Made available in DSpace on 2016-03-10T13:16:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 diana_viveiros_ioc_dout_2014.pdf: 2553058 bytes, checksum: cd6b615f6279917df0cb1eea71997b6f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Doenças pulmonares crônicas, como a asma e a silicose, são caracterizadas por inflamação das vias aéreas e fibrose que levam à marcada deterioração da função pulmonar. O objetivo da presente tese é investigar o impacto das propriedades anti-inflamatórias e antifibróticas do composto LASSBio-897 na asma e silicose experimental. Utilizaram-se metodologias diversas, incluindo a quantificação da reatividade de vias aéreas por pletismografia barométrica, além da quantificação do teor tecidual de mediadores inflamatórios por ELISA e do infiltrado celular pulmonar com técnicas de histologia e imunohistoquímica. Foram ainda quantificados a produção de citocinas por fibroblastos e macrófagos \201Cin vitro\201D. O tratamento oral profilático com LASSBio-897 (2 e 5 mg/kg) preveniu a instalação do quadro de hiper-reatividade brônquica, o infiltrado celular e a geração de citocinas pró-inflamatórias em modelos de asma aguda em camundongos. Por outro lado, o tratamento mostrou-se inativo quando feito após a instalação da resposta asmática. Resultados mais promissores foram obtidos na condição da silicose experimental, onde o tratamento oral terapêutico com LASSBio-897 (2 e 5 mg/kg) claramente inibiu o comprometimento da função pulmonar, o processo inflamatório e a fibrose observados induzidos pela exposição à sílica. O composto não interferiu com a atividade de mastócitos e células epiteliais estimuladas com sílica \201Cin vitro\201D No entanto, a administração de LASSBio-897 reduziu a expressão de F4/80 e \03B1-SMA no tecido pulmonar de animais silicóticos, evidenciando assim sua atividade sobre macrófagos e miofibroblastos, respectivamente. Ensaios \201Cin vitro\201D confirmaram esse efeito, uma vez que o composto reduziu a liberação de TNF-\03B1 por macrófagos alveolares estimulados com sílica e inibiu a proliferação e produção de colágeno induzida por IL-13 em fibroblastos pulmonares oriundos de animais silicóticos. Por fim, a administração do composto resultou na redução da expressão tecidual de NF-\03BAB após o desafio com sílica. Conclui-se que o composto LASSBio-897 pode prevenir a instalação do quadro de asma aguda, sem contudo alterar a resposta asmática já instalada. A capacidade do LASSBio-897 de reverter a resposta inflamatória e fibrótica pulmonar induzida por partículas de sílica sugere que uma aplicação na silicose, mais do que na asma, seja uma perspectiva verdadeiramente promissora / Chronic lung diseases such as asthma and silicosis are characterized by airway inflammation and fibrosis leading to marked deterioration of lung function. The aim of this thesis is to investigate the effect of compound LASSBio - 897 on experimental asthma and silicosis. Various pathol ogical parameters were assessed, including airway hyper - reactivity by barometric plethysmography, lung tissue content of inflammatory mediators by ELISA and cellular infiltration using histology and immunohistochemistry techniques. Cytokine generation from fibroblasts and macrophages in vitro was also quantified. Oral prophylactic treatment with LASSBio - 897 (2 and 5 mg/kg) prevented airway bronchial hyper - reactivity, leukocyte recruitment and cytokine generation in a model of acute asthma in mice. However, this treatment was inactive when performed after installation of the asthmatic response. More promising results were obtained in the experimental silicosis condition, where the LASSBio - 897 therapeutic treatment (2 and 5 mg/kg, oral) clearly inhib ited airway hyper - reactivity, as well as inflammation and peribronchial fibrosis induced by silica particles. Furthermore, LASSBio - 897 did not interfere with mast cells and epithelial cells activity after silica stimulation in vitro . However, LASSBio - 897 c learly reduced F4/80 and α - SMA expression in the lung of silicotic mice, showing its inhibitory effect on macrophages and myofibroblasts, respectively. In vitro assays confirmed this effect, since the compound reduced TNF - α release by an alveolar macrophag e cell lineage after silica exposure, and inhibited proliferation and collagen production induced by IL - 13 in lung fibroblasts recovered from silicotic mice. Finally, LASSBio - 897 reduced sil ica - induced upregulation of NF - κ B expression in the lung tissue. I t is concluded that LASSBio - 897 can prophylactically prevent the development of acute asthma, without altering the already installed asthmatic response. The capacity of LASSBio - 897 to reverse silica but not allergen - induced lung inflammation and fibrosis s uggests the application in silicosis, rather than in asthma, as a truly promising perspective

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