Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-24T19:42:50Z No. of bitstreams: 1 2014_DanielOliveiraFreire.pdf: 1843339 bytes, checksum: 0c23e13ac289983a2324f079c4c1aab6 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-11-25T12:18:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DanielOliveiraFreire.pdf: 1843339 bytes, checksum: 0c23e13ac289983a2324f079c4c1aab6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-25T12:18:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DanielOliveiraFreire.pdf: 1843339 bytes, checksum: 0c23e13ac289983a2324f079c4c1aab6 (MD5) / Nas últimas décadas, a busca por novos antimicrobianos tem despertado o interesse dos pesquisadores pelos Peptídeos Antimicrobianos (AMPs). Os AMPs apresentam em media de 10 a 100 resíduos de aminoácidos e, em geral, fazem parte do sistema de defesa inato dos organismos vertebrados e invertebrados ou de secreções, promovendo uma proteção contra uma variedade de microrganismos. Os AMPs por sua característica catiônica são atraídos pela superfície aniônica das membranas bacterianas, e após a interação, estes peptídeos sofrem mudanças conformacionais, causando uma pertubação na estrutura da bicamada lipídica. Atualmente, um número expressivo de estudos tem identificado da peçonha de vespas diversos peptídeos bioativos classificados por suas estruturas químicas e por suas atividades biológicas, em especial, as ações antimicrobianas. Synoeca surinama é uma vespa social que compõe um pequeno gênero com cinco espécies descritas: S. chalibea, S. virginea, S. surinama, S. septentrionalis e S. cyanea. Frente ao desafio do crescente número de cepas resitentes e à potencialidade dos peptídeos como precursores para a descoberta de novos fármacos antimicrobianos, este trabalho visou buscar novas alternativas para o tratamento de infecções bacterianas. Os ninhos da vespa S. surinama foram coletados na área de mata do Centro Olímpico da UnB (Universidade de Brasília). Para a separação dos constituintes da peçonha por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), a peçonha foi liofilizada e resssuspendida em água deionizada com 5% de acetonitrila e 0,1% de ácido trifluoracético. A avaliação da ação antimicrobiana foi realizada pela técnica de microdiluição em placas para determinação do MIC (Concentração Inibitória Mínima). Um peptídeo da classe dos mastoparanos foi isolado apresentando uma massa molecular de 1594,8 Da. O peptídeo foi sequenciado em por MALDI/TOF no modo linear refletido. A sequencia foi determinada como I/L-N-W-I/L-K-I/L-G-K-K-I/L-I/L-A-S-I/L-NH2. Trata-se de peptídeo inédito, pois não foi encontrado nos bancos de dados referências desta sequencia. O peptídeo foi, então, denominado Synoeca-MP e foi sintetizada pela AminoTech Pesquisa e Desenvolvimeto Ltda. O peptídeo Synoeca-MP foi testado contra 10 cepas ATCC nas doses: 62,5; 31,5; 15,6, 6,25; 3,12; 1,5 e 0,62 μM. O Synoeca-MP apresentou uma exelente ação antimicrobiana, para as doses testadas o MIC50 variou de 1,97 μM a 10,8 μM e o MIC90 variou de 1,24 μM a 17,8 μM. Os valores dos MICs foram calculados estatisticamente por regressões não-lineares sigmoidais. O EC50 calculado para a atividade hemolítica do peptídeo foi de 185μM, que representa 17 vezes a dose antimicrobiana efetiva mais alta realizada nos ensaios. Sendo assim, o Synoeca-MP pode ser considerado um promissor fármaco antimicrobiano. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In recent decades , the search for new antimicrobials has piqued the interest of researchers for Antimicrobial peptides ( AMPs ) . The AMPs have on average 10 to 100 amino acid residues and usually are part of the innate defense of vertebrate and invertebrate organisms or secretion system , providing a protection against a variety of microorganisms. The MPAs by its cationic character are attracted to the anionic surface of bacterial membranes , and after the interaction , these peptides undergo conformational changes , causing a disturbance in the structure of the lipid bilayer . Currently , a significant number of studies have identified the wasp venom of many bioactive peptides ranked by their chemical structures and their biological activities , in particular , the antimicrobial actions . Synoeca surinama is a social wasp which makes up a small genus with five species are described: S. chalibea , virginea , S. surinama , S. septentrionalis and S. cyanea . Forward to the challenge of the increasing number of seem quite resistant strains and potential of peptides as precursors for the discovery of new antimicrobial drugs , this work aims to seek new alternatives for the treatment of bacterial infections . Wasp Nests S. surinama were collected in the forested area of the Olympic Centre at UNB ( University of Brasilia ) . For the separation of the constituents of the venom by high performance liquid chromatography (HPLC ), the venom is lyophilized and resssuspendida in deionized water with 5% acetonitrile and 0.1% trifluoroacetic acid. The evaluation of the antimicrobial activity was performed by microdilution plates for determination of MIC ( Minimum Inhibitory Concentration ) . A class of peptide was isolated mastoparanos having a molecular mass of 1594.8 Da The peptide was sequenced by MALDI / TOF reflected in the linear mode. The sequence was determined as I/LNWI/LKI/LGKKI/LI/LASI/L-NH2 . This is unheard of peptide because it was not found in the data banks of references this sequence . The peptide was then called Synoeca - MP and was synthesized by Aminotech Research and Desenvolvimeto Ltda . The Synoeca - MP peptide was tested against 10 strains ATCC doses : 62.5 ; 31.5 ; 15.6, 6.25; 3.12; 1.5 and 0.62 mM . The Synoeca - MP presented an excellent antimicrobial activity for the MIC50 doses tested ranged from 1.97 mM to 10.8 mM and MIC90 ranged from 1.24 mM to 17.8 mM . The MIC values were calculated statistically by a sigmoidal non- linear regression. The EC50 calculated for the hemolytic activity of the peptide was 185μM , which is 17 times the highest effective dose antimicrobial held in rehearsals. Thus, the Synoeca -MP could be considered a promising antimicrobial drug .

O mercúrio (Hg) é um dos metais com maior impacto sobre os ecossistemas e sua presença no ambiente tem origem natural ou antropogênica. O acúmulo do mercúrio no ambiente tem afetado a integridade dos ecossistemas e a saúde do homem. Contudo, algumas bactérias desenvolveram mecanismos de resistência, e com isso desempenham um papel muito importante na redução enzimática de Hg (II) a Hg0, a qual é uma forma volátil e de menor toxicidade deste metal. Assim, a redução microbiana de Hg (II) representa um recurso para desenvolvimento de métodos alternativos de tratamento de resíduos que contenham este metal, oferecendo vantagens, como baixo custo operacional e alta eficiência na remoção de mercúrio. Deste modo, os objetivos do estudo foram isolar microrganismos resistentes a mercúrio; determinar a concentração inibitória mínima de Hg; bem como, estimar a capacidade de volatilização de mercúrio pelos microrganismos selecionados; a dinâmica da volatilização do mercúrio; e a caracterização da enzima mercúrio redutase produzida pelo isolado B50A. Foram selecionadas 16 bactérias Gram-negativas resistentes a altas concentrações de mercúrio (50 mg L-1 a 210 mg L-1), sendo que todos os isolados foram capazes de volatilizar este metal. Os isolados B50A e M50C, volatilizaram 86% do mercúrio presente no meio e a remoção de Hg (II) não dependeu de altas taxas de crescimento populacional. A enzima presente no extrato bruto de B50A apresentou atividade ótima em pH 8, e temperaturas entre 37ºC e 45ºC. Os íons NH4 +, Ba2+, Sn2+, Ni2+ e Cd2+ não inibiram nem estimularam significativamente (p>0,05) a atividade da mercúrio redutase do isolado B50A, porém ocorreu queda significativa (p>0,05) da atividade na presença de Ca2+, Cu+ e K+. As bactérias isoladas e a enzima de B50A foram eficientes na redução de Hg (II) a Hg0, o que evidencia o potencial destes microrganismos para desenvolvimento de tecnologias e processos de biorremediação de resíduos contaminados com mercúrio. / Mercury (Hg) is one of the metals that has had profound influence on all ecosystems, and can occur in the in the environment as a natural and anthropogenic phenomenon. The accumulation of mercury has affected the integrity of ecosystems and human health. However, some bacterias have developed biological mechanisms for mercury resistance, and subsequently perform an important role in the enzymatic reduction of Hg(II) to Hg(0), this being a volatile and less toxic form of the metal.The process of microbial Hg (II) reduction represents an area of development for alternative methods of waste treatment, with potentially low operating costs and high removal efficiencies. This study presents the screening of microrganisms resistant to mercury, and the determination of the minimum inhibitory concentration of Hg. An estimation of the mercury volatilization by selected microorganisms, the dynamics of volatilization, and the characterization of mercury reductase produced by the isolated B50A, are all addressed. Sixteen Gram-negative bacteria resistant to high concentrations of mercury (50 mg L-1 to 210 mg L-1) were selected, and these isolates showed ability to volatilize the metal. The dynamics of the volatilization of the B50A and M50C isolates demonstrated that in only 4 hours of incubation it was possible to volatilize 86% of the mercury present in the culture. The latter also demonstrating that the removal of Hg (II) is independent of high biomass formation. The enzyme present in the crude extract of B50A showed optimal activity at pH 8 and temperatures ranging between 37 and 45°C. The presence of NH 4 +, Ba2+, Sn2+, Ni2+ and Cd2+ did not significantly (p<0,05) inhibited or stimulated the activity of mercury reductase B50A, but significant (p<0,05) reduction in activity was observed in the presence of Ca2+, Cu+ and K+ . The isolates bacteria and mercury reductase produced by the isolated B50A were efficient in reducing Hg (II) to Hg0, this demonstrated the potential of these microorganisms to augment technologies for bioremediation processes for waste contaminated with mercury.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T14:31:32Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Lilian Rodrigues Alves.pdf: 2093175 bytes, checksum: 54aa27abf1609d8d44cc1ea5e02f0468 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T14:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Lilian Rodrigues Alves.pdf: 2093175 bytes, checksum: 54aa27abf1609d8d44cc1ea5e02f0468 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-03-08 / Propesq-UFPE, CNPq e CAPES / Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista associado a infecções relacionadas à assistência a saúde (IRAS), cuja principal característica é a capacidade de desenvolver resistência a diversos antimicrobianos através da produção de enzimas metalo-β-lactamases (MβLs) e KPC (Klebsiella pneumoniae-carbapenemase), além da hiperexpressão dos sistemas de efluxo multidroga. O objetivo do estudo foi caracterizar o perfil de fenotípico e genético de resistência, bem como determinar o grau de similaridade genética de isolados clínicos de P. aeruginosa provenientes de um hospital universitário em Recife, Pernambuco, no período de abril a agosto de 2011 e maio a setembro de 2012. O perfil de susceptibilidade dos isolados de P. aeruginosa foi determinado pela técnica de disco-difusão, segundo critérios do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2012). A pesquisa dos genes mexA, mexE e mexX foi realizada em isolados multidroga resistentes (MDR) e a pesquisa dos genes blaSPM, blaIMP, blaVIM e blaKPC foi realizada em isolados que apresentaram resistência a cefalosporinas e carbapenêmicos. Os genes descritos foram detectados pela Reação em Cadeia da Polimerase. Todos os isolados foram submetidos à tipagem molecular através da técnica de amplificação de sequências de consenso intergênicas repetitivas de enterobactérias (ERIC-PCR). Cento e vinte isolados de P. aeruginosa apresentaram taxas de resistência variando de 7,5% para polimixina e 52,5% para cefotaxima. Não foram observados genes MβL nos 17 isolados resistentes a ceftazidima e imipenem ou meropenem. O gene blaKPC foi encontrado em 4/33 isolados resistentes aos carbapenêmicos. Os genes mexA e mexE foram detectados em 67/69 isolados MDR e o mexX em 66/69. A ERIC-PCR demonstrou 82 perfis genéticos distintos entre os 120 isolados. Neste estudo, concluiu-se que os sistemas de efluxo e a KPC parecem contribuir para a resistência de isolados de P. aeruginosa. A heterogeneidade genética observada pode estar relacionada com a variabilidade genética desta espécie bacteriana oriunda de mutações não letais e recombinações, como a conjugação e transformação.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-17T15:31:44Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Deborah S. Braz.pdf: 1934016 bytes, checksum: 84ae355b6926d3a3d56ca66a631c8834 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-17T15:32:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Deborah S. Braz.pdf: 1934016 bytes, checksum: 84ae355b6926d3a3d56ca66a631c8834 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-17T15:32:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Deborah S. Braz.pdf: 1934016 bytes, checksum: 84ae355b6926d3a3d56ca66a631c8834 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T15:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Deborah S. Braz.pdf: 1934016 bytes, checksum: 84ae355b6926d3a3d56ca66a631c8834 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-31 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The infections related with health assistance are responsible in resume for the hospitalized patients‘ immunological, physical and mental commitment. In all the ways of nosocomial infections acquisition, the inanimate surfaces are indicated as responsible by the microorganism intersected contaminations presents at these surfaces to these patients. The majority of these agents produce mechanisms responsible by the resistance with a large quantity of antibiotics. The enterobacterias are the most common in hospital infections, with the production of ESβL against the β-lactaminics and carbapenamasis against carbapenemics. With the goal of evaluate the presence of enterobacterias in hostpital surfaces, as well the profile of resistance to antibiotics and possible production of resistance enzyme, this project were realized in hospital inanimate surfaces of two local hospitals: HUGV and ICAM. The evaluated surfaces were infirmary‘s sinks and bed and mattress‘ lateral structure, with isolation and identification of the recovered samples from these surfaces, antibiotics sensibility profile evaluation, phenotypic tests to detect the production of the enzyme and molecular characterization to evaluate the enzymes produced. As results, were recovered 23 isolated of enterobacteria at HUGV and 33 at ICAM, with the prevalence of species of Enterobacter and Klebsiella. The samples showed resistance against first generation penicillin and cephalosporin, over well other classes, and sensibility to carbapenemics. Fourteen samples were classified as producers of ESβL and one sample presented a resistance profile to carbapenemics, confirmed by molecular methods. The most founded enzymes were TEM, SHV and CTX-M-1/2. One isolated of k. pneumoniae were identified as KPC producer. Three samples from HUGV and two samples from ICAM showed 100% of similarity. The results of this project contribute with the local epidemiology, emphasizing the importance of the implementation of better hygiene and sanitization conditions. The premature identification of the β-lactamases/carbapenemases producers not only in clinical infections, but also in colonization state are vital to prevent difficulty and impossibility to treat infections, in consequence of the reduction of antibiotics release in the market. / As infecções relacionadas à assistência à saúde são responsáveis em suma pelo comprometimento imunológico, físico e mental de pacientes hospitalizados. Entre tantas formas de aquisição de infecções nosocomiais, as superfícies inanimadas hospitalares são apontadas como responsáveis por transmissão cruzada de micro-organismos presentes nessas superfícies a pacientes hospitalizados. Muitos desses agentes produzem mecanismos responsáveis pela resistência a uma infinidade de antibióticos. As Enterobactérias são as bactérias mais comuns em infecções hospitalares, com produção de ESβL contra beta-lactâmicos e carbapenemases contra carbapenêmicos. Com o intuito de avaliar a presença de Enterobactérias em superfícies inanimadas hospitalares, bem como seus perfis de sensibilidade aos antimicrobianos, possível produção de enzimas de resistência, este estudo foi realizado em superfícies inanimadas de dois hospitais da cidade de Manaus-AM: HUGV e ICAM. As superfícies avaliadas foram torneiras de enfermarias e estruturas laterais de leitos e colchões, com isolamento e identificação das amostras recuperada dessas superfícies, avaliação do perfil de sensibilidade a antimicrobianos, testes fenotípicos para detecção de produção de enzima, e caracterização molecular para avaliação das enzimas produzidas. Como resultados, foram recuperados 23 isolados de Enterobactérias do HUGV e 33 do ICAM, com prevalência de espécies de Enterobacter e Klebsiella. As amostras apresentaram resistência a penicilinas e cefalosporinas de primeira geração, além de ouras classes, e sensibilidade aos carbapenêmicos. Quatorze amostras foram triadas como produtoras de ESβL e uma amostra apresentou perfil de resistência a carbapenêmicos, confirmado por métodos moleculares. As enzimas mais encontradas foram TEM, SHV e CTX-M-1/2. Um isolado de K. pneumoniae foi identificado como produtor de KPC. Três amostras do HUGV e 2 amostras do ICAM apresentaram similaridade genética de 100% no RAPD. Os achados deste estudo contribuem para a epidemiologia local, ressaltando a importância de implantação de sistemas de controle de micro-organismos no ambiente inanimado e a implementação de melhores condições de higiene e sanitização. A identificação precoce de cepas produtoras de β-lactamases/carbapenemases tanto em infecções clínicas e/ou no estado de colonização é imprescindível para prevenir dificuldades ou impossibilidade de tratar infecções, dado a redução do aparecimento de novos antimicrobianos no mercado.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:30:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3563_1.pdf: 2862069 bytes, checksum: 8ef6f7035e92bf837ff1580945cd1157 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Atualmente, a Pseudomonas aeruginosa é o bacilo Gram-negativo mais reportado em casos de infecções hospitalares. Sua elevada resistência a antimicrobianos e desinfetantes químicos pode ser explicada, em parte, pela forma de crescimento em biofilmes. A variante mucóide da P. aeruginosa, comumente isolada de pacientes com fibrose cística, é capaz de produzir grandes quantidades de alginato, resultando em biofilmes extremamente complexos. O presente estudo objetivou realizar um levantamento da prevalência da P. aeruginosa, bem como seu perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos no Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco (HC), assim como avaliar a ação do óxido nítrico sobre biofilmes de amostras mucóides da mesma bactéria oriundas de pacientes com fibrose cística do Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP), Recife-PE. Para a análise da prevalência, foi realizado um estudo retrospectivo baseado no livro de registros de secreções diversas do laboratório de bacteriologia do HC. Biofilmes de amostras mucóides e não-mucóides de pacientes com fibrose cística do IMIP foram analisados sobre microscopia eletrônica de varredura. As bactérias mais freqüentes, isoladas das secreções diversas, foram P. aeruginosa (26%) e S. aureus (25%). Quanto à origem, a P. aeruginosa parece ser um patógeno essencialmente respiratório, uma vez que 33% das amostras positivas para esta bactéria foram de secreções traqueais e 21% nasais. Os antimicrobianos mais eficazes contra a P. aeruginosa foram Amicacina, Imipenem, Meropenem e Aztreonam. Biofilmes de amostras mucóides da P. aeruginosa são muito mais complexos se comparados aos das amostras não-mucóides. No primeiro caso, as bactérias se agregam em estruturas que lembram teias de aranha que se fixam ao substrato formando grandes estruturas complexas no interior das microcolônias. Portanto, apesar da elevada prevalência no HC, a P. aeruginosa mostrou boa sensibilidade aos antimicrobianos testados naquele hospital. Ainda concluindo, biofilmes desta bactéria apresentam grande complexidade e necessitam de estudos mais aprofundados. Apesar de mais complexos, biofilmes mucóides da P. aeruginosa podem ser inibidos na presença de concentrações nanomolares do nitroprussiato de sódio

A prata metálica é um conhecido agente antimicrobiano, e a sua aplicação na forma de nanopartículas de prata vem sendo apontada como uma alternativa para aplicação em dispositivos médico hospitalares. Vários métodos foram sugeridos para a prevenção da infecção relacionada ao acesso vascular, entre eles, os cateteres revestidos com nanopartículas de prata têm recebido atenção mais recentemente, por oferecerem desempenho superior em aspectos onde outros métodos falharam. Este trabalho propôs avaliar a ação de nanopartículas de prata (AgNPs) em linhagens hospitalares e sua aplicabilidade em cateteres intraluminais. Na primeira fase, 12 linhagens (3 linhagens de referência e 8 linhagens hospitalares) foram testadas frente a diferentes concentrações de nanopartículas de prata de 10 nm; e na segunda fase, duas linhagens de referência foram escolhidas para os testes com os cateteres impregnados com uma solução polimérica contendo nanopartículas de prata. Os resultados obtidos atestam que as nanopartículas de prata funcionam como uma opção para controle bactericida. / In recent years, there has been increased concern regarding the use of antimicrobials (antibiotics) in general practices and in hospital-medicine devices, a factor that may contribute for the development and selection of antibiotic-resistant strains. The metallic silver is a known antimicrobial agent. Currently, its application in the form of nanoparticles (nanosilver) has been suggested as an alternative for use in hospital medical devices. Central venous catheters (CVCs) are commonly used in critically ill patients to administer fluids, blood products and parenteral nutrition. The contamination of catheters introduced into the bloodstream and subsequent infection, severe sepsis and septic shock are associated with high morbidity and mortality. This is one of the greater challenges of treating critically ill patients. Various methods have been suggested for prevention of infection related to the vascular access, including, catheters coated with silver nanoparticles which have received attention more recently, since they offer higher performance in aspects in that other methods have failed. This alternative consists in associating nanoparticles of metallic silver to a polymeric material that coats the catheter inner and externally. The main characteristics of the coating that can potentially be ajusted are the intensity and spectrum of bactericidal activity, the rate of bactericidal releasing and resistance to biofilm formation. This work proposes to evaluate the effects of silver nanoparticles (AgNPs) in hospital strains and their applicability in intraluminal catheter. In the first stage, 12 strains (3 reference strains and 9 hospital strains) were tested against different concentrations of silver nanoparticles of 10 nm (SIGMA-Aldrich); and in the second phase, two reference strain (a Gram-positive and Gram-negative) were selected for the tests with catheters impregnated with a polymer solution containing silver nanoparticles of 10 nm (SIGMA-Aldrich). The results obtained in the first stage showed a high efficiency of nanoparticles on three reference strains - S. aureus IPT 246, P. aeruginosa IPT 322 and K. pneumoniae IPT 412-, and moderate efficiency on hospital strains - S. aureus S.a. 1 and S.a. 2; P. aeruginosa P.a. 1 and P.a.2 ; and A. baumannii Acb. 2, Acb. 4 and Acb. 8, indicating that silver nanoparticles work as an option for bacterial control. A preliminary search of silver resistance genes in the strains indicates the possibility that 5 of these strains have genes related to silver resistance similar to those described in the literature. The results obtained in the second phase show that the process of impregnation of the intraluminal catheter has reached the desired goal in both the coating device, and in reducing bioburden according the tests carried with the reference strains S. aureus 246 IPT and P. aeruginosa IPT 322.

Escherichia fergusonii é um patógeno emergente na medicina humana e veterinária, nos relatos de casos de infecção em aves são escassos. O objetivo desse trabalho foi identificar e caracterizar estirpes de E. fergusonii isoladas de anatídeos de vida livre, aves cativas silvestres e aves comerciais criadas em sistemas convencionais e orgânico. Dentre as 431 amostras, foram isoladas 29 estirpes de Escherichia fergusonii, sendo a maior prevalência em galinhas no sistema de criação convencional. O perfil de sensibilidade das amostras foi avaliado, revelando diferenças entre os grupos, com a presença de estirpes de frangos no sistema de criação convencional apresentando maiores índices de resistência aos antimicrobianos testados, enquanto estirpes de irerês apresentaram sensibilidade a todos os antibióticos. Foram identificadas duas estirpes multirresistentes com resistência a mais de três classes de antimicrobianos. A caracterização molecular dessas amostras revelou estirpes de irerês (Dendrocygna viduata) com maior presença de genes de virulência (iroN, cvi, cva, astA e ompT). O ensaio de produção de hemolisinas em ágar sangue revelou amostras negativas, sem formação de hemólise ao redor da colônia. A técnica de AFLP classificou as estirpes em clados distintos sugerindo padrões de heterogeneidade entre as amostras. Esse é o primeiro relato de achados de Escherichia fergusonii em irerês de vida livre e gavião-pombo pequeno. / Escherichia fergusonii is an emerging pathogen in human and veterinary medicine, in cases reports associated with birds are scarce. The aims of this work were to identify and to characterize strains of E. fergusonii isolated from free-living ants, wild captive birds and poultry from conventional and organic farms. Among the 431 samples, 29 Escherichia fergusonii were isolated, being the highest prevalence in chickens from conventional breeding systems. The sensitivity profile of the samples was evaluated, revealing differences between the groups, with the higher antimicrobial resistance indexes in isolates from chicken in the conventional farms, while strains of white-faced whistling-duck showed sensitivity to all antibiotics. Two multiresistant strains with resistance to more than three classes of antimicrobial agents were identified. The molecular characterization of these samples revealed strains of white-faced whistlingduck (Dendrocygna viduata) with higher presence of virulence genes (iroN, cvi, cva, astA and ompT). The assay of hemolysin production on blood agar revealed negative strains, with no hemolysis forming around the colony. The AFLP technique classified the strains into distinct clades suggesting patterns of heterogeneity between the strains. This is the first report of Escherichia fergusonii in free-living white-faced whistling duck and white-necked hawk.

Os psitacídeos estão entre as espécies de aves mais apreendidas e encaminhadas aos centros de triagem animal em São Paulo. Também são comumente mantidos em ambiente doméstico como aves de estimação. A manutenção destas aves em cativeiro pode representar um risco zoonótico e contribuir para a propagação das estirpes de enterobactérias multirresistentes, como Klebsiella spp. produtora de beta-lactamase de espectro estendido (ESBLs), que podem interferir no tratamento de infecções nosocomiais em humanos. O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar estirpes de Klebsiella spp. isoladas de secreções respiratórias de 46 psitácideos doentes, determinando a virulência e o perfil de resistência a 15 antimicrobianos. Dentre as 19 estirpes de Klebsiella spp. isoladas, 16 (16/19) foram identificadas como Klebsiella pneumoniae, e três (3/19) foram identificadas como Klebsiella oxytoca. O perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos demonstrou alta resistência para ampicilina (89,5%), e o perfil de virulência demonstrou uma alta prevalência dos genes fimH (94,7%), kpn (89,4%), uge (84,2%) e irp-2 (78,9%). Três estirpes de K. pneumoniae foram positivas para produção de beta-lactamase de espectro estendido. Estas estirpes foram classificadas nos sequence types (STs) ST15, ST147 e ST307. Esses três grupos clonais representam os principais responsáveis por surtos de infecções hospitalares por K. pneumoniae no mundo. No entanto, esse é o primeiro relato desses clones como causadores de doença em aves. Esses dados indicam a ocorrência de K. pneumoniae produtora de CTX-M-15 e CTX-M-8 em psitacídeos cativos e confirmam o potencial zoonótico e antropozoonótico do agente, destacando a relevância clínica para humanos e animais. / Psittacine birds are among the most seized bird species that are sent to animal sorting centers in São Paulo. They are also commonly kept in the domestic environment like pet birds. The maintenance of these birds in captivity may represent a zoonotic risk and contribute to the propagation of strains of multiresistant enterobacteria, such as Klebsiella spp. beta-lactamase extended-spectrum (ESBLs), which may interfere in the treatment of nosocomial infections in humans. The objective of this study was to identify and characterize strains of Klebsiella spp. isolated from respiratory secretions of 46 diseased psittacines, determining virulence and resistance profile to 15 antimicrobials. Among the 19 strains of Klebsiella spp. isolated, 16 (16/19) were identified as Klebsiella pneumoniae, and three (3/19) were identified as Klebsiella oxytoca. The antimicrobial susceptibility profile demonstrated high resistance to ampicillin (89.5%), and the virulence profile demonstrated a high prevalence of fimH (94.7%), kpn (89.4%), uge (84.2% %) and irp-2 (78.9%). Three strains of K. pneumoniae were positive for extended-spectrum beta-lactamase production. These strains were classified in sequence types (STs) ST15, ST147 and ST307. These three clonal groups represent the main responders for outbreaks of K. pneumoniae nosocomial infections worldwide. However, this is the first account of these clones as causing disease in birds. These data indicate the occurrence of K. pneumoniae producing CTX-M-15 and CTX-M-8 in captive parrots and confirm the zoonotic and anthropozoonotic potential of the agent, highlighting the clinical relevance for humans and animals.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ALINE CRISTINA BATISTA RESENDE.pdf: 921510 bytes, checksum: b4208f02be180566c75ce748e7f29585 (MD5) Previous issue date: 2009-03-27 / Introduction: The emergence of antimicrobial-resistant genes is becoming an increasingly important ecological issue. The selective pressure of antimicrobials is a significant factor in the selection and dissemination of resistance genes in the environment. Objective: The objective of this present study was to detect, isolate and identify Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter spp., Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli in the sewage effluents of 10 hospitals located in Goiânia and to assess the susceptibility profile of the isolated microorganisms. Methodology: The samples collected in the hospital effluents and from the Goiânia sewage treatment station were identified using biochemical tests, Gram-staining, microscopy, motility-indole-ornithine (MIO) medium, urea, catalase, oxidase, TAF, API 20E, API STAPH (Bio Merieux) and bile-esculin agar. Following identification, the profile of susceptibility to the antimicrobials was evaluated using the agar diffusion disk susceptibility test, later classified according to the NCCLS (2002). Next, the E. coli strains were analyzed regards the possibility extended spectrum &#946;-lactamase production (ESBL), using phenotypic tests. Results: A total of 73 microorganisms gram-negative were identified including 10 strains of E. coli (14,92 por cent), 10 strains of K. pneumoniae (14,92 por cent), 3 of P. aeruginosa (4.47 ´por cent) and 1 of A. baumannii (1.49 por cent). The E. coli strains presented 100 por cent total resistance to aztreonam, 40 por cent to ampicillin, 30 por cent to piperacillin, 20% to ciprofloxacin and 10 por cent to gentamicin. None of the aztreonam-resistant E. coli strains were identified as being extended spectrum Beta-lactamase producers. P. aeruginosa presented 100 por cent resistance to ampicillin-sulbactam and 100 por cent intermediary resistance to gentamicin. Strains of K. pneumoniae were resistant to ampicillin (70 por cent) and to piperacillin (20 por cent). Additionally, 50 por cent showed intermediate resistance to piperacillin. No cases of total resistance were detected in the sample of A. baumannii, which presented only intermediary resistance to aztreonam and ceftriaxone. Conclusion: The E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii isolates showed low resistance rates. None of the bacterial strains produced ESBL or carbapenems. The samples of A. baumannii had the highest susceptibility profile of all the microorganisms isolated. / INTRODUÇÃO: A emergência de genes de resistência antimicrobiana está cada vez mais se tornando um problema ecológico. A pressão seletiva dos antimicrobianos é um importante fator de seleção e disseminação dos genes de resistência no meio ambiente. OBJETIVO: O presente trabalho teve como objetivo a detecção, o isolamento e identificação de Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter spp., klebsiella pneumoniae e Escherichia coli de efluentes de esgoto de 10 hospitais localizados em Goiânia e a caracterização do perfil de susceptibilidade dos microrganismos isolados. METODOLOGIA: As amostras coletadas nos efluentes hospitalares e da Estação de Tratamento de Esgoto de Goiânia (ETE) foram identificadas e analisadas quanto ao perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, por provas bioquimicas, com a coloração de Gram, bacterioscopia, teste de motilidade (MIO), uréia, catalase, oxidase, TAF, API 20E, API STAPH (Bio Merieux) e teste de bilesculina. Após a identificação, a avaliação do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos foi realizada através do método de antibiograma em placa, e depois classificada de acordo com o NCCLS (2002). Posteriormente, as cepas de E.coli foram analisadas quanto a possível produção de Beta-lactamase de amplo espectro (ESBL), utilizando-se testes fenotípicos. RESULTADOS: Foram identificados 73 microrganismos gramnegativos, dentre estes 10(14,92 por cento) E.coli, 10(14,92 por cento) K.pneumoniae, 3(4,47 por cento) P.aeruginosa e 1(1,49 por cento) A.baumannii. As cepas de E.coli apresentaram 100 por cento de resistência total ao aztreonam, 40 por cento à ampicilina, 30 por cento à piperacilina, 20 por cento à ciprofloxacina, 10 por cento à gentamicina. Nenhuma cepa de E.coli resistente ao aztreonam foi identificada como produtora de &#946;-lactamase de espectro ampliado (ESBL). P.aeruginosa apresentou 100% de resistência à ampicilina-sulbactam e 100 por cento apresentaram resistência intermediária à gentamicina. 70 por cento das cepas de K.pneumoniae apresentaram resitência à ampicilina e 50 por cento apresentaram resistência intermediária a este mesmo antimicrobiano. Nenhuma resistência total foi detectada na amostra de A.baumannii apresentando apenas resistência intermediária ao aztreonam e a ceftriaxona. CONCLUSÃO: As amostras de E.coli, P.aeruginosa, K.pneumoniae e A.baumannii apresentaram baixas taxas de resistência aos antimicrobianos, em nenhum dos isolados foi detectada a produção de Beta-lactamase de espectro ampliado e carbapenemase e as amostras de A.baumannii apresentaram o maior perfil de susceptibilidade entre todos os microrganismos isolados.

Orientador: Carla Raquel Fontana / Resumo: A doença periodontal é um processo patológico infecto-inflamatório, que pode causar eventual perda do elemento dental. O principal tratamento realizado é a raspagem e alisamento radicular (RAR), que embora seja efetiva, tem como fator limitante a dificuldade técnica de intervir em biofilmes de áreas de difícil acesso. As associações com antibióticos podem ocasionar efeitos colaterais e em bactérias resistentes podem ser ineficazes. Desta forma, a terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) surge como uma opção adjuvante, para o tratamento das doenças periodontais. Este trabalho investigou, in vitro, o potencial de redução e desenvolvimento de resistência bacteriana, em um pool clínico resistente ao metronidazol, frente a múltiplos ciclos de TFDa, em fase planctônica e biofilme, utilizando azul de metileno, clorina-e6 e curcumina, como fotossensibilizadores (FS). Para realização dos ciclos de indução de resistência, foi necessário encontrar as condições sub ótimas da TFDa, através da quantificação das colônias formadas por mililitro de amostra (UFC/mL). Os seguintes parâmetros foram encontrados em fase planctônica: 50 µg/mL de azul de metileno e dose de luz de 120 J/cm2 com redução de 1,67 log10, clorina-e6 e curcumina obtiveram reduções de 1,91 log10 e 1,76 log10, respectivamente, com dose de luz de 25 J/cm2 e 100 µg/mL de FS. Posteriormente o pool de bactérias foi sujeito a múltiplas exposições de TFDa, seguido de um período de recuperação, em que células bacterianas sobreviv... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontal disease is an infectious-inflammatory pathological process, which can cause eventual loss of the dental element. The main treatment is scaling and root planing (RAR), which, although effective, has as a limiting factor the technical difficulty of intervening in biofilms of difficult access areas. Associations with antibiotics can cause side effects and in resistant bacteria they may be ineffective. In this way, antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) appears as an adjuvant option for the treatment of periodontal diseases. This study investigated, in vitro, the potential for reduction and development of bacterial resistance in a clinical pool, resistant to metronidazole, against multiple cycles of aPDT in planktonic phase and biofilm using methylene blue, chlorine-e6 and curcumin as photosensitizers (PS). For resistance induction cycles, it was necessary to find the sub optimal conditions of the aPDT, by quantifying the colonies formed per milliliter of sample (CFU/mL). The following parameters were found in the planktonic phase: 50 μg/mL methylene blue and light dose of 120 J/cm2 with a reduction of 1.67 log10, chlorine-e6 and curcumina obtained reductions of 1.91 log10 and 1.76 log10, respectively, with light dose of 25 J/cm2 and 100 μg/mL PS. Subsequently, the pool of bacteria was subjected to multiple exposures of aPDT, followed by a recovery period, in which surviving bacterial cells were resuspended in the same treatment, and so on until resistance developm... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor