A leptospirose é uma zoonose mundial causada por bactéria do gênero Leptospira. O desenvolvimento de uma vacina de subunidade eficaz seria de grande interesse em saúde pública. Propusemos investigar 4 antigenos de Leptospira interrogans srv Copenhageni, genes LIC12659, LIC12660, LIC12631 e LIC10868, os quais foram amplificados e clonados nos vetores de expressão pAE e pAEsox. As proteínas VapB, VapC, VapBC e Sph2 foram expressas em E. coli e em salmonela SL3261 e purificadas por cromatografia de afinidade a metal. As atividades hemolítica de Sph2 e ribonucleásica de VapC não foram evidenciadas, possivelmente devido a diferenças estruturais entre as proteínas recombinantes e as nativas. Os clones de E. coli com os genes do módulo toxina-antitoxina vapBC sofreram os efeitos de inibição (vapC) e recuperação (vapBC) de crescimento, como descrito. As proteínas recombinantes, VapB purificada ou em salmonlea e Sph2, mostraram-se imunogênicas em camundongos e em hamsters. A imunização com Salmonela-VapB determinou a melhor proteção no teste de desafio. / Leptospirosis is a zoonosis worldwide distributed, caused by bacteria from the genus Leptospira. The development of an efficient vaccine of sub-unities would be of major interest for public health. We proposed to investigate 4 antigens from Leptospira interrogans srv Copenhageni, genes LIC12659, LIC12660, LIC12631 and LIC10868, which were amplified and cloned into expression vectors pAE and pAEsox. The proteins VapB, VapC, VapBC and Sph2 were expressed in E. coli and in salmonella SL3261, and purified by metal-affinity chromatography. The activities hemolytic of Sph2 and ribonuclease of VapC were not confirmed, possibly due to differences between native and recombinant proteins. The clones of E. coli with genes of the toxin-antitoxin module vapBC suffered inhibition (vapC) and recovery (vapBC) of growth rate as described. The recombinant proteins VapB purified or in salmonella and purified Sph2, showed to be immunogenic in mice and in hamsters. The immunization with Salmonella-VapB determined better protection on challenge assay.

A leptospirose é uma zoonose mundial causada por bactéria do gênero Leptospira. O desenvolvimento de uma vacina de subunidade eficaz seria de grande interesse em saúde pública. Propusemos investigar 4 antigenos de Leptospira interrogans srv Copenhageni, genes LIC12659, LIC12660, LIC12631 e LIC10868, os quais foram amplificados e clonados nos vetores de expressão pAE e pAEsox. As proteínas VapB, VapC, VapBC e Sph2 foram expressas em E. coli e em salmonela SL3261 e purificadas por cromatografia de afinidade a metal. As atividades hemolítica de Sph2 e ribonucleásica de VapC não foram evidenciadas, possivelmente devido a diferenças estruturais entre as proteínas recombinantes e as nativas. Os clones de E. coli com os genes do módulo toxina-antitoxina vapBC sofreram os efeitos de inibição (vapC) e recuperação (vapBC) de crescimento, como descrito. As proteínas recombinantes, VapB purificada ou em salmonlea e Sph2, mostraram-se imunogênicas em camundongos e em hamsters. A imunização com Salmonela-VapB determinou a melhor proteção no teste de desafio. / Leptospirosis is a zoonosis worldwide distributed, caused by bacteria from the genus Leptospira. The development of an efficient vaccine of sub-unities would be of major interest for public health. We proposed to investigate 4 antigens from Leptospira interrogans srv Copenhageni, genes LIC12659, LIC12660, LIC12631 and LIC10868, which were amplified and cloned into expression vectors pAE and pAEsox. The proteins VapB, VapC, VapBC and Sph2 were expressed in E. coli and in salmonella SL3261, and purified by metal-affinity chromatography. The activities hemolytic of Sph2 and ribonuclease of VapC were not confirmed, possibly due to differences between native and recombinant proteins. The clones of E. coli with genes of the toxin-antitoxin module vapBC suffered inhibition (vapC) and recovery (vapBC) of growth rate as described. The recombinant proteins VapB purified or in salmonella and purified Sph2, showed to be immunogenic in mice and in hamsters. The immunization with Salmonella-VapB determined better protection on challenge assay.

A leptospirose é uma zoonose de importância global causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. Foi avaliado o potencial adjuvante da flagelina FliCi de Salmonella enterica sorovar Thyphimurium na indução de resposta imunoprotetora em uma formulação vacinal acelular composta pela proteína LigAc e por seis prováveis lipoproteínas de membrana externa recombinantes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni como alternativa profilática. Grupos de hamsters imunizados com LigAc co-administrada com o pool das proteínas acrescidas de FliCi ou Al(OH)3 apresentaram altos títulos de anticorpos contra as proteínas recombinantes e foram protegidos do desafio letal (86-100%). Grupos imunizados com vacina comercial, bacterina ou pool+LigAc+FliCi apresentaram redução na colonização renal (0-28%). Dados sugerem aumento da expressão dos genes das citocinas de resposta Th1/Th2. Os resultados demonstram que novas formulações vacinais, compostas por proteínas recombinantes e flagelina FliCi como adjuvante, é um caminho promissor. / Leptospirosis is a global zoonotic disease caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira. In the present study, we evaluated the adjuvant activity of Salmonella enterica FliCi flagellin in the protective immunity induced by the LigAc and also by six other novel recombinant leptospiral outer membrane lipoproteins (OMP) of Leptospira interrogans serovar Copenhageni. Immunization of hamsters with LigAc or LigAc coadministered with OMPs cocktail, both with FliCi or Al(OH)3, induced robust antibody responses against recombinant proteins, and conferred protection after challenge (86-100%). Moreover, only groups inoculated with the commercial vaccine, bacterin or LigAc coadministered with OMPs cocktail and FliCi as adjuvant showed reduced bacterial load in kidneys (0-28%) with significant enhancement of gene expression of both Th1 and Th2 cytokines. Taken together, our data pave the way for the development of novel vaccine formulations against leptospirosis, using recombinant proteins and FliCi as adjuvant.

A leptospirose é uma zoonose de importância global causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. Foi avaliado o potencial adjuvante da flagelina FliCi de Salmonella enterica sorovar Thyphimurium na indução de resposta imunoprotetora em uma formulação vacinal acelular composta pela proteína LigAc e por seis prováveis lipoproteínas de membrana externa recombinantes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni como alternativa profilática. Grupos de hamsters imunizados com LigAc co-administrada com o pool das proteínas acrescidas de FliCi ou Al(OH)3 apresentaram altos títulos de anticorpos contra as proteínas recombinantes e foram protegidos do desafio letal (86-100%). Grupos imunizados com vacina comercial, bacterina ou pool+LigAc+FliCi apresentaram redução na colonização renal (0-28%). Dados sugerem aumento da expressão dos genes das citocinas de resposta Th1/Th2. Os resultados demonstram que novas formulações vacinais, compostas por proteínas recombinantes e flagelina FliCi como adjuvante, é um caminho promissor. / Leptospirosis is a global zoonotic disease caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira. In the present study, we evaluated the adjuvant activity of Salmonella enterica FliCi flagellin in the protective immunity induced by the LigAc and also by six other novel recombinant leptospiral outer membrane lipoproteins (OMP) of Leptospira interrogans serovar Copenhageni. Immunization of hamsters with LigAc or LigAc coadministered with OMPs cocktail, both with FliCi or Al(OH)3, induced robust antibody responses against recombinant proteins, and conferred protection after challenge (86-100%). Moreover, only groups inoculated with the commercial vaccine, bacterin or LigAc coadministered with OMPs cocktail and FliCi as adjuvant showed reduced bacterial load in kidneys (0-28%) with significant enhancement of gene expression of both Th1 and Th2 cytokines. Taken together, our data pave the way for the development of novel vaccine formulations against leptospirosis, using recombinant proteins and FliCi as adjuvant.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Leptospira spp. em peixes-bois (Trichechus inunguis) da Amazônia Brasileira. Amostras sanguineas de 74 peixes-bois foram colhidas. Para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii, os soros foram diluídos a 1:25, 1:50 e 1:500 e a presença de anticorpos foi determinada pela técnica de aglutinação modificada (MAT). Para Leptospira spp. a presença de anticorpos foi determinada pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), com ponto de corte na diluição de 1:100. Dos 74 peixes-bois 29 (39,2%) foram positivos para T. gondii apresentando título de 25. Para Leptospira spp. 23 (31,1%) foram reagentes para quatro sorovares com títulos variando de 100 a 1600. Os sorovares foram: Patoc, Castellonis, Icterohaemorrhagiae e Butembo. Houve coaglutinação entre os sorovares Patoc, Castellonis e Icterohaemorrhagiae (títulos 100 e 200) em um animal (n°51). Este foi o primeiro relato da ocorrência de T. gondii e Leptospira spp. em peixes-bois da Amazônia brasileira. / This study aimed to evaluate the occurrence of anti-T. gondii and Leptospira spp. in manatees (Trichechus inunguis) from two preservation centers located in the Brazilian Amazon. Blood samples from 74 manatees were taken. For detecting antibodies to T. gondii, sera were diluted 1:25, 1:50 and 1:500 and precense of antibodies was determined by the modified agglutination test (MAT). To Leptospira spp. sera were diluted 1:100 and tested against a collection of 24 antigenic serovars and presence of antibodies was determined by microscopic agglutination test (MAT). Of the 74 manatees 29 (39.2%) were positive to T. gondii with titre at 25. For Leptospira spp. 23 (31.1%) samples were kacted with four serotypes with titers ranging from 100 to 1600. The serovars reagents were Patoc, Castellonis, Icterohaemorrhagiae and Butembo. In one sample, coaglutination of serovars Patoc, Castellonis and Icterohaemorrhagiae (titres 100 and 200) was observed. This is the first report of the occurrence of T. gondii and Leptospira spp. in manatees in the Brazilian Amazon.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Leptospira spp. em peixes-bois (Trichechus inunguis) da Amazônia Brasileira. Amostras sanguineas de 74 peixes-bois foram colhidas. Para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii, os soros foram diluídos a 1:25, 1:50 e 1:500 e a presença de anticorpos foi determinada pela técnica de aglutinação modificada (MAT). Para Leptospira spp. a presença de anticorpos foi determinada pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), com ponto de corte na diluição de 1:100. Dos 74 peixes-bois 29 (39,2%) foram positivos para T. gondii apresentando título de 25. Para Leptospira spp. 23 (31,1%) foram reagentes para quatro sorovares com títulos variando de 100 a 1600. Os sorovares foram: Patoc, Castellonis, Icterohaemorrhagiae e Butembo. Houve coaglutinação entre os sorovares Patoc, Castellonis e Icterohaemorrhagiae (títulos 100 e 200) em um animal (n°51). Este foi o primeiro relato da ocorrência de T. gondii e Leptospira spp. em peixes-bois da Amazônia brasileira. / This study aimed to evaluate the occurrence of anti-T. gondii and Leptospira spp. in manatees (Trichechus inunguis) from two preservation centers located in the Brazilian Amazon. Blood samples from 74 manatees were taken. For detecting antibodies to T. gondii, sera were diluted 1:25, 1:50 and 1:500 and precense of antibodies was determined by the modified agglutination test (MAT). To Leptospira spp. sera were diluted 1:100 and tested against a collection of 24 antigenic serovars and presence of antibodies was determined by microscopic agglutination test (MAT). Of the 74 manatees 29 (39.2%) were positive to T. gondii with titre at 25. For Leptospira spp. 23 (31.1%) samples were kacted with four serotypes with titers ranging from 100 to 1600. The serovars reagents were Patoc, Castellonis, Icterohaemorrhagiae and Butembo. In one sample, coaglutination of serovars Patoc, Castellonis and Icterohaemorrhagiae (titres 100 and 200) was observed. This is the first report of the occurrence of T. gondii and Leptospira spp. in manatees in the Brazilian Amazon.