A poluição contribui para o agravamento da asma, principalmente em indivíduos susceptíveis. Achados prévios do grupo mostram que a exposição de camundongos neonatos, à 1,2-naftoquinona (1,2-NQ), um contaminante do material particulado eliminado do diesel (PED), aumentou a susceptibilidade à asma na idade adulta. Dados recentes mostram que as PEDs aumentam a expressão de receptores do tipo Toll (TLR) no pulmão de roedores, sugerindo que poluentes podem atuar como ligantes dos TLRs. Os objetivos deste estudo incluíram: 1) investigar o papel do TLR4 e os mecanismos de sinalização envolvidos na maior susceptibilidade à asma; 2) avaliar o perfil de células do sistema imunológico envolvidas na resposta inata/adaptativa. Demonstramos, que a exacerbação da asma em camundongos expostos precocemente à 1,2-NQ é modulada pela via de sinalização intracelular TLR4-MyD88. Conclui-se que contato de camundongos neonatos com a 1,2-NQ interfere na maturação e função de células do sistema imunológico, afeta a resposta adaptativa e, assim, promove o aumento da inflamatória alérgica. / Air pollution is a public health problem worldwide, related to the worsening of asthma, mainly in susceptible individual. Ours previous data showed that early-life exposure to the 1,2-naphthoquinone (1,2-NQ), one of those air contaminants adsorbed on diesel exhaust particles (DEP), increased the susceptibility to asthma at adulthood. Recent studies have been shown that DEP are able to increase Toll like receptors (TLR) mRNA expression of in the lungs of rodents, suggesting that environmental pollutants can act as TLRs ligands. This study aimed: 1) to investigate the role of TLR4 and the mechanisms involved in increased susceptibility to allergic inflammation; 2) evaluate immune cells population involved in innate/adaptive response. We demonstrate that aggravation of asthma in mice early exposed to 1,2-NQ is modulated by TLR4-MyD88 intracellular signaling pathway. We concluded that the short contact of individuals susceptible with 1,2-NQ interfere with immune cells maturation and function, which affect the adaptive response and thus promoted increase of asthma.

A poluição contribui para o agravamento da asma, principalmente em indivíduos susceptíveis. Achados prévios do grupo mostram que a exposição de camundongos neonatos, à 1,2-naftoquinona (1,2-NQ), um contaminante do material particulado eliminado do diesel (PED), aumentou a susceptibilidade à asma na idade adulta. Dados recentes mostram que as PEDs aumentam a expressão de receptores do tipo Toll (TLR) no pulmão de roedores, sugerindo que poluentes podem atuar como ligantes dos TLRs. Os objetivos deste estudo incluíram: 1) investigar o papel do TLR4 e os mecanismos de sinalização envolvidos na maior susceptibilidade à asma; 2) avaliar o perfil de células do sistema imunológico envolvidas na resposta inata/adaptativa. Demonstramos, que a exacerbação da asma em camundongos expostos precocemente à 1,2-NQ é modulada pela via de sinalização intracelular TLR4-MyD88. Conclui-se que contato de camundongos neonatos com a 1,2-NQ interfere na maturação e função de células do sistema imunológico, afeta a resposta adaptativa e, assim, promove o aumento da inflamatória alérgica. / Air pollution is a public health problem worldwide, related to the worsening of asthma, mainly in susceptible individual. Ours previous data showed that early-life exposure to the 1,2-naphthoquinone (1,2-NQ), one of those air contaminants adsorbed on diesel exhaust particles (DEP), increased the susceptibility to asthma at adulthood. Recent studies have been shown that DEP are able to increase Toll like receptors (TLR) mRNA expression of in the lungs of rodents, suggesting that environmental pollutants can act as TLRs ligands. This study aimed: 1) to investigate the role of TLR4 and the mechanisms involved in increased susceptibility to allergic inflammation; 2) evaluate immune cells population involved in innate/adaptive response. We demonstrate that aggravation of asthma in mice early exposed to 1,2-NQ is modulated by TLR4-MyD88 intracellular signaling pathway. We concluded that the short contact of individuals susceptible with 1,2-NQ interfere with immune cells maturation and function, which affect the adaptive response and thus promoted increase of asthma.

O Vírus Respiratório Sincicial Humano (HRSV) é um dos patógenos mais importantes do trato respiratório. Analisamos as interações das proteínas virais nucleoproteína (N), fosfoproteína (P) e matriz (M) em células HEK-293T. N interage com as proteínas celulares Hsp70, PRMT5 e WDR77; P com Hsp70 e Tropomiosina; e M com Nucleofosmina e Tropomiosina. Cada gene celular foi co-expresso em bactérias com um gene viral possibilitando a co-precipitação das proteínas. Analisamos a interação entre Hsp70 e N ou P, confirmando sua ocorrência em bactérias. Com um conjunto de proteínas mutantes, definimos que as interações são através dos amino terminais de N e P, ou do carboxi terminal de P, e do domínio amino terminal de Hsp70. Superexpressão de Hsp70 por transfecção provocou efeito de estímulo sobre a replicação de HRSV. Imunizações em camundongos com vacinas de DNA para N e P mostraram a indução de resposta celular e humoral. Ensaios de desafio resultaram em redução da carga viral após imunização com N, indicando potencial para sua aplicação em formulação vacinal. / Human respiratory syncytial virus (HRSV) is one of the most important pathogens of the respiratory tract. We analyzed the interactions of viral nucleoprotein (N), phosphoprotein (P) and matrix (M) in HEK-293T. N interacts with the cellular proteins Hsp70, PRMT5 and WDR77; P interacts with Hsp70 and Tropomyosin; and M with Nucleophosmin and Tropomyosin. Each cellular gene was co-expressed with a viral gene in bacteria allowing co-precipitation of proteins. Hsp70 co-expression with N or P proteins confirmed that these interactions also occur in bacteria. Using a set of mutants we found that the N and P amino terminus, P carboxy terminus, and Hsp70 amino terminal domain participate in the interactions. The overexpression of Hsp70 by transfection resulted in stimulation of HRSV replication. Mice immunization with N and P showed that DNA vaccines were capable of inducing humoral and cellular response. In challenge assays it was possible to detect significant virus titer reduction in animals immunized with N, indicating its potential for a vaccine formulation.

O Vírus Respiratório Sincicial Humano (HRSV) é um dos patógenos mais importantes do trato respiratório. Analisamos as interações das proteínas virais nucleoproteína (N), fosfoproteína (P) e matriz (M) em células HEK-293T. N interage com as proteínas celulares Hsp70, PRMT5 e WDR77; P com Hsp70 e Tropomiosina; e M com Nucleofosmina e Tropomiosina. Cada gene celular foi co-expresso em bactérias com um gene viral possibilitando a co-precipitação das proteínas. Analisamos a interação entre Hsp70 e N ou P, confirmando sua ocorrência em bactérias. Com um conjunto de proteínas mutantes, definimos que as interações são através dos amino terminais de N e P, ou do carboxi terminal de P, e do domínio amino terminal de Hsp70. Superexpressão de Hsp70 por transfecção provocou efeito de estímulo sobre a replicação de HRSV. Imunizações em camundongos com vacinas de DNA para N e P mostraram a indução de resposta celular e humoral. Ensaios de desafio resultaram em redução da carga viral após imunização com N, indicando potencial para sua aplicação em formulação vacinal. / Human respiratory syncytial virus (HRSV) is one of the most important pathogens of the respiratory tract. We analyzed the interactions of viral nucleoprotein (N), phosphoprotein (P) and matrix (M) in HEK-293T. N interacts with the cellular proteins Hsp70, PRMT5 and WDR77; P interacts with Hsp70 and Tropomyosin; and M with Nucleophosmin and Tropomyosin. Each cellular gene was co-expressed with a viral gene in bacteria allowing co-precipitation of proteins. Hsp70 co-expression with N or P proteins confirmed that these interactions also occur in bacteria. Using a set of mutants we found that the N and P amino terminus, P carboxy terminus, and Hsp70 amino terminal domain participate in the interactions. The overexpression of Hsp70 by transfection resulted in stimulation of HRSV replication. Mice immunization with N and P showed that DNA vaccines were capable of inducing humoral and cellular response. In challenge assays it was possible to detect significant virus titer reduction in animals immunized with N, indicating its potential for a vaccine formulation.