A Doença de Fabry (DF) é uma desordem lisossomal ligada ao X causada pela deficiência da enzima alfa-galactosidase A, que provoca acúmulo de globotriaosilceramida (Gb3). O gene que codifica essa enzima está localizado no braço longo do cromossomo X, na região Xq21.33-Xq22, chama-se gene GLA e é composto por 12Kb divididos em sete exons. As manifestações clínicas incluem hipohidrose, angioqueratomas, acroparestesias e opacidade corneana. A progressão da doença leva a doenças vasculares secundárias envolvendo rins, coração e sistema nervoso central. A detecção de mulheres portadoras baseada somente na análise enzimática muitas vezes é inconclusiva. Portanto, a análise de mutações é uma ferramenta fundamental para diagnóstico e aconselhamento genético. A heterogeneidade da DF é alta e a maioria das mutações são privadas. Neste estudo nós descrevemos a análise molecular de seis pacientes homens pertencentes a quatro famílias diferentes e suas mães. O seqüenciamento automatizado dos sete exons do gene GLA revelou a presença de três mutações não conhecidas e uma descrita anteriormente em outra família brasileira. Aparentemente, ambas as famílias não são relacionadas, mas estudos futuros utilizando análise de haplótipos esclarecerão esta situação. Uma mãe era portadora, a outra não. Este estudo confirma a heterogeneidade de mutações que causam DF. Isto também destaca a importância da análise molecular para detecção de portadoras e aconselhamento genético. / Fabry disease is a an X-linked lysosomal disorder due to the deficiency of α- galactosidase A that causes storage of globotriaosylceramide (Gb3). The gene coding for this lysosomal enzyme is located at the long arm of X chromosome, on region Xq21.33 – Xq22, called GLA gene and spans 12kb and is divided in seven exons. Clinical manifestations include hypohidrosis, angiokeratomas, acroparesthesias and corneal opacities. Disease progression leads to vascular disease secondary to involvement of kidney, heart and the central nervous system. Detection of female carriers based solely on enzyme assays is often inconclusive. Therefore, mutation analysis is a valuable tool for diagnosis and genetic counseling. However there is high genetic heterogeneity and most mutations are private. In this study we describe the molecular analysis of six male Fabry patients belonging to four different families and their mothers. Automated sequencing of the seven exons of GLA gene revealed the presence of three unknown mutations and one previously described in another Brazilian family. Apparently, both families are not related but further studies using haplotype analysis shall clarify this question. All but one of the studied mothers were carriers. This study confirms the heterogeneity of mutations in Fabry disease. It also highlights the importance of molecular analysis for carrier detection and genetic counseling.

De nombreux travaux suggèrent l’implication du microbiote intestinal dans différentes pathologies telles que l’obésité, les pathologies chroniques intestinales et les cancers. Le but de notre étude est de caractériser le microbiote intestinal de patientes atteintes d’un cancer du sein, avant toute intervention thérapeutique, et d’évaluer, in vitro, l’impact des métabolites d’origine bactérienne sur les cellules cancéreuses mammaires. Premièrement, nos travaux ont démontré que le microbiote intestinal de patientes atteintes d’un cancer du sein varie selon leurs caractéristiques clinico-biologiques. Nous avons également mis en évidence des différences significatives entre le microbiote intestinal de patientes et celui de femmes témoins, en termes de diversité, d’abondances relatives des phyla Bacteroidetes et Firmicutes, et de certains genres bactériens. Nous avons ensuite constaté l’impact des métabolites microbiens sur l’expression d’ApoA-IV dans les entérocytes, et l’effet des sécrétions intestinales, sur la prolifération des cellules cancéreuses mammaires MCF-7. Finalement, nous avons montré que l’acide biliaire lithocholique, un métabolite microbien, inhibe la survie des cellules cancéreuses mammaires MCF-7 et MDA-MB-231, en réduisant la synthèse et le stockage des lipides. Ce travail de thèse constitue une approche préliminaire à l’exploration des mécanismes permettant de clarifier le rôle du microbiote dans le développement du cancer du sein. Sur la base des résultats présentés, nous proposons que la modulation du microbiote intestinal pourrait être une cible de choix pour une stratégie thérapeutique en prévention primaire et secondaire du cancer du sein. / Many studies suggest the involvement of the intestinalmicrobiota in various pathologies such as obesity,intestinal chronic diseases and cancers. The aim of ourstudy is to characterize the intestinal microbiota of breastcancer patients before any therapeutic intervention, andto evaluate, in vitro, the impact of bacterial metaboliteson breast cancer cells. Firstly, our work has shown thatthe intestinal microbiota of breast cancer patients variesaccording to their clinical and biological characteristics.We also found significant differences between the gutmicrobiota of patients and that of healthy women, in termsof diversity, of relative abundances of phylaBacteroidetes and Firmicutes, and of certain bacterialgenera. We then observed the impact of microbialmetabolites for the expression of ApoA-IV in enterocytes,and the effect of intestinal secretions on the proliferationof MCF-7 breast cancer cells. Finally, we showed thatlithocholic bile acid, a microbial metabolite, inhibits thesurvival of breast cancer cells MCF-7 and MDA-MB-231by reducing lipid synthesis and storage. This thesis workis a preliminary approach to the exploration ofmechanisms to clarify the role of gut microbiota in thedevelopment of breast cancer. Based on the resultsshown in this study, we propose that the modulation ofgut microbiota could be a target of choice for atherapeutic strategy in primary and secondary preventionagainst breast cancer.

Introdução: A Síndrome de Morquio A (MPS IVA) é um Erro Inato do Metabolismo do grupo das Doenças Lisossômicas. Esta patologia é caracterizada pelo acúmulo e excreção de queratan e condroitin sulfato devido à deficiência da enzima lisossomal Galactose–6 sulfatase (GALNS; E.C.3.1.6.4). É uma doença rara cuja incidência varia entre 1:45.000 e 1:640.000. Os aspectos clínicos predominantes estão relacionados com o sistema osteo-articular com efeitos secundários sobre o sistema nervoso central, embora não haja déficit cognitivo. Os achados clínicos, evidentes a partir dos 2 anos, direcionam as análises bioquímicas para confirmação do diagnóstico através de avaliação dos glicosaminoglicanos urinários e de ensaios enzimáticos específicos. A doença é herdada de forma autossômica recessiva. O cDNA revela uma região codificante com 1566 nucleotídeos, que determina uma proteína com 522 aminoácidos. O gene contém 14 exons e foi mapeado em 16q24.3. Já foram descritas 148 mutações e 16 polimorfismos. O gene apresenta grande heterogeneidade molecular, sendo que 46,1% das mutações ocorreram menos de três vezes. Objetivo Identificar as mutações presentes no gene da GALNS em pacientes brasileiros com diagnóstico bioquímico para a MPS IVA; verificar se as mutações novas encontradas são causadoras do fenótipo patológico; e padronizar as técnicas de PCR e SSCP para análise do gene da GALNS. Materiais e Métodos: Seis casos-índice tiveram todo o gene da GALNS amplificados por PCR, seguido de seqüenciamento. Para as mutações novas, primers foram confeccionados para os respectivos exons e a patogenicidade testada por análise de freqüência em 100 controles normais. Condições de PCR e SSCP foram determinadas para cada um dos 4 exons com mutações novas. Sete pacientes novos com diagnóstico bioquímico foram analisados para os exons com as condições pré-estabelecidas. Os controles e pacientes com padrão alterado no gel de SSCP foram seqüenciados. Resultados: Em relação aos seis casos-índice 11 dos 12 alelos tiveram a alteração identificada, revelando seis mutações diferentes. Destas, quatro eram novas (p.G116S, p.N164T, p.L307P e p.S341R) e duas já descritas (p.R386C e p.G139S).Dos 100 controles analisados para cada exon nenhum apresentou o mesmo padrão de migração da amostra mutada, mas foram encontradas novas alterações (p.A107A, p.Y108Y e p.P357P). Entre os pacientes novos, sete dos 14 alelos foram identificados (p.N164T, p.G301C e uma mudança do quadro de leitura). Discussão: As quatro mutações novas identificadas foram consideradas patogênicas uma vez que não estavam presentes nos controles, indicando uma freqüência menor que 1% nesse grupo. As mutações p.G116S, p.N164T e p.G301C (freqüências de 14,3%, 14,3% e 19,0% dos alelos, respectivamente) foram consideradas recorrentes, além das já descritas e também recorrentes p.G139S e p.R386C. Nos quatro exons padronizados encontramos 40% das mutações descritas. Entre as diferentes mutações encontradas em nossos casos-índice uma nova (p.G116S) e duas já descritas (p.G139S e p.R386C) se localizam em regiões CpG. Conclusões: Foram identificadas alterações moleculares em 11 dos 12 alelos de seis pacientes brasileiros com MPS IVA, sendo que as quatro mutações novas encontradas puderam ser classificados como patogênicas; as técnicas de PCR e SSCP para os 4 exons do gene da GALNS foram padronizadas.

A Doença de Fabry (DF) é uma desordem lisossomal ligada ao X causada pela deficiência da enzima alfa-galactosidase A, que provoca acúmulo de globotriaosilceramida (Gb3). O gene que codifica essa enzima está localizado no braço longo do cromossomo X, na região Xq21.33-Xq22, chama-se gene GLA e é composto por 12Kb divididos em sete exons. As manifestações clínicas incluem hipohidrose, angioqueratomas, acroparestesias e opacidade corneana. A progressão da doença leva a doenças vasculares secundárias envolvendo rins, coração e sistema nervoso central. A detecção de mulheres portadoras baseada somente na análise enzimática muitas vezes é inconclusiva. Portanto, a análise de mutações é uma ferramenta fundamental para diagnóstico e aconselhamento genético. A heterogeneidade da DF é alta e a maioria das mutações são privadas. Neste estudo nós descrevemos a análise molecular de seis pacientes homens pertencentes a quatro famílias diferentes e suas mães. O seqüenciamento automatizado dos sete exons do gene GLA revelou a presença de três mutações não conhecidas e uma descrita anteriormente em outra família brasileira. Aparentemente, ambas as famílias não são relacionadas, mas estudos futuros utilizando análise de haplótipos esclarecerão esta situação. Uma mãe era portadora, a outra não. Este estudo confirma a heterogeneidade de mutações que causam DF. Isto também destaca a importância da análise molecular para detecção de portadoras e aconselhamento genético. / Fabry disease is a an X-linked lysosomal disorder due to the deficiency of α- galactosidase A that causes storage of globotriaosylceramide (Gb3). The gene coding for this lysosomal enzyme is located at the long arm of X chromosome, on region Xq21.33 – Xq22, called GLA gene and spans 12kb and is divided in seven exons. Clinical manifestations include hypohidrosis, angiokeratomas, acroparesthesias and corneal opacities. Disease progression leads to vascular disease secondary to involvement of kidney, heart and the central nervous system. Detection of female carriers based solely on enzyme assays is often inconclusive. Therefore, mutation analysis is a valuable tool for diagnosis and genetic counseling. However there is high genetic heterogeneity and most mutations are private. In this study we describe the molecular analysis of six male Fabry patients belonging to four different families and their mothers. Automated sequencing of the seven exons of GLA gene revealed the presence of three unknown mutations and one previously described in another Brazilian family. Apparently, both families are not related but further studies using haplotype analysis shall clarify this question. All but one of the studied mothers were carriers. This study confirms the heterogeneity of mutations in Fabry disease. It also highlights the importance of molecular analysis for carrier detection and genetic counseling.

To qualify for a diagnosis of posttraumatic stress disorder the DSM-IV requires that individuals report dominant emotions of fear, helplessness, and horror during the trauma. Despite this stipulation, traumatic events can elicit a myriad of emotions other than fear such as anger, guilt or shame, sadness, and numbing. The present study examined which emotional reactions to a stressful event in a college student sample are associated with the highest levels of PTSD symptoms. Results suggest mixed support for the DSM-IV criteria. Although participants who experienced a dominant emotion of fear reported high PTSD symptomatology, participants who experienced anger, disgust-related emotions, and sadness reported PTSD symptoms of equivalent severity. Participants also reported experiencing other emotions more frequently than they reported experiencing fear. Coping style was unrelated to dominant emotion experienced; however, dysfunctional coping was associated with worse outcomes in terms of PTSD symptoms. These results have diagnostic and treatment limitations.

Diploma thesis " The image of the church in Bohemia during the reign of Charles IV." deals with state of the Czech church in the late Middle Ages during the reign of Charles IV. The aim is to outline the image of the Church before the advent of Charles IV. to the Czech throne and especially to capture the state during his reign. The first part deals with the description of the situation in the church before the beginning of the reign of Charles IV. in Bohemia. It also includes the biography of the last bishop of Prague, John IV. of Dražice, but also efforts and attempts at the creation of the Prague archbishopric in the country. A special chapter deals with a biography of Charles IV. and his achievements especially in the role of the Czech and Roman king and emperor. The third chapter is dedicated to the main theme of the work, and that is the state of the Czech Church in Bohemia, the Prague Archbishopric and other religious institutions in the Czech kingdom. Part of the chapter is devoted to the first archbishop of Prague, Arnošt of Pardubice and his relationship and cooperation with Charles IV. The last part deals with the spiritual heritage, which Charles IV. left after his death, and which still exists.

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