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Estudo cinético da produção de exopolissacarídeo por Lasiodiplodia theobromae em biorreator agitado e aerado de baixo cisalhamento / Kinetic study of the production of exopolysaccharide by Lasiodiplodia theobromae in agitated and aerated low shear bioreactor

Tabuchi, Stéphanie Caroline Tavares 10 November 2017 (has links)
Os polissacarídeos possuem diversas aplicações industriais devido a sua ampla variedade de propriedades físico-químicas. Além desses empregos tradicionais, pesquisas mais recentes estão impulsionando o uso de polissacarídeos para novas aplicações, principalmente na área de terapia farmacêutica. Com o objetivo de ampliar a produção industrial de polissacarídeos microbianos, pesquisas têm se concentrado nos exopolissacarídeos (EPS), que apresentam produtividade elevada e processos de extração e purificação mais simples quando comparados aos polímeros tradicionais. A lasiodiplodana, uma ?-(1->6)-D-glucana, é um EPS produzido por Lasiodiplodia theobromae, um fungo filamentoso característico de regiões tropicais e patógeno de mais de 500 espécies vegetais. Na produção de EPS observa-se que, como resultado do crescimento e da produção do biopolímero, o meio de cultivo torna-se mais viscoso, tornando difícil a manutenção da homogeneidade no biorreator e, consequentemente, prejudicando a transferência de massa e oxigênio no meio. Nos cultivos em que ocorrem mudanças na reologia do meio e nos quais são utilizados fungos filamentosos, sensíveis ao cisalhamento, o uso de biorreatores convencionais, como o Stirred Tank Reactor (STR) e o Airlift, não é adequado. Nesse contexto, no presente estudo tem-se como objetivo estudar a cinética de crescimento, consumo de substrato e produção de EPS pelo fungo filamentoso Lasiodiplodia theobromae, a partir de glicose e de glicerol, no Biorreator Agitado e Aerado de Baixo Cisalhamento (BAABC) e compará-lo com o STR. No estudo inicial, realizado em frascos agitados, a maior produção de EPS (6,49 ± 0,03 g/L) foi alcançada pelo ensaio G, que continha a maior concentração glicose testada (50 g/L) e a menor concentração de extrato de levedura (3 g/L). Quando se utilizou glicerol como fonte de carbono, a maior produção de EPS (3,39 ± 0,06 g/L) foi observada no Ensaio O, que continha 30 g/L de glicerol e a maior concentração de fonte de nitrogênio testada (12 g/L de extrato de levedura). Nos ensaios em biorreatores, quando utilizou-se glicose como fonte de carbono observou-se que o BAABC com controle de temperatura proporcionou uma produção de 3,17 ± 0,16 g/L de EPS, concentração inferior à obtida em frascos, porém bastante superior à obtida no biorreator STR (0,70 ± 0,12 g/L). Para os meios contendo glicerol, o biorreator STR proporcionou uma produção de EPS de 3,02 ± 0,19 g/L, enquanto no BAABC a concentração de EPS obtida foi muito menor (1,45 ± 0,25 g/L). Analisando-se, porém, a concentração máxima de biomassa obtida (28,86 ± 1,46 g/L) bem como os parâmetros cinéticos relacionados (YX/S e QX), nota-se que a produção de biomassa foi muito superior e mais eficiente no BAABC. Apesar das diferenças morfológicas visualmente observadas e confirmadas por meio de microscopia óptica nos EPS obtidos a partir de glicose e de glicerol, as análises de Difração de raios-X e Espectroscopia de absorção na região do infravermelho com Transformada de Fourier permitiram evidenciar a similaridade estrutural entre ambos os EPS. / Polysaccharides have several industrial applications because of their wide variety of physicochemical properties. In addition to these traditional applications, recent research is driving the use of polysaccharides towards new applications, especially in the field of pharmaceutical therapy. With the aim of increasing the industrial production of microbial polysaccharides, research has focused on exopolysaccharides (EPS), which have high productivity and simpler extraction and purification processes when compared to traditional polymers. Lasiodiplodana, a ?-(1->6)-D-glucan, is an EPS produced by Lasiodiplodia theobromae, a filamentous fungus characteristic of tropical areas and pathogenic of more than 500 plant species. In EPS production, as a result of the growth and biopolymer production, the culture medium becomes more viscous, making it difficult to maintain homogeneity inside the bioreactor and, consequently, harming the transfer of mass and oxygen in the medium. In cultures where changes in media rheology occur and in which shear-sensitive filamentous fungi are used, the use of conventional bioreactors, such as Stirred Tank Reactor (STR) and Airlift, is not appropriate. In this context, the objective of the present study was to study the growth kinetics, substrate consumption and EPS production by the Lasiodiplodia theobromae filamentous fungus, from glucose and glycerol, in the Low-Shear Aerated-Agitated Bioreactor (LSAAB) and compare it with the STR. In the initial study, conducted in shaken flasks, the highest EPS production (6.49 ± 0.03 g/L) was achieved by the G test, which contained the highest glucose concentration tested (50 g/L) and the lowest concentration of yeast extract (3 g/L). When glycerol was used as the carbon source, the highest EPS yield (3.39 ± 0.06 g/L) was observed in Test O, which contained 30 g/L glycerol and the highest concentration of nitrogen source tested (12 g/L of yeast extract). In the bioreactor trials, when glucose was used as the carbon source, it was observed that the LSAAB with temperature control provided a production of 3.17 ± 0.16 g/L of EPS, a concentration lower than that obtained in flasks, but rather higher than that obtained in the STR bioreactor (0.70 ± 0.12 g/L). For the glycerol-containing media, the STR bioreactor produced 3.02 ± 0.19 g/L of EPS, while in LSAAB the EPS concentration obtained was much lower (1.45 ± 0.25 g/L). However, analyzing the maximum concentration of biomass obtained (28.86 ± 1.46 g/L) as well as the related kinetic parameters (YX/S and QX), biomass production was much higher and more efficient in LSAAB. In spite of the visually observed morphological differences confirmed by optical microscopy in EPS obtained from glucose and glycerol, X-ray diffraction and absorption spectroscopy analyzes in the infrared region with Fourier transform showed the structural similarity between both EPS.
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Estudo cinético da produção de exopolissacarídeo por Lasiodiplodia theobromae em biorreator agitado e aerado de baixo cisalhamento / Kinetic study of the production of exopolysaccharide by Lasiodiplodia theobromae in agitated and aerated low shear bioreactor

Stéphanie Caroline Tavares Tabuchi 10 November 2017 (has links)
Os polissacarídeos possuem diversas aplicações industriais devido a sua ampla variedade de propriedades físico-químicas. Além desses empregos tradicionais, pesquisas mais recentes estão impulsionando o uso de polissacarídeos para novas aplicações, principalmente na área de terapia farmacêutica. Com o objetivo de ampliar a produção industrial de polissacarídeos microbianos, pesquisas têm se concentrado nos exopolissacarídeos (EPS), que apresentam produtividade elevada e processos de extração e purificação mais simples quando comparados aos polímeros tradicionais. A lasiodiplodana, uma ?-(1->6)-D-glucana, é um EPS produzido por Lasiodiplodia theobromae, um fungo filamentoso característico de regiões tropicais e patógeno de mais de 500 espécies vegetais. Na produção de EPS observa-se que, como resultado do crescimento e da produção do biopolímero, o meio de cultivo torna-se mais viscoso, tornando difícil a manutenção da homogeneidade no biorreator e, consequentemente, prejudicando a transferência de massa e oxigênio no meio. Nos cultivos em que ocorrem mudanças na reologia do meio e nos quais são utilizados fungos filamentosos, sensíveis ao cisalhamento, o uso de biorreatores convencionais, como o Stirred Tank Reactor (STR) e o Airlift, não é adequado. Nesse contexto, no presente estudo tem-se como objetivo estudar a cinética de crescimento, consumo de substrato e produção de EPS pelo fungo filamentoso Lasiodiplodia theobromae, a partir de glicose e de glicerol, no Biorreator Agitado e Aerado de Baixo Cisalhamento (BAABC) e compará-lo com o STR. No estudo inicial, realizado em frascos agitados, a maior produção de EPS (6,49 ± 0,03 g/L) foi alcançada pelo ensaio G, que continha a maior concentração glicose testada (50 g/L) e a menor concentração de extrato de levedura (3 g/L). Quando se utilizou glicerol como fonte de carbono, a maior produção de EPS (3,39 ± 0,06 g/L) foi observada no Ensaio O, que continha 30 g/L de glicerol e a maior concentração de fonte de nitrogênio testada (12 g/L de extrato de levedura). Nos ensaios em biorreatores, quando utilizou-se glicose como fonte de carbono observou-se que o BAABC com controle de temperatura proporcionou uma produção de 3,17 ± 0,16 g/L de EPS, concentração inferior à obtida em frascos, porém bastante superior à obtida no biorreator STR (0,70 ± 0,12 g/L). Para os meios contendo glicerol, o biorreator STR proporcionou uma produção de EPS de 3,02 ± 0,19 g/L, enquanto no BAABC a concentração de EPS obtida foi muito menor (1,45 ± 0,25 g/L). Analisando-se, porém, a concentração máxima de biomassa obtida (28,86 ± 1,46 g/L) bem como os parâmetros cinéticos relacionados (YX/S e QX), nota-se que a produção de biomassa foi muito superior e mais eficiente no BAABC. Apesar das diferenças morfológicas visualmente observadas e confirmadas por meio de microscopia óptica nos EPS obtidos a partir de glicose e de glicerol, as análises de Difração de raios-X e Espectroscopia de absorção na região do infravermelho com Transformada de Fourier permitiram evidenciar a similaridade estrutural entre ambos os EPS. / Polysaccharides have several industrial applications because of their wide variety of physicochemical properties. In addition to these traditional applications, recent research is driving the use of polysaccharides towards new applications, especially in the field of pharmaceutical therapy. With the aim of increasing the industrial production of microbial polysaccharides, research has focused on exopolysaccharides (EPS), which have high productivity and simpler extraction and purification processes when compared to traditional polymers. Lasiodiplodana, a ?-(1->6)-D-glucan, is an EPS produced by Lasiodiplodia theobromae, a filamentous fungus characteristic of tropical areas and pathogenic of more than 500 plant species. In EPS production, as a result of the growth and biopolymer production, the culture medium becomes more viscous, making it difficult to maintain homogeneity inside the bioreactor and, consequently, harming the transfer of mass and oxygen in the medium. In cultures where changes in media rheology occur and in which shear-sensitive filamentous fungi are used, the use of conventional bioreactors, such as Stirred Tank Reactor (STR) and Airlift, is not appropriate. In this context, the objective of the present study was to study the growth kinetics, substrate consumption and EPS production by the Lasiodiplodia theobromae filamentous fungus, from glucose and glycerol, in the Low-Shear Aerated-Agitated Bioreactor (LSAAB) and compare it with the STR. In the initial study, conducted in shaken flasks, the highest EPS production (6.49 ± 0.03 g/L) was achieved by the G test, which contained the highest glucose concentration tested (50 g/L) and the lowest concentration of yeast extract (3 g/L). When glycerol was used as the carbon source, the highest EPS yield (3.39 ± 0.06 g/L) was observed in Test O, which contained 30 g/L glycerol and the highest concentration of nitrogen source tested (12 g/L of yeast extract). In the bioreactor trials, when glucose was used as the carbon source, it was observed that the LSAAB with temperature control provided a production of 3.17 ± 0.16 g/L of EPS, a concentration lower than that obtained in flasks, but rather higher than that obtained in the STR bioreactor (0.70 ± 0.12 g/L). For the glycerol-containing media, the STR bioreactor produced 3.02 ± 0.19 g/L of EPS, while in LSAAB the EPS concentration obtained was much lower (1.45 ± 0.25 g/L). However, analyzing the maximum concentration of biomass obtained (28.86 ± 1.46 g/L) as well as the related kinetic parameters (YX/S and QX), biomass production was much higher and more efficient in LSAAB. In spite of the visually observed morphological differences confirmed by optical microscopy in EPS obtained from glucose and glycerol, X-ray diffraction and absorption spectroscopy analyzes in the infrared region with Fourier transform showed the structural similarity between both EPS.
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Caracterização molecular e controle de fungos da família Botryosphaeriaceae em fruteiras tropicais / Molecular characterization and fungi control family Botryosphaeriaceae associated with tropical fruit

Lima, Ingrid Bernardo de January 2016 (has links)
LIMA, Ingrid Bernardo de. Caracterização molecular e controle de fungos da família Botryosphaeriaceae em fruteiras tropicais. 2016. 138 f. Tese (Doutorado em Agronomia/Fitotecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2016-08-22T22:56:47Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_iblcoutinho.pdf: 1992689 bytes, checksum: 641c3a45ba47627586eded38cb628f64 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-23T18:27:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_iblcoutinho.pdf: 1992689 bytes, checksum: 641c3a45ba47627586eded38cb628f64 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T18:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_iblcoutinho.pdf: 1992689 bytes, checksum: 641c3a45ba47627586eded38cb628f64 (MD5) Previous issue date: 2016 / The family Botryosphaeriaceae (Ascomycota, Botryosphaeriales) encompasses several ecologically diverse fungal species, which are usually isolated as endophytes or pathogens, from various woody hosts. The present work aimed to identify morphologically and by molecular techniques as well as to assess the pathogenicity of isolates of Botryosphaeriaceous fungi obtained from fruit plants grown in the Brazilian Northeastern region. After the isolation of DNA from the fungi the combined analyses of fragments sequency of transcribed spacer (ITS) of ribosomal DNA, translation elongation factor 1-α (TEF-1α) and β-tubulina (βt) were used to determine the phylogenetic relationships among the isolates which lead to identification of six fungal species of Lasiodiplodia, two of Neofusicoccum, one of Pseudofusicocuum and one of Neoscytalidium associated with die-back and cankers on the following host plants: Lasiodiplodia brasiliense (Manilkara zapota, Mangifera indica and Spondias purpurea), L. caatinguensis sp. nov (Anarcadium occidentale, S. purpurea, S. mombin and Citrus sinensis), L. euphorbicola (Annona muricata and Cocos nucifera), L. theobromae (S. purpurea, Talisia esculenta and A. occidentale), L. pontae sp. nov (S. purpurea and A. occidentale), L pseudotheobromae (S. purpurea, Tamarindus indica and A. occidentale), Neofusicoccum brasiliense (Psidium guajava), Neofusicoccum kwambonambiense (A. occidentale), Neoscytalidium hyalinum (A. occidentale and M. indica) e Pseudofusicoccum stromaticum (A. occidentale). As far as the morphology of isolates is concerned there were significant differences among them, mainly concerning the culture media and the incubation temperatures adopted. Generally, isolates presented a white mycelial growth, becoming dark after aging. As for pathogenicity all species were pathogenic to fruits of mango as well as to seedlings of A. occidentale and S. purpurea. All species of pathogenic Lasiodiplodia were the young plants of soursop. However, the aggressiveness of the isolates varied as the species and the host species Lasiodiplodia being the most aggressive. The cashew genotype BRS253 behaved as the most susceptible of all genotypes tested, followed by CCP76, BRS189 and BRS226, which did not present any significant difference among them. All the other genotype were considered as moderately resistant, especially BRS274 and Embrapa 51, upon which the fungal isolates showed no pathogenicity differences. Both fungicides tested were able to inhibit the fungal growth in vitro conditions, despite carbendazin had been a little more efficient than tebuconazole. / A família Botryosphaeriaceae (Ascomycota, Botryosphaeriales) é composta por complexos de espécies crípticas endofíticas e patogênicas capazes de provocar sintomas de cancros e morte descendente de ramos a diversos hospedeiros, sobretudo plantas lenhosas, dentre as fruteiras tropicais se destacam. Objetivou-se com o presente estudo realizar a caracterização biológica, molecular e o controle de isolados fúngicos família Botryosphaeriaceae associados a fruteiras tropicais no Nordeste brasileiro. Dentre as técnicas utilizadas estão: o sequenciamento gênico combinado das regiões do espaçador interno transcristo (ITS) do DNA ribossômico, fator de elongação 1-alfa (TEF-1α) e β-tubulina (βt) para a determinação das relações filogenéticas entre os isolados, dados de caracteres morfofisiológicos e patógenico, bem como a avaliação dos métodos de controle químico e genético das espécies identificadas. Diante da caracterização molecular foi possível a identificação de seis espécies do complexo Lasiodiplodia, dentre as quais duas novas espécies, duas espécies de Neofusicoccum, uma de Pseudofusicocuum e uma de Neoscytalidium associadas a diversas fruteiras tropicais. Dentre essas espécies e seus respectivos hospedeiros estão: Lasiodiplodia brasiliense (Manilkara zapota, Mangifera indica e Spondias purpurea), L. caatinguensis sp. nov (Anarcadium occidentale, S. purpurea, S. mombin e Citrus sinensis), L. euphorbicola (Annona muricata e Cocos nucifera), L. theobromae (S. purpurea, Talisia esculenta e A. occidentale), L. pontae sp. nov (S. purpurea e A. occidentale), L pseudotheobromae (S. purpurea, Tamarindus indica e A. occidentale), Neofusicoccum brasiliense (Psidium guajava), Neofusicoccum kwambonambiense (A. occidentale), Neoscytalidium hyalinum (A. occidentale, M. indica) e Pseudofusicoccum stromaticum (A. occidentale). Através da caracterização morfológica dos isolados, percebeu-se grandes semelhanças morfofisiológicas entre os isolados, notando-se variações em taxa de crescimento quando submetidos a diferentes meios de cultura e temperaturas de incubação. Em geral, os isolados apresentaram abundante crescimento micelial, de coloração inicialmente esbranquiçada se tornando escura com a idade. Quanto à patogenicidade, todos os isolados de Botryosphaeriaceae foram patogênicos a frutos de manga, aos diferentes genótipos de cajueiro e as plantas jovens de umbu-cajá. Todas as espécies de Lasiodiplodia foram patogênicas a plantas jovens de gravioleira. No entanto, a agressividade dos isolados variou quanto à espécie e ao hospedeiro, sendo as espécies de Lasiodiplodia as mais agressivas. No que concerne às medidas de controle genético e químico, respectivamente: o genótipo BRS253 foi o mais susceptível as espécies, seguido do CCP76, BRS189 e BRS226 que não diferiram entre si. Os demais genótipos foram moderadamente resistentes, com destaque para BRS274 e Embrapa 51, nos quais as espécies não diferiram em virulência; os fungicidas tebuconazole e carbendazin inibiram o crescimento in vitro das espécies, não obstante o carbendazin tenha se mostrado mais eficiente.
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ReaÃÃo de clones de cajueiro comum à resinose / Reaction of the clones of common cashew resinose

Renato Cesar Moreira 06 June 2011 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O cajueiro (Anacardium occidentale) no nordeste brasileiro caracterizando-se como uma das mais importantes fontes de emprego e renda das populaÃÃes. O lanÃamento de clones de cajueiro tipo anÃo-precoce aumentou a produtividade e qualidade das castanhas e pendÃculos, permitindo uma exploraÃÃo comercial mais vantajosa aos produtores, porem a uniformidade genÃtica deixou os pomares mais vulnerÃveis. A resinose hoje à considerada a principal doenÃa do cajueiro no semiÃrido nordestino. Esse estudo teve por objetivo avaliar a reaÃÃo de genÃtipos de cajueiro do tipo comum à resinose sob condiÃÃes de elevada incidÃncia no semiÃrido. Vinte clones de cajueiro-comum previamente selecionados pelo programa de melhoramento genÃtico da Embrapa AgroindÃstria Tropical foram usados no estudo e dessa forma foi possÃvel concluir que hà fontes de resistÃncia para uso em programas de melhoramento. Os clones CNPAT 06, CNPAT 08, CNPAT 11, CNPAT 12 e CNPAT 13 se apresentara como os mais resistentes a resinose, enquanto que os clones CNPAT 07, CNPAT 09, CNPAT 14, COMUM 05 e COMUM 31 forma os que obtiveram maiores notas de severidade de resinose. Outro importante resultado obtido foi que os clones CNPAT 08, CNPAT 11 e CNPAT 15 apresentaram capacidade de recuperaÃÃo da resinose. Por fim, sugere-se que com a avaliaÃÃo da incidÃncia à possÃvel estimar a severidade de resinose em pomares de cajueiro. / The cashew nut (Anacardium occidentale) represents a social and economic tradition in Brazilian northeastern as one of the most important source of income and labor for its people. The releasing of early-dwarf clones contributed to increase yield and nut and apple quality, allowing gain in profit by small growers, in spite of increase genetic vulnerability of orchards. Cashew gummosis is presently the most important disease of this species in semi-arid regions of northeast. This study aimed to evaluate reactions of common selected clones of cashew to gummosis under high disease pressure of semi-arid region. Twenty clones selected by the cashew breeding program of Embrapa AgroindÃstria Tropical were evaluated for three consecutive years. Clones named CNPAT 06, CNPAT 08, CNPAT 11, CNPAT 12 and CNPAT 13 attained the highest levels of resistance, while CNPAT 07, CNPAT 09, CNPAT 14, COMUM 05 and COMUM 31 otherwise were the most susceptible ones. It was also found that clones CNPAT 08, CNPAT 11 and CNPAT 15 are able to heal gummosis cankers, which points to a new kind of resistance to be considered. Finally, it was shown that monitoring gummosis incidence it is possible to estimate disease severity.
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Intensidade da podridão-da-haste em mamoeiro causada por isolados de Lasiodiplodia theobromae com diferentes níveis de sensibilidade a fungicidas.

GONÇALVES, Amanda de Melo 28 February 2011 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-17T11:48:39Z No. of bitstreams: 1 Amanda de Melo Goncalves.pdf: 469509 bytes, checksum: 85589967175227a912f3d38c09495b82 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T11:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amanda de Melo Goncalves.pdf: 469509 bytes, checksum: 85589967175227a912f3d38c09495b82 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Papaya is a fruit tree common in almost all countries of Tropical America. Its products are used for different uses in textile, pharmaceuticals, food and cosmetics industries. The Brazil is the world's leading producer and most of its production is for export. Several diseases affect the crop and are its main limiting factor, causing major damage to production and marketing. The main losses are responsible for diseases post-harvest, which occur during storage of the product, however, the rot in the middle part of the stem, caused by Lasiodiplodia theobromae, has been highlighting the culture. The disease spreads rapidly and has been observed decimating an entire orchard papaya, the symptoms are initially soaked lesions, showing disintegration of tissues and formation of pits, which under predisposing conditions evolve, surrounding the stem, causing it to overturn. There is little information regarding the development of the disease and prevention is the best control measure. Chemical control is already used when the disease is detected, but there is no product registered for pathosystem in this field. The lack of knowledge of the interaction pathogen-host added to the misuse of these continuous products can result in failure of control. Studies sensitivity to fungicide isolates found not sensitive to these products, which can complicate treatment and control of disease, demonstrating the importance of studying the behavior of these isolates in plants. / O mamoeiro é uma das fruteiras mais comuns em quase todos os países da América Tropical. Seus produtos são empregados para os mais diversos usos nas indústrias têxteis, famacêutica, de alimentos e de cosméticos. O Brasil é o principal produtor mundial e a maior parte da sua produção é destinada à exportação. Várias doenças acometem a cultura e constituem seu principal fator limitante, causando grandes danos na produção e na comercialização. As principais responsáveis pelas perdas são as doenças de pós-colheita, que ocorrem durante o armazenamento do produto, no entanto, uma podridão na parte mediana da haste, causada por Lasiodiplodia theobromae, vem se destacando na cultura. A doença se dissemina rapidamente e tem sido observada dizimando todo um pomar de mamoeiro, os sintomas consistem inicialmente em lesões encharcadas, apresentando desintegração dos tecidos e formação de pontuações, que sob condições predisponentes, evoluem circundando o caule, fazendo-o tombar. Existem poucas informações a respeito do desenvolvimento da doença e a prevenção é a melhor medida de controle. O controle químico já é utilizado quando a doença é detectada, mas não há produto registrado para esse patossistema em campo. A falta de conhecimento da interação patógeno-hospedeiro somada a utilização indevida e contínua desses produtos podem resultar no insucesso do controle. Estudos de sensibilidade a fungicida constataram isolados não sensíveis a esses produtos, fato que pode dificultar o manejo e o controle da doença, demonstrando a importância do estudo do comportamento desses isolados em plantas.
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Condições favoráveis para ocorrência da podridão por lasiodiplodia e métodos alternativos de controle na pós- colheita do maracujá amarelo

SILVA, Erlen Keila Candido e 23 March 2012 (has links)
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-16T16:11:56Z No. of bitstreams: 1 Erlen Keila Candido e Silva.pdf: 1040745 bytes, checksum: ff498b7594207b8fe0b9686268a394aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T16:11:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Erlen Keila Candido e Silva.pdf: 1040745 bytes, checksum: ff498b7594207b8fe0b9686268a394aa (MD5) Previous issue date: 2012-03-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Phytopathogenic fungi are responsible for significant losses in yellow passion fruit in the postharvest, among these the Lasiodiplodia theobromae that damages the fruit thus impairing its commercialization. The objectives for the development of this research were to evaluate the epidemiological parameters of lasiodiplodia rot in yellow passion fruit and the effect of plant extracts, inducing resistance and solid formulations of phosphite in controlling this disease. In the first article, beyond the study of the epidemiological parameters of inoculum concentration (102, 103, 104, 105, 106 and 107 conídia.mL-1), wetness (0, 12, 24, 36, 48 h) and temperature (20, 25, 30, 35 ° C) of three isolates of L. theobromae, enzymatic characterization was performed in 43 isolated solid substrates, where it was possible to detect halos of degradation showing the ability of this fungus has to produce hydrolytic enzymes amylase, cellulase, lipase and protease. In relation to epidemiological aspects, it was observed that the optimal conditions for the establishment of the disease consisted of high inoculum concentrations (106 and 107 conídia.mL-1), temperature around 30 ° C, and wetness period of 48 hours. In the second article evaluated the effect of alternative products to control the disease. For this, the fruits were treated with extracts of melon mentrasto, ginger, basil, cinnamon, yellow passion fruit peel, and potassium phosphite, calcium phosphite, and Ecolife Agro-Mos® in five concentrations. The fruits were treated by immersion in suspensions of the products for 10 minutes. Three hours after treatment, the fruits were inoculated with a suspension at a concentration of 106 conídios.mL-1. Despite all the products tested show fungitoxic properties, better results were obtained with potassium phosphite, Ecolife ® and melon mentrasto extract. The best doses obtained were tested in combination and found that calcium phosphite (5 mL) + extract of yellow passion fruit peel (80%), calcium phosphite (5 mL) + melon mentrasto extract (60% ) and Agro-Mos (300μl) + basil extract (80%) promoted smaller sizes of lesions. In the third article we evaluated the efficiency of different formulations of solid nature of phosphites in reducing decay. K, K+BMo, Ca, Ca+B, Cu, Zn, Mg e ultra ABS nas concentrações de 1, 2, 3, 4 e 5 g.L-1. Treatment and inoculation of fruits were carried out following the same methodology as the previous article. The results showed that solid formulations of potassium phosphite, FK+FBMo, FCa, FCa+FB, FZn e FMg demonstrated fungitoxic properties inhibiting the development of lesions. Physical-chemical properties of fruit showed that the treatments promoted changes to the content promoted ATT, SST and pH. / Fungos fitopatôgênicos são responsáveis por perdas significativas em maracujá amarelo na fase pós-colheita, dentre estes o Lasiodiplodia theobromae que provoca lesões nas frutas prejudicando conseqüentemente sua comercialização. Neste trabalho buscou-se realizar a caracterização de agressividade e enzimática de isolados de L. theobromae; avaliar a concentração de inóculo, o período de molhamento e a influência da temperatura sobre o desenvolvimento da podridão por lasiodiplodia; avaliar a eficiência de extratos vegetais brutos, fosfitos sólidos e indutores de resistência no controle da doença em maracujá amarelo; avaliar alterações nos fatores físico-químicos das frutas tratadas. No primeiro artigo, além do estudo dos parâmetros epidemiológicos de concentração de inóculo (102, 103, 104, 105, 106 e 107 conídios.mL-1), período de molhamento (0, 12, 24, 36, 48 h) e temperatura (20, 25, 30, 35ºC) de três isolados de L. theobromae, foi realizado a caracterização enzimática em substratos sólidos de 43 isolados, onde foi possível detectar halos de degradação mostrando a capacidade que este fungo tem de produzir as enzimas hidrolíticas amilase, celulase, lipase e protease. Em relação aos aspectos epidemiológicos, observou-se que as condições ótimas para o estabelecimento da doença consistiu em alta concentrações de inóculo (106 e 107 conídios.mL-1), temperatura em torno de 30°C e período de molhamento de 48 horas. A temperatura em torno de 20 °C inibe o desenvolvimento do fitopatógeno mantendo a integridade física dos frutos. No segundo artigo avaliou-se o efeito de produtos alternativos no controle da doença. Para isto, as frutas foram tratadas com extratos de melão-de-São-Caetano, gengibre, manjericão, canela, casca de maracujá amarelo, e de fosfito de potássio, fosfito de cálcio, Agro-Mós e Ecolife®, em cinco concentrações. As frutas foram tratadas através da imersão nas suspensões dos produtos durante 10 minutos. Três horas após tratamento, as frutas foram inoculadas com suspensão na concentração de 106 conídios.mL-1. Apesar de todos os produtos testados demonstrarem propriedades fungitóxicas, melhores resultados foram obtidos com fosfito de potássio e Ecolife®. As melhores doses obtidas foram testadas em combinação e verificou-se que fosfito de Cálcio (5mL) + extrato de casca de maracujá amarelo (60%), fosfito de Cálcio (5mL) + extrato de melão-de-São-Caetano (60%) e Agro-Mós (300μl) + extrato de manjericão (80%) promoveram menores tamanhos de lesões. Os teores de ATT foram alterados nos tratamentos individuais enquanto que quanto utilizados em combinação os teores de SST e ATT sofreram alterações. No terceiro artigo foi avaliada a eficiência de diferentes formulações de fosfitos de natureza sólida na redução da podridão. Os fosfitos utilizados foram K, K+BMo, Ca, Ca+B, Cu, Zn, Mg e ultra ABS nas concentrações de 1, 2, 3, 4 e 5 g.L-1. O tratamento e inoculação das frutas foram realizados seguindo a mesma metodologia do artigo anterior. Os resultados mostraram que as formulações sólidas dos fosfitos de potássio, FK, FK+BMo, FCa, FCaB e FZn demonstraram propriedades fungitóxicas inibindo o desenvolvimento das lesões. Análises físico-químicas das frutas realizadas demonstraram que os tratamentos promoveram alteração nos teores ATT, SST e pH.
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Botryosphaeriales endofíticos e fitopatogênicos causadores de podridões pós-colheita em frutos de goiabas / Endophytic and pathogenic Botryosphaeriales causing post-harvest fruit rot of guava

Abreu, Vanessa Pereira de 23 February 2015 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-12T17:59:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2243894 bytes, checksum: ab4e44704d5ce4a8b8eed861c68ee7fc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T17:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2243894 bytes, checksum: ab4e44704d5ce4a8b8eed861c68ee7fc (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A goiabeira (Psidium guajava) é uma cultura de grande importância, destacando-se como uma atividade econômica e social de grande expressão. Nativa da América Tropical, a goiabeira, é amplamente cultivada em todas as regiões do Brasil. A produção da goiabeira tem sido limitada por vários fatores, dentre eles, destacam-se as doenças, com especial ênfase às que ocorrem em pós-colheita. A pinta-preta da goiaba é a doença pós-colheita de maior incidência. As goiabas acometidas pela doença apresentam sintomas que constituem-se, inicialmente, de pontos deprimidos, os quais evoluem rapidamente na superfície dos frutos, de forma concêntrica e tornam-se lesões de coloração escura com diversos pontos negros correspondendo aos sinais do patógeno. Vários trabalhos associam a pinta-preta da goiaba ao fungo Phyllosticta psidiicola entretanto, ainda não existem trabalhos mais abrangentes com estudos taxonômicos mais apurados que investiguem qual o real agente etiológico dessa doença. Além da pinta-preta da goiaba, existem outras doenças de pós-colheita muito comuns causadas por fungos da ordem Botryosphaeriales como a podridão parda associada ao fungo Dothiorella dominicana e a podridão de Lasiodiplodia associada à Lasiodiplodia theobromae. Entretanto, também existe uma carência de estudos mais abrangentes associados a essas doenças. Nos últimos anos novas espécies têm sido propostas a partir de estudos moleculares, evidenciando a existência de um complexo de espécies. Assim, os objetivos deste trabalho foram estudar a etiologia da pinta-preta da goiaba baseada na combinação de características morfológicas e moleculares, verificar o relacionamento das espécies causadoras dessa doença com as espécies endofíticas, estabelecer o posicionamento filogenético das espécies encontradas, bem como comprovar a patogenicidade das espécies associadas. Foram realizadas coletas de goiabas com sintomas de podridões pós- colheita, frutos secos e mumificados nos mercados do município de Viçosa – Minas Gerais e em uma área de cultivo no município de Piraúba – Minas Gerais. Folhas, ramos e frutos sadios foram coletados nesta mesma área, a fim de obter os isolados endofíticos correspondentes a área com elevada ocorrência da doença na pós- colheita. Isolados monospóricos foram obtidos e armazenados. Estes tiveram o DNA extraído e a região TEF1-α amplificada e sequenciada. A partir dos resultados das análises filogenéticas, um isolado representativo de cada espécie foi selecionado para a caracterização morfológica e testes de patogenicidade. Seis espécies de Botryosphaeriales foram identificadas, entre elas, três pertencentes ao gênero Neofusicoccum, uma pertencente ao gênero Phyllosticta e duas espécies de Lasiodiplodia. Entre estas espécies, duas serão propostas como novas (Neofusicoccum sp. e Lasiodiplodia sp.). Todas as espécies foram comparadas morfológica e filogeneticamente, com exceção de Lasiodiplodia sp. que não esporulou em meio de cultura. Todas as espécies tiveram patogenicidade comprovada. Os resultados deste trabalho serão fundamentais para futuros estudos envolvendo medidas de manejo da doença, programas de quarentena e especialmente, para o desenvolvimento de variedades de goiabas resistentes à pinta- preta e outras podridões de frutos. / The guava (Psidium guajava) is an fruit crop of great importance, standing out as an economic and social activity of great expression. Native to tropical America, the guava, is widely cultivated in all regions of Brazil. The production of guava has been limited by several factors, specially the diseases, with special emphasis to those that occur in post-harvest. The guava black spot is a post-harvest higher incidence disease. Diseased guavas presents symptoms that are initially depressed points, which are changing rapidly on the surface of the fruit, concentrically and become dark-colored with many black spots corresponding to the signs of the pathogens in the lesions. Several studies associate the black guava spot with the fungus Phyllosticta psidiicola however, there are no more comprehensive work with more accurate taxonomic studies investigating the real causative agent of this disease. Besides the black guava spot, there are other very common post-harvest fungal diseases caused by the order Botryosphaeriales as the brown fruit rot disease associated with Dothiorella dominicana and the Lasiodiplodia rot associated with Lasiodiplodia theobromae. However there is also a lack of more comprehensive studies associated with these diseases. In recent years new species have been proposed based specially on molecular studies, showing the existence of a complex of species. The objectives of this study were to study the etiology of black spot of guava based on a combination of morphological and molecular characteristics, verify the relationship of the species that cause this disease with the endophytic species, establish the phylogenetic position of the species found, as well as prove the pathogenicity of the associated species. Guavas samples were collected with symptoms of post-harvest decay as also dried and mummified fruit disease in Viçosa local markets - Minas Gerais and in a farming area with a high occurrence of the disease after harvesting in the city of Piraúba - Minas Gerais. Healthy leaves, branches and fruits were collected in the same area, in order to get the endophytic isolates from this high incidence area. Single spore isolates were obtained and stored. These has the DNA extracted and TEF1-α region amplified and sequenced. Based on the results of the phylogenetic analysis one isolate of each species was selected for morphological characterization and pathogenicity test. Six species belonging to the Botryosphaeriales were identified, in which three belongs to Neofusicoccum genera, one belongs to the genera Phyllosticta and two species of Lasiodiplodia. Among these species, two will be proposed as new (Neofusicoccum sp. and Lasiodiplodia sp.). All species were compared morphologically and phylogenetically except Lasiodiplodia sp. since it was not sporulating in culture. All species proved to be pathogenic. Despite its importance, the etiology of black spot and other post-harvest fruit rot diseases has been neglected and remained obscure for a long time. The results of this work will be critical for future studies involving disease management, quarantine programs and especially for the development of guava varieties resistant to the black spot and others post-harvest fruit rot diseases.
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Produção de exopolissacarídeo lasiodiplodana a partir de hidrolisados de subprodutos agrícolas / Production of lasiodiplodan exopolysaccharide from agricultural byproducts

Philippini, Rafael Rodrigues 17 July 2017 (has links)
A utilização de resíduos da agroindústria na produção de biomoléculas de interesse industrial agrega valor ao produto, por não utilizar meios sintéticos, reduzindo custos totais de produção e promovendo o desenvolvimento de tecnologias mais limpas e sustentáveis. Os exopolissacarídeos, ou simplesmente EPS são polímeros naturais, excretados por algumas espécies de bactérias e fungos. Possuem grande interesse no setor industrial, dado a versatilidade da biomolécula na utilização nas áreas médica, farmacêutica e química apresentando potencial de geração de diversos produtos. O presente trabalho teve como objetivo estudar a obtenção do exopolissacarídeo lasiodiplodana utilizando hidrolisados obtidos a partir de subprodutos agrícolas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae. Foram realizados Delineamentos Compostos Centrais Rotacionais (DCCR) 22 com três repetições nos pontos centrais para avaliação de condições ótimas de produção de hidrolisados de farelos de arroz e milho com concentrações estimáveis de açúcares totais, açúcares redutores e proteínas totais. Os hidrolisados obtidos foram utilizados em ensaios fermentativos para obtenção da lasiodiplodana em meio de cultivo (LAS-M) e aderida à biomassa celular (LASC), bem como produção de células. Para elaboração dos ensaios foram utilizados DCCR 23 e 22 em hidrolisados de farelos de arroz e milho, respectivamente. As variáveis escolhidas para o DCCR 23 foram pH, volume de meio em frasco e adição de sais suplementares, enquanto o DCCR 22 apresentaram como variáveis o estudo da agitação e temperatura. Os delineamentos estudados geraram diversos modelos significativos para a produção de hidrolisados e obtenção de frações de lasiodiplodana. As frações de LAS-M e LAS-C obtidas foram caracterizadas parcialmente quanto a seus conteúdos de carboidratos e proteínas, sendo também analisadas por espectroscopia de infravermelho (FTIR) e análises cristalográficas de Raios-X. Os hidrolisados de farelo de arroz apresentaram concentrações aproximadas para açúcares totais (40 g/L), açúcares redutores (10 g/L) e proteínas (14 g/L) enquanto o hidrolisado de farelo de milho apresentou 170, 70 e 14 g/L dos respectivos componentes. Os hidrolisados foram tratados e utilizados em ensaios fermentativos apresentando concentrações de LAS-M de 7,8 e 5,73 g/L, LAS-C 4,93 e 3,0 g/L e biomassa celular de 10,68 e 4,47 g/L respectivamente para hidrolisados de farelos de arroz e milho, apresentando consumo dos açúcares totais de 94 e 84%. As frações de lasiodiplodana LAS-M apresentaram em sua composição concentrações de açúcares redutores correspondentes a 83,62 e 92,16%, enquanto as frações LAS-C apresentaram 82,19 e 88,42% para os respectivos hidrolisados. As análises de FTIR e Raios-X demonstraram que os biopolímeros obtidos neste trabalho apresentaram estruturas semelhantes aos citados na literatura. Evidenciou-se que os hidrolisados utilizados nas condições estudadas proporcionaram condições adequadas para o fungo L. theobromae sintetizar o exopolissacarídeo lasiodiplodana. / The utilization of agro-industrial wastes for industrial-interest biomolecules production generates add-value products, reducing total production costs and promoting the development of cleaner and more sustainable technologies. Exopolysaccharides, or simply EPS are natural polymers, excreted by some species of bacteria and fungi. They present a great interest from industrial sector, given the versatility of the biomolecule and its use in medical, pharmaceutical and chemical sectors, generating a diversity of products. The present work had as objective to study the exopolysaccharide lasiodiplodan by fermentation of hydrolysates obtained from agricultural by-products from filamentous fungi Lasiodiplodia theobromae. Rotational Central Compound Designs (DCCR) 22 were performed for the evaluation of optimum conditions for the production of hydrolysates from rice and corn brans with estimated concentrations of total sugars, reducing sugars and total proteins. The optimized hydrolysates were used in fermentative assays for obtaining lasiodiplodan from culture medium (LAS-M) and cell biomass (LAS-C), as well as cell production. For the elaboration of the tests, DCCR 23 and 22 were performed using rice bran and corn bran hydrolysates, respectively. The chosen variables for the DCCR 23 were pH, medium volume in flask and addition of supplemental salts, while the DCCR 22 presented agitation and temperature as variables. The studied designs presented several significant models for the hydrolysates production and its lasiodiplodan fractions. Obtained fractions of LAS-M and LAS-C were partially characterized due to carbohydrate and protein contents, as well as X-ray crystallographic analysis and Fourier-Transform Infrared Spectroscopy - FTIR. Rice bran hydrolysates presented estimated concentrations for total sugars (40 g / L), reducing sugars (10 g / L) and proteins (14 g / L) while corn bran hydrolysates showed 170, 70 and 14 g / L respectively. Treated rice and corn bran hydrolysates used for fermentative assays presented respective concentrations for LAS-M (7.8 and 5.73 g/L), LAS-C (4.93 and 3.0 g/L) and cellular biomass (10.68 and 4.47 g/L) and total sugar consumption of 94 and 84%, respectively. The lasiodiplodan fractions LAS-M presented reducing sugars compositions of 83.62 and 92.16%, while LAS-C fractions presented 82.19 and 88.42% for rice and corn bran hydrolysates. FTIR and X-ray anlysis showed that the present obtained biopolymers presented similar structures to those mentioned in the literature. It was evidenced that the hydrolysates used under the studied conditions provided adequate conditions for L. theobromae to synthesize the exopolysaccharide lasiodiplodan.
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Produção de exopolissacarídeo lasiodiplodana a partir de hidrolisados de subprodutos agrícolas / Production of lasiodiplodan exopolysaccharide from agricultural byproducts

Rafael Rodrigues Philippini 17 July 2017 (has links)
A utilização de resíduos da agroindústria na produção de biomoléculas de interesse industrial agrega valor ao produto, por não utilizar meios sintéticos, reduzindo custos totais de produção e promovendo o desenvolvimento de tecnologias mais limpas e sustentáveis. Os exopolissacarídeos, ou simplesmente EPS são polímeros naturais, excretados por algumas espécies de bactérias e fungos. Possuem grande interesse no setor industrial, dado a versatilidade da biomolécula na utilização nas áreas médica, farmacêutica e química apresentando potencial de geração de diversos produtos. O presente trabalho teve como objetivo estudar a obtenção do exopolissacarídeo lasiodiplodana utilizando hidrolisados obtidos a partir de subprodutos agrícolas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae. Foram realizados Delineamentos Compostos Centrais Rotacionais (DCCR) 22 com três repetições nos pontos centrais para avaliação de condições ótimas de produção de hidrolisados de farelos de arroz e milho com concentrações estimáveis de açúcares totais, açúcares redutores e proteínas totais. Os hidrolisados obtidos foram utilizados em ensaios fermentativos para obtenção da lasiodiplodana em meio de cultivo (LAS-M) e aderida à biomassa celular (LASC), bem como produção de células. Para elaboração dos ensaios foram utilizados DCCR 23 e 22 em hidrolisados de farelos de arroz e milho, respectivamente. As variáveis escolhidas para o DCCR 23 foram pH, volume de meio em frasco e adição de sais suplementares, enquanto o DCCR 22 apresentaram como variáveis o estudo da agitação e temperatura. Os delineamentos estudados geraram diversos modelos significativos para a produção de hidrolisados e obtenção de frações de lasiodiplodana. As frações de LAS-M e LAS-C obtidas foram caracterizadas parcialmente quanto a seus conteúdos de carboidratos e proteínas, sendo também analisadas por espectroscopia de infravermelho (FTIR) e análises cristalográficas de Raios-X. Os hidrolisados de farelo de arroz apresentaram concentrações aproximadas para açúcares totais (40 g/L), açúcares redutores (10 g/L) e proteínas (14 g/L) enquanto o hidrolisado de farelo de milho apresentou 170, 70 e 14 g/L dos respectivos componentes. Os hidrolisados foram tratados e utilizados em ensaios fermentativos apresentando concentrações de LAS-M de 7,8 e 5,73 g/L, LAS-C 4,93 e 3,0 g/L e biomassa celular de 10,68 e 4,47 g/L respectivamente para hidrolisados de farelos de arroz e milho, apresentando consumo dos açúcares totais de 94 e 84%. As frações de lasiodiplodana LAS-M apresentaram em sua composição concentrações de açúcares redutores correspondentes a 83,62 e 92,16%, enquanto as frações LAS-C apresentaram 82,19 e 88,42% para os respectivos hidrolisados. As análises de FTIR e Raios-X demonstraram que os biopolímeros obtidos neste trabalho apresentaram estruturas semelhantes aos citados na literatura. Evidenciou-se que os hidrolisados utilizados nas condições estudadas proporcionaram condições adequadas para o fungo L. theobromae sintetizar o exopolissacarídeo lasiodiplodana. / The utilization of agro-industrial wastes for industrial-interest biomolecules production generates add-value products, reducing total production costs and promoting the development of cleaner and more sustainable technologies. Exopolysaccharides, or simply EPS are natural polymers, excreted by some species of bacteria and fungi. They present a great interest from industrial sector, given the versatility of the biomolecule and its use in medical, pharmaceutical and chemical sectors, generating a diversity of products. The present work had as objective to study the exopolysaccharide lasiodiplodan by fermentation of hydrolysates obtained from agricultural by-products from filamentous fungi Lasiodiplodia theobromae. Rotational Central Compound Designs (DCCR) 22 were performed for the evaluation of optimum conditions for the production of hydrolysates from rice and corn brans with estimated concentrations of total sugars, reducing sugars and total proteins. The optimized hydrolysates were used in fermentative assays for obtaining lasiodiplodan from culture medium (LAS-M) and cell biomass (LAS-C), as well as cell production. For the elaboration of the tests, DCCR 23 and 22 were performed using rice bran and corn bran hydrolysates, respectively. The chosen variables for the DCCR 23 were pH, medium volume in flask and addition of supplemental salts, while the DCCR 22 presented agitation and temperature as variables. The studied designs presented several significant models for the hydrolysates production and its lasiodiplodan fractions. Obtained fractions of LAS-M and LAS-C were partially characterized due to carbohydrate and protein contents, as well as X-ray crystallographic analysis and Fourier-Transform Infrared Spectroscopy - FTIR. Rice bran hydrolysates presented estimated concentrations for total sugars (40 g / L), reducing sugars (10 g / L) and proteins (14 g / L) while corn bran hydrolysates showed 170, 70 and 14 g / L respectively. Treated rice and corn bran hydrolysates used for fermentative assays presented respective concentrations for LAS-M (7.8 and 5.73 g/L), LAS-C (4.93 and 3.0 g/L) and cellular biomass (10.68 and 4.47 g/L) and total sugar consumption of 94 and 84%, respectively. The lasiodiplodan fractions LAS-M presented reducing sugars compositions of 83.62 and 92.16%, while LAS-C fractions presented 82.19 and 88.42% for rice and corn bran hydrolysates. FTIR and X-ray anlysis showed that the present obtained biopolymers presented similar structures to those mentioned in the literature. It was evidenced that the hydrolysates used under the studied conditions provided adequate conditions for L. theobromae to synthesize the exopolysaccharide lasiodiplodan.
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Phylogeny, identification and pathogenicity of the Botryosphaeriaceae associated with collar and root rot of the biofuel plant Jatropha curcas in Brazil, with a description of new species. / Phylogeny, identification and pathogenicity of the Botryosphaeriaceae associated with collar and root rot of the biofuel plant Jatropha curcas in Brazil, with a description of new species

Machado, Alexandre Reis 19 July 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6115511 bytes, checksum: f9a6de95b1f160207c633c70ff99d635 (MD5) Previous issue date: 2012-07-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A partir da iniciativa do Governo Federal em introduzir o biodiesel na matriz energética brasileira, surgiu a necessidade de se pesquisar plantas oleaginosas potenciais para produção de matéria-prima para este biocombustível. O pinhão manso (Jatropha curcas) tem se destacado por ser uma planta perene, de fácil manejo, além de produzir sementes com alto teor de óleo. A grande expansão das áreas de cultivo tem sido acompanhada pelo surgimento de diversas enfermidades, do qual pouco se conhece sobre os reais agentes etiológicos. Atualmente, em diversas áreas do Brasil, tem-se relatado a ocorrência de uma nova doença que não apenas reduz a produtividade, como tem causado a morte das plantas. Esta doença está associada a uma podridão das raízes e do colo das plantas. Alguns patógenos já foram relatados para essa doença, sendo mais frequente a ocorrência de fungos da família Botryosphaeriaceae, grupo conhecido pela dificuldade de separação das espécies utilizando características morfológicas. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar os possíveis agentes etiológicos, investigar a diversidade de Botryosphaeriaceae associado a essa doença, utilizando características morfológicas aliadas às ferramentas moleculares, bem como provar a potogenicidade dos isolados. Foram realizadas coletas nos estados de Minas Gerais e Espírito Santo. Em adição a estes, foram obtidas amostras dos estados do Piauí e São Paulo. Isolados monospóricos foram obtidos e armazenados. Estes tiveram o DNA extraído e as regiões ITS e TEF1-α sequenciadas. A partir dos resultados das análises filogenéticas, foram separados dois a três isolados de cada espécie para a caracterização morfológica. Nove espécies de Botryosphaeriaceae foram identificadas, sendo Lasiodiplodia theobromae, L. parva, L. pseudotheobromae, L. iraniensis, Neoscytalidium dimidiatum, Macrophomina phaseolina e três a serem propostas como novas espécies (Lasiodiplodia sp.1, Lasiodiplodia sp.2 e Macrophomina sp.1). Todas as espécies distinguiram morfologicamente e filogeneticamente, com exceção de Macrophomina sp.1 que não esporulou em meio de cultura. Até o momento, apenas Lasiodiplodia theobromae, Lasiodiplodia sp.1 e Neoscytalidium dimidiatum tiveram a patogenicidade comprovada. Pelos testes de Blotter foram encontrados associados às sementes: Lasiodiplodia theobromae, Macrophomina phaseolina e Macrophomina sp.1. Espécies de Botryosphaeriaceae ocorrem em uma ampla gama de hospedeiros e ambientes, e são frequentemente referidos como endofíticos, patógenos latentes ou oportunistas, devido a manifestação da doença estar diretamente associada à ocorrência de estresse do hospedeiro. A expansão das áreas de pinhão manso no mundo tem contribuído para o surgimento de várias doenças que até o momento não tinham seus agentes etiológicos conhecidos. Este estudo fornece informações novas para futuros estudos de manejo da doença, programas de quarentena e especialmente para o desenvolvimento de variedades resistentes à podridão do colo e raiz do pinhão-manso. / The introduction of biodiesel in the Brazilian energy matrix by initiative of the Federal Government, encouraged the search for potential oleaginous crops to supply raw material for biofuel production. The physic nut (Jatropha curcas) has been highlighted since it is a perennial plant, easy to manage, and produces seeds with a high oil content. The expansion of areas of Jatropha in the world has contributed to the emergence of various diseases. Currently in Brazil, the occurrence of a new disease that not only reduces the productivity, since it causes death of the plants. This disease is associated with a collar and root rot of plants. A number of pathogens have been associates with this disease, the occurrence of Botryosphaeriaceae fungi being the most frequent, which is a group known to be difficult to delimit species based on morphological characters. Thus, the purposes of this work was to investigate the diversity of Botryosphaeriaceae associated with collar and root rot of J. curcas, with the aid of morphology and molecular tools and to asses the pathogenicity of the species involved. Samples were colleted in states of Minas Gerais and the Espirito Santo. In addition, samples were obtained from Piauí and São Paulo states. Single spore cultures were obtained and stored. These had their DNA extracted and the ITS and TEF1-α regions were sequenced. From the results of the phylogenetic analyses, two to three isolates of each species were separated for the morphological characterization and pathogenicity tests. With the purpose of investigating the association of the pathogens in seeds, Blotter tests were performed. Nine Botryosphaeriaceae species were identified: Lasiodiplodia theobromae, L. parva, L. pseudotheobromae, L. iraniensis, Neoscytalidium dimidiatum, Macrophomina phaseolina and three to be proposed as new species (Lasiodiplodia sp.1, Lasiodiplodia sp.2 and Macrophomina sp.1). All species were distinguished morphologically and phylogenetically, except Macrophomina sp.1 that failed sporulate in culture.Currently, only Lasiodiplodia theobromae, Lasiodiplodia sp.1 and Neoscytalidium dimidiatum have proven to be pathogenic. Lasiodiplodia theobromae, Macrophomina phaseolina and Macrophomina sp.1 were associated with seeds. Botryosphaeriaceae species occur in a wide range of hosts and environments, and are often referred to as endophytes and latent or opportunistic pathogens, because manifestation of the disease is directly linked with host stress. The great expansion of Jatropha areas in the world have contributed to the emergence of several diseases, which so far, the etiological agent have remained unknown. This study will provide new information for future studies of disease management, quarantine programs and especially, the development of resistant varieties for collar and root rot of J. curcas.

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