Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10561_Dissertação_Geraldo da Silva Alves.pdf: 2478261 bytes, checksum: 9cd1b27b375af96d81c665a368ec6c9b (MD5) Previous issue date: 2016-11-24 / A resistência bacteriana aos antimicrobianos é uma ameaça global à saúde pública. O uso de produtos naturais derivados de plantas que tem atividade antimicrobiana em associação com antibacterianos tradicionais podem ser alternativas viáveis para a produção de novos fármacos eficazes contra micro- organismos multirresistentes. A isocumarina paepalantina e o dímero de paepalantina, isolados dos capítulos de Paepalanthus bromelioides, têm se destacado como substâncias promissoras em função de seu potencial biológico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana in vitro da paepalantina e do dímero isoladamente e em associação, através do método de checkerboard, com diferentes antimicrobianos de uso clínico (vancomicina, oxacilina e meropenem) em amostras de Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa multirresistentes e avaliar por microscopia eletrônica de varredura possíveis alterações morfológicas em amostras expostas a concentrações inibitórias e subinibitórias de paepalantina e do dímero isoladamente e em associação com antibacterianos. Nas amostras de E. faecium, a paepalantina e o dímero isoladamente apresentaram concentração mínima inibitória (CMI) de 32 µg/mL. A associação com a vancomicina não apresentou aumento na atividade desse fármaco. Para S. aureus, a paepalantina e o dímero apresentam bom potencial inibitório quando testados isoladamente (CMI 16 e 8 µg/mL, respectivamente). A associação da paepalantina com a oxacilina mostrou-se indiferente em três das cinco amostras analisadas, enquanto que a associação do dímero com esse fármaco mostrou-se sinérgica em todas as amostras, com redução de até 256 vezes na CMI. Em relação aos micro-organismos Gram-negativos, K. pneumoniae e P. aeruginosa, a paepalantina e o dímero apresentaram fraco potencial inibitório (CMI > 256 µg/mL) e a associação com meropenem não apresentou aumento na atividade desses. O presente estudo demonstrou a atividade das isocumarinas paepalantina e do dímero apenas em bactérias Gram-positivas (E. faecium e S. aureus). A combinação dessas substâncias, sobretudo do dímero, com a oxacilina apresentou efeito sinérgico relevante, o que propicia perspectiva de estudos adicionais para o desenvolvimento de produtos com a associação destas substâncias. Em S. aureus, após análise por MEV, verificou-se que as substâncias vi não atuam alterando a estrutura externa desse micro-organismo nas condições utilizadas neste estudo. Palavras-chave: Resistência bacteriana; Paepalantina; Sinergismo.

A produção de resíduos gerou uma problemática a ser abordada em nível de redução, reciclagem e reutilização de produtos. A técnica da compostagem é uma alternativa promissora para tratar resíduos sólidos orgânicos, bem como o lodo produzido nas estações de tratamento de esgotos. Os micro-organismos que promovem a degradação durante o processo de compostagem podem apresentar perfil de resistência a antimicrobianos e metais pesados, consequência da pressão seletiva de produtos químicos que estão misturados à matéria orgânica. Para avaliar o perfil de resistência a antimicrobianos, foram testadas 344 bactérias isoladas do processo de compostagem, utilizando-se 14 antimicrobianos. Para os ensaios de concentração inibitória mínima (CIM) de metais pesados, foram avaliados 91 isolados do início e final do processo, utilizando cromo, cobre, zinco e chumbo. Também foi avaliada a qualidade microbiológica do composto, segundo a Resolução 375/2006 do CONAMA. Os resultados apontaram para um perfil de 88% dos isolados resistentes a pelo menos um antimicrobiano. O antimicrobiano com maior índice de resistência foi a nitrofurantoína (64,82%), e o mais eficiente foi o imipenem, com apenas um isolado resistente. Das bactérias isoladas do início do processo de compostagem, 33,3% foram resistentes a MIC acima de 710 mg.L-1 de cromo, 38,9% foram resistentes ao mínimo de 1020 mg.L-1 de cobre, 91,7% resistentes ao zinco, e 100% resistentes ao chumbo. No final do processo, 41,8% dos isolados foram resistentes ao cromo, 41,8% ao cobre, 94,5% ao zinco e 96,4% ao chumbo. Escherichia coli apresentou NMP de 4x104 UFC/g-1, acima do limite preconizado pelo CONAMA. / With the production of residues comes the need for reduction, recycling and reuse of products. The composting technique is a promising alternative for the treatment of solid organic residues, along with the sludge produced in sewage treatment plants. The microorganisms that promote the degradation during the composting process might show antimicrobial and heavy metal resistance as a result of the selective pressure of chemical products mixed to the organic matter. The antimicrobial resistance profile was evaluated by testing 344 bacteria isolated from the composting process, using 14 antimicrobial agents. The minimum inhibitory concentration (MIC) for heavy metals was evaluated using 91 isolates from the initial and final stages of the process, using chrome, copper, zinc and lead. The microbial quality of the compound was also evaluated, according to the 375/2006 resolution from the Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). The results showed that 88% of the isolates showed resistance to at least one antimicrobial. The antimicrobial nitrofurantoin showed the highest resistance rate (64.82%), and imipenem was the most efficient, as only one isolate showed resistance. Among the bacteria isolated during the initial stages of the composting process, 33.3% showed resistance to MIC over 710 mg.L-1 chrome, 38.9% showed resistance to a minimum of 1020 mg.L-1 copper, 91.7% were resistant to zinc, and 100% were resistant to lead. In the end of the process, 41.8% of the isolates showed resistance to chrome, 41.8% to copper, 94.5% to zinc and 96.4% to lead. Escherichia coli’s NMP was 4x104 UFC/g-1, above the limit recommended by CONAMA.

A produção de resíduos gerou uma problemática a ser abordada em nível de redução, reciclagem e reutilização de produtos. A técnica da compostagem é uma alternativa promissora para tratar resíduos sólidos orgânicos, bem como o lodo produzido nas estações de tratamento de esgotos. Os micro-organismos que promovem a degradação durante o processo de compostagem podem apresentar perfil de resistência a antimicrobianos e metais pesados, consequência da pressão seletiva de produtos químicos que estão misturados à matéria orgânica. Para avaliar o perfil de resistência a antimicrobianos, foram testadas 344 bactérias isoladas do processo de compostagem, utilizando-se 14 antimicrobianos. Para os ensaios de concentração inibitória mínima (CIM) de metais pesados, foram avaliados 91 isolados do início e final do processo, utilizando cromo, cobre, zinco e chumbo. Também foi avaliada a qualidade microbiológica do composto, segundo a Resolução 375/2006 do CONAMA. Os resultados apontaram para um perfil de 88% dos isolados resistentes a pelo menos um antimicrobiano. O antimicrobiano com maior índice de resistência foi a nitrofurantoína (64,82%), e o mais eficiente foi o imipenem, com apenas um isolado resistente. Das bactérias isoladas do início do processo de compostagem, 33,3% foram resistentes a MIC acima de 710 mg.L-1 de cromo, 38,9% foram resistentes ao mínimo de 1020 mg.L-1 de cobre, 91,7% resistentes ao zinco, e 100% resistentes ao chumbo. No final do processo, 41,8% dos isolados foram resistentes ao cromo, 41,8% ao cobre, 94,5% ao zinco e 96,4% ao chumbo. Escherichia coli apresentou NMP de 4x104 UFC/g-1, acima do limite preconizado pelo CONAMA. / With the production of residues comes the need for reduction, recycling and reuse of products. The composting technique is a promising alternative for the treatment of solid organic residues, along with the sludge produced in sewage treatment plants. The microorganisms that promote the degradation during the composting process might show antimicrobial and heavy metal resistance as a result of the selective pressure of chemical products mixed to the organic matter. The antimicrobial resistance profile was evaluated by testing 344 bacteria isolated from the composting process, using 14 antimicrobial agents. The minimum inhibitory concentration (MIC) for heavy metals was evaluated using 91 isolates from the initial and final stages of the process, using chrome, copper, zinc and lead. The microbial quality of the compound was also evaluated, according to the 375/2006 resolution from the Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). The results showed that 88% of the isolates showed resistance to at least one antimicrobial. The antimicrobial nitrofurantoin showed the highest resistance rate (64.82%), and imipenem was the most efficient, as only one isolate showed resistance. Among the bacteria isolated during the initial stages of the composting process, 33.3% showed resistance to MIC over 710 mg.L-1 chrome, 38.9% showed resistance to a minimum of 1020 mg.L-1 copper, 91.7% were resistant to zinc, and 100% were resistant to lead. In the end of the process, 41.8% of the isolates showed resistance to chrome, 41.8% to copper, 94.5% to zinc and 96.4% to lead. Escherichia coli’s NMP was 4x104 UFC/g-1, above the limit recommended by CONAMA.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-30T13:02:59Z No. of bitstreams: 1 cp108652.pdf: 3211869 bytes, checksum: 99fdf86f3617cb57359337d87c540797 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-30T13:03:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp108652.pdf: 3211869 bytes, checksum: 99fdf86f3617cb57359337d87c540797 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T13:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp108652.pdf: 3211869 bytes, checksum: 99fdf86f3617cb57359337d87c540797 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / FAPESP: 04/14434-3

Submitted by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-07-14T14:23:19Z No. of bitstreams: 1 Publico-05.pdf: 1607531 bytes, checksum: 67899ba37fe0afd3c83933baf91264f2 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-07-14T14:24:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-05.pdf: 1607531 bytes, checksum: 67899ba37fe0afd3c83933baf91264f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T14:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-05.pdf: 1607531 bytes, checksum: 67899ba37fe0afd3c83933baf91264f2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS) / Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) / Objetivo. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito microbiocida dos biocidas clorexidina, triclosan, PVP-I e cloreto de benzalcônio contra clones bacterianos resistentes disseminados no território brasileiro. Métodos. O efeito microbiocida do gluconato de clorexidina (nas concentrações de 0,2 e 2%), PVP-I (0,5 e 1%), cloreto de benzalcônio (5 e 10%) e triclosan (0,2 e 0,5%) foi avaliado contra duas amostras de Staphylococcus aureus (MRSA - SCCmec tipos III e IVc); uma amostra de E. faecalis resistente a vancomicina (VRE; vanA); uma amostra de P. aeruginosa produtora de SPM-1; uma amostra de A. baumannii resistente a polimixina e uma amostra de K. pneumoniae produtora de IMP-1. Os testes foram realizados de acordo com "European Standard EN1040 - Quantitative Suspension Test". O neutralizador utilizado também foi preparado de acordo com a padronização EN 1040. Biocidas foram inativados após um minuto e cinco minutos de contato com as amostras testadas. O biocida que demonstrou redução ≥ 5 log no número de UFC/mL foi considerado ativo. As cepas S. aureus ATCC 6538 e P. aeruginosa ATCC 15442 foram utilizadas como controle de qualidade do teste. A relação genética dos isolados que apresentaram redução de sensibilidade aos biocidas testados foi confirmada pela técnica de eletroforese em campo pulsado. Resultados. O gluconato de clorexidina e PVP-I apresentaram redução ≥ cinco log no número de UFC/ml na concentração de 2%. O cloreto de benzalcônio não apresentou efeito microbiocida na concentração de 5% para as amostras de S. aureus ATCC 6538, S. aureus Sccmec IVc, A. baumannii, K. pneumoniae e P. aeruginosa P10093 e ATCC 15442. Na concentração de 10% apresentou efeito microbiocida contra quase todas as amostras do teste, exceto S. aureus ATCC 6538, P. aeruginosa P10093 e K. pneumoniae. Triclosan apresentou atividade contra as amostras Gram positivas, com exceção da amostra de E. faecalis na concentração de 0,2%, entretanto para as amostras de P. aeruginosa, A. baumanii e K. pneumoniae não foi efetivo. Conclusão. PVP-I e clorexidina foram os agentes mais ativos contra os clones bacterianos multirresistentes. Em contraste, triclosan não apresentou efeito microbiocida contra isolados clínicos Gram negativos. A correlação da resistência entre antibióticos e biocidas ainda é pouco esclarecida e pode ser mediada por diversos mecanismos. Estudos adicionais nesse tema são extremamente importantes para determinar a importância epidemiológica dos nossos achados. / Purpose. The aim of this study was to evaluate the microbiocidal effect of distinct concentrations of chlorhexidine gluconate, triclosan, PVP-I and benzalkonium chloride, against multidrug-resistant bacterial clones spread out in the Brazilian territory. Methods. The microbiocidal effect of chlorhexidine gluconate, triclosan, PVP-I and benzalkonium chloride was evaluated against two Staphylococcus aureus (MRSA - SCCmec types III and IVc); one vancomycin-resistant Enterococcus faecalis (VRE; vanA); one SPM-1-producing Pseudomonas aeruginosa isolate; one carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii and IMP-1- producing Klebsiella pneumoniae. Tests were carried out according to European Standard EN1040 - Quantitative Suspension Test. Neutralizer was prepared according the EN1040. Biocides were inactivated after one minute and five minutes of contact. S. aureus ATCC 6538 and P. aeruginosa ATCC 15442 were tested as quality control strains. The genetic relatedness of the isolates that showed reduced susceptibility to biocides was confirmed by Pulsed-Field Gel Electrophoresis. Results. Chlorhexidine gluconate and PVP-I showed ≥ 5 log reduction in the number of CFU/mL. Benzalkonium chloride did not demonstrate microbiocidal effect in the 5% concentration against S. aureus ATCC 6538, S. aureus Sccmec type IVc, A. baumannii, K. pneumoniae and P. aeruginosa P10093 and ATCC 15442. The 10% concentration of benzalkonium chloride showed microbiocidal effect against all isolates, except S. aureus ATCC 6538, P. aeruginosa P10093 and K. pneumoniae. Triclosan was active agaist Gram positive isolates, except E. faecalis in the 0,2% concentration, however did not showed activity to P. aeruginosa, A. baumanii and K. pneumoniae. Conclusion. PVP-I and chlorhexidine gluconate were the most active agents tested and kept activity against multidrug resistant clones. In contrast, Triclosan had poor ME against Gram-negative clinical isolates. The correlation between antibiotic and biocide resistance is still unclear and could be mediated by several mechanisms. More studies are necessary to determine the epidemiological importance of our findings.

Submitted by Leonardo Biancolino Marino null (leobmarino@hotmail.com) on 2016-03-24T13:21:31Z No. of bitstreams: 1 Tese Leonardo Biancolino Marino versão final.pdf: 7165900 bytes, checksum: b52d4eb1bb81181de6acee83becaa5f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-24T18:55:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marino_lb_dr_arafcf.pdf: 7165900 bytes, checksum: b52d4eb1bb81181de6acee83becaa5f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-24T18:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marino_lb_dr_arafcf.pdf: 7165900 bytes, checksum: b52d4eb1bb81181de6acee83becaa5f9 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tuberculose (TB), com principal agente etiológico o bacilo Mycobacterium tuberculosis, é uma doença infecciosa passível de cura. Entretanto, é detentora de uma estatística mundial preocupante, e em 2014 apresentou 9,5 milhões de novos casos e 1,5 milhão de mortes. Além dos altos índices estatísticos, a TB aparece ainda associada a dois fatores agravantes: a co-infecção com HIV (“Human Immunodeficiency Virus”) e a crescente emergência de linhagens resistentes aos quimioterápicos como “multi-drug resistant” (MDR) e “extensively drug resistant” (XDR), que dificultam sobremaneira o tratamento, indicando premência na pesquisa de novos fármacos. A resistência do bacilo manifesta-se a partir de eventos adquiridos (como aquisição de mutações cromossomais em genes específicos relacionados ao metabolismo de fármacos) ou intrínsecos, como uma parede celular altamente hidrofóbica (devido à grande quantidade de ácidos micólicos). Estes mecanismos de resistência são discutidos amplamente na literatura. Por outro lado, pouco se sabe a respeito da resistência devido as alterações na expressão dos genes das bombas de efluxo, responsáveis pela exclusão de fármacos, bem como dos mecanismos de resistência relacionados a halotolerância bacteriana. Neste sentido, três assuntos de relevância no combate à tuberculose foram abordados nesta tese. Como primeira frente, avaliou-se inicialmente a expressão de 5 genes codificadores de bombas de efluxo pela técnica de RT-qPCR em 12 isolados clínicos frente ao tratamento com rifampicina, principal fármaco do regime terapêutico da TB. Resultados indicaram que essas proteínas auxiliam na emergência da resistência, sendo indicados pela superexpressão dos genes frente ao tratamento. Como segunda frente avaliou-se a atividade de 15 compostos inéditos de furoxânicos e benzofuroxânicos quanto à capacidade inibitória frente ao M. tuberculosis, citotoxicidade em células VERO, além de ensaios para avaliar seus mecanismos de ação (acumulação de brometo de etídio / inibição de efluxo, liberação de óxido nítrico e microarray). Resultados indicaram que a classe de compostos é promissora para o tratamento, com boa atividade inibitória contra o bacilo e considerado grau de seletividade. Ensaios de mecanismo de ação, indicaram atividade independente da inibição do efluxo, da subunidade de isoniazida ou da liberação de óxido nítrico. Microarray apontou para alteração em grande quantidade de proteínas ribossomais, semelhante ao que ocorre com aminoglicosídeos. Por fim, na terceira frente do estudo avaliou-se os efeitos da halotolerância na emergência de bacilos resistentes a fármacos, tendo como base as diferentes concentrações de cloreto de sódio a que o bacilo é submetido durante o seu ciclo de vida. Os resultados apontaram para aumento da resistência bacteriana com consequente aumento nas concentrações inibitórias de vários fármacos usados para a terapia da TB, quando o bacilo é submetido à concentração de cloreto de sódio encontrada no interior dos macrófagos, indicando uma necessidade de reflexão sobre as novas diretrizes para testes de novos fármacos contra TB. / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis bacillus, presenting 9.5 million of new cases and 1.5 million of deaths in 2014. Two aggravating factors are associated with these high statistical indexes: a co-infection with HIV ("Human Immunodeficiency Virus") and the increasing emergence of resistant strains represented by MDR ("multi-drug resistant") and XDR ("extreme drug resistant") strains. The bacillus resistance manifests from acquired events (such as acquisition of chromosomal mutations in specific genes related to drug metabolism) or intrinsic, as a highly hydrophobic cell wall (due to the large amount of mycolic acids) and the action of efflux pumps (responsible for drug extrusion). Thus, the thesis project evaluated the expression of five genes encoding efflux pumps by RT-qPCR technique in 12 clinical isolates against rifampicin, the main anti-TB drug used in the standard treatment. Results indicated that these proteins contribute to the emergence of resistance, indicated by overexpression of these genes after treatment. The second part of the study evaluated the activity of 15 furoxan and benzofuroxan derivative compounds for inhibitory capacity against the M. tuberculosis, cytotoxicity in VERO cells, as well as ethidium bromide accumulation and efflux assays. Aiming evaluate their mechanism of action, microarray and assays of nitric oxide release were also done, as they are supposed nitric oxide donors and may present an action by oxidative stress and/or the activity efflux pumps inhibition. Results indicated that the class of compounds is promising for the treatment, with good inhibitory activity against bacillus and substantial degree of selectivity. Mechanism of action assays indicated activity independent of efflux inhibition, of isoniazid subunit’ or nitric oxide release. Microarray pointed to changes in expression of ribosomal proteins, similar to what occurs with aminoglycosides. Finally, the third part of the study demonstrated that the halotolerance developed by M. tuberculosis might cause the emergence of drug resistant bacilli, based on the different concentrations of sodium chloride that the bacillus faces during its cycle. The results indicate a need for reflection on the new guidelines for testing new TB drugs. The results pointed to an increase in the minimal inhibitory concentrations of various anti-TB drugs, when the bacillus was subjected to the sodium chloride concentration found in macrophages, indicating a need for reflection on the guidelines for discovery of new anti-TB drugs. / CNPq: 140079/2013-0 / FAPESP: 2011/21232-1 / CAPES PDSE: 99999.003125/2014-09

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-12-01T18:03:35Z No. of bitstreams: 1 2015_HenriqueMarconiSampaioPinhati.pdf: 2613202 bytes, checksum: 53e58dc72ef2d8c50e044da026b3527e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2016-04-13T15:53:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_HenriqueMarconiSampaioPinhati.pdf: 2613202 bytes, checksum: 53e58dc72ef2d8c50e044da026b3527e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T15:53:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_HenriqueMarconiSampaioPinhati.pdf: 2613202 bytes, checksum: 53e58dc72ef2d8c50e044da026b3527e (MD5) / Introdução. Candidíase hematogênica é um problema cada vez mais relevante em hospitais terciários em todo o mundo, onde há uma grande variação nas taxas de incidência, mortalidade e as espécies de candida envolvidas. Candida parapsilosis é a Candida não albicans mais comumente isolada nos hospitais da América Latina. Tradicionalmente, apresenta baixo nível de resistência aos antifúngicos comumente empregados na prática clínica e também está associada às menores taxas de letalidade entre as candidemias de diferentes espécies, entre elas a Candida albicans. Este é o primeiro relato de um surto de candidemia por C. parapsilosis resistente ao fluconazol (CPRF), onde os pacientes tiveram uma mortalidade além do esperado. Material e Métodos. Este é um estudo transversal e observacional. Coletamos dados clínicos e microbiológicos de todos os episódios de candidemia diagnosticados de julho de 2011 a fevereiro de 2012 em um hospital terciário de 200 leitos em Brasília. A identificação inicial e os testes de susceptibilidade foram feitos pelo aparelho VITEK 2 - Bio-Mérieux. Os isolados de C. parapsilosis resistente ao fluconazol foram enviados para o laboratório de referência (LEMI-UNIFESP), para confirmação da identificação por tipagem molecular, perfil de resistência pelo teste de microdiluição padronizado pelo CLSI. Análise univariada (testes de qui ao quadrado e Fisher) e multivariada foram empregados para identificar fatores associados com a infecção por CPRF. Resultados. Foi identificado 42 episódios de candidemia no período, e 15 foram em mulheres. A mediana de idade foi 72 anos. A incidência de candidemia no período foi 4,05 episódios por 1,000 admissões, 30 casos (71,4%) por C. parapsilosis, 23 dos quais (54,8%) eram por CPFR (CIM 50% = 16mcg/ml). Encontravam-se na UTI 95,2% dos pacientes no momento do diagnóstico da candidemia. O único fator associado à CPRF foi diabete melito. A letalidade global por candidemia foi 45,2% e 43, 5% no grupo CPRF. Discussão: Este é o primeiro relato de um surto por Candida parapsilosis fluconazol resistente na América Latina. A concentração de casos na UTI e a baixa prévia à exposição ao fluconazol sugerem transmissão horizontal. Os pacientes tiveram alta taxa de letalidade a despeito do tratamento com anfotericina lipossomal. / Introduction: Hematogenous candidiasis is an increasing problem in tertiary hospitals around the world, where there are large variations in incidence rates, mortality and agents involved. C. parapsilosis is the main species of non-albicans candida in many hospitals in Latin America, with a low resistance to various antifungal agents and lower mortality rates than C albicans. This is a report of the first outbreak of candidemia by fluconazole resistant C parapsilosis whose patients had mortality beyond the expected. Material and Methods: It is cross-sectional, observational study. We collect clinical and microbiological data of all candidemia episodes diagnosed from July/2011 to february/2012 in a tertiary hospital of 200 beds in Brasília. Initial identification and susceptibility testing were performed by the VITEK 2 - Bio-Mérieux system. Isolates of Candida parapsilosis Fluco-R were sent to reference laboratory (LEMI-UNIFESP) for confirmation of the identification by molecular typing and to antifungal resistance profile by CLSI microdilution test. Univariate (Chi Square and Fisher) and Multivariate analysis was performed to identify associated factors related to C parapsilosis fluconazole resistant (CPFR) infection. Results: We identified a total of 42 episodes of candidemia in the period, 15 in women. The median age was 72 years. The incidence of candidemia in the period was 4.05 per 1000 admissions, 30 cases (71.4%) by Candida parapsilosis, 23 of which (54.8%) were resistant to fluconazole (MIC50% = 16mcg/ml). 95.2% of patients were in the ICU at the time of diagnosis of CPRF. Previous use of fluconazole occurred in only 21.7% of cases of candidemia CPFR . The only risk factor for infection founded for CPRF was diabetes. Overall mortality of candidemia was 45.2% and 43.5% for CPFR infection . Discussion: This is the first report of an outbreak of Candida parapsilosis fluconazole resistant in Latin America. The concentration of cases in the ICU and low prior exposure to fluconazole suggest horizontal transmission. Patients had high mortality despite treated with Liposomal Amphotericin.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-12-17T19:33:21Z No. of bitstreams: 1 2015_FabianoJoséQueirozCosta.pdf: 3573477 bytes, checksum: 03e447fd00fe16402cfa8f66c347ca59 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-12-21T19:20:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_FabianoJoséQueirozCosta.pdf: 3573477 bytes, checksum: 03e447fd00fe16402cfa8f66c347ca59 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-21T19:20:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_FabianoJoséQueirozCosta.pdf: 3573477 bytes, checksum: 03e447fd00fe16402cfa8f66c347ca59 (MD5) / Esse projeto de tese de doutorado tem o apoio financeiro do CNPq, da FAPDF, da FINEP e da FUB-UnB. / Os peptídeos antimicrobianos, compostos encontrados em plantas, insetos e vertebrados, dentre outros, surgem como fortes candidatos na desafiadora busca por novas drogas capazes de combater a diversificada maquinaria bacteriana, principalmente pelo fato da maioria deles apresentarem um mecanismo de ação independente da interação com receptores. Nos últimos anos, o número de novos antimicrobianos licenciados para uso no homem tem sido bem menor que em um passado recente. As indústrias farmacêuticas e o governo não estão dispendendo recursos para a geração de novos antimicrobianos eficazes e seguros, deixando a população suscetível a infecções bacterianas multi-droga-resistentes (MDR), um fenômeno que tem se tornado um dos maiores problemas de saúde pública do século 21. O desenho racional e a síntese química permitem a produção de análogos de peptídeos antimicrobianos com atividade citotóxica diminuída e melhora na potência antimicrobiana, fornecendo drogas eficazes no combate a disseminação da resistência bacteriana. No presente estudo, foram sintetizados dois análogos de peptídeos antimicrobianos de anuros. Os dois análogos, denominados AH_1 e AH_2, foram produzidos por síntese química em fase sólida e purificados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência em coluna de fase reversa (RP-HPLC). Seu grau de homogeneidade e pureza foram avaliados por espectrometria de massas do tipo MALDI-TOF. Após confirmação da pureza, estes análogos foram utilizados em ensaios in vitro buscando avaliar suas atividades antibacteriana, fungicida, micobactericida e hemolítica. Os dois análogos apresentaram atividade antimicrobiana contra bactérias Gram positivas e Gram-negativas, inclusive frente a cepas multirresistentes de Staphylococcus aureus meticilina-resistente (MRSA), Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) e Pseudomonas aeruginosa. Também apresentaram atividade contra as espécies de Candida albicans, Candida krusei e Candida parapsilosis, além de atividade micobactericida contra cepas de Mycobacterium tuberculosis H37Rv. O efeito sinérgico entre estes análogos e a polimixina B foi avaliado através do ensaio Checkerboard. Uma cepa de Pseudomonas aeruginosa multirresistente com CIM igual a 8 g/mL para polimixina B, caracterizada como resistente de acordo com breakpoints estabelecidos pelo CLSI 2014 foi utilizada neste ensaio. Os dois peptídeos AH_1 e AH_2 apresentaram ICIF < 0,5 demonstrando assim sinergismo de ação com a polimixina B. Houve uma redução da CIM inicial de 8 g/mL quando a polimixina foi testada sozinha, para 0,0625 g/mL e 0,25 g/mL quando testada em combinação aos dois análogos AH_1 e AH_2, respectivamente. Nestas baixas concentrações ativas exibidas no ensaio Checkerboard, as atividades hemolíticas dos dois análogos foram desprezíveis. Tais resultados confirmam o potencial dos análogos AH_1 e AH_2 como agentes antimicrobianos de interesse para a indústria farmacêutica. O análogo AH_1, apesar de seu maior potencial hemolítico em altas concentrações, exibiu excelente atividade principalmente sobre bactérias gram negativas, responsáveis hoje por grande parte dos casos de infecções hospitalares. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Antimicrobial peptides, compounds found in plants, insects and vertebrates, emerge as strong candidates in the challenging search for new drugs. They are able to combat the bacterial machinery, mainly because most of them present a mechanism of action independent of the interaction with receptors. In recent years, the number of new antimicrobial drugs licensed for human use has been smaller than in the recent past. The pharmaceutical industries and government are not expending resources for the generation of new effective and safe antimicrobial agents, leaving the population susceptible to multi-drug-resistant (MDR) bacterial infections, a phenomenon that has become one of the greatest public health problems of the 21st century. Rational design and chemical synthesis allow production of antimicrobial peptides analogues with reduced cytotoxic activity and improved antimicrobial potency, providing effective drugs in combating the spread of bacterial resistance. In this study, two analogues of anurans antimicrobial peptides were synthesized. Both analogues, named AH_1 and AH_2 were produced by chemical solid-phase synthesis and purified by high performance liquid chromatography on reversed-phase column (RP-HPLC).Their degree of homogeneity and purity were assessed by mass spectrometry analysis using MALDI TOF. After confirming their purity, these analogs were tested in vitro to evaluate their antibacterial, fungicidal, mycobactericidal and hemolytic properties. The two analogues showed antimicrobial activity against Gram-positive and Gram negative bacteria, including multidrug resistant strains such as methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA), Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), and Pseudomonas aeruginosa. Also showed activity against species of Candida albicans, C. krusei and C. parapsilosis, in addition mycobactericidal activity against Mycobacterium tuberculosis H37Rv. The synergistic effect between these analogs and polymyxin B was tested by checkerboard assay. A strain of multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa with MIC equal to 8 g/mL for polymyxin B, characterized as resistant in accordance with breakpoints established by the CLSI 2014 was used in this test. Both AH_1 and AH_2 peptides presented ICIF <0.5 thus demonstrating synergistic action with polymyxin B. There was a reduction of the initial MIC of 8 g/mL when the polymyxin was tested alone to 0.0625 g/mL and 0.25 g/mL when tested in combination to the two analogs AH_1 and AH_2, respectively. In this low active concentrations in Checkboard assay.

A produção de resíduos gerou uma problemática a ser abordada em nível de redução, reciclagem e reutilização de produtos. A técnica da compostagem é uma alternativa promissora para tratar resíduos sólidos orgânicos, bem como o lodo produzido nas estações de tratamento de esgotos. Os micro-organismos que promovem a degradação durante o processo de compostagem podem apresentar perfil de resistência a antimicrobianos e metais pesados, consequência da pressão seletiva de produtos químicos que estão misturados à matéria orgânica. Para avaliar o perfil de resistência a antimicrobianos, foram testadas 344 bactérias isoladas do processo de compostagem, utilizando-se 14 antimicrobianos. Para os ensaios de concentração inibitória mínima (CIM) de metais pesados, foram avaliados 91 isolados do início e final do processo, utilizando cromo, cobre, zinco e chumbo. Também foi avaliada a qualidade microbiológica do composto, segundo a Resolução 375/2006 do CONAMA. Os resultados apontaram para um perfil de 88% dos isolados resistentes a pelo menos um antimicrobiano. O antimicrobiano com maior índice de resistência foi a nitrofurantoína (64,82%), e o mais eficiente foi o imipenem, com apenas um isolado resistente. Das bactérias isoladas do início do processo de compostagem, 33,3% foram resistentes a MIC acima de 710 mg.L-1 de cromo, 38,9% foram resistentes ao mínimo de 1020 mg.L-1 de cobre, 91,7% resistentes ao zinco, e 100% resistentes ao chumbo. No final do processo, 41,8% dos isolados foram resistentes ao cromo, 41,8% ao cobre, 94,5% ao zinco e 96,4% ao chumbo. Escherichia coli apresentou NMP de 4x104 UFC/g-1, acima do limite preconizado pelo CONAMA. / With the production of residues comes the need for reduction, recycling and reuse of products. The composting technique is a promising alternative for the treatment of solid organic residues, along with the sludge produced in sewage treatment plants. The microorganisms that promote the degradation during the composting process might show antimicrobial and heavy metal resistance as a result of the selective pressure of chemical products mixed to the organic matter. The antimicrobial resistance profile was evaluated by testing 344 bacteria isolated from the composting process, using 14 antimicrobial agents. The minimum inhibitory concentration (MIC) for heavy metals was evaluated using 91 isolates from the initial and final stages of the process, using chrome, copper, zinc and lead. The microbial quality of the compound was also evaluated, according to the 375/2006 resolution from the Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). The results showed that 88% of the isolates showed resistance to at least one antimicrobial. The antimicrobial nitrofurantoin showed the highest resistance rate (64.82%), and imipenem was the most efficient, as only one isolate showed resistance. Among the bacteria isolated during the initial stages of the composting process, 33.3% showed resistance to MIC over 710 mg.L-1 chrome, 38.9% showed resistance to a minimum of 1020 mg.L-1 copper, 91.7% were resistant to zinc, and 100% were resistant to lead. In the end of the process, 41.8% of the isolates showed resistance to chrome, 41.8% to copper, 94.5% to zinc and 96.4% to lead. Escherichia coli’s NMP was 4x104 UFC/g-1, above the limit recommended by CONAMA.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T12:08:34Z No. of bitstreams: 2 TESE Jeanne Cristina Lapenda Lins Gantalice.pdf: 5843613 bytes, checksum: 7a0d4c576fb77e7f12a07cfcb1758e30 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T12:08:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Jeanne Cristina Lapenda Lins Gantalice.pdf: 5843613 bytes, checksum: 7a0d4c576fb77e7f12a07cfcb1758e30 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CNPq; CAPES / A prodigiosina, pigmento vermelho natural, é um alcaloide produzido por Serratia marcescens e pertencente à família das prodigininas cujos pigmentos apresentam em sua estrutura química três anéis cíclicos pirrólicos. Este pigmento tem despertado, nos últimos anos, um crescente interesse das diversas áreas como médica, farmacêutica e industrial pela inúmeras atividades biológicas descritas como antimicrobianas, antimalárica e antitumoral. Este trabalho tem por objetivo avaliar a atividade antimicrobiana da prodigiosina frente a micro-organismos Grampositivos e Gram-negativos patogênicos, avaliar a atividade citotóxica do pigmento em linhagens de células tumorais e seus os efeitos genotóxicos. O pigmento vermelho foi isolado e identificado a partir da biomassa de Serratia marcescens UFPEDA 398 cujas as frações foram separadas e purificadas por cromatografia em coluna TLC, identificadas por cromatografia em camada delgada CCD e caracterizadas por cromatografia de massa GCMS sendo em seguida os dados obtidos comparados com a biblioteca computadorizada de valores em massa / elétrons (m / e) onde o pigmento vermelho caracterizado correspondeu a prodigiosina com máxima absorção em 534 nm e peso molecular de 323. Para avaliar a atividade antimicrobiana da prodigiosina foram realizados testes de difusão em discos frente aos micro-organismos Escherichia coli UFPEDA 224, Pseudomonas aeruginosa UFPEDA 39, Staphylococcus aureus UFPEDA 01, Enterococcus faecalis UFPEDA 138, Streptococcus pyogenes UFPEDA 07, Acinetobacter sp UFPEDA 994 e a determinação da concentração mínima inibitória e mínima bactericida (CMI e CMB) frente a 20 linhagens de Staphylococcus aureus oxacilina resistente (ORSA). Os antibióticos padrões utilizados nos testes em discos foram ampicilina, cloranfenicol, gentamicina (10 g). Os testes de difusão em discos demostraram significativos halos inibitórios para Staphylococcus aureus (35 ± 0.6), Enterococcus faecalis (22 ± 1.0) e Streptococcus pyogenes (14 ± 0.6) sugerindo sensibilidade destes micro-organismos a prodigiosina. Contudo, o mesmo resultado não foi observado para Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter não sendo observados formação de halos inibitórios significativos e portanto, sugerindo resistencia dos mesmos ao pigmento. As CMI’s encontradas para Staphylococcus aureus variaram de 1 a 4 g / mL, enquanto as CMB’s entre 2 e 16 g / mL. Estes resultados demostram ser bastante promissores quando comparados com o antibiótico padrão oxacilina (CMI 128 g / mL e CMB ≥ 128 g / mL). Os efeitos citotóxicos da prodigiodiosina frente as linhagens tumorais NCHI 292, Hep 2, MCF 7 e HL 60 foram bastante significativos destacando maio efeito citotóxico para alinhagem tumoral Hep 2 (IC50 3,4 g / mL).Contudo a linhagem MCF 7 apresentou leve resistência ao pigmento (IC50 5,1 g / mL). Foi observado também que o pigmento induziu apoptose para as linhagens tumorais em 90%. Foram observados para a prodigiosina efeitos genotóxicos estatisticamente significativos em células mononucledas de sangue periférico humano como também em linhagens tumorais demonstranto que o pigmento age resultando em danificação genômica com efeito genotóxico superior a doxorrubicina e que não apresenta alvo de ação específico. Neste sentido, com base nos dados encontrados neste trabalho a Serratia marcescens UFPEDA 398 apresentou promissora atividade antimicrobiana, citótoxicidade e genotóxica para linhagens de células tumorais e ainda, efeitos genotóxicos em células normais demonstrando a sua ação não seletiva. Desta forma o pigmento prodigiosina ainda não pode ser empregado nas terapias antineoplásicas, uma vez que por apresentar alvo de ação não específico induz graves danificações as células normais que podem causar morte celular ou mutações que são as principais causas da tumorigênese.