No sentido de colaborar com o estudo da redução de microrganismos em Endodontia, foi realizada uma análise crítica dos modelos metodológicos in vivo sobre as técnicas moleculares utilizadas na avaliação da microbiota endodôntica e na capacidade de medir a antissepsia que o tratamento endodôntico proporciona. Desta maneira, os trabalhos foram agrupados de acordo com a proposta do presente estudo. Na análise critica e comparativa, pode-se observar uma grande variedade de métodos moleculares aplicados nos estudos, sendo que o mais utilizado nos ensaios para avaliação da microbiota foi o PCR. Havia estudos que utilizavam uma combinação de vários métodos onde foi possível identificar microrganismos ainda não conhecidos. Nos ensaios que utilizam iniciadores universais e que se valem da identificação de microrganismos através do DNA, foram listados de maneira a poder observar que o iniciador universal formado pela seguinte cadeia de oligonucleotídeos: F: 5- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3/R: 5-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3 foi o mais descrito pela literatura. / In order to collaborate with the study of disinfection in Endodontics, was performed a study of critical methodological models in vivo on the molecular techniques used in the evaluation of endodontic microbiota and the ability to measure the disinfection capacity of endodontic treatment. Thus, the studies were grouped according to the purpose of this study. Under in critical and comparative analysis its can be seen a wide variety of molecular techniques used in the studies, and as used in the tests was to evaluate the microbial PCR studies using a combination of various methods which could be identified microorganisms has not known. In assays using universal primers which rely on the identification of microorganisms using the DNA, were listed as to be able to observe that the universal primer chain formed by the following primers: F: 5\'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 \'/ R: 5\'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3\' was as described in the literature.

No sentido de colaborar com o estudo da redução de microrganismos em Endodontia, foi realizada uma análise crítica dos modelos metodológicos in vivo sobre as técnicas moleculares utilizadas na avaliação da microbiota endodôntica e na capacidade de medir a antissepsia que o tratamento endodôntico proporciona. Desta maneira, os trabalhos foram agrupados de acordo com a proposta do presente estudo. Na análise critica e comparativa, pode-se observar uma grande variedade de métodos moleculares aplicados nos estudos, sendo que o mais utilizado nos ensaios para avaliação da microbiota foi o PCR. Havia estudos que utilizavam uma combinação de vários métodos onde foi possível identificar microrganismos ainda não conhecidos. Nos ensaios que utilizam iniciadores universais e que se valem da identificação de microrganismos através do DNA, foram listados de maneira a poder observar que o iniciador universal formado pela seguinte cadeia de oligonucleotídeos: F: 5- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3/R: 5-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3 foi o mais descrito pela literatura. / In order to collaborate with the study of disinfection in Endodontics, was performed a study of critical methodological models in vivo on the molecular techniques used in the evaluation of endodontic microbiota and the ability to measure the disinfection capacity of endodontic treatment. Thus, the studies were grouped according to the purpose of this study. Under in critical and comparative analysis its can be seen a wide variety of molecular techniques used in the studies, and as used in the tests was to evaluate the microbial PCR studies using a combination of various methods which could be identified microorganisms has not known. In assays using universal primers which rely on the identification of microorganisms using the DNA, were listed as to be able to observe that the universal primer chain formed by the following primers: F: 5\'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 \'/ R: 5\'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3\' was as described in the literature.

Nos últimos 30 anos, Acinetobacter tornou-se um dos patógenos de maior preocupação clínica pela falta de terapias eficazes em virtude do fenótipo de multirresistência frequentemente apresentado. Dentre as espécies do gênero Acinetobacter, A. baumannii, A. genoespécie 3 e A. genoespécie 13TU são as mais comumente encontradas a partir de amostras biológicas. Estas espécies ao lado de A. calcoaceticus constituem o complexo A. calcoaceticus-A. baumannii (ACB). Este estudo propõe um esquema composto de duas PCRs para a identificação das espécies de interesse médico que fazem parte do complexo ACB. O método é simples, rápido e, além de identificar as espécies, permite pesquisar a presença de genes de resistência. Foram identificadas 515 amostras do complexo ACB, isoladas de pacientes no período de janeiro de 2005 a dezembro de 2010. A identificação das espécies do complexo ACB foi realizada por esquema composto de duas reações de PCR. Foram avaliados os perfis de sensibilidade por disco difusão e a pesquisa da presença dos genes blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like, blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaSPM e blaGIM foi realizada por PCR utilizando-se iniciadores específicos. No grupo de amostras estudas, 82,5% são A. baumannii (425), 11,5% A. genoespécie 13TU (59) e 6,0% A. genoespécie 3 (30), sendo A. baumannii mais isolado em pacientes internados em UTIs (p=0,0407) e A. genoespécie 13TU mais isolado em pacientes de outros ambientes hospitalares (p=0,0204). A. baumannii apresentou menor sensibilidade a todos os antimicrobianos quando comparado com A. genoespécie 13TU e A. genoespécie. 3 (p<0,05). Foi possível observar ao longo do período estudado o aumento significativo da resistência aos carbapenêmicos e da sensibilidade a gentamicina por A. baumannii entre os isolados de pacientes de UTIs (p<0.05). Nenhum dos genes codificadores para metalo-lactamases foi detectado nas amostras estudadas Dentre os cepas resistentes aos carbapenêmicos (176) o gene blaOXA-23 foi detectado em 81,25% e uma amostra de A. baumannii apresentou o gene codificador para OXA-72. A tipagem molecular foi realizada por RAPD e para os isolados resistentes aos carbapenêmicos também por PFGE. Resultados obtidos por RAPD revelaram menor diversidade entre os isolados de pacientes internados em UTIs. O dendrograma obtido utilizando-se PFGE separou dois clones cujos componentes eram resistentes aos carbapenêmicos, no entanto não apresentavam o gene blaOXA-23-like. A produção de acil-homoserina lactona, autoindutor-2 e autoindutor-3 de três amostras de cada espécie clínica do complexo ACB foi pesquisada utilizando-se bioensaios. Apenas Autoindutor 3 foi detectado por bioensaio e em menor quantidade no meio précondicionados obtido a partir de A. genoespécie 3 quando comparado com A. genoespécie 13TU e A. baumannii (p<0.05). Três cepas de cada espécie clínica do complexo ACB foi avaliada quanto a capacidade de adesão em monocamada de células Hep-2, MRC-5 e NCI-H292, sendo essa última a que revelou diferenças entre as espécies clínicas do complexo ACB. A. baumannii apresentou adesão difusa, A. genoespécie 13 TU adesão com formação de agrupamentos e A. genoespécie 3 não aderiu. Esse mesmo ensaio foi realizado na presença de propanolol e notou-se a diminuição de células aderidas por campo observado. Dez cepas de cada espécie clínica do complexo ACB foram pesquisadas quanto a produção de biofilme por ensaio colorimétrico utilizando cristal violeta e foi possível notar a produção significativa de biofilme por A. baumannii, quando comparado com A. genoespécie 3 (p<0.05). Esse mesmo ensaio na presença de de fentolamina, mostrou a diminuição significativa na produção do biofilme por A. baumannii. A interferência no ensaio de adesão bacteriana e biofilme, na presença de fentolamina ou propanolol, sugerem o envolvimento do autoindutor-3 na regulação desses mecanismos de virulência. / The genus Acinetobacter has emerged as one of the most troublesome pathogens for health care institutions globally. Its clinical significance, especially over the last 15 years, has been driven by its remarkable ability to up regulate or acquire resistance determinants, making it one of the organisms threatening the current antibiotic era. A. baumannii, A. 3 and A. 13TU are the most commonly species found from biological samples. These species beside A. calcoaceticus are very closely related and difficult to distinguish from each other by phenotypic properties. Therefore, it has been proposed to refer to these species as the A.calcoaceticus-A. baumannii complex(ACB). In the period from 2005 to 2009, the most frequent bacterial isolates among the nosocomial infection at the HU-USP was ACB (18%). Due to the frequency with which species are involved in ACB outbreaks of infection in the HU-USP and the emergency clinic because of expression of the phenotype of resistance to several classes of antibiotics, this study aimed to identify and characterize the species of complex ACB by molecular methods, to study their mechanisms of resistance and to characterize the different clones from patients admitted to different hospital areas. Furthermore, the ability to characterize biofilm formation, adhesion to different cell lines as well as the mechanisms of cell-cell communication were analyzed. From the ACB complex, 515 samples were identified, isolated from patients from January 2005 to December 2010. The identification of clinical species of the ACB was performed by molecular methods that were developed and validated for identification of Acinetobacter sp. include two reactions of PCR. The profiles of sensibility were evaluated by disc diffusion and the detection of the presence of genes blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like, blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM, and blaSPM were performed using specific primers. Molecular typing was performed by RAPD and isolates resistant to carbapenems also by PFGE. The production of autoinducers of three clinical species complex was sought using bioassays with sensor strains. The ability adhesion was evaluated in monolayer of Hep-2 cells, MRC-5 and NCI-H292E. Ten clinical strains of each species of ACB complex were screened for the production of biofilms by colorimetric assay using crystal violet. Among all the strains studied, 82.5% were A. baumannii (425), 11.5% A.13TU (59) and 6.0% A. 3 (30). A. baumannii strains were more isolated from intensive care unit (ICU) patients (p = 0.0407) and A. 13TU from other patients in different hospital settings (p = 0.0204). A. baumannii showed less sensitivity to all drugs when compared with A. 13TU and A.3 (p <0.05). It was possible to observe during the study period a significant increase in carbapenem resistance and sensitivity to gentamicin by A. baumannii isolates from patients in ICUs (p <0.05). No genes coding for metallo-lactamase was detected in the samples studied. blaOXA-23 gene was detected in 81.25% among the 176 strains resistant to carbapenems. Results obtained by RAPD revealed less diversity among isolates from ICU patients compared to isolates from patients from other hospitals. The dendrogram obtained by PFGE showed less diversity than RAPD It was unable to detect homoserine lactone and autoinducer-2 by bioassay. The survey was positive of autoinducer-3 observed differences in yield among clinical species, smaller amount produced by strains of A. 3 when compared with A. 13TU and A. baumannii (p <0.05). Among the cells studied in adhesion testing, line NCI-H292 showed the greatest power discrimination between adhesion pattern observed and species of the ACB. A. baumannii showed diffuse adherence, A. 13 TU strains showed adhesion clustering and A. 3 did not adhere. This experiment was repeated in the presence of 100 &#181;M of propranolol and it was noted a decrease in cell A. 13TU and A. baumannii adhered per field observed. The biofilm assay showed significantly higher production of biofilms by A.baumannii compared with A. 3 (p <0.05). When the test was conducted in the presence of phentolamine at 100&#181;M, it was observed a significant decrease in the biofilm productions by A. baumannii, which revealing the involvement of the autoinducer-3 in biofilm production. The data obtained suggest that the proposed method of identification is a method for identification of species of medical interest belonging to the ACB complex which could be used in a routine laboratory. The method is simple, fast and beside the identification species, provides data about the resistance genes. Moreover, it revealed that the isolates of A. baumannii are more resistant and OXAbla genes, that was restricted to the ACB complex studied in this work. A. baumannii has also increased capacity for adhesion and biofilm formation, which regulates the expression of the phenotype may be linked to the production of autoinducers-3.

Nos últimos 30 anos, Acinetobacter tornou-se um dos patógenos de maior preocupação clínica pela falta de terapias eficazes em virtude do fenótipo de multirresistência frequentemente apresentado. Dentre as espécies do gênero Acinetobacter, A. baumannii, A. genoespécie 3 e A. genoespécie 13TU são as mais comumente encontradas a partir de amostras biológicas. Estas espécies ao lado de A. calcoaceticus constituem o complexo A. calcoaceticus-A. baumannii (ACB). Este estudo propõe um esquema composto de duas PCRs para a identificação das espécies de interesse médico que fazem parte do complexo ACB. O método é simples, rápido e, além de identificar as espécies, permite pesquisar a presença de genes de resistência. Foram identificadas 515 amostras do complexo ACB, isoladas de pacientes no período de janeiro de 2005 a dezembro de 2010. A identificação das espécies do complexo ACB foi realizada por esquema composto de duas reações de PCR. Foram avaliados os perfis de sensibilidade por disco difusão e a pesquisa da presença dos genes blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like, blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaSPM e blaGIM foi realizada por PCR utilizando-se iniciadores específicos. No grupo de amostras estudas, 82,5% são A. baumannii (425), 11,5% A. genoespécie 13TU (59) e 6,0% A. genoespécie 3 (30), sendo A. baumannii mais isolado em pacientes internados em UTIs (p=0,0407) e A. genoespécie 13TU mais isolado em pacientes de outros ambientes hospitalares (p=0,0204). A. baumannii apresentou menor sensibilidade a todos os antimicrobianos quando comparado com A. genoespécie 13TU e A. genoespécie. 3 (p<0,05). Foi possível observar ao longo do período estudado o aumento significativo da resistência aos carbapenêmicos e da sensibilidade a gentamicina por A. baumannii entre os isolados de pacientes de UTIs (p<0.05). Nenhum dos genes codificadores para metalo-lactamases foi detectado nas amostras estudadas Dentre os cepas resistentes aos carbapenêmicos (176) o gene blaOXA-23 foi detectado em 81,25% e uma amostra de A. baumannii apresentou o gene codificador para OXA-72. A tipagem molecular foi realizada por RAPD e para os isolados resistentes aos carbapenêmicos também por PFGE. Resultados obtidos por RAPD revelaram menor diversidade entre os isolados de pacientes internados em UTIs. O dendrograma obtido utilizando-se PFGE separou dois clones cujos componentes eram resistentes aos carbapenêmicos, no entanto não apresentavam o gene blaOXA-23-like. A produção de acil-homoserina lactona, autoindutor-2 e autoindutor-3 de três amostras de cada espécie clínica do complexo ACB foi pesquisada utilizando-se bioensaios. Apenas Autoindutor 3 foi detectado por bioensaio e em menor quantidade no meio précondicionados obtido a partir de A. genoespécie 3 quando comparado com A. genoespécie 13TU e A. baumannii (p<0.05). Três cepas de cada espécie clínica do complexo ACB foi avaliada quanto a capacidade de adesão em monocamada de células Hep-2, MRC-5 e NCI-H292, sendo essa última a que revelou diferenças entre as espécies clínicas do complexo ACB. A. baumannii apresentou adesão difusa, A. genoespécie 13 TU adesão com formação de agrupamentos e A. genoespécie 3 não aderiu. Esse mesmo ensaio foi realizado na presença de propanolol e notou-se a diminuição de células aderidas por campo observado. Dez cepas de cada espécie clínica do complexo ACB foram pesquisadas quanto a produção de biofilme por ensaio colorimétrico utilizando cristal violeta e foi possível notar a produção significativa de biofilme por A. baumannii, quando comparado com A. genoespécie 3 (p<0.05). Esse mesmo ensaio na presença de de fentolamina, mostrou a diminuição significativa na produção do biofilme por A. baumannii. A interferência no ensaio de adesão bacteriana e biofilme, na presença de fentolamina ou propanolol, sugerem o envolvimento do autoindutor-3 na regulação desses mecanismos de virulência. / The genus Acinetobacter has emerged as one of the most troublesome pathogens for health care institutions globally. Its clinical significance, especially over the last 15 years, has been driven by its remarkable ability to up regulate or acquire resistance determinants, making it one of the organisms threatening the current antibiotic era. A. baumannii, A. 3 and A. 13TU are the most commonly species found from biological samples. These species beside A. calcoaceticus are very closely related and difficult to distinguish from each other by phenotypic properties. Therefore, it has been proposed to refer to these species as the A.calcoaceticus-A. baumannii complex(ACB). In the period from 2005 to 2009, the most frequent bacterial isolates among the nosocomial infection at the HU-USP was ACB (18%). Due to the frequency with which species are involved in ACB outbreaks of infection in the HU-USP and the emergency clinic because of expression of the phenotype of resistance to several classes of antibiotics, this study aimed to identify and characterize the species of complex ACB by molecular methods, to study their mechanisms of resistance and to characterize the different clones from patients admitted to different hospital areas. Furthermore, the ability to characterize biofilm formation, adhesion to different cell lines as well as the mechanisms of cell-cell communication were analyzed. From the ACB complex, 515 samples were identified, isolated from patients from January 2005 to December 2010. The identification of clinical species of the ACB was performed by molecular methods that were developed and validated for identification of Acinetobacter sp. include two reactions of PCR. The profiles of sensibility were evaluated by disc diffusion and the detection of the presence of genes blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-51-like, blaOXA-58-like, blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM, and blaSPM were performed using specific primers. Molecular typing was performed by RAPD and isolates resistant to carbapenems also by PFGE. The production of autoinducers of three clinical species complex was sought using bioassays with sensor strains. The ability adhesion was evaluated in monolayer of Hep-2 cells, MRC-5 and NCI-H292E. Ten clinical strains of each species of ACB complex were screened for the production of biofilms by colorimetric assay using crystal violet. Among all the strains studied, 82.5% were A. baumannii (425), 11.5% A.13TU (59) and 6.0% A. 3 (30). A. baumannii strains were more isolated from intensive care unit (ICU) patients (p = 0.0407) and A. 13TU from other patients in different hospital settings (p = 0.0204). A. baumannii showed less sensitivity to all drugs when compared with A. 13TU and A.3 (p <0.05). It was possible to observe during the study period a significant increase in carbapenem resistance and sensitivity to gentamicin by A. baumannii isolates from patients in ICUs (p <0.05). No genes coding for metallo-lactamase was detected in the samples studied. blaOXA-23 gene was detected in 81.25% among the 176 strains resistant to carbapenems. Results obtained by RAPD revealed less diversity among isolates from ICU patients compared to isolates from patients from other hospitals. The dendrogram obtained by PFGE showed less diversity than RAPD It was unable to detect homoserine lactone and autoinducer-2 by bioassay. The survey was positive of autoinducer-3 observed differences in yield among clinical species, smaller amount produced by strains of A. 3 when compared with A. 13TU and A. baumannii (p <0.05). Among the cells studied in adhesion testing, line NCI-H292 showed the greatest power discrimination between adhesion pattern observed and species of the ACB. A. baumannii showed diffuse adherence, A. 13 TU strains showed adhesion clustering and A. 3 did not adhere. This experiment was repeated in the presence of 100 &#181;M of propranolol and it was noted a decrease in cell A. 13TU and A. baumannii adhered per field observed. The biofilm assay showed significantly higher production of biofilms by A.baumannii compared with A. 3 (p <0.05). When the test was conducted in the presence of phentolamine at 100&#181;M, it was observed a significant decrease in the biofilm productions by A. baumannii, which revealing the involvement of the autoinducer-3 in biofilm production. The data obtained suggest that the proposed method of identification is a method for identification of species of medical interest belonging to the ACB complex which could be used in a routine laboratory. The method is simple, fast and beside the identification species, provides data about the resistance genes. Moreover, it revealed that the isolates of A. baumannii are more resistant and OXAbla genes, that was restricted to the ACB complex studied in this work. A. baumannii has also increased capacity for adhesion and biofilm formation, which regulates the expression of the phenotype may be linked to the production of autoinducers-3.

A espectrometria de massas baseada na tecnologia MALDI-TOF (do inglês, matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight) (MALDI-TOF MS) tem sido cada vez mais incorporada à rotina de identificações microbiológicas nos laboratórios farmacêuticos de controle de qualidade, principalmente para as atividades do Programa de Monitoramento Ambiental de Salas Limpas. Isso porque o longo tempo necessário para a obtenção dos resultados por meio de métodos convencionais tem incentivado a procura por técnicas que permitam métodos rápidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a adequação da técnica MALDI-TOF MS para a identificação de bactérias isoladas do ambiente de salas limpas utilizadas em algumas etapas da produção de uma vacina viral. Treze espécies bacterianas conhecidas, normalmente isoladas das salas limpas estudadas, e cinco cepas ATCC foram identificadas pela técnica MALDI-TOF MS e por uma técnica bioquímica (BBL Crystal®). O desempenho da técnica MALDI-TOF MS foi superior ao da técnica bioquímica na identificação correta das espécies bacterianas (88,89% e 38,89%, respectivamente) e produziu menos identificações não confiáveis (5,55% e 22,22%, respectivamente). Os resultados evidenciaram que a técnica MALDI-TOF MS pode ser implementada para identificação rotineira de bactérias em um laboratório de controle de qualidade farmacêutico. Entretanto, a dependência de bases de dados exige estudos adicionais de isolados não identificados e, se apropriado, a adição destes a uma base de dados interna. O aperfeiçoamento de métodos de identificação microbiana é muito relevante no contexto de salas limpas, pois permitem ações corretivas e proativas essenciais para garantir a segurança microbiológica do processamento asséptico. / Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has been increasingly introduced in routine microbiological identifications of pharmaceutical quality control laboratories, mainly for the activities of the Environmental Monitoring Program of Clean Rooms. The long time needed to obtain the results through conventional methods has stimulated the search for techniques that allow rapid methods, as MALDI-TOF MS. Thus, the objective of this work was to evaluate the suitability of the MALDI-TOF MS technique for the identification of bacteria isolated from the environment of clean rooms used in some stages of the production of a viral vaccine. Thirteen bacterial species commonly isolated from clean rooms studied and five strains ATCC were identified by MALDI-TOF MS technique and by a biochemical technique (BBL Crystal® System). Performance of MALDI-TOF MS was better than biochemical technique for correct species identifications (88.89% and 38.89%, respectively) and produced fewer unreliable identifications (5.55% and 22.22%, respectively). MALDI-TOF MS can be implemented for routine identification of bacteria in a pharmaceutical quality control laboratory. However, as a database-dependent system, maybe some isolated not identified by this technique must be additionally studied and, if appropriate, added to an in-house database.

A espectrometria de massas baseada na tecnologia MALDI-TOF (do inglês, matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight) (MALDI-TOF MS) tem sido cada vez mais incorporada à rotina de identificações microbiológicas nos laboratórios farmacêuticos de controle de qualidade, principalmente para as atividades do Programa de Monitoramento Ambiental de Salas Limpas. Isso porque o longo tempo necessário para a obtenção dos resultados por meio de métodos convencionais tem incentivado a procura por técnicas que permitam métodos rápidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a adequação da técnica MALDI-TOF MS para a identificação de bactérias isoladas do ambiente de salas limpas utilizadas em algumas etapas da produção de uma vacina viral. Treze espécies bacterianas conhecidas, normalmente isoladas das salas limpas estudadas, e cinco cepas ATCC foram identificadas pela técnica MALDI-TOF MS e por uma técnica bioquímica (BBL Crystal®). O desempenho da técnica MALDI-TOF MS foi superior ao da técnica bioquímica na identificação correta das espécies bacterianas (88,89% e 38,89%, respectivamente) e produziu menos identificações não confiáveis (5,55% e 22,22%, respectivamente). Os resultados evidenciaram que a técnica MALDI-TOF MS pode ser implementada para identificação rotineira de bactérias em um laboratório de controle de qualidade farmacêutico. Entretanto, a dependência de bases de dados exige estudos adicionais de isolados não identificados e, se apropriado, a adição destes a uma base de dados interna. O aperfeiçoamento de métodos de identificação microbiana é muito relevante no contexto de salas limpas, pois permitem ações corretivas e proativas essenciais para garantir a segurança microbiológica do processamento asséptico. / Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has been increasingly introduced in routine microbiological identifications of pharmaceutical quality control laboratories, mainly for the activities of the Environmental Monitoring Program of Clean Rooms. The long time needed to obtain the results through conventional methods has stimulated the search for techniques that allow rapid methods, as MALDI-TOF MS. Thus, the objective of this work was to evaluate the suitability of the MALDI-TOF MS technique for the identification of bacteria isolated from the environment of clean rooms used in some stages of the production of a viral vaccine. Thirteen bacterial species commonly isolated from clean rooms studied and five strains ATCC were identified by MALDI-TOF MS technique and by a biochemical technique (BBL Crystal® System). Performance of MALDI-TOF MS was better than biochemical technique for correct species identifications (88.89% and 38.89%, respectively) and produced fewer unreliable identifications (5.55% and 22.22%, respectively). MALDI-TOF MS can be implemented for routine identification of bacteria in a pharmaceutical quality control laboratory. However, as a database-dependent system, maybe some isolated not identified by this technique must be additionally studied and, if appropriate, added to an in-house database.