Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-04T19:10:35Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Luiz de Lima Silva - 2016.pdf: 2502108 bytes, checksum: 9af274c5556e225e1478c978f79254ad (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-04T19:11:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Luiz de Lima Silva - 2016.pdf: 2502108 bytes, checksum: 9af274c5556e225e1478c978f79254ad (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-04T19:11:54Z (GMT). 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This study aimed to investigate the effects of IL-32 and IL-15 in the production of cytokines and microbicidal activity of primary human macrophages infected with L. (V.) braziliensis. For this, human peripheral blood monocytes were derived into macrophages and infected with metacyclic forms of L. (V.) braziliensis; evaluation of the infection index (4 h, phagocytosis, 48 h, microbicidal activity) in the absence or presence of rIL-32, rIL-15 or gamma interferon (rIFN) and lipopolysaccharide (LPS); in culture supernatants, IL-32, tumor necrosis factor (TNF) and IL-10 were measured by enzime-linked immunoassay. The addition of rIL-32 to macrophages did not significantly altered phagocytosis of the parasites or microbicidal activity of macrophages. Classical activation of macrophages with rIFN plus LPS decreased the infection index. rIL-32 em high concentration (200 ng/mL) was able to induce TNF in uninfected or infected macrophages, and IL-10 was not induced. Parasites induced lower amounts of intracellular IL-32 as well as rIFN0.1 ng / ml), but there was a synergism between the activation signals provided by the parasites and rIFN (0.1 ng / ml). In the opposite, rIFN in higher concentration (10 ng/mL) induced higher amounts of IL-32, but its activity was partially inhibited by parasites. The rIL-15 was able to induce IL- 32 and TNF in macrophages, but not IL-10 in both non-infected or infected macrophages. The rIL-15 also decreased phagocytosis of parasites by macrophages and increased the microbicidal activity of these cells. The data suggest that IL-15 induces IL-32 and TNF which can contribute to control of the infection. To evaluate the leishmanicidal mechanism pathways induced by IL-15 and IL-32 can help in the development of new therapies for the control of ATL. / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infectoparasitária causada por protozários Leishmania, pertencentes aos subgêneros Viannia e Leishmania. No Brasil, a espécies mais comum e prevalente é L. (V.) braziliensis. Em pacientes com LTA, foi detectada a expressão da citocina interleucina 32 (IL-32) nas lesões cutâneas ou mucosas causadas por L. Viannia spp. No entanto, o papel da IL-32 na LTA ainda não foi esclarecido. Foi demonstrado que a IL-15 induz IL-32, além disso a IL-15 leva à morte de L. infantum. O presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos da IL-32 e IL-15 na produção de citocinas e na atividade microbicida de macrófagos humanos primários infectados com L. (V.) braziliensis. Para isto, foi realizada a derivação de macrófagos humanos a partir de monócitos do sangue periférico de doadores não infectados e infecção com formas metacíclicas de L. (V.) braziliensis; avaliação do índice de infecção (4 h, fagocitose; 48 h, atividade microbicida), na ausência ou presença de tratamento com rIL-32, rIL-15 ou interferon gama (rIFN) e lipopolissacarídeo (LPS); e avaliação da produção de citocinas IL-32, fator de necrose tumoral (TNF) e IL-10, por ensaio imunoenzimático. A adição de rIL-32 às culturas de macrófagos primários infectados com L. (V.) braziliensis não alterou significantemente a fagocitose ou a atividade microbicida das células. A ativação clássica dos macrófagos com rIFN e LPS resultou em uma diminuição do índice de infecção. A rIL-32 em elevada concentração foi capaz de induzir TNF nos macrófagos não infectados ou infectados pelos parasitos L. (V.) braziliensis, sendo que não foi induzida produção de IL- 10. Os parasitos L. (V.) braziliensis induziram baixas quantidades de IL-32 intracelular, assim como rIFN0,1 ng/mL), porém houve sinergismo entre os sinais de ativação fornecidos pelos parasitos e os do rIFN (0,1 ng/mL). O rIFN em uma concentração mais elevada (10 ng/mL) induziu maiores quantidades de IL-32, porém esta indução foi parcialmente inibida pela infecção com os parasitos. A rIL-15 foi capaz de induzir IL-32 nos macrófagos e, além disso, induziu TNF e não induziu a produção de IL-10, tanto nos macrófagos infectados quanto não infectados. A rIL-15 também diminuiu a fagocitose dos parasitos pelos macrófagos e aumentou a atividade microbicida destes. Os dados sugerem que a IL-15 induz IL-32 e TNF que podem contribuir para o controle da infecção. Avaliar as vias de ativação de mecanismos leishmanicidas induzidos pelas IL- 15 e IL-32 podem auxiliar no desenvolvimento de novas terapias para o controle da LTA.