Dor abdominal pode ser consequente a inúmeras causas, entre as várias possibilidades precisamos ficar atentos aos quadros de isquemia intestinal. No trato digestório a isquemia/reperfusão intestinal (I/R-i) acarreta alterações morfológicas nos neurônios entéricos. Este trabalho tem como objetivo analisar o comportamento das diferentes classes neuronais e do receptor P2X7 no plexo mioentérico do íleo de ratos Wistar submetidos à I/R-i. A isquemia intestinal foi obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo das artérias ileais no período de 35 minutos, seguida pelos períodos de reperfusão de 6, 24, 72 horas e 1 semana. No grupo sham não houve a oclusão das artérias ileais. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X7 com a Óxido Nítrico Sintase neuronal (NOSn), calbindina (Calb), calretinina (Calr) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e do receptor P2X7, da NOSn e da ChAT com o pan-neuronal anti-HuC/D. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das duplas marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas dos microscópios de fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Os resultados qualitativos demonstraram diminuição da expressão do receptor P2X7 no grupo I/R-i de 24 horas e retorno da expressão nos grupos I/R-i de 72 horas e 1 semana. Os dados quantitativos demonstraram: a) os neurônios do plexo mioentérico foram imunorreativos ao receptor P2X7; b) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7 com os neurônios NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir e ChAT-ir nos grupos sham e I/R-i; c) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7, e dos neurônios NOSn-ir e ChAT-ir com o pan-neuronal anti-HuC/D nos grupos sham e I/R-i; d) houve diminuição nas densidades nos grupos I/R-i com 6, 24, 72 horas e 1 semana dos neurônios P2X7-ir, NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir, ChAT-ir e anti-HuC/D-ir quando comparados aos grupos sham; e) houve um aumento na área do perfil dos neurônios NOSn-ir nos grupos I/R-i de 6 e 24 horas, nos neurônios ChAT-ir houve um aumento no grupo I/R-i de 1 semana e nos neurônios Calr-ir houve uma diminuição no grupo I/R-i de 6 horas e um aumento no grupo I/R-i de 24 horas quando comparados aos grupos sham. O presente estudo demonstrou que a I/R-i está associada com a perda significativa de diferentes subpopulações de neurônios do plexo mioentérico acompanhada por diversas alterações morfológicas, o que pode acarretar problemas na motilidade intestinal. / Abdominal pain may be consequent to numerous causes, among the various possibilities need to be attentive to intestinal ischemia. In the digestive tract the intestinal ischemia-reperfusion (I/R-i) causes morphological changes in enteric neurons. The aim of the work was to analyze the behavior of different neurons and P2X7 receptor in the myenteric plexus of the ileum of rats subjected to I/R-i. Intestinal ischemia was obtained by the obstruction of blood flow in the ileal arteries period of 35 minutes followed by reperfusion periods of 6, 24, 72 hours and 1 week. In the sham group there was no occlusion of the ileal arteries. The tissues were prepared by immunohistochemical methods for double staining of P2X7 receptor with neuronal nitric oxide synthase (nNOS), calbindin, calretinin and acetylcholine transferase (ChAT) and P2X7 receptor, the nNOS and ChAT with pan-neuronal marker anti-HuC/D The qualitative and quantitative analysis of the counting of double staining, the neuronal density and the area of the cell body profile were obtained from fluorescence microscopy and confocal scanning laser. The qualitative results showed decreased expression of the P2X7 receptor in I/R-i for 24 hours group and return the expression in I/R-i for 72 hours and 1 week groups. The quantitative data showed: a) neurons in the myenteric plexus were immunoreactive for P2X7 receptor; b) no significant changes in the double staining of P2X7 receptor with nNOS, calretinin, calbindin and ChAT neurons in the sham and I/R-i groups; c) does not significant changes in the double staining of the P2X7 receptor, the nNOS and ChAT neurons with the pan-neuronal marker anti-HuC/D in sham and I/R-i groups; d) the densities of the P2X7 receptor, nNOS-IR, calretinin-IR, calbindin-IR, ChAT-IR and anti-HuC/D-IR neurons were decreased in I/R-i 6, 24, 72 hours and 1 week groups, when compared to sham group; e) the profile area was increased in nNOS-IR neurons in the I/R-i for 6 and 24 hours groups, ChAT-IR neurons in I/R-i 1 week group and in the calretinin-IR neurons there was a decrease in I/R-i 6 hours group and an increase in I/R-i for 24 hours group when compared to sham group. The present study demonstrated that I/R-i is associated with significant loss of different subpopulations of neurons in the myenteric plexus accompanied by several morphological changes, which can cause intestinal motility disorder.

A isquemia e reperfusão intestinal (I/R-i) é relevante fator para o desenvolvimento da síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA). A lesão tecidual decorrente da I/R-i pode ser local e em órgãos distante do sitio isquêmico, notadamente o pulmão. Indivíduos submetidos à isquemia intestinal ao tornarem-se vulneráveis, desenvolvem resposta exacerbada a estímulos inflamatórios secundários constituindo assim a percepção de lesão decorrente de uma dupla agressão. Neste estudo desenvolvemos modelo murino de dupla agressão pulmonar ocasionada pela I/R-i seguida de estímulo da instilação nasal de LPS ou de suco gástrico (SG). A fase de caracterização do modelo de I/R-i revelou aumento de IL-6, G-CSF, KC, IP-10 e MCP-1, mas não de TNF-a no soro e em homogeneizados de pulmão e intestino. Anticorpos anti TNF-a e o etanercepte falharam em inibir o aumento de MPO pulmonar e intestinal após a I/R-i. A instilação nasal de LPS após a I/R-i aumentou a atividade pulmonar de MPO e exacerbou a permeabilidade vascular pulmonar. Neste caso, aminoguanidina ou a vimblastina reverterem o aumento da permeabilidade vascular, sugerindo a participação conjunta de neutrófilos e óxido nítrico no processo lesivo causado pela dupla agressão. A instilação nasal de SG induziu aumento inicial (2h) de MPO pulmonar seguido de influxo de neutrófilos (24h) para o espaço alveolar. Tal processo foi acompanhado por expressão inicial e transiente de TNF-a no LBA e contrabalanceada por IL-10. A resposta inflamatória aumentada de camundongos IL-10 KO à instilação de suco gástrico mostra o papel fundamental desta citocina do controle da inflamação. O rolipram ou o composto PKF 241-466 (inibidores de TNF-a) reduziram a inflamação pulmonar induzida pelo SG. A instilação de SG após a I/R-i (I/R-i +SG) exacerbou o aumento da permeabilidade vascular pulmonar. Os dados apresentados sugerem que a exposição do organismo ao trauma intestinal torna o pulmão suscetível a um estímulo secundário como o LPS e o suco gástrico. Visto a gama de estímulos inflamatórios a que indivíduos internados em unidades de terapia intensiva podem ser submetidos, os resultados deste estudo podem contribuir para a compreensão dos mecanismos reguladores do recrutamento de neutrófilos e geração de mediadores inflamatórios na síndrome do desconforto respiratório agudo. / Intestinal ischemia and reperfusion (I/R) is implicated as a prime initiating event in the development of systemic inflammatory syndrome and Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS). Several studies pointed the possibility of massive systemic inflammatory events rendering the lungs more susceptible to an exacerbated inflammatory response, the so called two-hit hypothesis. In this way, minor local inflammatory stimuli could be a trigger for ARDS. In this study we investigated the effects of low-dose LPS or gastric juice (GJ) administered by nasal instillation to mice previously submitted to intestinal I/R. Our data showed that i-I/R alone induced histological signs of edema in lung as well as an increase of lung MPO activity and IL-6, G-CSF, KC, IP-10 and MCP-1 levels. Nasal instillation of LPS following i-I/R increased lung MPO activity and exacerbated lung vascular permeability. In this case, aminoguanidine or vinblastine blocked the increase of vascular permeability, suggesting the role of neutrophils and nitric oxide in injury induced by the two-hit stimuli. Instillation of GJ induced an initial (2h) increase of lung MPO followed by the influx of neutrophils (24h) to the alveolar space. Such process was followed by the transient expression of TNF-a in BAL and balanced by IL-10. The exacerbated inflammatory response of IL-10 KO mice to GJ instillation shows the importance of this cytokine in the control of the inflammation in such model. Treatment with rolipram or PKF 241-466 compound (TNF-a inhibitors) reduced lung inflammation induced by GJ. Nasal instillation of GJ after i-I/R exacerbated the increase in lung vascular permeability. The data shown suggest that the exposition of the organism to mesenteric trauma primes the host organism to a secondary inflammatory stimulus such as LPS or gastric juice. Considering the possible multiple insults to lung to which patients in intensive care units are submitted, the results of this study might contribute to the understanding of the regulatory mechanisms of neutrophils and generation of inflammatory mediators in the context of ARDS.

Dor abdominal pode ser consequente a inúmeras causas, entre as várias possibilidades precisamos ficar atentos aos quadros de isquemia intestinal. No trato digestório a isquemia/reperfusão intestinal (I/R-i) acarreta alterações morfológicas nos neurônios entéricos. Este trabalho tem como objetivo analisar o comportamento das diferentes classes neuronais e do receptor P2X7 no plexo mioentérico do íleo de ratos Wistar submetidos à I/R-i. A isquemia intestinal foi obtida pela obstrução do fluxo sanguíneo das artérias ileais no período de 35 minutos, seguida pelos períodos de reperfusão de 6, 24, 72 horas e 1 semana. No grupo sham não houve a oclusão das artérias ileais. Os tecidos foram preparados por métodos imunohistoquímicos de duplas marcações do receptor P2X7 com a Óxido Nítrico Sintase neuronal (NOSn), calbindina (Calb), calretinina (Calr) e Acetilcolina Transferase (ChAT) e do receptor P2X7, da NOSn e da ChAT com o pan-neuronal anti-HuC/D. As análises qualitativas e quantitativas das contagens das duplas marcações, das densidades neuronais e da área dos perfis foram obtidas dos microscópios de fluorescência e de Confocal de Varredura à Laser. Os resultados qualitativos demonstraram diminuição da expressão do receptor P2X7 no grupo I/R-i de 24 horas e retorno da expressão nos grupos I/R-i de 72 horas e 1 semana. Os dados quantitativos demonstraram: a) os neurônios do plexo mioentérico foram imunorreativos ao receptor P2X7; b) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7 com os neurônios NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir e ChAT-ir nos grupos sham e I/R-i; c) não houve alterações significativas nas duplas marcações do receptor P2X7, e dos neurônios NOSn-ir e ChAT-ir com o pan-neuronal anti-HuC/D nos grupos sham e I/R-i; d) houve diminuição nas densidades nos grupos I/R-i com 6, 24, 72 horas e 1 semana dos neurônios P2X7-ir, NOSn-ir, Calr-ir, Calb-ir, ChAT-ir e anti-HuC/D-ir quando comparados aos grupos sham; e) houve um aumento na área do perfil dos neurônios NOSn-ir nos grupos I/R-i de 6 e 24 horas, nos neurônios ChAT-ir houve um aumento no grupo I/R-i de 1 semana e nos neurônios Calr-ir houve uma diminuição no grupo I/R-i de 6 horas e um aumento no grupo I/R-i de 24 horas quando comparados aos grupos sham. O presente estudo demonstrou que a I/R-i está associada com a perda significativa de diferentes subpopulações de neurônios do plexo mioentérico acompanhada por diversas alterações morfológicas, o que pode acarretar problemas na motilidade intestinal. / Abdominal pain may be consequent to numerous causes, among the various possibilities need to be attentive to intestinal ischemia. In the digestive tract the intestinal ischemia-reperfusion (I/R-i) causes morphological changes in enteric neurons. The aim of the work was to analyze the behavior of different neurons and P2X7 receptor in the myenteric plexus of the ileum of rats subjected to I/R-i. Intestinal ischemia was obtained by the obstruction of blood flow in the ileal arteries period of 35 minutes followed by reperfusion periods of 6, 24, 72 hours and 1 week. In the sham group there was no occlusion of the ileal arteries. The tissues were prepared by immunohistochemical methods for double staining of P2X7 receptor with neuronal nitric oxide synthase (nNOS), calbindin, calretinin and acetylcholine transferase (ChAT) and P2X7 receptor, the nNOS and ChAT with pan-neuronal marker anti-HuC/D The qualitative and quantitative analysis of the counting of double staining, the neuronal density and the area of the cell body profile were obtained from fluorescence microscopy and confocal scanning laser. The qualitative results showed decreased expression of the P2X7 receptor in I/R-i for 24 hours group and return the expression in I/R-i for 72 hours and 1 week groups. The quantitative data showed: a) neurons in the myenteric plexus were immunoreactive for P2X7 receptor; b) no significant changes in the double staining of P2X7 receptor with nNOS, calretinin, calbindin and ChAT neurons in the sham and I/R-i groups; c) does not significant changes in the double staining of the P2X7 receptor, the nNOS and ChAT neurons with the pan-neuronal marker anti-HuC/D in sham and I/R-i groups; d) the densities of the P2X7 receptor, nNOS-IR, calretinin-IR, calbindin-IR, ChAT-IR and anti-HuC/D-IR neurons were decreased in I/R-i 6, 24, 72 hours and 1 week groups, when compared to sham group; e) the profile area was increased in nNOS-IR neurons in the I/R-i for 6 and 24 hours groups, ChAT-IR neurons in I/R-i 1 week group and in the calretinin-IR neurons there was a decrease in I/R-i 6 hours group and an increase in I/R-i for 24 hours group when compared to sham group. The present study demonstrated that I/R-i is associated with significant loss of different subpopulations of neurons in the myenteric plexus accompanied by several morphological changes, which can cause intestinal motility disorder.

L’angiographie par fluorescence au vert d’indocyanine (ICG-FA) est une technologie d’imagerie non-invasive ayant été validée pour évaluer la perfusion tissulaire, pour délimiter l’anatomie des voies biliaires extra-hépatiques et pour localiser les ganglions et les vaisseaux lymphatiques. Depuis les années 2000, son utilisation connaît une expansion dans diverses spécialités chirurgicales incluant la chirurgie pédiatrique. Ce mémoire explore les indications actuelles de l’angiographie par fluorescence au vert d’indocyanine en pédiatrie et son introduction lors de résections intestinales pédiatriques à l’aide d’un essai clinique prospectif de faisabilité. Alors que l’utilisation de l’ICG-FA est bien définie en chirurgie adulte, cette technologie demeure peu utilisée en pédiatrie. Une revue systématique avec synthèse narrative portant sur l’utilisation de la technologie en contexte périopératoire chez la population pédiatrique a été menée. La majorité des articles étaient des études de cas et des séries de cas (n=36 ; 56%). Aucun effet indésirable relié au vert d’indocyanine n’a été rapporté. Le risque de biais de sélection et d’information était élevé. Les résultats de la revue systématique indiquent que bien que les indications demeurent limitées en pédiatrie, un intérêt important pour la technologie est noté à travers l’augmentation du nombre de publications sur le sujet. L’ICG-FA est un outil fréquemment utilisé en chirurgie colorectale adulte pour évaluer la vascularisation intestinale. Un essai clinique prospectif de phase II a été mené afin d’établir la faisabilité et l’impact de l’utilisation de l’ICG-FA lors de chirurgies pédiatriques d’urgence et électives nécessitant une résection intestinale. Les résultats de l’étude prouvent que l’introduction de la technologie est faisable, sécuritaire et simple. Par ailleurs, 95% des membres de l’équipe chirurgicale considèrent la technologie sécuritaire. / Indocyanine green fluorescence angiography (ICG-FA) is a validated non-invasive imaging technology used to evaluate tissue perfusion, delineate biliary anatomy, and localize lymph nodes and lymphatic vessels. Since the 2000s, its use has grown in various surgical subspecialties including pediatric surgery. This thesis explores the current ICG-FA indications in pediatric surgical subspecialties and its introduction in pediatric bowel resections by the mean of a prospective feasibility clinical trial. While ICG-FA is well established in adult surgery, the technology remains sparsely used in pediatric surgery. A systematic review with narrative synthesis on the perioperative ICG-FA use in the pediatric population was conducted. Most articles were case reports and case series (n=36; 56%). No adverse event related to ICG occurred. Risk of selection and information biases was high. The results show that pediatric applications of ICG remain currently limited, but significant interest in the technology is seen with the rising number of publications on the subject. ICG-FA is a frequently used tool in adult colorectal surgery to determine intestinal perfusion. A prospective Phase II clinical trial was conducted to establish the feasibility and impact of ICG-FA use during emergency and elective pediatric surgeries requiring bowel resection. The study results indicate that the introduction of the technology is feasible, safe, and simple. They show that 95% of the surgical team agreed that ICG-FA was safe.