Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Banca: Victor Hugo Vitorino Sarmento / Banca: Silmara Marques Allegretti / Resumo: A esquistossomose é uma infecção parasitária causada pelo trematódeo do gênero Schistosoma. Afeta aproximadamente 200 milhões de pessoas, matando cerca de 280.000 pessoas por ano, com uma grande porcentagem dos indivíduos infectados residindo na África. Praziquantel (PRZ) é ativo contra todas as espécies de Schistosoma e é considerado o fármaco de escolha para o tratamento de tal doença. No entanto, sua baixa solubilidade em água e o risco de resistência ou tolerância do parasita ao PRZ justificam a importância de desenvolver uma alternativa tecnológica para obtenção de um produto farmacêutico que pode aumentar a eficácia terapêutica e melhorar a biodisponibilidade deste fármaco. Lipossomas têm sido utilizados com sucesso na área farmacêutica e vários estudos clínicos têm demonstrado sua versatilidade para compartimentalizar e modificar o comportamento de fármacos. Os lipossomas são capazes de modificar várias propriedades de fármacos, tais como sua farmacocinética e, no caso de fármacos lipofílicos, sua solubilidade e biodisponibilidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito das dispersões lipídicas contendo PRZ e sua eficácia in vivo contra a cepa tolerante BH. O transporte do fármaco através da membrana intestinal foi avaliado empregando o modelo do saco intestinal invertido. / Abstract: Schistosomiasis is a parasitic infection caused by trematode of the genus Schistosoma. It affects approximately 200 million people, killing as many as 280.000 people per year, with a large percentage of infected individuals residing in Africa. Praziquantel (PRZ) is active against all species of Schistosoma and it is considered the drug of choice for the treatment of such disease. However, its low water solubility and the risk of parasite resistance or tolerance to PRZ justify the importance to develop an alternative technology to obtain a pharmaceutical product that can increase the therapeutic efficacy and improve the bioavailability of this drug. Liposomes have been successfully used in the pharmaceutical area and some clinical studies have demonstrated its versatility to compartmentalize and to modify the drug behavior. Liposomes are able to modify several properties of a drug, such as its pharmacokinetics and, in the case of lipophilic drugs, their solubility and bioavailability. The aim of this work was to evaluate the effect of lipid dispersions containing PRZ and its in vivo efficacy against a BH tolerant strain. The transport of the drug through the intestinal membrane was evaluated by means of the everted gut sac model. In order to assess the effect of increasing both PC and PRZ concentrations during the structuration of these systems, they were characterized by means of SAXS, rheology, dynamic light scattering and polarized light microscopy. / Mestre

O presente trabalho apresenta o estudo físico-químico da interação de lipossomas miméticos de plaquetas humanas (LM) com a urease de jack bean (JBU), bem como a interação com o surfactante Triton X-100. Realizou-se, também, um estudo físico-químico preliminar de LM com gangliosídeos (GG) em sua composição e a interação com a JBU e com o Triton X-100. Os LM foram preparados pelo método de evaporação em fase reversa. A interação da JBU e do Triton X-100 com os LM foi analisada pelas técnicas de Microscopia Óptica de Luz Polarizada (POM), Espalhamento de Luz Dinâmico (DLS), Espalhamento de Raios-X a Baixo Ângulo (SAXS) e Velocimetria de Espalhamento de Luz (PZ). O estudo da interação de LM com a JBU revelou uma significativa mudança nas dimensões dos LM, que se mostrou mais pronunciada com uma maior concentração de JBU. Os dados de SAXS revelaram mudanças estruturais na membrana lipossômica, indicando que a JBU aumenta a distância de repetição lamelar, enquanto que o Triton X-100 diminui. Observou-se, também, uma mudança no potencial elétrico superficial dos LM na presença do JBU e do Triton X-100. Os LM com GG apresentaram um perfil de SAXS característico de lipossomas unilamerales, diferentemente dos LM sem GG, indicando que os GG foram incorporados na membrana. Os dados de SAXS sugerem que a JBU esteja interagindo com GG dos LM e não com a membrana lipossômica. / This work presents the physical-chemical study of platelets mimetic liposomes (LM) interaction with jack bean urease (JBU), as well as interaction with the surfactant Triton X-100. The preliminary physical-chemical study was carried out with LM content gangliosides (GG) in its composition and its interaction with JBU and Triton X-100. The LM were prepared by reverse phase evaporation. The interaction of JBU and Triton X-100 with LM was analyzed by Polarized Optical Microscopy (POM), Dynamic Light Scattering (DLS), Small Angle X-ray Scattering (SAXS) and Velocimetry Light Scattering (PZ). The study of the interaction of LM with JBU revealed a significant change in the LM dimensions, which was more pronounced with a higher concentration of JBU. The SAXS data indicate structural changes in the liposome membrane, indicating that the JBU cause an increase in the lamellar repeat distance, while the Triton X-100 decreases. The surface electric potential changed in the presence of JBU and Triton X-100 in the LM. The LM with GG showed a SAXS profile characteristic of unilamerales liposomes, unlike of LM without GG, indicating that the GG were incorporated into the membrane. The SAXS data suggest that JBU interacts with GG of the LM.

O presente trabalho apresenta o estudo físico-químico da interação de lipossomas miméticos de plaquetas humanas (LM) com a urease de jack bean (JBU), bem como a interação com o surfactante Triton X-100. Realizou-se, também, um estudo físico-químico preliminar de LM com gangliosídeos (GG) em sua composição e a interação com a JBU e com o Triton X-100. Os LM foram preparados pelo método de evaporação em fase reversa. A interação da JBU e do Triton X-100 com os LM foi analisada pelas técnicas de Microscopia Óptica de Luz Polarizada (POM), Espalhamento de Luz Dinâmico (DLS), Espalhamento de Raios-X a Baixo Ângulo (SAXS) e Velocimetria de Espalhamento de Luz (PZ). O estudo da interação de LM com a JBU revelou uma significativa mudança nas dimensões dos LM, que se mostrou mais pronunciada com uma maior concentração de JBU. Os dados de SAXS revelaram mudanças estruturais na membrana lipossômica, indicando que a JBU aumenta a distância de repetição lamelar, enquanto que o Triton X-100 diminui. Observou-se, também, uma mudança no potencial elétrico superficial dos LM na presença do JBU e do Triton X-100. Os LM com GG apresentaram um perfil de SAXS característico de lipossomas unilamerales, diferentemente dos LM sem GG, indicando que os GG foram incorporados na membrana. Os dados de SAXS sugerem que a JBU esteja interagindo com GG dos LM e não com a membrana lipossômica. / This work presents the physical-chemical study of platelets mimetic liposomes (LM) interaction with jack bean urease (JBU), as well as interaction with the surfactant Triton X-100. The preliminary physical-chemical study was carried out with LM content gangliosides (GG) in its composition and its interaction with JBU and Triton X-100. The LM were prepared by reverse phase evaporation. The interaction of JBU and Triton X-100 with LM was analyzed by Polarized Optical Microscopy (POM), Dynamic Light Scattering (DLS), Small Angle X-ray Scattering (SAXS) and Velocimetry Light Scattering (PZ). The study of the interaction of LM with JBU revealed a significant change in the LM dimensions, which was more pronounced with a higher concentration of JBU. The SAXS data indicate structural changes in the liposome membrane, indicating that the JBU cause an increase in the lamellar repeat distance, while the Triton X-100 decreases. The surface electric potential changed in the presence of JBU and Triton X-100 in the LM. The LM with GG showed a SAXS profile characteristic of unilamerales liposomes, unlike of LM without GG, indicating that the GG were incorporated into the membrane. The SAXS data suggest that JBU interacts with GG of the LM.

O presente trabalho apresenta o estudo físico-químico da interação de lipossomas miméticos de plaquetas humanas (LM) com a urease de jack bean (JBU), bem como a interação com o surfactante Triton X-100. Realizou-se, também, um estudo físico-químico preliminar de LM com gangliosídeos (GG) em sua composição e a interação com a JBU e com o Triton X-100. Os LM foram preparados pelo método de evaporação em fase reversa. A interação da JBU e do Triton X-100 com os LM foi analisada pelas técnicas de Microscopia Óptica de Luz Polarizada (POM), Espalhamento de Luz Dinâmico (DLS), Espalhamento de Raios-X a Baixo Ângulo (SAXS) e Velocimetria de Espalhamento de Luz (PZ). O estudo da interação de LM com a JBU revelou uma significativa mudança nas dimensões dos LM, que se mostrou mais pronunciada com uma maior concentração de JBU. Os dados de SAXS revelaram mudanças estruturais na membrana lipossômica, indicando que a JBU aumenta a distância de repetição lamelar, enquanto que o Triton X-100 diminui. Observou-se, também, uma mudança no potencial elétrico superficial dos LM na presença do JBU e do Triton X-100. Os LM com GG apresentaram um perfil de SAXS característico de lipossomas unilamerales, diferentemente dos LM sem GG, indicando que os GG foram incorporados na membrana. Os dados de SAXS sugerem que a JBU esteja interagindo com GG dos LM e não com a membrana lipossômica. / This work presents the physical-chemical study of platelets mimetic liposomes (LM) interaction with jack bean urease (JBU), as well as interaction with the surfactant Triton X-100. The preliminary physical-chemical study was carried out with LM content gangliosides (GG) in its composition and its interaction with JBU and Triton X-100. The LM were prepared by reverse phase evaporation. The interaction of JBU and Triton X-100 with LM was analyzed by Polarized Optical Microscopy (POM), Dynamic Light Scattering (DLS), Small Angle X-ray Scattering (SAXS) and Velocimetry Light Scattering (PZ). The study of the interaction of LM with JBU revealed a significant change in the LM dimensions, which was more pronounced with a higher concentration of JBU. The SAXS data indicate structural changes in the liposome membrane, indicating that the JBU cause an increase in the lamellar repeat distance, while the Triton X-100 decreases. The surface electric potential changed in the presence of JBU and Triton X-100 in the LM. The LM with GG showed a SAXS profile characteristic of unilamerales liposomes, unlike of LM without GG, indicating that the GG were incorporated into the membrane. The SAXS data suggest that JBU interacts with GG of the LM.

Orientadores : Maria Helena Andrade Santana, Carlos Roque Duarte Correia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-28T00:49:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hennies_PaulodeTarso_D.pdf: 4421226 bytes, checksum: dcb3016d64c96afe5b033e24f32f6485 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O desenvolvimento de diversas aplicações dos lipossomas tem sido limitado pela instabilidade da bicamada lipídica, principalmente nas aplicações in vivo. A utilização de lipídios polimerizáveis proporciona a formação de lipossomas mais estáveis após a polimerização, constituindo-se em uma alternativa muito promissora para a administração de medicamentos encapsulados, particularmente por via oral Neste trabalho foram sintetizadas, purificadas e caracterizadas fosfatidilcolinas polimerizáveis contendo o grupo diacetileno nas cadeias acila. Esses grupos foram diferentemente posicionados ao longo de cadeias com mesmo número de átomos de carbono, ou localizados na mesma posição em cadeias de diferentes comprimentos, produzindo os fosfolipídios 1,2-bis(heptadeca-1O,12­diinoil)-sn-glicero-3-fosfatidilcolina (DCS,3PC, Ia), 1,2-bis(tricosa-4,6-diinoil)-sn­glicero-3-fosfatidilcolina (DCZ,lSPC, Ic) e 1,2-bis(tricosa-lO,12-diinoil)-sn-glicero­3-fosfatidilcolina (DCS,9PC, Ib). Lipossomas do tipo unilamelares pequenos (SUV) foram preparados a partir dos lipídios puros, e polimerizados através de radiação ultra-violeta. Eles foram caracterizados através do conteúdo de fosfolipídios, raio hidrodinâmico, cinética de polimerização e estabilidade em presença de tensoativos. Os resultados indicaram o sucesso na síntese do DCS,9PC, fosfolipídio diacetilênico mais usado em lipossomas e disponível comercialmente, e também na síntese de duas novas moléculas, DCS,3PC e DCZ,lSPC, até então inéditas na literatura. Inovações introduzidas no processo de síntese conduziram ao seu aprimoramento, com o uso de reagentes menos agressivos ao meio ambiente, e à obtenção de intermediários mais estáveis. As variações no posicionamento dos grupos diacetilênicos e no comprimento das cadeias produziram bicamadas com diferentes propriedades fisico-químicas. Os lipossomas polimerizados apresentaram-se mais estáveis que os monoméricos. A redução das insaturações do polímero conjugado mostrou-se factível através da reação com diimida. A capacidade de encapsulamento de drogas hidrofilicas nas estruturas formadas com os fosfolipídios puros foi avaliada usando-se o tuberculostático isoniazida / Abstract: Development of liposome applications has been limited by lipid bilayer instability, mainly for in vivo applications. Polymerizable lipids leads to more stable liposomes afier polymerization process, which represents a promising altemative for drug delivery by the oral administration route specially. In this work, diacetylenic polymerizable phoshpolipids analogous to phosphatidylcholine were synthesized, purified and caracterized. Diacetylenic groups were located at different positions in acyl chains with the same lenght (23 carbon atoms), or located at the same position in acyl chains with different lenght, generating the following phospholipids: 1,2-bis(heptadeca-l O, 12-diynoyl)-sn-glycero-3 phosphatidylcholine (DCS,3PC, Ia), 1,2-bis(tricosa-4,6-diynoyl)-sn-glycero-3­phosphatidylcholine (DC2,ISPC, Ic), and 1,2-bis(tricosa-lO,12-diynoyl)-sn-glycero­3-phosphatidylcholine (DCS,9PC, Ib). Small unilamellar vesicles (SUV) were prepared ITom pure diacetylenes and polymerized by ultra-violet (UV) radiation. Liposomes were characterized by their lipid contents, hydrodynamic radius, polymerization kinetics and stability in the presence of surfactants. Synthesis of DCS,9PC, the only commercially available and the most used polymerizable diacetylenic phospholipid, was reached, as well as the synthesis of two new molecules, DCs,JPC and DC2,lsPC. Innovation introduced in the synthesis process has lead to its improvemment by using environrnenta11ess aggressive reagents and obtention of more stable intermediate compounds. Changes on diacetilenic group positioning and acyl chain length generated lipid bilayers with different physical­chemical properties. Polymerized liposomes were more stable than the corresponding monomeric liposomes. Insaturations of the polymeric conjugated chain could be reduced by reaction with diimide molecules. The trapping ability of hydrophilic drugs in the lipid aggregates was evaluated for the tubercu1ostatic isoniazid / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador : Francisco B. T. Pessine / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:13:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zalloum_NeifeLilian_M.pdf: 3135979 bytes, checksum: 03ba62db2809953b298ff49d7c749a69 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador: Eneida de Paula / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T12:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_LucianadeMatosAlves_D.pdf: 10779794 bytes, checksum: 3fbc1d9b6c639dc39ff7fc52325d6921 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A dor crônica ou aguda pode ser controlada utilizando-se anestésicos locais (AL), substâncias que agem ao longo dos axônios impedindo a transmissão do estímulo nervoso. Os AL são moléculas anfifílicas e por isso seu mecanismo de ação é modulado por interações com a bicamada lipídica, além de com a proteína canal de sódio voltagem-dependente dos axônios. Muitos AL utilizados clinicamente apresentam toxicidade que é proporcional a potência, sendo um grande desafio o desenvolvimento de medicamentos mais potentes e menos tóxicos. A modificação da molécula anestésica por síntese química é uma alternativa interessante, mas hoje em dia muitos trabalhos estão voltados para o desenvolvimento de sistemas de liberação controlada de drogas. A adição em veículos viscosos, encapsulação em lipossomas ou microesferas e a complexação em ciclodextrinas são exemplos promissores da tecnologia desenvolvida atualmente no sentido de minimizar fatores de risco para os pacientes, além de aumentar a potência medicamentosa, diminuindo a freqüência de aplicação do medicamento. Este trabalho teve como objetivo principal o desenvolvimento de formulações anestésicas locais de longa duração, com Benzocaina (BZC) encapsulada em lipossomas ou complexada com r3-ciclodextrina e o preparo e caracterização de formulações similares de Bupivacaina (BVC) e Lidocaina (LDC) visando a redução da toxicidade dos ALs e prolongamento da duração da anestesia através da liberação controlada dos fármacos. Foram realizados testes de caracterização físico-química quanto à estabilidade e eficácia, além de testes de citotoxicidade in vitro, comparando-se com formulações convencionais. Os anestésicos também foram comparados entre si e em relação aos veículos utilizados. No caso da Benzocaína, a formulação em ciclodextrina mostrou-se menos tóxica em ensaios in vitro além de levar a um aumento significativo da solubilidade aquosa do AL, permitindo sua utilização por via i nfiltrativa , como os demais AL.Testes de toxicidade in vitro demonstraram que houve uma diminuição geral da toxicidade das formulações contendo LDC e BVC. Com isto, a formulação de LDC em lipossomas e a de BVC em ciclodextrina também são promissoras quanto à diminuição da toxicidade e aumento do tempo de ação de anestesia / Abstract: Chronic and acute pain can be treated with local anesthetics (LA), drugs that act along the axon fiber blocking the nervous impulse propagation. Since LA are amphiphilic molecules their mechanism of action is modulated by interactions with the lipid membrane phase, besides specific binding to the voltage-gated Na+ channels in the axons. Many clinically used LA are toxic and a great challenge nowadays consists in the development of new drugs with increased potency and decreased toxicity. The development of new systems for the controlled release of LA is a strategy to increase the anesthetic potency without increasing its toxicity, minimizing risk-factors and decreasing the drugs' frequency of use. Chemical synthesis is an interesting alternative to discover new potential LA drugs, but nowadays the approach towards this aim is the encapsulation of LA into liposomes or either the complexation with Cyclodextrins (CD). Here we report results on the encapsulation in liposomes and complexation in pCD of Benzocaine (BZC), Bupivacaine (BVC) and Lidocaine (LDC), three clinically used LA, in order to reduce their toxicity and increase the potency. The formulations were characterized using different physico-chemical techniques in relation to the stability and efficacy. In vitro tests were used to access the citotoxicity of the formulations in comparison to the commercial LA formulation. Benzocaine's formulation in cyclodextrin was less toxic to in vitro assays and increased the aqueous solubility of the LA, leading to an infiltrative solution as well as the other LA. Toxicity tests in vitro demonstrated that a general decrease of the toxicity in the formulations containing LDC and BVC was achieved. The liposomal LDC formulation and the cyclodextrin BVC formulation are promising in relation to the decrease in the toxicity and to prolong the anesthesia / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-24T18:58:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_Fernanda_M.pdf: 4297913 bytes, checksum: 73adb4a049514ee29caec993005d54d4 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Magnetolipossomas são vesículas formadas pela adsorção de fosfolipídios na superfície de partículas de um fluido magnético coloidal, tal como a magnetita. Essas vesículas apresentam uma estrutura na qual os fosfolipídios, agregados na forma de bicamada, encapsulam o ferrofluido no seu interior. Os lipossomas assim constituídos preservam as propriedades da sua bicamada lipídica, além disso podem ser capturados da solução ou direcionados para sítios específicos pela ação de um alto gradiente de campo magnético. Atualmente, as pesquisas no campo de partículas magnéticas vêm se intensificando pela importância de suas aplicações em várias áreas da ciência. A literatura sobre magnetolipossomas, porém, ainda é escassa. Os trabalhos concentram-se na preparação e caracterização de vesículas constituídas de um único componente lipídico, sem modificações químicas na superfície. As principais aplicações estudadas foram na área médica, mais especificamente na liberação controlada de medicamentos. Neste trabalho, magnetolipossomas foram preparados e caracterizados para aplicações em processos de adsorção por afinidade. Essas aplicações contemplam a utilização de lipossomas em terapia extracorpórea, como biossensores, em diagnóstico, além de veículos para encapsulamento e liberação controlada de medicamentos. A potencialidade do sistema foi analisada na adsorção da tripsina utilizando p-aminobenzamidina, PAB, como ligante de afinidade. Os magnetolipossomas foram preparados por adsorção dos fosfolipídios dimiristoil fosfatidil etanolamina, DMPE, e dimiristoil fosfatidil colina, DMPC, na superficie de magnetita coloidal, previamente sintetizada a partir de cloretos de ferro e estabilizada com ácido láurico. Essas vesículas foram capturadas da solução através de um sistema de magnetoforese de alto gradiente. A superfície dos magnetolipossomas foi modificada através da ligação covalente de PAB, um inibidor da tripsina. As vesículas foram caracterizadas quanto ao diâmetro, estabilidade na presença de tensoativo, teor de fosfolipídios, magnetita, e PAB ligado à superfície. Os resultados obtidos mostraram que a relação de saturação dos fosfolipídios adsorvidos sobre a magnetita foi de 1,29 ± 0,04 mmol de fosfolipídios/g de magnetita, obtida em aproximadamente 40 horas de diálise. A concentração de fosfolipídios na monocamada foi de 0,4 mmol de fosfolipídios/g de magnetita. A constante de associação, calculada pelo ajuste dos dados à Equação de Langmuir foi de 11,3 'mM POT. ¿1¿. Os dados da cinética de adsorção obedeceram a um modelo de pseudo primeira ordem, com uma constante da taxa de reação de 0,066 ± '0,002 POT. h-1¿, e um tempo de 10,5 ± 0,3 horas para se atingir 50% da saturação. A retenção das partículas pelo sistema de magnetoforese foi de 100% e o suporte mostrou boa estabilidade e capacidade para reutilização. Para uma concentração de PAB na superfície das vesículas de 8,9 nmol/ml,obteve-se uma adsorção de 13% de tripsina, quantificada pela sua atividade. Essas características demonstram que há uma grande potencialidade para aplicações dos magnetolipossomas em vários processos que utilizam adsorção por afinidade / Abstract: Magnetoliposomes are vesicles which are made by adsorption of phospholipids in the surface of particles of the colIoidal magnetic fluid, like magnetite. These particles have structures formed by phospholipids in bilayer which encapsule magnetite inside of them. These liposomes preserve almost alI properties of lipidic bilayer, besides to be captured from solution or take to specific sites, by action of high gradient magnetic field. Nowadays, the research in the field of magnetic particles increases because their applications are important in various areas of science. However, the literature about magnetoliposomes is still not long. The studies are mainly about the preparation and characterization of the vesicles made by one lipidic component only, without chemical modifications in the surface. The main applications of the magnetoliposomes are in the medical area, as vehicles to the encapsulating of therapeutic drugs and their control release. In this work, magnetoliposomes were prepared and characterized for applications in process of adsorption by affinity. These applications lead to the use of liposomes in extrabody therapy, as biosensor, in diagnostic, and to the encapsulating and controlled release of drugs. The potenciality of the system was analyzed in the adsorption of the trypsin by the use of paminobenzamidine, PAB, like affinity ligand. The magnetoliposomes were prepared using dimyristoil phosphatidyl ethanolamine, DMPE, and dimyristoil phosphatidyl choline, DMPC phospholipids, on the surface of colIoidal magnetite, which are made from iron chlorides and stabilized by lauric acid. These vesicles were captured ITomthe medium through a high gradient magnetophoresis system. The affinity magnetoliposomes were prepared by covalently attaching PAB, a trypsin inhibitor, to the surface of vesicles. Vesicles were characterized by diameter measurements phospholipids, magnetite, and PAB concentrations, and by their stability in the presence of surfactant. The obtained results showed that the relation of saturation of the adsorbed phopholipids on the magnetite was 1,29 ± 0,04 mmol of phospholipids/g of magnetite, obtained in about 40 hours of dialysis. The concentration of the phospholipids in the monolayer was 0,4 mmol of phospholipids/g of magnetite. The association constant, obtained by adjustment of the results to the Langmuir Equation was 11,3 'mM POT. ¿1¿I. The results of the kinetic of adsorption obeyed to the modelof pseudo firstorder, witha reactionrate of 0,066 ± '0,002 POT. h-1¿, and a time of 10,5 ± 0,3 hours to reaches 50% of the saturation. The retention of the particles by the system of magnetophoresis was 100% and the magnetoliposomes showed good stability and ability to reutilization. A adsorption of 13% of the trypsin, which was quantified by its activity, was obtained to a concentration of 8,9 nmol /ml of the PAB in the surface ofvesicles. These characteristics show that there is a large potenciality to applications of the magnetoliposomes in several processes which use adsorption by affinity / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:42:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 janaiara_cunha_ioc_mest_2014.pdf: 5340118 bytes, checksum: d30f5606e8d7731758e5708a036d73ec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os primatas neotropicais dos gêneros Saimiri e Aotus são modelos recomendados pela OMS para estudos experimentais da malária humana, pois são susceptíveis à infecção por plasmódios humanos e reproduzem de forma relativamente confiável a patologia e a imunidade observadas em humanos. Eles apresentam, entretanto, uma importante limitação: a necessidade de se esplenectomizar o animal para que as parasitemias sejam elevadas e consistentes. O objetivo desse estudo foi avaliar a influência da administração de lipossomo-clodronato (LC), utilizado para depletar monócitos/macrófagos em vários modelos experimentais, na infecção por Plasmodium falciparum em Saimiri sciureus. Realizou-se um experimento in vitro utilizando cultivo de esplenócitos de Saimiri, incubados em presença ou não de LC, quantificando-se a depleção de macrófagos por citometria de fluxo. Primeiro experimento: foram utilizados seis animais não esplenectomizados divididos em dois grupos que receberam 1mL PBS ou de LC (5mg/mL) a partir do dia 0 de infecção com inóculo contendo 106 hemácias parasitadas com P. falciparum (cepa FUP). Segundo experimento: foram utilizados 14 animais não esplenectomizados divididos em seis grupos - três grupos não infectados, com dois animais cada, que receberam 1mL PBS, ou 0,5mL ou 1mL de LC e três grupos infectados no dia 0 que receberam as mesmas administrações; sendo que o grupo que recebeu PBS tinha dois animais e os grupos que receberam LC tinham três animais cada. Em ambos os experimentos as administrações foram por via intravenosa duas vezes por semana a partir de dia 0. Após eutanásia, foram realizados exames histopatológicos e ensaio de expressão de citocinas em células esplênicas No ensaio in vitro o LC induziu uma citotoxicidade dose-dependente de monócitos/macrófagos. No primeiro experimento o grupo tratado com LC apresentou aumento na parasitemia alcançando valores superiores a 20% no d11 e requerendo tratamento. O grupo tratado com PBS apresentou parasitemia de 0,029% a 8,15% e foi capaz de controlar espontaneamente a infecção no d18. No segundo experimento os animais infectados que receberam 0,5mL LC apresentaram parasitemias mais elevadas (pico entre 16,1% e 26,7% entre d10 e d14) do que os outros grupos (grupo PBS - picos entre 6,3% e 17,7% entre d12 e d13, e grupo 1mL LC \2013 pico entre 4,8% e 8,8% entre d11 e d15). Em todos os animais infectados, a temperatura foi relacionada com a presença de parasitemia e a hemoglobina e o hematócrito diminuíram alcançando valores mínimos quando parasitos já não são mais detectáveis na circulação. Os animais toleraram clinicamente a administração de LC, mas apresentaram sinais histopatológicos de toxicidade hepática. Em conclusão, o LC é capaz de promover parasitemias mais altas em infecções de P. falciparum em primatas S. sciureus. A infecção esteve associada a evidências de depleção parcial de macrófagos como diferenças no tamanho dos baços e menor presença de ferro nos baços e fígados dos animais que receberam LC. Ensaios ainda precisam ser realizados para se estabelecer volumes mínimos funcionais e superar o problema da aparente toxicidade hepática / The WHO recommends the Neotropical primates of the genus Saimiri and Aotus as models for experimental studies of human malaria. The se monkeys are susceptible to infection by human P lasmodi a and reproduce relatively reliably the pathology and immunity observed in man . However, the model has a s limitation the need of splenectomy for the obtention of high and consistent parasitemias . The aim was to evaluate the influence of administration of clo dronate - liposome (CL), used to deplete monocytes/macrophages in several experimental models, in Plasmodium falciparum infected Saimir i sciureus . We conducted an experiment using in vitro culture of spleen cells from Saimiri incubated in the presence or abs ence of C L and quantifying the depletion of macrophages by flow cytometry. Other experiment s were: Exp. 1 : six non splenectomized animals were divided into two groups receiv ing 1 mL of PBS or 1 mL of C L (5mg/mL) from the d ay 0 of infection with 10 6 P. falc iparum (FUP strain) parasitized erythrocytes . Exp. 2 : 14 non - splenectomized animals were divided in six groups - three non - infected groups , with two animals each, receiv ing 1mL PBS, 0.5 mL or 1 mL CL ; and three infected groups receiving the same injections . The group that received PBS had two animals each; and the groups that received CL had three animals each . In both experiments the injections were intravenous, two times a week from d0. After euthanasia, histopathological examination and testing of cytoki ne expression in splenic cells were performed. In vitro assay : the CL induced a dose - dependent monocyte / macrophage cytotoxicity. In Exp 1, the CL treated group showed an increase in parasitemia reaching values higher than 20% at d11 and requir ed treatm ent. T he group treated with PBS showed parasitemia from 0.029 % to 8.15% and was able to spontaneously control the infection by d18. In Exp 2, the infected animals receiv ing 0.5 ml CL showed higher parasitaemia (peak s between 16.1% and 26.7% between d10 and d14) than the other groups (PBS group - peaks between 6.3% and 17 7% between d12 and d13, and 1mL CL group - peak between 4.8% and 8.8% between d11 and d15). In all infected animals, the temperature was related to the presence of parasitaemia and hemoglob in and hematocrit decreased , reaching minimum values during or after clearance of the parasite. The animals tolerated clinically the CL administration but showed histopahological signs of liver toxicity. Animals receiving CL showed less iron in the spl ee n , suggesting a decreased erythrophagocitosis . In conclusion, the CL is capable of promoting higher parasitemia in P. falciparum infect ed S. sciureus primates. The infection was associated with evidence s of partial depletion of macrophages , such as differe nces in the spleen size s and decreased presence of iron in the spleens and livers of animals receiv ing CL. However , more tests still need to be conducted to define the lower volum es of LC that are still functional , to overcome the problem of the apparent l iver toxicity.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-11Bitstream added on 2014-06-13T20:32:57Z : No. of bitstreams: 1 souza_alr_me_arafcf.pdf: 951216 bytes, checksum: 70cd598a05fc4ed9f5bbfed1f2fff0df (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A esquistossomose é uma infecção parasitária causada pelo trematódeo do gênero Schistosoma. Afeta aproximadamente 200 milhões de pessoas, matando cerca de 280.000 pessoas por ano, com uma grande porcentagem dos indivíduos infectados residindo na África. Praziquantel (PRZ) é ativo contra todas as espécies de Schistosoma e é considerado o fármaco de escolha para o tratamento de tal doença. No entanto, sua baixa solubilidade em água e o risco de resistência ou tolerância do parasita ao PRZ justificam a importância de desenvolver uma alternativa tecnológica para obtenção de um produto farmacêutico que pode aumentar a eficácia terapêutica e melhorar a biodisponibilidade deste fármaco. Lipossomas têm sido utilizados com sucesso na área farmacêutica e vários estudos clínicos têm demonstrado sua versatilidade para compartimentalizar e modificar o comportamento de fármacos. Os lipossomas são capazes de modificar várias propriedades de fármacos, tais como sua farmacocinética e, no caso de fármacos lipofílicos, sua solubilidade e biodisponibilidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito das dispersões lipídicas contendo PRZ e sua eficácia in vivo contra a cepa tolerante BH. O transporte do fármaco através da membrana intestinal foi avaliado empregando o modelo do saco intestinal invertido. / Schistosomiasis is a parasitic infection caused by trematode of the genus Schistosoma. It affects approximately 200 million people, killing as many as 280.000 people per year, with a large percentage of infected individuals residing in Africa. Praziquantel (PRZ) is active against all species of Schistosoma and it is considered the drug of choice for the treatment of such disease. However, its low water solubility and the risk of parasite resistance or tolerance to PRZ justify the importance to develop an alternative technology to obtain a pharmaceutical product that can increase the therapeutic efficacy and improve the bioavailability of this drug. Liposomes have been successfully used in the pharmaceutical area and some clinical studies have demonstrated its versatility to compartmentalize and to modify the drug behavior. Liposomes are able to modify several properties of a drug, such as its pharmacokinetics and, in the case of lipophilic drugs, their solubility and bioavailability. The aim of this work was to evaluate the effect of lipid dispersions containing PRZ and its in vivo efficacy against a BH tolerant strain. The transport of the drug through the intestinal membrane was evaluated by means of the everted gut sac model. In order to assess the effect of increasing both PC and PRZ concentrations during the structuration of these systems, they were characterized by means of SAXS, rheology, dynamic light scattering and polarized light microscopy.