Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-01T18:02:45Z No. of bitstreams: 1 Aline Clara Silva - Estudo da Integração Genômica do HTLV-1 e da Clonalidade das células Leucêmicas na Leucemia Linfoma de células T do adulto(ATL)na Bahia - CPqGM -Dissertação - 2008.pdf: 691526 bytes, checksum: bd12143117cc3a8662527a22f6c7adef (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-01T18:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aline Clara Silva - Estudo da Integração Genômica do HTLV-1 e da Clonalidade das células Leucêmicas na Leucemia Linfoma de células T do adulto(ATL)na Bahia - CPqGM -Dissertação - 2008.pdf: 691526 bytes, checksum: bd12143117cc3a8662527a22f6c7adef (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leucemia/linfoma de células T do adulto (ATL) constitui uma forma grave de leucemia/ linfoma que ocorre, em geral, na vida adulta e é causada pelo vírus linfotrópico de células T humanas (HTLV-I). O HTLV-I está presente em cerca de 1,8% da população da cidade de Salvador, Bahia, Brasil. No entanto, apenas cerca de 5% dos infectados desenvolvem ATL. O HTLV-I é um retrovírus que integra o seu DNA proviral no DNA genômico da célula hospedeira (principalmente células T CD4+) num local que presume-se randômico e, acredita-se que, para o desenvolvimento da ATL, é necessário ocorrer a expansão clonal das células infectadas. Assim, a detecção da integração proviral e da clonalidade da células leucêmicas são de fundamental importância para o diagnóstico da ATL e definição do tratamento. O presente trabalho buscou identificar os locais de integração do DNA proviral do HTLV-I no DNA da célula hospedeira e o tipo de expansão clonal observada em amostras de PBMC e células de tecido de lesões de pacientes com diagnóstico clínico-patológico de ATL do estado da Bahia. A determinação do sítio de integração do DNA proviral na célula hospedeira foi feita, em 24 pacientes, através das técnicas de IPCR e ILPCR. Estas técnicas permitiram identificar o sítio de integração proviral em pacientes de ATL de diferentes formas clínicas e observou-se que a integração do provírus não ocorreu de forma preferencial em nenhum cromossomo. Em apenas três pacientes houve interrupção de seqüências codificantes e na maioria dos demais pacientes analisados, o provírus integrou-se em regiões próximas aos centrômeros, conhecidas como regiões repetitivas alfóides. O padrão de clonalidade das células leucêmicas foi determinado, em 36 pacientes, através da análise por PCR do rearranjo dos genes que codificam para a cadeia γ do TCR. Observou-se assim um padrão monoclonal das células T para todos os pacientes com forma clínica aguda. Nas outras formas clínicas, uma pequena percentagem de pacientes apresentou padrão misto ou policlonal. Os resultados obtidos demonstraram que as técnicas utilizadas permitiram determinar o sítio de integração e o padrão de clonalidade das células infectadas pelo HTLV-I em pacientes de ATL e podem ser aplicadas para diagnóstico e acompanhamento dos pacientes de ATL da Bahia. / Adult T-cell leukemia/lymphoma (ATL) is a severe neoplasm that usually occurs in adults, and that is caused by human T-cell lymphotropic virus (HTLV-I) infection. In Salvador, Bahia, Brazil, a HTLV-I seroprevalence rate of 1.8% was observed in healthy subjects. However, generally, only 5% of infected individuals develop ATL. HTLV-I is a retrovirus that randomly integrates its proviral DNA into the host genome (specially, T CD4+ cells), and clonal expansion of infected cells is believed to result in the onset of ATL. Therefore, detection of monoclonal provirus integration is important to ATL diagnosis and treatment definition. The aim of this study was to investigate the HTLV-I proviral integration sites and T cell clonality in samples of PBMC and cutaneous biopsies of patients with clinical and histopathologic diagnosis of ATL from Bahia. Using inverse PCR (IPCR and ILPCR) we identified provirus integration sites in PBMC and cutaneous biopsies of 24 patients in diverse clinical subtypes of ATL. No chromosome bias was evident among different patients. In three patients occurred interruption of transcriptional units and in most patients the provirus was integrated in alphoid regions near centrosomes. T-cell clonality was assessed by detection of the rearranged TCR-γ genes. Monoclonal pattern was observed in acute patients. In the other clinical subtypes, small number of patients showed oligoclonal and policlonal patterns. According to these results, we showed that inverse PCR and TCR-γ PCR are efficient for integration site determination and infected cells clonality patterns in ATL patients and could be used in diagnosis and patient follow up in Bahia

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T16:12:54Z No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T16:25:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T16:28:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T16:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Moreira Argolo Análise...2014.pdf: 2379371 bytes, checksum: 6533fc64b2d6221825fc83948cfb30eb (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A dermatite infecciosa associada ao vírus linfotrópico de células T humanas tipo 1 (HTLV-1), DIH, é uma forma de eczema grave e recidivante que incide principalmente em crianças que em geral foram verticalmente infectadas pelo HTLV-1, ocorrendo lesões eritematosas, escamativas e crostosas, sendo geralmente localizadas nas regiões do couro cabeludo e retroauriculares, assim como pescoço, virilha, região paranasal, axilas, ouvido externo e narinas. Inicia-se após os 18 meses de vida e raramente persiste até a vida adulta. No Brasil, muitos casos têm sido diagnosticados na Bahia, estado brasileiro que atualmente conta com a maior casuística da literatura depois da Jamaica. Acompanhando uma coorte de 31 pacientes da faixa etária infanto-juvenil com DIH em Salvador, observou-se em esfregaço do sangue periférico, em 11 dos indivíduos, o aparecimento de linfócitos atípicos (LA) e/ou células em flor (CF), que não são comumente observados em pacientes com DIH, mas ocorrem com frequência em pacientes com leucemia/linfoma de células T do adulto (ATL). Submetemos amostras dos 31 pacientes a reações em cadeia da polimerase (PCR) para verificar se havia um clone majoritário através do padrão de clonalidade do TCR-gama. Para este ensaio, todos os 31 pacientes apresentaram padrão oligoclonal ou policlonal típico para DIH, onde não ocorre um clone predominante. A fim de verificar se o aparecimento dos linfócitos atipicos estava relacionado ao possível desenvolvimento da ATL, para os 11 indivíduos que apresentaram os LA e/ou CF em esfregaço do sangue periférico, realizamos ensaios de ILPCR para verificar a clonalidade dos linfócitos infectados pelo vírus e posteriormente sequenciamos as amostras a fim de identificar o local de integração do provírus ao genoma do portador hospedeiro. Em 7 dos 11 indivíduos identificou-se um único clone predominante nos produtos de PCR em pelo menos uma das coletas avaliadas. Nesses casos, o DNA proviral não interrompeu regiões codificadoras para genes humanos. Para um paciente, o provírus se integrou na região do gene da MAP2K1 (proteína quinase 1 ativadora de mitose), localizado no cromossomo 15. Observou-se que na presença de LA e/ou CF podem existir clones majoritários circulantes em portadores do HTLV-1 com DIH. / Infective dermatitis associated with human T lymphotropic cells virus type 1 (HTLV-1), IDH, is a form of severe and recurrent dermatitis that occurs mostly in children who were mainly vertically infected with HTLV-1, occurring erythematous, desquamative and crusty, being generally located in regions of the scalp and retroauricular, neck, groin, paranasal region, armpits, outer ear and nostrils. It begins after 18 months of life and rarely persists into adulthood. In Brazil, several cases have been diagnosed in Bahia, the Brazilian state that currently has the highest incidence after Jamaica. Tracking a cohort of 31 patients in the juvenile age group with IDH in Salvador, we observed the appearance of atypical lymphocytes (AL) and/or flower cells (FC), which are not commonly observed in patients with IDH, but occur frequently in patients with adult T cell leukemia/lymphoma (ATL), in peripheral blood smear in 11 of the subjects. Samples of 31 patients underwent tests of PCR assays to verify if there was a major clone by the clonality patterns of gamma-TCR. For this test, all 31 patients had oligoclonal pattern or typical polyclonal of IDH, where there isn’t a predominant clone. In order to verify if the appearance of the atypical cells was related to the future ATL we submitted the 11 subjects who had the AL and/or FC in peripheral blood smear to ILPCR tests conducted to analyze clonality of lymphocytes infected by the virus and subsequently these samples were sequenced to identify the integrations sites of the provirus in the host-carrier genome. A single dominant clone was observed in the PCR products from at least one of the tested samples in 7 of 11 individuals. In such cases, the proviral DNA did not interrupt coding regions for human gene. For a patient, the provirus was integrated in the region of the MAP2K1 gene (mitosis protein kinase activator 1), located on chromosome 15. We observed that in the presence of AL and/or FC may be majority clones circulating in HTLV- 1 carries with IDH.