statistically significant when associated to metastases p=0.025 and to a high mitotic index (p=0.002. The multivariate Cox Regression analysis showed two independent risk factors indicating a poor prognosis: Ki67>3% and a high mitotic index. Conclusions: anatomopathological, immunohistochemical, clinical and molecular aspects of 85 GIST were studied in this series. Negativity for p16 INK4A and a Ki67 >3% were associated to a shorter survival time. Ki67>3% was associated to GIST belonging to the high risk category group. No significant associations were seen concerning presence of mutation or type of mutation in relation to survival rate or risk categories. A high mitotic index (more than 10 mitoses in 50 HPF), one of the NIH risk criteria, was strongly related to a shorter survival time and was also seen as an independent factor for poor prognosis in GIST on multivariate analysis. Mitotic count and Ki67 are important predictors of outcome in patients with GIST.

O presente trabalho foi dividido em três etapas: 1) otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva utilizando três diferentes anticorpos; 2) mapeamento histológico e imunoistoquímico de cortes seriados do sistema nervoso central (SNC) de bovinos e eqüinos e 3) Histologia e imunoistoquímica de bovinos com diagnóstico de raiva registrados no programa DXSNC do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) com lesões de encefalite não-supurativa e de casos de eqüinos com raiva do arquivo do Setor de Patologia da UFRGS entre 2002-2007. Para a otimização da técnica de imunoistoquímica para raiva foram utilizadas 5 amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato. No mapeamento do SNC foram avaliadas 12 amostras de bovinos e 3 de eqüinos que morreram de raiva. Foi realizado histologia convencional e imunoistoquímica com utilização do anticorpo policlonal na diluição de 1:1000. Os principais achados histopatológicos em bovinos e eqüinos caracterizaram-se por meningoencefalite não-supurativa, microgliose focal, degeneração e necrose neuronal e neuronofagia. Em bovinos os principais locais de lesões foram no tronco encefálico, medula espinhal e gânglio trigêmeo. Corpúsculos de inclusão foram observados em 83,33% dos bovinos e em 100% dos eqüinos. Na imunoistoquímica todos os casos de bovinos e eqüinos obtiveram marcação positiva para raiva. Na terceira etapa do trabalho a histopatologia e imunoistoquímica de 30 amostras de bovinos com raiva do Programa DXSNC do SPV-UFRGS caracterizaram-se por meningoencefalite e meningomielite não supurativa com infiltrado mononuclear perivascular, principalmente de linfócitos e também de plasmócitos e macrófagos, além de, microgliose, satelitose e neuronofagia. Presença de corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos foi observado em 73,33% dos casos. Na imunoistoquímica obteve-se marcação em 80% dos casos. Em dois casos de eqüinos examinados do material de arquivo do SPV-UFRGS havia meningoencefalite não-supurativa e com presença de corpúsculos de inclusão e marcação imunoistoquímica nos dois casos. / The present study was divided in three stages: 1) optimization of the immunohistochemistry technique for rabies using three different antibodies; 2) histological and immunohistochemical mapping of serial sections of the central nervous system (CNS) of cattle and horses, and 3) histology and immunohistochemistry of bovine diagnosed with rabies registered on the DXSNC program of the Ministério da Agricultura e Abastecimento (MAPA) with lesions of non-suppurative encephalitis and of equines diagnosed with rabies registered on the files of Veterinary Pathology Section at UFRGS from 2002 to 2007. For the optimization of the rabies immunohistochemistry technique, 5 samples of CNS of bovine naturally infected with rabies virus were used. One polyclonal antibody and two monoclonal antibodies were used. The following reagents were evaluated for antigen retrieval: XIV protease, proteinase K and citrate buffer (pH 6,0). Detection of rabic antigen was possible with the three antibodies tested. The polyclonal antibody was superior to the monoclonal antibodies, demonstrating good results with the three antigen retrieval protocols. The highest intensity staining was obtained with the citrate buffer. In the CNS mapping, 12 samples of bovine and 3 of equine that died of rabies were evaluated. Conventional histology and immunohistochemistry with polyclonal antibody in a 1:1000 dilution were performed. The main histopathological findings in cattle and horses were non-suppurativepurulent meningoencephalitis, focal microgliosis, neuronal degeneration and necrosis and neurophagia. In bovine, the major sites of lesions were brain stem, spinal cord and trigeminal ganglion. Inclusion bodies were observed in 83.33% of bovine and 100% of equine. In the immunohistochemistry, all the bovine and equine cases resulted in positive staining for rabies. On the third stage of the study, histopathology and immunohistochemistry of 30 samples of bovine diagnosed with rabies from the DXSNC program of SPV-UFRGS were characterized by meningoencephalitis and nonsupurative meningomyelitis with perivascular mononuclear infiltrate, especially with lymphocytes and also plasma cells and macrophages. Microgliosis, satellitosis and neuronophagia were also seen. Intracytoplasmic inclusion bodies were observed in 73.33% of the cases. Positive staining was obtained in 80% of the cases in the immunohistochemistry. In two equine cases examined from the SPV-UFRGS file material, there was non-suppurative meningoencephalitis with inclusion bodies and immunohistochemical positive staining.