Os inseticidas neonicotinóides são atualmente o principal grupo químico utilizado para o controle de insetos sugadores, constituindo-se uma boa opção para o controle de Diaphorina citri Kuwayama. Outra opção de controle do psilídeo tem sido a exploração do parasitóide Tamarixia radiata (Waterson). A compatibilidade dessas duas estratégias de controle poderia auxiliar na implementação de programas de manejo integrado de pragas na cultura do citros. No entanto, faltam estudos sobre a caracterização da suscetibilidade de D. citri para os inseticidas neonicotinóides e o impacto desses inseticidas sobre T. radiata. Sendo assim, os objetivos do trabalho foram o de caracterizar a suscetibilidade de D. citri a inseticidas neonicotinóides, realizar o monitoramento da suscetibilidade a esses inseticidas em populações de D. citri coletadas em pomares de diferentes regiões do Estado de São Paulo e avaliar os efeitos letais e subletais desses inseticidas sobre o parasitóide T. radiata. Os inseticidas avaliados foram: thiamethoxam, thiacloprid e imidacloprid. O método de bioensaio adotado foi o de contato residual para a caracterização da suscetibilidade de D.citri a esses inseticidas. O monitoramento da suscetibilidade a esses inseticidas em diferentes populações de D. citri foi realizado com concentrações diagnósticas baseadas na concentração letal 95 (CL95) de cada inseticida. Para avaliar os efeitos letais e subletais desses inseticidas sobre T. radiata foram realizados bioensaios de contato direto em adultos e pupas, toxicidade residual em adultos, e persistência da atividade biológica desses inseticidas sobre a superfície de folhas de citros. Entre os neonicotinóides testados, a maior toxicidade a D. citri foi observado com thiametoxam, seguidos por imidacloprid e thiaclopid. Os resultados do monitoramento apresentaram diferenças significativas na suscetibilidade das populações de D. citri aos inseticidas neonicotinóides. Para thiamethoxam, a sobrevivência estimada para as populações de D. citri testadas na concentração diagnóstica variou entre 5,5 e 16%, para thiacloprid variou entre 4,5 e 22,5 % e para imidacloprid entre 4 e 14%. Uma alta toxicidade desses inseticidas foi observada para adultos e pupas de T. radiata. No entanto, os efeitos subletais desses inseticidas a 10% da concentração recomendada sobre o estágio de pupa causou redução significativa no parasitismo somente com thiamethoxam. A emergência, longevidade e razão sexual de T. radiata não foram afetadas pelos inseticidas avaliados. A toxicidade residual de thiametoxam, thiacloprid e imidaclopid em folhas de mudas de citros foi relativamente elevada para adultos de T. radiata e com persistência de pelo menos 14 dias. / The neonicotinoids insecticides are currently the main chemical group used for controlling sucking pests and represent a good option for the control of Diaphorina citri Kuwayama. Another control alternative of this pest is the exploitation of parasitoid Tamarixia radiata (Waterson). The compatibility of these control strategies could be very helpful for the implementation of integrated pest management program in citrus. However, there are few studies on the characterization of the susceptibility of D. citri to neonicotinoid insecticides and the evaluation of the impact of these insecticides on T. radiata. Therefore, the objectives of this research were to evaluate the susceptibility of D. citri to neonicotinoid insecticides, to monitor the susceptibility to these insecticides in D. citri populations collected from different citrus groves in the State of São Paulo, and to evaluate the lethal and sublethal effects of these insecticides on T. radiata. The insecticides evaluated in this study were: thiamethoxam, thiacloprid e imidacloprid. A residual contact bioassay was used to characterize the susceptibility of D. citri to these insecticides. A diagnostic concentration bioassays based on lethal concentration 95 (LC95) of each insecticide were used for monitoring the susceptibility of D. citri populations. The lethal and sublethal effects of these insecticides on T. radiata were conducted by using direct contact bioassays on adult and pupal stages of T. radiata, residual contact bioassays and persistence of biological activity of these insecticides on citrus leaf surface. Among the neonicotinoid insecticides tested, the highest toxicity was observed with thiametoxam, followed by imidacloprid and thiaclopid. A significant difference in the susceptitibity to neonicotinoid insecticides was detected in D. citri populations. For thiamethoxam, the survivorship at diagnostic concentration varied from 5.5 to 16%, for thiacloprid varied from 4.5 to 22.5 %, and for imidacloprid from 4 to 14%. The toxicity of these insecticides was high to adult and pupal stages of T. radiata. However, the sublethal effects of these insecticides at 10% of the recommended rate on pupae stage caused the reduction of the parasitism capacity only with thiamethoxam. The emergence, longevity and sexual ratio of T. radiata were not affected by any insecticide tested. The residual toxicity of thiametoxam, thiacloprid and imidaclopid sprayed on citrus seedling leaves was relatively high to D. citri adults and lasted at least 14 days.

Os inseticidas neonicotinóides são atualmente o principal grupo químico utilizado para o controle de insetos sugadores, constituindo-se uma boa opção para o controle de Diaphorina citri Kuwayama. Outra opção de controle do psilídeo tem sido a exploração do parasitóide Tamarixia radiata (Waterson). A compatibilidade dessas duas estratégias de controle poderia auxiliar na implementação de programas de manejo integrado de pragas na cultura do citros. No entanto, faltam estudos sobre a caracterização da suscetibilidade de D. citri para os inseticidas neonicotinóides e o impacto desses inseticidas sobre T. radiata. Sendo assim, os objetivos do trabalho foram o de caracterizar a suscetibilidade de D. citri a inseticidas neonicotinóides, realizar o monitoramento da suscetibilidade a esses inseticidas em populações de D. citri coletadas em pomares de diferentes regiões do Estado de São Paulo e avaliar os efeitos letais e subletais desses inseticidas sobre o parasitóide T. radiata. Os inseticidas avaliados foram: thiamethoxam, thiacloprid e imidacloprid. O método de bioensaio adotado foi o de contato residual para a caracterização da suscetibilidade de D.citri a esses inseticidas. O monitoramento da suscetibilidade a esses inseticidas em diferentes populações de D. citri foi realizado com concentrações diagnósticas baseadas na concentração letal 95 (CL95) de cada inseticida. Para avaliar os efeitos letais e subletais desses inseticidas sobre T. radiata foram realizados bioensaios de contato direto em adultos e pupas, toxicidade residual em adultos, e persistência da atividade biológica desses inseticidas sobre a superfície de folhas de citros. Entre os neonicotinóides testados, a maior toxicidade a D. citri foi observado com thiametoxam, seguidos por imidacloprid e thiaclopid. Os resultados do monitoramento apresentaram diferenças significativas na suscetibilidade das populações de D. citri aos inseticidas neonicotinóides. Para thiamethoxam, a sobrevivência estimada para as populações de D. citri testadas na concentração diagnóstica variou entre 5,5 e 16%, para thiacloprid variou entre 4,5 e 22,5 % e para imidacloprid entre 4 e 14%. Uma alta toxicidade desses inseticidas foi observada para adultos e pupas de T. radiata. No entanto, os efeitos subletais desses inseticidas a 10% da concentração recomendada sobre o estágio de pupa causou redução significativa no parasitismo somente com thiamethoxam. A emergência, longevidade e razão sexual de T. radiata não foram afetadas pelos inseticidas avaliados. A toxicidade residual de thiametoxam, thiacloprid e imidaclopid em folhas de mudas de citros foi relativamente elevada para adultos de T. radiata e com persistência de pelo menos 14 dias. / The neonicotinoids insecticides are currently the main chemical group used for controlling sucking pests and represent a good option for the control of Diaphorina citri Kuwayama. Another control alternative of this pest is the exploitation of parasitoid Tamarixia radiata (Waterson). The compatibility of these control strategies could be very helpful for the implementation of integrated pest management program in citrus. However, there are few studies on the characterization of the susceptibility of D. citri to neonicotinoid insecticides and the evaluation of the impact of these insecticides on T. radiata. Therefore, the objectives of this research were to evaluate the susceptibility of D. citri to neonicotinoid insecticides, to monitor the susceptibility to these insecticides in D. citri populations collected from different citrus groves in the State of São Paulo, and to evaluate the lethal and sublethal effects of these insecticides on T. radiata. The insecticides evaluated in this study were: thiamethoxam, thiacloprid e imidacloprid. A residual contact bioassay was used to characterize the susceptibility of D. citri to these insecticides. A diagnostic concentration bioassays based on lethal concentration 95 (LC95) of each insecticide were used for monitoring the susceptibility of D. citri populations. The lethal and sublethal effects of these insecticides on T. radiata were conducted by using direct contact bioassays on adult and pupal stages of T. radiata, residual contact bioassays and persistence of biological activity of these insecticides on citrus leaf surface. Among the neonicotinoid insecticides tested, the highest toxicity was observed with thiametoxam, followed by imidacloprid and thiaclopid. A significant difference in the susceptitibity to neonicotinoid insecticides was detected in D. citri populations. For thiamethoxam, the survivorship at diagnostic concentration varied from 5.5 to 16%, for thiacloprid varied from 4.5 to 22.5 %, and for imidacloprid from 4 to 14%. The toxicity of these insecticides was high to adult and pupal stages of T. radiata. However, the sublethal effects of these insecticides at 10% of the recommended rate on pupae stage caused the reduction of the parasitism capacity only with thiamethoxam. The emergence, longevity and sexual ratio of T. radiata were not affected by any insecticide tested. The residual toxicity of thiametoxam, thiacloprid and imidaclopid sprayed on citrus seedling leaves was relatively high to D. citri adults and lasted at least 14 days.

O cultivo de plantas oleaginosas é uma das principais atividades de subsistência para pequenos agricultores na Paraíba. Porém estes cultivos são afetados por pulgões. Alternativas agroecológicas têm sido consideradas como uma estratégia eficiente no controle de insetos sugadores. Este estudo tem o objetivo de relatar a influência do consórcio de erva-doce (Foeniculum vulgare) e algodão (Gossypium hirsutum) com fibra colorida nas populações de Hyadaphis foeniculi (Passerini, 1860) (Hemiptera: Aphididae) e Aphis gossypii Glover, 1877 (Hemiptera: Aphididae) e do principal inimigo natural Cycloneda sanguinea (Linnaeus, 1763) (Coleoptera: Coccinelidae) ao longo do tempo. Os experimentos foram conduzidos nos anos agrícolas de 2009, 2010 e 2011 na Área Experimental da Embrapa - Algodão localizado no município de Lagoa Seca - PB, Brasil. Utilizou-se o delineamento experimental de blocos ao acaso com três tratamentos: cultivo de erva-doce solteiro, algodão solteiro e erva-doce consorciada com algodão, distribuído em quatro repetições. O levantamento populacional dos pulgões e seus respectivos inimigos naturais na área experimental ocorreu em intervalos semanais do início até o fim do ciclo produtivo da erva-doce e do algodão com fibra colorida em cada ano de estudo. A dinâmica e distribuição dos insetos tanto no algodão quanto na erva-doce em ambos os sistemas de cultivo foram analisados através da ANOVA e as médias foram comparadas pelo teste de Student-Newman-Keuls (P = 0,05). A análise de associação interespecífica ao longo dos três anos de estudo foi baseada na presença e ausência de pulgões e seus inimigos naturais nos dois tipos de cultivos. Foram utilizados modelos matemáticos de equações de diferença para explicar o comportamento dos pulgões e do seu predador. A taxa de crescimento da presa (K1), qualidade da planta de algodão (Qa) e qualidade da planta de erva-doce (Qe), taxa de chegada da praga na planta, resposta numérica do predador foram inclusos nos modelos e analisados em diagrama de bifurcação. Tanto no algodão quanto na erva-doce solteira foi encontrado mais pulgões ápteros e alados do que no sistema consorciado. Independentemente do sistema de cultivo, as regiões da planta de algodão com maior concentração de A. gossypii foram a apical e a mediana, enquanto que a região da planta de erva-doce com maior número de H. foeniculi áptero e alado foi a apical. A produção de picos populacionais de A. gossypii e H. foeniculi se deu em idade distinta das plantas solteiras ou consorciadas. A. gossypii e H. foeniculi na maioria dos casos não coocorreram no consórcio. A movimentação do predador C. sanguinea foi geralmente associada ao sistema de cultivo consorciado e isto se deve provavelmente em função de A. gossypii e H. foeniculi áptero ou alado que ocorreram em épocas distintas ao longo do ano. A qualidade da planta, tanto no sistema de cultivo de algodão ou erva-doce solteiro quanto em algodão ou erva-doce no sistema de cultivo consorciado, mudou o comportamento dos insetos com K1 superior a 1,4. Portanto, o consórcio de algodão com erva-doce pode ser ferramenta importante para o manejo integrado de pulgões. / The cultivation of oilseeds is considered as major activity of small farmers in Paraiba State. However, these crops are affected by aphids. Agroecology alternatives have been considered as an efficient strategy in sucking insects. This study has the objective of reporting the influence of colored fiber cotton (Gossypium hirsutum) intercropped with fennel (Foeniculum vulgare) on populations of Hyadaphis foeniculi (Passerini, 1860) (Hemiptera: Aphididae) and Aphis gossypii Glover, 1877 (Hemiptera: Aphididae) and their natural enemy Cycloneda sanguinea (Linnaeus, 1763) (Coleoptera: Coccinelidae) over the time. The study was conducted on 2009, 2010, and 2011 seasons in Experimental Station of the Embrapa - Cotton, placed in the municipality of Lagoa Seca, Paraiba, Brazil. A randomized block design was used with three treatments: sole fennel, sole cotton, and colored fiber cotton intercropped with fennel, distributed in four replications. The population study of aphids and their natural enemy was carried out weekly within of each season. The dynamic and distribution of insects in sole cotton, sole fennel, or in cotton-fennel intercropping systems were analyzed by the ANOVA and the means were compared by the Student-Newman-Keuls (P = 0.05) test. Interspecific association was used to analyze the dynamic herbivore-plant and predator-prey over the three years study, based in aphid and their natural enemy presence or absence in sole crop or intercropping systems. Difference equations have been used to explain the behavior of aphids and their predator. Growth rate of pest (K1), quality of cotton plant (Qa) and fennel plant (Qe), pest immigration rate and the numerical response of predator were included in the model and showed in bifurcation diagrams. Both sole cotton and sole fennel hosted more aphids than cotton-fennel intercropping system. Independently of the crop system, in the cotton plants, A. gossypii populations were highest in the apical and middle regions, whereas in fennel, H. foeniculi apterous and alate populations were highest in the apical regions. A. gossypii and H. foeniculi peaked in different ages of sole crop or intercropping system. In many cases there was no co-occurrence of A. gossypii and H. foeniculi in intercropping systems. C. sanguinea was associated with the intercropping systems in response to A. gossypii and H. foeniculi that were found in distinct times over the year. The plant quality in both cotton and fennel in sole crop or intercropping system, changes the insect behavior with K1 higher than 1.4. Therefore, cotton-fennel intercropping can be used in aphids integrated pest management.

O cultivo de plantas oleaginosas é uma das principais atividades de subsistência para pequenos agricultores na Paraíba. Porém estes cultivos são afetados por pulgões. Alternativas agroecológicas têm sido consideradas como uma estratégia eficiente no controle de insetos sugadores. Este estudo tem o objetivo de relatar a influência do consórcio de erva-doce (Foeniculum vulgare) e algodão (Gossypium hirsutum) com fibra colorida nas populações de Hyadaphis foeniculi (Passerini, 1860) (Hemiptera: Aphididae) e Aphis gossypii Glover, 1877 (Hemiptera: Aphididae) e do principal inimigo natural Cycloneda sanguinea (Linnaeus, 1763) (Coleoptera: Coccinelidae) ao longo do tempo. Os experimentos foram conduzidos nos anos agrícolas de 2009, 2010 e 2011 na Área Experimental da Embrapa - Algodão localizado no município de Lagoa Seca - PB, Brasil. Utilizou-se o delineamento experimental de blocos ao acaso com três tratamentos: cultivo de erva-doce solteiro, algodão solteiro e erva-doce consorciada com algodão, distribuído em quatro repetições. O levantamento populacional dos pulgões e seus respectivos inimigos naturais na área experimental ocorreu em intervalos semanais do início até o fim do ciclo produtivo da erva-doce e do algodão com fibra colorida em cada ano de estudo. A dinâmica e distribuição dos insetos tanto no algodão quanto na erva-doce em ambos os sistemas de cultivo foram analisados através da ANOVA e as médias foram comparadas pelo teste de Student-Newman-Keuls (P = 0,05). A análise de associação interespecífica ao longo dos três anos de estudo foi baseada na presença e ausência de pulgões e seus inimigos naturais nos dois tipos de cultivos. Foram utilizados modelos matemáticos de equações de diferença para explicar o comportamento dos pulgões e do seu predador. A taxa de crescimento da presa (K1), qualidade da planta de algodão (Qa) e qualidade da planta de erva-doce (Qe), taxa de chegada da praga na planta, resposta numérica do predador foram inclusos nos modelos e analisados em diagrama de bifurcação. Tanto no algodão quanto na erva-doce solteira foi encontrado mais pulgões ápteros e alados do que no sistema consorciado. Independentemente do sistema de cultivo, as regiões da planta de algodão com maior concentração de A. gossypii foram a apical e a mediana, enquanto que a região da planta de erva-doce com maior número de H. foeniculi áptero e alado foi a apical. A produção de picos populacionais de A. gossypii e H. foeniculi se deu em idade distinta das plantas solteiras ou consorciadas. A. gossypii e H. foeniculi na maioria dos casos não coocorreram no consórcio. A movimentação do predador C. sanguinea foi geralmente associada ao sistema de cultivo consorciado e isto se deve provavelmente em função de A. gossypii e H. foeniculi áptero ou alado que ocorreram em épocas distintas ao longo do ano. A qualidade da planta, tanto no sistema de cultivo de algodão ou erva-doce solteiro quanto em algodão ou erva-doce no sistema de cultivo consorciado, mudou o comportamento dos insetos com K1 superior a 1,4. Portanto, o consórcio de algodão com erva-doce pode ser ferramenta importante para o manejo integrado de pulgões. / The cultivation of oilseeds is considered as major activity of small farmers in Paraiba State. However, these crops are affected by aphids. Agroecology alternatives have been considered as an efficient strategy in sucking insects. This study has the objective of reporting the influence of colored fiber cotton (Gossypium hirsutum) intercropped with fennel (Foeniculum vulgare) on populations of Hyadaphis foeniculi (Passerini, 1860) (Hemiptera: Aphididae) and Aphis gossypii Glover, 1877 (Hemiptera: Aphididae) and their natural enemy Cycloneda sanguinea (Linnaeus, 1763) (Coleoptera: Coccinelidae) over the time. The study was conducted on 2009, 2010, and 2011 seasons in Experimental Station of the Embrapa - Cotton, placed in the municipality of Lagoa Seca, Paraiba, Brazil. A randomized block design was used with three treatments: sole fennel, sole cotton, and colored fiber cotton intercropped with fennel, distributed in four replications. The population study of aphids and their natural enemy was carried out weekly within of each season. The dynamic and distribution of insects in sole cotton, sole fennel, or in cotton-fennel intercropping systems were analyzed by the ANOVA and the means were compared by the Student-Newman-Keuls (P = 0.05) test. Interspecific association was used to analyze the dynamic herbivore-plant and predator-prey over the three years study, based in aphid and their natural enemy presence or absence in sole crop or intercropping systems. Difference equations have been used to explain the behavior of aphids and their predator. Growth rate of pest (K1), quality of cotton plant (Qa) and fennel plant (Qe), pest immigration rate and the numerical response of predator were included in the model and showed in bifurcation diagrams. Both sole cotton and sole fennel hosted more aphids than cotton-fennel intercropping system. Independently of the crop system, in the cotton plants, A. gossypii populations were highest in the apical and middle regions, whereas in fennel, H. foeniculi apterous and alate populations were highest in the apical regions. A. gossypii and H. foeniculi peaked in different ages of sole crop or intercropping system. In many cases there was no co-occurrence of A. gossypii and H. foeniculi in intercropping systems. C. sanguinea was associated with the intercropping systems in response to A. gossypii and H. foeniculi that were found in distinct times over the year. The plant quality in both cotton and fennel in sole crop or intercropping system, changes the insect behavior with K1 higher than 1.4. Therefore, cotton-fennel intercropping can be used in aphids integrated pest management.

Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Psyllidae) tornou-se um psilídeo de grande importância para a citricultura paulista após a constatação da bactéria Candidatus Liberibacter sp., causadora do Huanglongbing (greening). Sabe-se que esse inseto abriga microrganismos endossimbiontes, os quais desempenham papel fundamental em sua ecologia nutricional, sendo transmitidos verticalmente à progênie. Dessa forma, propomos caracterizar a morfologia do aparelho reprodutor feminino durante o seu desenvolvimento para embasar a identificação do processo de migração dos simbiontes do bacterioma aos tecidos reprodutivos. D. citri possui ovário do tipo telotrófico, com ovaríolos organizados em bouquet e características gerais semelhantes às observadas para outros Sternorrhyncha. Os trofócitos parecem ser desprovidos de delimitação por membrana no ovaríolo desenvolvido. Um único oócito se desenvolve por ciclo no vitelário, o qual mantém-se em contato com a câmara trófica por um prolongamento citoplasmático, denominado cordão trófico. As informações morfo-estruturais do aparelho reprodutor de D. citri obtidas indicam similaridades importantes a de outros membros de Sternorryncha. Nesse contexto, a migração de simbiontes do bacterioma para os oócitos em maturação de D. citri, ocorre de modo semelhante ao descrito para aleirodídeos, caracterizandose pela migração de bacteriócito intacto. Este último, atravessa o epitélio de revestimento do oócito, formado por células foliculares, e invade o oócito, liberando as bactérias nele contidas. Entretanto, os simbiontes associados ao sincício do bacterioma, são liberados na hemocele através de uma pequena abertura formada no epitélio de revestimento dessa estrutura, invadindo o oócito por um mecanismo distinto. Os simbiontes contidos no oócito, formam um agrupamento de aspecto arredondado (= symbiont ball) na região posterior do oócito, próximo ao pedicelo. / Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Psyllidae) became a serious problem to the citrus industry in São Paulo State once the Huanglongbing disease (greening), which is caused by the bacteria Candidatus Liberibacter sp., was detected. Psyllids are known to harbor endosymbiont microorganisms, which are vertically transmitted to the progeny and play a key role in the nutritional ecology of their hosts. Therefore, we aimed to characterize the morphology of the reproductive system during D. citri development as a tool for further investigation on the symbiont migration from the bacteriome to the reproductive tissues. D. citri has telotrophic ovaries with ovarioles organized in a bouquet, sharing all other characteristics with the remaining Sternorrhyncha. In developed ovarioles, trophocytes seems to lack any membrane delimitation. Only one oocyte develops at a time in the vitellarium, remaining in communication with the trophic chamber by a citoplasmatic brigde, named trophic cord. The morphostructural information reported in here on the D. citri reproductive system shows important similarities with other Sternorryncha. Symbionts associated to the bacteriome of D. citrus migrate to the ovaries and invade the oocytes during ovary maturation, as previously reported for aleyrodids. In this case, symbionts will move within the bacteriocyte as it detaches from the bacteriome and moves through the oocyte follicular epithelium, releasing the contained bacteria into the oocyte. However, symbionts associated to the bacteriome syncitium are relased into the hemocoel through small openings on the bacteriome epithelium, invading the oocyte by a different mechanism. All symbionts that invaded or were discharged into the oocyte aggregate into a balllike symbiont structure at the posterior pole close to the egg pedicel.

Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria entomopatogênica encontrada em várias partes do mundo e tem a capacidade de produzir cristais durante a fase estacionária do crescimento. Esses cristais são toxinas compostas por proteínas ativas contra uma ampla variedade de fases imaturas de insetos. As toxinas do Bt têm sido usadas como bioinseticidas por décadas no controle de insetos das ordens Coleoptera, Lepidoptera e Diptera, e algumas toxinas já foram selecionadas como efetivas contra ácaros, nematoides e insetos sugadores de floema da ordem Hemiptera, como os afídeos. Recentemente, foi comprovada a patogenicidade de três isolados de Bt a outro inseto dessa ordem, o psilídeo Diaphorina citri. Esse psilídeo é vetor das bactérias Candidatus Liberibacter spp., agentes causais da principal doença dos citros: o Huanglongbing ou HLB. A descoberta da capacidade endofítica de Bt em plantas de diferentes espécies vegetais abriu perspectivas para novos estudos usando o Bt para controle de insetos sugadores, como a D. citri. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito patogênico de cada toxina Cry ou Cyt presente nestes três isolados através de isolados de Bt recombinantes expressando as toxinas individualmente. Foram montados bioensaios para confirmar a taxa de mortalidade causada por isolados de Bt contra ninfas de D. citri. Os bioensaios foram feitos usando cinco plantas de laranja doce (Citrus sinensis (L.) Osbeck) e dez ninfas de 3º ínstar de D. citri por planta, além dos controles (sem Bt). A mortalidade das ninfas foi avaliada diariamente durante cinco dias. Durante a avaliação, as ninfas mortas foram coletadas para o isolamento do Bt além da detecção do gene da toxina por PCR. No final do experimento, as folhas jovens onde as ninfas se alimentavam também foram avaliadas quanto à presença do Bt. Nossos resultados confirmaram que os isolados de Bt previamente identificados como patogênicos a D. citri causaram elevada mortalidade (em média 68-93%) em ninfas de 3º ínstar. Dentre os isolados recombinantes testados, um deles apresentou grande destaque, causando a mortalidade de 68-81% das ninfas em 48 horas e 83-93% em 120 horas. Esse isolado possui grande potencial de uso no controle biológico de D. citri através da produção de um bioinseticida ou produção de plantas de citros transgênicas. / Bacillus thuringiensis (Bt) is an entomopathogenic bacterium found in several locations around the world and has the ability to produce crystals during the stationary phase of growth. These crystals are composed of protein toxins that are active against a wide variety of insect larvae. The Bt toxins have been used for decades as biopesticides to control insects of the orders Coleoptera, Lepidoptera, and Diptera. Some toxins have been selected as effective for mites, nematodes and phloem-sucking insects of the order Hemipera, such as aphids. The pathogenicity of strains of Bt to Diaphorina citri, an hemipteran known as Asian citrus psyllid, has been recently demonstrated. This psyllid is the vector of the bacteria Candidatus Liberibacter spp., the causal agents of the main disease of citrus: Huanglongbing or HLB. The discovery of the ability of Bt strains to endophytically colonize plants of different species has opened new perspectives for studies. The aim of this work was to evaluate the pathogenic effect of each Cry or Cyt toxin present in these three isolates through the use of recombinant Bt isolates expressing each toxin individually. A series of bioassays were done in order to confirm the mortality caused by Bt strains against nymphs of D. citri. Bioassays were performed in five seedlings of Citrus sinensis (L.) Osbeck (five replicates/ bioassay) and using ten D. citri 3rd instar nymphs to each assay plant. A suspension containing Bt spores was inoculated via drench in each seedling, and five seedlings were maintained as negative control (without Bt). Mortality was assessed daily for five days. During the bioassays, dead nymphs were collected for further Bt isolation and detection by PCR. At the end of the experiment, young leaves where nymphs feed were also collected to Bt isolation and detection. Our results confirmed that the previously identified Bt isolates pathogenic to D. citri cause high mortality to 3rd instar nymphs. Among the ten recombinant isolates tested, one of them stood out, causing 68-81 % and 83-93% mortality after 48 and 120 hours of inoculation, respectively. The isolation of Bt from dead nymphs and young leaves, and PCR performed with specific primers confirmed the presence of the Bt isolates in psyllids and plants, and their involvement in psyllid mortality. This recombinant Bt with the higher mortality rate found in our results has the potential to be used as a bioinsecticide to control D. citri and the toxin gene can be used to genetic engineering of citrus.

O presente estudo foi desenvolvido com 22 espécies de insetos sugadores e seus controladores em citros, na fazenda Cambuhy, município de Matão, estado de São Paulo, Brasil, durante o período novembro de 2004 a abril de 2006. Inicialmente foram determinados os indicadores ecológicos desse agroecossistema e feita a avaliação da diversidade de espécies nos três sistemas de controle sendo, controle microbiano de pragas (CMP) com uso de fungos entomopatogênicos, manejo ecológico de pragas (MEP) com uso de agrotóxicos seletivos a fungos entomopatogênicos, e manejo integrado de pragas (MIP) com uso padrão de pesticidas. Determinou-se que a diversidade foi maior no CMP e que os sistemas MEP e MIP foram semelhantes (80%) e não ocorreu impacto ambiental nos três sistemas, em função dos períodos de observação. Orthezia praelonga, no período total de seis estações, foi controlada nos tratamentos CMP e MEP, pelos fungos Syngliocladium sp. e Lecanicillium longisporum , com maior prevalência do primeiro e comportamento distinto dos dois entomopatógenos nas diferentes estações. Dialeurodes citri foi o principal hospedeiro de Aschersonia aleyrodis com mais de 80% de incidência do patógeno. No sistema MEP determinou-se associação inversa entre população de O. praelonga e o número de unidades formadoras de colônia (UFC) do fungo Lecanicillium obtendo-se, para a maior população da praga, menor número de colônias no solo. No CMP obteve-se associação direta, sendo que para a maior mortalidade da praga observou-se maior UFC de Lecanicillium, indicando o potencial do solo como reservatório de inóculo para a formação de focos primários da doença, não sendo influenciado pelos agrotóxicos aplicados no sistema. No sistema MIP, a mortalidade da praga causada por Syngliocladium teve associação inversa ao potencial de produção de UFC de Lecanicillium, sendo que as condições de manejo das pragas foram favoráveis à ação desse fungo. O ciclo biológico completo de L. longisporum (isolado ESALQ-1300) em O. praelonga, determinado em microscopia eletrônica de varredura foi de 96 a 144 horas, causando morte a partir das 24 horas após a inoculação. Estudou-se também a influência dos fatores abióticos sobre a população e mortalidade dos insetos sugadores em função dos tratos culturais e a produção de inóculo pelos fungos entomopatogênicos prevalentes. / This present work was developed with 22 sucking insect species and their controllers in citrus orchard, at Cambuhy Farm, Matão County, São Paulo State, Brazil., during the period of November 2004 - April 2006. At first, the ecological indexes were determined for that agroecosystem and the evaluation of species diversity in three control systems was performed: microbiological pest management (MPM) only with the entomopathogenic fungus use, ecological pest management (EPM) with selective pesticides use, and integrated pest management (IPM) with pesticides standard use. The higher diversity was found in MPM; EPM and IPM were similar (80%), and there were no environmental impact in all three systems, as a function of the periods of observation. Orthezia praelonga, in six season periods, was kept under control in MPM and EPM by Syngliocladium sp. and Lecanicillium longisporum fungi, with higher prevalence of both entomopathogens at different seasons. Dialeurodes citri was the mean host of Aschersonia aleyrodis with more than 80% incidence of the pathogen. In EPM system, it was observed the reverse association between O. praelonga population and the number of colony formation units (CFU) of Lecanicillium, when to a bigger pest population a lower colony number in soil was observed. For the MPM treatment a direct association was determined, being the biggest pest mortality correlated to the biggest CFU of Lecanicillium, indicating soil potential as inoculum reservoir to primary disease focus formation, not being influenced by pesticides application in the system. In IPM system, pest mortality caused by Syngliocladium had a inverse association with the potential CFU production of Lecanicillium, being pest management conditions favorable to the action of this fungus. Complete biological cycle of L. longisporum (ESALQ isolate-1300) in O. praelonga was 96-144 hours, as determined by electronic microscopy, causing death after 24 hours inoculation. Also, it was studied the influence of abiotic factors on the population and sucking insects mortalities, as a function of cultural practices and inoculum\'s production by prevalent entomopathogenic fungi.

Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Psyllidae) tornou-se um psilídeo de grande importância para a citricultura paulista após a constatação da bactéria Candidatus Liberibacter sp., causadora do Huanglongbing (greening). Sabe-se que esse inseto abriga microrganismos endossimbiontes, os quais desempenham papel fundamental em sua ecologia nutricional, sendo transmitidos verticalmente à progênie. Dessa forma, propomos caracterizar a morfologia do aparelho reprodutor feminino durante o seu desenvolvimento para embasar a identificação do processo de migração dos simbiontes do bacterioma aos tecidos reprodutivos. D. citri possui ovário do tipo telotrófico, com ovaríolos organizados em bouquet e características gerais semelhantes às observadas para outros Sternorrhyncha. Os trofócitos parecem ser desprovidos de delimitação por membrana no ovaríolo desenvolvido. Um único oócito se desenvolve por ciclo no vitelário, o qual mantém-se em contato com a câmara trófica por um prolongamento citoplasmático, denominado cordão trófico. As informações morfo-estruturais do aparelho reprodutor de D. citri obtidas indicam similaridades importantes a de outros membros de Sternorryncha. Nesse contexto, a migração de simbiontes do bacterioma para os oócitos em maturação de D. citri, ocorre de modo semelhante ao descrito para aleirodídeos, caracterizandose pela migração de bacteriócito intacto. Este último, atravessa o epitélio de revestimento do oócito, formado por células foliculares, e invade o oócito, liberando as bactérias nele contidas. Entretanto, os simbiontes associados ao sincício do bacterioma, são liberados na hemocele através de uma pequena abertura formada no epitélio de revestimento dessa estrutura, invadindo o oócito por um mecanismo distinto. Os simbiontes contidos no oócito, formam um agrupamento de aspecto arredondado (= symbiont ball) na região posterior do oócito, próximo ao pedicelo. / Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Psyllidae) became a serious problem to the citrus industry in São Paulo State once the Huanglongbing disease (greening), which is caused by the bacteria Candidatus Liberibacter sp., was detected. Psyllids are known to harbor endosymbiont microorganisms, which are vertically transmitted to the progeny and play a key role in the nutritional ecology of their hosts. Therefore, we aimed to characterize the morphology of the reproductive system during D. citri development as a tool for further investigation on the symbiont migration from the bacteriome to the reproductive tissues. D. citri has telotrophic ovaries with ovarioles organized in a bouquet, sharing all other characteristics with the remaining Sternorrhyncha. In developed ovarioles, trophocytes seems to lack any membrane delimitation. Only one oocyte develops at a time in the vitellarium, remaining in communication with the trophic chamber by a citoplasmatic brigde, named trophic cord. The morphostructural information reported in here on the D. citri reproductive system shows important similarities with other Sternorryncha. Symbionts associated to the bacteriome of D. citrus migrate to the ovaries and invade the oocytes during ovary maturation, as previously reported for aleyrodids. In this case, symbionts will move within the bacteriocyte as it detaches from the bacteriome and moves through the oocyte follicular epithelium, releasing the contained bacteria into the oocyte. However, symbionts associated to the bacteriome syncitium are relased into the hemocoel through small openings on the bacteriome epithelium, invading the oocyte by a different mechanism. All symbionts that invaded or were discharged into the oocyte aggregate into a balllike symbiont structure at the posterior pole close to the egg pedicel.

Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria entomopatogênica encontrada em várias partes do mundo e tem a capacidade de produzir cristais durante a fase estacionária do crescimento. Esses cristais são toxinas compostas por proteínas ativas contra uma ampla variedade de fases imaturas de insetos. As toxinas do Bt têm sido usadas como bioinseticidas por décadas no controle de insetos das ordens Coleoptera, Lepidoptera e Diptera, e algumas toxinas já foram selecionadas como efetivas contra ácaros, nematoides e insetos sugadores de floema da ordem Hemiptera, como os afídeos. Recentemente, foi comprovada a patogenicidade de três isolados de Bt a outro inseto dessa ordem, o psilídeo Diaphorina citri. Esse psilídeo é vetor das bactérias Candidatus Liberibacter spp., agentes causais da principal doença dos citros: o Huanglongbing ou HLB. A descoberta da capacidade endofítica de Bt em plantas de diferentes espécies vegetais abriu perspectivas para novos estudos usando o Bt para controle de insetos sugadores, como a D. citri. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito patogênico de cada toxina Cry ou Cyt presente nestes três isolados através de isolados de Bt recombinantes expressando as toxinas individualmente. Foram montados bioensaios para confirmar a taxa de mortalidade causada por isolados de Bt contra ninfas de D. citri. Os bioensaios foram feitos usando cinco plantas de laranja doce (Citrus sinensis (L.) Osbeck) e dez ninfas de 3º ínstar de D. citri por planta, além dos controles (sem Bt). A mortalidade das ninfas foi avaliada diariamente durante cinco dias. Durante a avaliação, as ninfas mortas foram coletadas para o isolamento do Bt além da detecção do gene da toxina por PCR. No final do experimento, as folhas jovens onde as ninfas se alimentavam também foram avaliadas quanto à presença do Bt. Nossos resultados confirmaram que os isolados de Bt previamente identificados como patogênicos a D. citri causaram elevada mortalidade (em média 68-93%) em ninfas de 3º ínstar. Dentre os isolados recombinantes testados, um deles apresentou grande destaque, causando a mortalidade de 68-81% das ninfas em 48 horas e 83-93% em 120 horas. Esse isolado possui grande potencial de uso no controle biológico de D. citri através da produção de um bioinseticida ou produção de plantas de citros transgênicas. / Bacillus thuringiensis (Bt) is an entomopathogenic bacterium found in several locations around the world and has the ability to produce crystals during the stationary phase of growth. These crystals are composed of protein toxins that are active against a wide variety of insect larvae. The Bt toxins have been used for decades as biopesticides to control insects of the orders Coleoptera, Lepidoptera, and Diptera. Some toxins have been selected as effective for mites, nematodes and phloem-sucking insects of the order Hemipera, such as aphids. The pathogenicity of strains of Bt to Diaphorina citri, an hemipteran known as Asian citrus psyllid, has been recently demonstrated. This psyllid is the vector of the bacteria Candidatus Liberibacter spp., the causal agents of the main disease of citrus: Huanglongbing or HLB. The discovery of the ability of Bt strains to endophytically colonize plants of different species has opened new perspectives for studies. The aim of this work was to evaluate the pathogenic effect of each Cry or Cyt toxin present in these three isolates through the use of recombinant Bt isolates expressing each toxin individually. A series of bioassays were done in order to confirm the mortality caused by Bt strains against nymphs of D. citri. Bioassays were performed in five seedlings of Citrus sinensis (L.) Osbeck (five replicates/ bioassay) and using ten D. citri 3rd instar nymphs to each assay plant. A suspension containing Bt spores was inoculated via drench in each seedling, and five seedlings were maintained as negative control (without Bt). Mortality was assessed daily for five days. During the bioassays, dead nymphs were collected for further Bt isolation and detection by PCR. At the end of the experiment, young leaves where nymphs feed were also collected to Bt isolation and detection. Our results confirmed that the previously identified Bt isolates pathogenic to D. citri cause high mortality to 3rd instar nymphs. Among the ten recombinant isolates tested, one of them stood out, causing 68-81 % and 83-93% mortality after 48 and 120 hours of inoculation, respectively. The isolation of Bt from dead nymphs and young leaves, and PCR performed with specific primers confirmed the presence of the Bt isolates in psyllids and plants, and their involvement in psyllid mortality. This recombinant Bt with the higher mortality rate found in our results has the potential to be used as a bioinsecticide to control D. citri and the toxin gene can be used to genetic engineering of citrus.

O presente estudo foi desenvolvido com 22 espécies de insetos sugadores e seus controladores em citros, na fazenda Cambuhy, município de Matão, estado de São Paulo, Brasil, durante o período novembro de 2004 a abril de 2006. Inicialmente foram determinados os indicadores ecológicos desse agroecossistema e feita a avaliação da diversidade de espécies nos três sistemas de controle sendo, controle microbiano de pragas (CMP) com uso de fungos entomopatogênicos, manejo ecológico de pragas (MEP) com uso de agrotóxicos seletivos a fungos entomopatogênicos, e manejo integrado de pragas (MIP) com uso padrão de pesticidas. Determinou-se que a diversidade foi maior no CMP e que os sistemas MEP e MIP foram semelhantes (80%) e não ocorreu impacto ambiental nos três sistemas, em função dos períodos de observação. Orthezia praelonga, no período total de seis estações, foi controlada nos tratamentos CMP e MEP, pelos fungos Syngliocladium sp. e Lecanicillium longisporum , com maior prevalência do primeiro e comportamento distinto dos dois entomopatógenos nas diferentes estações. Dialeurodes citri foi o principal hospedeiro de Aschersonia aleyrodis com mais de 80% de incidência do patógeno. No sistema MEP determinou-se associação inversa entre população de O. praelonga e o número de unidades formadoras de colônia (UFC) do fungo Lecanicillium obtendo-se, para a maior população da praga, menor número de colônias no solo. No CMP obteve-se associação direta, sendo que para a maior mortalidade da praga observou-se maior UFC de Lecanicillium, indicando o potencial do solo como reservatório de inóculo para a formação de focos primários da doença, não sendo influenciado pelos agrotóxicos aplicados no sistema. No sistema MIP, a mortalidade da praga causada por Syngliocladium teve associação inversa ao potencial de produção de UFC de Lecanicillium, sendo que as condições de manejo das pragas foram favoráveis à ação desse fungo. O ciclo biológico completo de L. longisporum (isolado ESALQ-1300) em O. praelonga, determinado em microscopia eletrônica de varredura foi de 96 a 144 horas, causando morte a partir das 24 horas após a inoculação. Estudou-se também a influência dos fatores abióticos sobre a população e mortalidade dos insetos sugadores em função dos tratos culturais e a produção de inóculo pelos fungos entomopatogênicos prevalentes. / This present work was developed with 22 sucking insect species and their controllers in citrus orchard, at Cambuhy Farm, Matão County, São Paulo State, Brazil., during the period of November 2004 - April 2006. At first, the ecological indexes were determined for that agroecosystem and the evaluation of species diversity in three control systems was performed: microbiological pest management (MPM) only with the entomopathogenic fungus use, ecological pest management (EPM) with selective pesticides use, and integrated pest management (IPM) with pesticides standard use. The higher diversity was found in MPM; EPM and IPM were similar (80%), and there were no environmental impact in all three systems, as a function of the periods of observation. Orthezia praelonga, in six season periods, was kept under control in MPM and EPM by Syngliocladium sp. and Lecanicillium longisporum fungi, with higher prevalence of both entomopathogens at different seasons. Dialeurodes citri was the mean host of Aschersonia aleyrodis with more than 80% incidence of the pathogen. In EPM system, it was observed the reverse association between O. praelonga population and the number of colony formation units (CFU) of Lecanicillium, when to a bigger pest population a lower colony number in soil was observed. For the MPM treatment a direct association was determined, being the biggest pest mortality correlated to the biggest CFU of Lecanicillium, indicating soil potential as inoculum reservoir to primary disease focus formation, not being influenced by pesticides application in the system. In IPM system, pest mortality caused by Syngliocladium had a inverse association with the potential CFU production of Lecanicillium, being pest management conditions favorable to the action of this fungus. Complete biological cycle of L. longisporum (ESALQ isolate-1300) in O. praelonga was 96-144 hours, as determined by electronic microscopy, causing death after 24 hours inoculation. Also, it was studied the influence of abiotic factors on the population and sucking insects mortalities, as a function of cultural practices and inoculum\'s production by prevalent entomopathogenic fungi.