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Ação do ácido indol-3-acético sobre Staphylococcus aureus / Action of acid indole-3-acetic acido on Staphylococcus aureusVaz, Andréia Cristina Nakashima 02 March 2012 (has links)
O objetivo foi avaliar a ação do ácido indol-3-acético (AIA) na ausência e presença da peroxidase de raiz forte (HRP) sobre a viabilidade de cepas certificadas de Staphylococcus aureus ATCC 6538 (produtora de biofilme), ATCC 14458 (portadora do gene seb), ATCC 43300 (portadora do gene mecA) e ATCC 29213 (controle). Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) e, após, escolheu-se uma concentração subinitória para avaliar a capacidade de formação de biofilme, atividade de enzimas antioxidantes, integridade de DNA, integridade de membrana para todas as cepas e avaliação da expressão do gene seb da cepa ATCC 14458. A CIM observada foi de 40 mM de AIA para cepa ATCC 6538, 60 mM para ATCC 43300,50 mM para ATCC 14458 e ATCC 29213. No entanto, houve diferença significativa (P<0,05), na presença de HRP, somente para as cepas ATCC 14458 e 43300. A concentração subinibitória de AIA utilizada foi de 30 mM para ATCC 6538 e ATCC 14458, e de 40 mM para ATCC 43300 e ATCC 29213.mM. A capacidade de formação de biofilme pelo S. aureus(biofilme positivo) não foi alterada pela presença de AIA ou AIA/HRP. A atividade específica de catalase e superóxido dismutase foi aumentada pela ação de AIA/HRP (P<0,05) para todas as cepas, porém, não houve diferença (P>0,05) entre AIA e AIA/HRP. O DNA manteve-se íntegro, porém, houve diminuição na integridade de membrana (P<0,05) para todas as cepas cultivadas na concentração subinibitória de AIA, sendo este efeito potencializado na presença de HRP somente para ATCC 43300. Houve redução na expressão do gene seb da cepa ATCC 14458 (P<0,05). Conclui-se que o AIA, associado à HRP apresenta efeito bacteriostático em cepas de Staphylococcus aureus portadoras de diferentes fatores de virulência. / The objective was to evaluate the action of indole-3-acetic acid (IAA) in the absence and presence of horseradish peroxidase (HRP) on the viability of certified strains of Staphylococcus aureus ATCC 6538 (producer of biofilm), ATCC 14458 (carrying the seb gene), ATCC 43300 (carrying the mecA gene) and ATCC29213 (control). Concentration was determined minimum inhibitory (CIM) and, after, we chose a concentration subinitória to assess the ability of biofilm formation, activity of antioxidant enzymes, integrity DNA, membrane integrity for all strains and evaluation of gene expression seb of strain ATCC 14458. The MIC for the strains ATCC 6538 was 40 mM IAA , for the strains ATCC 14458 and 29213 was 50 mM and for the strain ATCC 43300 was 60 mM IAA, however, significant differences (P<0.05) compared to the addition of HRP to the culture medium, was found only for the doses of MIC of the strains ATCC14458 and 43300. The concentration subinibitória IAA used was 30 mM for ATCC 6538 and ATCC 14458, and 40 mM to ATCC 43300 and ATCC 29213.mM for ATCC 6538 and ATCC 14458, and 50 mM to ATCC 43300 and ATCC 29213.The ability of biofilm formation by S. aureus(biofilm-positive) was not altered by the presence of IAA or IAA/HRP in the culture medium. The activity of catalase and superoxide dismutase was influenced by the action of IAA and IAA/HRP (P<0.05), but there was no difference (P≥0.05) between IAA and IAA/HRP. The DNA remained intact, however, there were changes (P<0.05) in the membrane integrity of microorganisms to sub-inhibitory concentrations of IAA and IAA/HRP, as well as the expression of the sebgene was lower (P<0.05) in microorganisms treated with IAA and IAA/HRP. It is concluded that the IAA has bacteriostatic effect on S. aureus carrying different virulence factors.
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Ação do ácido indol-3-acético sobre Staphylococcus aureus / Action of acid indole-3-acetic acido on Staphylococcus aureusAndréia Cristina Nakashima Vaz 02 March 2012 (has links)
O objetivo foi avaliar a ação do ácido indol-3-acético (AIA) na ausência e presença da peroxidase de raiz forte (HRP) sobre a viabilidade de cepas certificadas de Staphylococcus aureus ATCC 6538 (produtora de biofilme), ATCC 14458 (portadora do gene seb), ATCC 43300 (portadora do gene mecA) e ATCC 29213 (controle). Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) e, após, escolheu-se uma concentração subinitória para avaliar a capacidade de formação de biofilme, atividade de enzimas antioxidantes, integridade de DNA, integridade de membrana para todas as cepas e avaliação da expressão do gene seb da cepa ATCC 14458. A CIM observada foi de 40 mM de AIA para cepa ATCC 6538, 60 mM para ATCC 43300,50 mM para ATCC 14458 e ATCC 29213. No entanto, houve diferença significativa (P<0,05), na presença de HRP, somente para as cepas ATCC 14458 e 43300. A concentração subinibitória de AIA utilizada foi de 30 mM para ATCC 6538 e ATCC 14458, e de 40 mM para ATCC 43300 e ATCC 29213.mM. A capacidade de formação de biofilme pelo S. aureus(biofilme positivo) não foi alterada pela presença de AIA ou AIA/HRP. A atividade específica de catalase e superóxido dismutase foi aumentada pela ação de AIA/HRP (P<0,05) para todas as cepas, porém, não houve diferença (P>0,05) entre AIA e AIA/HRP. O DNA manteve-se íntegro, porém, houve diminuição na integridade de membrana (P<0,05) para todas as cepas cultivadas na concentração subinibitória de AIA, sendo este efeito potencializado na presença de HRP somente para ATCC 43300. Houve redução na expressão do gene seb da cepa ATCC 14458 (P<0,05). Conclui-se que o AIA, associado à HRP apresenta efeito bacteriostático em cepas de Staphylococcus aureus portadoras de diferentes fatores de virulência. / The objective was to evaluate the action of indole-3-acetic acid (IAA) in the absence and presence of horseradish peroxidase (HRP) on the viability of certified strains of Staphylococcus aureus ATCC 6538 (producer of biofilm), ATCC 14458 (carrying the seb gene), ATCC 43300 (carrying the mecA gene) and ATCC29213 (control). Concentration was determined minimum inhibitory (CIM) and, after, we chose a concentration subinitória to assess the ability of biofilm formation, activity of antioxidant enzymes, integrity DNA, membrane integrity for all strains and evaluation of gene expression seb of strain ATCC 14458. The MIC for the strains ATCC 6538 was 40 mM IAA , for the strains ATCC 14458 and 29213 was 50 mM and for the strain ATCC 43300 was 60 mM IAA, however, significant differences (P<0.05) compared to the addition of HRP to the culture medium, was found only for the doses of MIC of the strains ATCC14458 and 43300. The concentration subinibitória IAA used was 30 mM for ATCC 6538 and ATCC 14458, and 40 mM to ATCC 43300 and ATCC 29213.mM for ATCC 6538 and ATCC 14458, and 50 mM to ATCC 43300 and ATCC 29213.The ability of biofilm formation by S. aureus(biofilm-positive) was not altered by the presence of IAA or IAA/HRP in the culture medium. The activity of catalase and superoxide dismutase was influenced by the action of IAA and IAA/HRP (P<0.05), but there was no difference (P≥0.05) between IAA and IAA/HRP. The DNA remained intact, however, there were changes (P<0.05) in the membrane integrity of microorganisms to sub-inhibitory concentrations of IAA and IAA/HRP, as well as the expression of the sebgene was lower (P<0.05) in microorganisms treated with IAA and IAA/HRP. It is concluded that the IAA has bacteriostatic effect on S. aureus carrying different virulence factors.
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Desenvolvimento e validação de um novo modelo de permeabilidade intestinal ex vivo em segmentos de jejuno de ratos para screening de novas moléculas / Development and validation of a new ex vivo intestinal permeability model in rat jejunum segments ofr new molecules screeningSilva, Laís Cristina da 29 September 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-09-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The main predictive models of absorption of potential new drugs in preclinical
stage are focused on the gastrointestinal mucosa, given the predominance of
this pathway in drug administration. Often, the fraction absorbed (Fa) can be
predicted in ex vivo models (p.e. Ussing chambers), in vitro (p.e. Caco-2 cells
monolayers), intestinal perfusion studies in situ and in vivo absorption. In the
present study, from an adaptation of Snapwell ™ inserts, a new ex vivo
model to evaluate the permeability of substances passively absorbed is
proposed. High permeable drugs (metoprolol, caffeine and theophylline) and
low permeable drugs (atenolol, ranitidine and cimetidine) were maintained in
an incubator at 37 ° C under constant stirring (60 rpm) and carbogenic
atmosphere (5% CO2). The viability of the jejunal membrane (52 Ω.cm2 ± 8.0)
was observed remaining above 20 Ω.cm2 for 120 min incubation, under all
conditions evaluated, including the addition of co-solvents (1% DMSO and
1% EtOH). Values of apparent permeability coefficients obtained (Papp) were
characteristic of ex vivo permeation studies (3.8 to 12.6 x10-6 cm / s). Strong
correlation was observed between the data obtained here versus data
intestinal perfusion in vivo (r = 0.89), as well as the fraction absorbed in
humans (r = 0.85), reported in the literature. Additionally, the model features
high sensitivity and accuracy compared to other commonly used models in
classification permeability of substances. In line, we can infer that the MTSSNAPWELL
model demonstrates, yet, potential application in studies of
screening for selection of low molecular weight, such as potential
phytochemicals, as well as their synthetic analogues evaluated with low
amount of sample (ca 10 mg). / Os principais modelos preditivos da absorção de potenciais novos fármacos
na etapa pré-clinica são focados na mucosa gastrointestinal, haja vista a
predominância desta via na administração medicamentosa. Frequentemente,
a fração absorvida (Fa) pode ser predita em modelos ex vivo em câmaras de
Ussing, in vitro em monocamadas de células Caco-2, perfusão intestinal in
situ e estudos de absorção in vivo. No presente estudo, a partir de uma
adaptação do aparato Snapwell™, um novo modelo ex vivo de avaliação da
permeabilidade para substâncias absorvidas por difusão passiva é proposto.
Substâncias de alta (metoprolol, cafeína e teofilina) e baixa (atenolol,
ranitidina e cimetidina) permeabilidade, foram mantidos em incubadora à
37OC, sob agitação constante (60 rpm) e atmosfera carbogênica (5% CO2). A
viabilidade da membrana jejunal (52 ± 8,0 Ω.cm2) foi observada mantendose
acima de 20 Ω.cm2 por até 120 min de incubação, sob todas condições
avaliadas incluindo a adição de co-solventes (DMSO 1% e EtOH 1%). Os
valores de coeficientes de permeabilidade aparente obtidos (Papp)
mostraram-se característicos de estudos ex vivo de permeação (3,8 – 12,6
x10-6 cm/s). Forte correlação foi observada entre os dados aqui obtidos
versus dados de perfusão intestinal in vivo (r = 0,89), assim como da fração
absorvida em humanos (r = 0,85), relatados na literatura. Adicionalmente, o
modelo apresenta elevada sensibilidade e precisão frente aos demais
modelos comumente utilizados na classificação da permeabilidade de
substâncias. Em consonância, pode-se inferir que o modelo MTSSNAPWELL
demonstra, até o momento, potencial aplicação em estudos de
screening para seleção de moléculas de baixo peso molecular, tais como
potenciais fitofármacos, assim como seus análogos sintéticos avaliados com
baixa quantidade de amostra (c.a. 10 mg).
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