Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-13T15:48:01Z No. of bitstreams: 1 Tese - Maurício M. Ogusku.pdf: 3811428 bytes, checksum: f32cda31f56f3f4d15311ce015f3600a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-13T15:48:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Maurício M. Ogusku.pdf: 3811428 bytes, checksum: f32cda31f56f3f4d15311ce015f3600a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-13T15:48:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Maurício M. Ogusku.pdf: 3811428 bytes, checksum: f32cda31f56f3f4d15311ce015f3600a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-13T15:48:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Maurício M. Ogusku.pdf: 3811428 bytes, checksum: f32cda31f56f3f4d15311ce015f3600a (MD5) Previous issue date: 2012-06-28 / Item withdrawn by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-14T13:23:59Z Item was in collections: Doutorado em Biotecnologia (ID: 76) No. of bitstreams: 3 Tese - Maurício M. Ogusku.pdf: 3811428 bytes, checksum: f32cda31f56f3f4d15311ce015f3600a (MD5) Tese - Maurício M. Ogusku.pdf.txt: 191579 bytes, checksum: ee0f8a6107947c9c2298bc9b541a1c9c (MD5) Tese - Maurício M. Ogusku.pdf.jpg: 4160 bytes, checksum: 65c7cd943f5481f875e561b9fda3e11e (MD5) / Item reinstated by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-14T13:28:41Z Item was in collections: Doutorado em Biotecnologia (ID: 76) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / In clinical practice is widely accepted that an episode of active tuberculosis (TB) is caused by a single clone of Mycobacterium tuberculosis. However, several studies have shown that there is heterogeneity of clones and this can be much larger than expected. In this context, the aim of this study was to investigate pulmonary TB by M. tuberculosis polyclonal infection in newly diagnosed patients, from a sputum sample and before starting treatment. A total of 62 of sputum samples were select. By screening in 7H10 medium, simultaneous presence of M. tuberculosis clones phenotypically sensitive and resistant to INH and/or RIF in the same isolate was observed in 30.6% (n=19). Genotyping by DRE-PCR and DNA sequencing of katG, inhA and rpoB genes were carried out in 74 clones INH and RIF sensitive, 65 clones INH-resistant, a clone RIF-resistant and 3 clones INH/RIF-resistant. The presence of resistant and sensitive clones to INH and/or RIF as well as the occurrence of different genotypes indicating heterogeneity in the same isolated from M. tuberculosis. The frequency of polyclonal infection was superior to published studies that show percentages ranging from 0.4% to 19.0%. These results indicate that the presence of polyclonal infection is not a rare phenomenon in patients with pulmonary TB in this population. The partial sequencing of the katG gene revealed that only 4.4% of INH-resistant clones were present described mutations in this gene. For inhA gene mutations were not detected for INH-resistant clones. Clones resistant to RIF present mutations in the rpoB gene. In clones INH-resistant, 83.8% not show mutations in katG and inhA genes, while 11.7% had mutations in katG gene not yet described. The absence of mutations commonly associated with drug resistance in katG and inhA genes, besides detection of new mutations in M. tuberculosis INH-resistant clones, suggests the need to sequencing larger fragments of these genes to propose strategies for fast detection of M. tuberculosis resistance. The results of this survey show that polyclonal infection is present in approximately one third of patients newly TB diagnosed, either by genotypic or phenotypic characteristics of M. tuberculosis clones, although both are not strictly related. / Na prática clínica é amplamente admitido que um episódio de tuberculose (TB) ativa seja causado por um único clone de Mycobacterium tuberculosis. Contudo, vários estudos têm revelado que há uma heterogeneidade de clones e isso pode ser bem maior que o esperado. Neste contexto, o objetivo do presente trabalho foi investigar a TB pulmonar por infecção policlonal de M. tuberculosis em pacientes recém-diagnosticados, a partir de uma amostra de escarro e antes do início do tratamento. Foram selecionadas 62 amostras de escarros, sendo 31 paucibacilares e 31 multibacilares. A triagem de clones em meio de 7H10 proporcionou o isolamento de clones sensíveis e resistentes à Isoniazida (INH) e/ou Rifampicina (RIF) coexistentes em 19 (30,6%) isolados de M. tuberculosis. A genotipagem por DRE-PCR e o sequenciamento parcial de DNA para os genes katG, inhA e rpoB foram realizados em 74 clones sensíveis à INH e RIF, 65 clones resistentes à INH, 1 clone resistente à RIF e 3 clones resistentes à INH e RIF. A presença de clones sensíveis e resistentes a INH e/ou RIF, assim como a ocorrência de diferentes genótipos indicam a heterogeneidade de clones em um mesmo isolado de M. tuberculosis. A frequência de infecção policlonal observada foi superior aos estudos descritos na literatura, visto que os mesmos apresentaram percentuais de 0,4% a 19,0%. Estes resultados permitem afirmar que a presença de infecção policlonal não é um fenômeno raro em pacientes com TB pulmonar na população estudada. O sequenciamento parcial dos genes katG revelou que apenas 4,4% dos clones resistentes à INH apresentaram as mutações comumente descritas neste gene. Para o gene inhA não foram detectadas mutações para os clones resistentes à INH. Os clones resistentes para RIF apresentaram mutações no gene rpoB. Dos clones resistentes à INH, 83,8% não apresentaram mutações nos genes katG e inhA, enquanto 11,7% apresentaram mutações ainda não descritas no gene katG. A ausência das mutações comumente associadas à resistência medicamentosa nos genes katG e inhA e a detecção de novas mutações em clones de M. tuberculosis resistentes à INH, explicitam a necessidade de sequenciar fragmentos maiores desses genes ou ampliar a busca de mutações em outros genes, a fim de que sejam propostas estratégias mais rápidas para a detecção de resistência em M. tuberculosis. Os resultados da presente pesquisa evidenciam que a infecção policlonal está presente em aproximadamente 1/3 dos pacientes de TB recém-diagnosticados, seja pelas características fenotípica ou genotípica dos clones de M. tuberculosis, embora estas não estejam estritamente relacionadas.