Dentre os vários fatores que podem influenciar a polarização das respostas imunológicas nos animais destacam-se o tipo do agente agressor envolvido, as células apresentadoras de antígenos atuantes no processo e o microambiente formado pelas citocinas. Diferentes perfis de citocinas podem determinar o curso da doença, uma vez que distúrbios no equilíbrio da produção e liberação destes polipeptídeos têm papel significativo no desencadeamento e agravamento de diversas enfermidades. Vírus podem interferir com as funções das citocinas em vários níveis, influenciando na natureza da resposta imune do hospedeiro. Este desequilíbrio entre a produção de citocinas do tipo Th1 e Th2 é geralmente considerado como uma das causas da cronificação das infecções por retrovírus. O VLB, assim como outros retrovírus, também possui esta capacidade de manipular a resposta imune do hospedeiro a fim de direcionar os estágios alinfocitóticos (AL) e de linfocitose persistente (LP). No entanto, seu efeito diretamente sobre as citocinas no sangue e leite dos animais infectados ainda não foi completamente elucidado. Desta forma, o presente estudo objetivou a avaliação da resposta imune contra o VLB em vacas naturalmente infectadas por meio da quantificação de um perfil abrangente de citocinas presentes tanto no soro sanguíneo como no lácteo minimizados outros aspectos de estimulação que não fossem a presença do próprio vírus in vivo. Para tanto foram coletadas amostras de sangue e leite de 11 animais divididos em seus respectivos grupos experimentais (4, 3 e 4 animais para os grupos negativo, AL e LP, respectivamente) e determinadas as concentrações séricas e lácteas de IL-1β, IL-4, IL-10, TNF-α e IFN-γ. Para as comparações entre os grupos utilizou-se o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e quando estes apresentaramse significativos aplicou-se \"pós-teste\" para verificar onde tal diferença ocorreu. O nível de significância aplicado nos testes foi de 5 % (P≤0,05), sempre considerando hipóteses alternativas bicaudais. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações das citocinas IL-1β, IL-4, IFN-γ e TNF-α no sangue dos animais pertencentes aos diferentes grupos experimentais. Quanto às concentrações das citocinas no soro lácteo dos bovinos testados nos diferentes grupos, os resultados demonstraram comportamentos semelhantes aos habitualmente descritos na literatura científica para o sangue periférico, sugerindo que a atuação do VLB sobre a glândula mamária promova interações análogas às observadas sistemicamente. Os resultados obtidos apontam para um envolvimento do VLB sobre o perfil de citocinas da glândula mamária nos animais sororreagentes. / Among the many factors that can influence the polarization of immune responses in animals include the type of the offending agent involved, the antigen-presenting cells active in the process and the microenvironment formed by the cytokine. Different profiles of cytokines may determine the course of the disease, since disturbances in the balance of production and release of these polypeptides play a significant role in triggering and worsening of many diseases. Viruses can interfere with the functions of cytokines at various levels, influencing the nature of the host immune response. This imbalance in cytokine production from Th1 and Th2 is generally regarded as a cause of chronic infections by retroviruses. The BLV, like other retroviruses, also possess this ability to manipulate the host immune response in order to drive the stages non-lymphocytotic and persistent lymphocytosis. However, its effect directly on cytokines in blood and milk of infected animals has not been fully elucidated. Thus, this study aimed at evaluating the immune response against the BLV in cows naturally infected by quantifying a comprehensive profile of cytokines present in both the serum and in whey minimized others aspects of stimulation that was not the presence of the virus itself in vivo. For this purpose, samples of blood and milk of 11 animals divided into their respective experimental groups (4, 3 and 4 animals for groups negative, PL- and PL+, respectively) and certain whey and serum concentrations of IL-1β, IL- 4, IL-10, TNF-α and IFN-γ. For comparisons between groups used the nonparametric Kruskal-Wallis test and when they showed up was applied to significant \"post test\" to see where this difference occurred. The level of significance in the tests was 5 % (P≤ 0.05), when considering two-tailed alternative hypotheses. There was no difference in the concentrations of IL-1β, IL-4, IFN-γ and TNF-α in the blood of animals belonging to the different experimental groups. The concentrations of cytokines in the whey of cattle in different groups, the results showed behaviors similar to those usually described in scientific literature to the peripheral blood, suggesting that the action of BLV on the mammary gland promotes interactions similar to those seen systemically. The results indicate an involvement of BLV on the cytokine profile of the mammary gland in animals seropositive.

Thesis (MSc (Production Animal Studies)--University of Pretoria, 2007. / Includes bibliographical references.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-10T16:24:10Z No. of bitstreams: 1 Hamilton Pereira Santos.pdf: 661343 bytes, checksum: 002eebd8b1e7c7b5293fde2164fb6317 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-10T16:24:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hamilton Pereira Santos.pdf: 661343 bytes, checksum: 002eebd8b1e7c7b5293fde2164fb6317 (MD5) Previous issue date: 2010-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Bovine Enzootic Leukosis (BL) is a disease caused by bovine leukemia virus (BLV), a Deltaretrovirus of the Retroviridae family, characterized by lymphocyte proliferation and lymphosarcoma, mainly distributed in dairy cattle. Based on national and international literature was found that all continents are affected by BLV, including Brazil. The state of Maranhão is characterized by intense trading of cattle from various regions of the country, where the presence of the EBL was found. This work aimed to study the prevalence and risk factors associated with EBL in the dairy herd of the state of Maranhao and the evaluation of a microimmunediffusion technique (micro-AGID) in agar gel for the diagnosis of EBL. In order to know the seroprevalence and risk factors associated with EBL, a total of 920 blood samples were collected from 92 dairy HZ breed cattle distributed in 23 municipalities of the five that make up the regional dairy farming country. For the diagnosis of EBL, the AGID was used to test (kit produced by the Technological Institute of Parana - TECPAR). The estimated prevalence was of 53.80% of seropositive animals, distributed in98.91% (91/92) of herds, mainly affecting animals over the age of 48 months (P <0.05). The Bacabal, Sao Luis and Pedreiras regionals presented higher seropositive frequencies (63.50%, 61.87, and 60.62%%) respectively; Imperatriz, intermediate (41.18%), and Açailândia, the lowest (30.83%) (P<0.05). All municipalities had seropositive animals, with frequencies ranging from 22.50% (San Francisco Brejao) to 75.00% (Bernardo do Mearim). When analyzing the variables studied as potential risk factors for EBL a statistically significant association (P <0.05) was found between seropositive for EBL and repeated use of the same needle for blood sampling or vaccination (Odds Ratio - OR=2.76; IC – 1,73 - 4,93), repeated use of the same obstetric glove (OR=1.74; IC – 1.2 a 2.49), animal housing (OR=1.97; IC – 1.28 – 3.02 ), and lack of veterinary care (OR=1.42; IC – 1.06 – 1.88), was found. Knowledge of BEL by farmers and the purchase of animals from other farms for breeding did not interfere in seroreactivity to BEL (OR=1.09; IC – 0.82 – 1.44 and OR=0.88; IC – 0.57 – 1.36, respectively) (P> 0.05). In order to improve the development of a diagnostic test for EBL,micro-gel immuno-Agarose (micro-AGID) was used with simple protocol for obtaining the antigen compared to a macro-AGID. A total of 450 serum samples from 92 properties in 23 counties that make up the dairy state of Maranhao were used. The antigen used in micro-AGID was obtained by dialysis of supernatant of FLK cells infected by BLV against the polyethylenogricol. In micro-AGID 10 μl of antigen and positive serum control was used and 30 μl of test serum, in the macro-AGID 25 μl of all reagents wereused. This produced by the Technological Institute of Parana (TECPAR). Of the sera compared, 259 (57.56%) and 245 (54.44%) showed positive results in micro-AGID and macro-AGID, respectively. There was a very good agreement between both techniques (K = 0.91), with sensitivity and specificity of the macro-AGID for micro-AGID of 93.43% and 98.43% with an accuracy of 95.96%. Micro-AGID showed clearer lines than those observed in the macro-AGID and reading can be made 24 hours before the macro-AGID. It is concluded that micro-AGID can be used successfully in the serological diagnosis of EBL, with the advantage of greater speed in issuing the results and obtaining the antigen with a simple technique. / A Leucose Enzoótica Bovina (LEB) é uma doença causada por um Deltaretrovirus da família Retroviridae, caracterizada por proliferação linfocitária e/ou formação de linfosarcomas, principalmente distribuída em bovinos leiteiros. O vírus da LEB está presente em todos os continentes. No Brasil foram encontrados 27,6% do rebanho leiteiro, infectado. O Estado do Maranhão se caracteriza por intensa comercialização de bovinos de várias regiões do país, onde foi constatada a presença da LEB. Neste trabalho se teve como objetivos, estudar a soroprevalência e fatores de riscos associado à LEB na Bacia Leiteira do Estado do Maranhão e aperfeiçoar técnica de imunodifusão em gel de agar (IDGA) para diagnóstico da LEB. Assim foram coletadas 920 amostras sanguíneas de 92 rebanhos leiteiros da raça Girolanda distribuídos em 23 municípios das cinco Regionais que compõem a bacia leiteira do Estado. Para o diagnóstico da LEB foi utilizada a prova de Imunodifusão em Gel deÁgar (IDGA). A prevalência estimada foi de 53,80% de animais sororeagentes, distribuídos em98,91% (91/92) dos rebanhos estudados, afetando principalmente animais de idade superior aos 48 meses (P<0,05). As Regionais Bacabal, São Luís e Pedreira apresentaram as freqüências de sororeatividade mais elevadas (63,50%, 61,87,% e 60,62%, respectivamente); Imperatriz, intermediária (41,18%); e Açailândia, a mais baixa (30,83%) (P<0,05). Todos os municípios apresentaram animais sororeagentes, com freqüências variando de 22,50% (São Francisco do Brejão) a 75,00% (Bernardo do Mearim). Ao se analisar as variáveis estudadas como potenciais fatores de risco para LEB foi verificada associação estatisticamente significativa (P<0,05) entre sororeagentes para LEB e uso repetido da mesma agulha para colheita de sangue ou vacinação (Odds Ratio – OR = 2,76; IC – 1,73 - 4,93), uso repetido da mesma luva obstétrica (OR=1,74; IC - 1,2 a 2,49), estabulação dos animais (OR=1,97; IC – 1,28 – 3,02) e ausência de assistência Veterinária (OR=1,42; IC – 1,06 – 1,88). O conhecimento da LEB pelos criadores e a aquisição de animais de outras criações parareprodução não interferiu na sororeatividade para LEB (OR=1,09; IC – 0,82 – 1,44 e OR=0,88; IC – 0,57 – 1,36, respectivamente) (P>0,05). Para aperfeiçoamento de uma prova de diagnóstico para LEB, utilizou-se a micro-imunodifusão em gel de agarose (micro-IDGA) usou-se protocolo simples para obtenção do antígeno comparativamente a uma macro-IDGA. Foram utilizadas 450 amostras de soro bovino provenientes de 92 propriedades dos 23 municípios que compõem a bacia leiteira do estado do Maranhão. O antígeno usado na micro-IDGA foi obtido por diálise frente ao polietilenogricol de sobrenadante de células FLK infectadas pelo VLEB. Na micro-IDGA utilizou-se 10 μl de antígeno e soro controle positivoe 30 μl do soro teste; na macro-IDGA 25 μl de todos os reagentes, produzidos pelo Instituto Tecnológico do Paraná (TECPAR). Dos soros comparados, 259 (57,56%) e 245 (54,44%) apresentaram resultados positivos na micro-IDGA e macro-IDGA, respectivamente. Houve ótima concordância entre as duas técnicas (K=0,91), com sensibilidade e especificidade da macro-IDGA em relação a micro-IDGA de 93,43% e 98,43%. A micro-IDGA apresentou linhas mais claras do que as observadas na macro-IDGA e a leitura pode ser feita 24 horas antes da macro-IDGA. Conclui-se que a micro-IDGA pode substituir a macro-IDGA no diagnóstico sorológico da LEB, com a vantagem de maior rapidez na emissão dos resultados e da obtenção do antígeno com técnica simples.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-18T13:39:28Z No. of bitstreams: 1 Luiz Carlos Fontes Baptista Filho.pdf: 748065 bytes, checksum: c624b21e9ec70bfdd8c60bd08dac6e9f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T13:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Carlos Fontes Baptista Filho.pdf: 748065 bytes, checksum: c624b21e9ec70bfdd8c60bd08dac6e9f (MD5) Previous issue date: 2012-03-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Enzootic Leukosis (EBL) and Bovine Tuberculosis (BT) compromise the immune status of the herds, especially the immunosuppressive potential of bovine leukosis virus (BLV). Several factors interfere with leukocyte values of cattle, but little is known about the effects of BT on them. The aim with the study was to evaluate the leukogram of tuberculinized cattle, with a view to the use of leukocytes as an epidemiologic tool in combating EBL in dairy herds of Pernambuco. 1.000 serum samples from 33 herds of cattle coming from various municipalities in the state were submitted to the serodiagnosis of EBL (AGID), being 920 cattle previously tuberculinized by the simultaneously comparative technique (SCT). Blood smears were prepared of all tuberculinized cattle, and the total and differential leukocyte count was performed using conventional techniques. The evaluation of the influence of BT in leukocyte counts was performed by comparing the results of four experimental groups, according to the results of the AGID and SCT (gTB group - 41 to the positive SCT; group gLEB - the 151 AGID positive, group gNEG - 379 to the negative TSC and AGID, group gINT - 43 positive to both tests). The prevalence rates of TB and LEB were, respectively, 11% (99/920) and 28% (282/1000), with 88% (29/33) of herds contributing at least one animal positive for one or both tests. From the 920 cattle examined, 43 (4,7%) were positive to both tests simultaneously. The mean values of leukocytes and lymphocytes (x 103/mm3 of blood) of the experimental groups were, respectively: gTB 9,6 ± 2,5 and 5,9 ± 1,9; gLEB 13,3 ± 6,3 and 9,1 ± 6,0; gNEG 11,5 ± 3,8 and 7,6 ± 5,1; and gINT 11,8 ± 4,3 and 8,0 ± 3,5. There were significant differences (p<0,05) between leukocytes and lymphocytes, when confronted gTB group (lower values) and gLEB (higher values) with the gNEG group, while gINT group did not differ (p>0,05) in none of the parameters analyzed in relation to the group gNEG. It is concluded that the leukogram is influenced by bovine BT, and health programs to combat LEB in dairy herds in the state of Pernambuco, and include the white blood cell count as an epidemiologic tool wish to consider the strategic prior tuberculin test the herds involved, being discarded cattle that are experiencing imunoalergic test positivity. / Leucose Enzoótica (LEB) e Tuberculose bovina (TB) comprometem o estado imunitário dos rebanhos, especialmente pelo potencial imunodepressor do Vírus da Leucose Bovina (VLB). Inúmeros fatores interferem nos valores leucométricos dos bovinos, porém, pouco se sabe dos efeitos da TB sobre os mesmos. O objetivo com o estudo foi avaliar o leucograma de bovinos tuberculizados, com vista ao uso da leucometria como ferramenta epidemiológica no combate à LEB em rebanhos leiteiros de Pernambuco. Amostras séricas de 1.000 bovinos procedentes de 33 rebanhos de diversos municípios do estado foram submetidas ao sorodiagnóstico da LEB (IDGA), sendo 920 bovinos previamente tuberculinizados pela técnica simultânea comparada (TSC). Esfregaços sanguíneos foram confeccionados de todos os bovinos tuberculinizados, sendo a contagem total e diferencial dos leucócitos realizada usando técnicas convencionais. A avaliação da influência da TB no leucograma foi realizada pelo confronto dos resultados de quatro grupos experimentais, em função dos resultados da IDGA e TSC (grupo gTB - 41 positivos ao TSC; grupo gLEB - 151 positivos à IDGA; grupo gNEG - 379 negativos ao TSC e IDGA; grupo gINT - 43 positivos a ambos os testes). As taxas de prevalência da TB e da LEB foram, respectivamente, 11% (99/920) e 28% (282/1000), com 88% (29/33) dos rebanhos contribuindo com ao menos um animal positivo para um ou ambos os testes. Dos 920 bovinos examinados, 43 (4,7%) apresentaram positividade simultânea a ambos os testes. Os valores médios dos leucócitos e linfócitos (x 103/mm3 de sangue) dos grupos experimentais foram, respectivamente: gTB 9,6 ± 2,5 e 5,9 ± 1,9; gLEB 13,3 ± 6,3 e 9,1 ± 6,0; gNEG 11,5 ± 3,8 e 7,6 ± 5,1; e gINT 11,8 ± 4,3 e 8,0 ± 3,5. Houve diferença significativa (p<0,05) entre os leucócitos e linfócitos, quando confrontados os grupos gTB (valores menores) e gLEB (valores maiores) com o grupo gNEG, enquanto o grupo gINT não diferiu (p>0,05) em nenhum dos parâmetros analisados em relação ao grupo gNEG. Conclui-se que o leucograma dos bovinos sofre influência da TB, devendo programas sanitários de combate à LEB em rebanhos leiteiros do estado de Pernambuco e que incluam a leucometria como ferramenta epidemiológica estratégica preconizar a prévia tuberculinização dos rebanhos envolvidos, sendo descartados os bovinos que apresentarem positividade ao teste imunoalérgico.

Dentre os vários fatores que podem influenciar a polarização das respostas imunológicas nos animais destacam-se o tipo do agente agressor envolvido, as células apresentadoras de antígenos atuantes no processo e o microambiente formado pelas citocinas. Diferentes perfis de citocinas podem determinar o curso da doença, uma vez que distúrbios no equilíbrio da produção e liberação destes polipeptídeos têm papel significativo no desencadeamento e agravamento de diversas enfermidades. Vírus podem interferir com as funções das citocinas em vários níveis, influenciando na natureza da resposta imune do hospedeiro. Este desequilíbrio entre a produção de citocinas do tipo Th1 e Th2 é geralmente considerado como uma das causas da cronificação das infecções por retrovírus. O VLB, assim como outros retrovírus, também possui esta capacidade de manipular a resposta imune do hospedeiro a fim de direcionar os estágios alinfocitóticos (AL) e de linfocitose persistente (LP). No entanto, seu efeito diretamente sobre as citocinas no sangue e leite dos animais infectados ainda não foi completamente elucidado. Desta forma, o presente estudo objetivou a avaliação da resposta imune contra o VLB em vacas naturalmente infectadas por meio da quantificação de um perfil abrangente de citocinas presentes tanto no soro sanguíneo como no lácteo minimizados outros aspectos de estimulação que não fossem a presença do próprio vírus in vivo. Para tanto foram coletadas amostras de sangue e leite de 11 animais divididos em seus respectivos grupos experimentais (4, 3 e 4 animais para os grupos negativo, AL e LP, respectivamente) e determinadas as concentrações séricas e lácteas de IL-1&beta;, IL-4, IL-10, TNF-&alpha; e IFN-&gamma;. Para as comparações entre os grupos utilizou-se o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e quando estes apresentaramse significativos aplicou-se \"pós-teste\" para verificar onde tal diferença ocorreu. O nível de significância aplicado nos testes foi de 5 % (P&le;0,05), sempre considerando hipóteses alternativas bicaudais. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações das citocinas IL-1&beta;, IL-4, IFN-&gamma; e TNF-&alpha; no sangue dos animais pertencentes aos diferentes grupos experimentais. Quanto às concentrações das citocinas no soro lácteo dos bovinos testados nos diferentes grupos, os resultados demonstraram comportamentos semelhantes aos habitualmente descritos na literatura científica para o sangue periférico, sugerindo que a atuação do VLB sobre a glândula mamária promova interações análogas às observadas sistemicamente. Os resultados obtidos apontam para um envolvimento do VLB sobre o perfil de citocinas da glândula mamária nos animais sororreagentes. / Among the many factors that can influence the polarization of immune responses in animals include the type of the offending agent involved, the antigen-presenting cells active in the process and the microenvironment formed by the cytokine. Different profiles of cytokines may determine the course of the disease, since disturbances in the balance of production and release of these polypeptides play a significant role in triggering and worsening of many diseases. Viruses can interfere with the functions of cytokines at various levels, influencing the nature of the host immune response. This imbalance in cytokine production from Th1 and Th2 is generally regarded as a cause of chronic infections by retroviruses. The BLV, like other retroviruses, also possess this ability to manipulate the host immune response in order to drive the stages non-lymphocytotic and persistent lymphocytosis. However, its effect directly on cytokines in blood and milk of infected animals has not been fully elucidated. Thus, this study aimed at evaluating the immune response against the BLV in cows naturally infected by quantifying a comprehensive profile of cytokines present in both the serum and in whey minimized others aspects of stimulation that was not the presence of the virus itself in vivo. For this purpose, samples of blood and milk of 11 animals divided into their respective experimental groups (4, 3 and 4 animals for groups negative, PL- and PL+, respectively) and certain whey and serum concentrations of IL-1&beta;, IL- 4, IL-10, TNF-&alpha; and IFN-&gamma;. For comparisons between groups used the nonparametric Kruskal-Wallis test and when they showed up was applied to significant \"post test\" to see where this difference occurred. The level of significance in the tests was 5 % (P&le; 0.05), when considering two-tailed alternative hypotheses. There was no difference in the concentrations of IL-1&beta;, IL-4, IFN-&gamma; and TNF-&alpha; in the blood of animals belonging to the different experimental groups. The concentrations of cytokines in the whey of cattle in different groups, the results showed behaviors similar to those usually described in scientific literature to the peripheral blood, suggesting that the action of BLV on the mammary gland promotes interactions similar to those seen systemically. The results indicate an involvement of BLV on the cytokine profile of the mammary gland in animals seropositive.

No / Transposable elements (TEs), such as endogenous retroviruses (ERVs), are common in the genomes of vertebrates. ERVs result from retroviral infections of germ-line cells, and once integrated into host DNA they become part of the host's heritable genetic material. ERVs have been ascribed positive effects on host physiology such as the generation of novel, adaptive genetic variation and resistance to infection, as well as negative effects as agents of tumorigenesis and disease. The avian leukosis virus subgroup E family (ALVE) of endogenous viruses of chickens has been used as a model system for studying the effects of ERVs on host physiology, and approximately 30 distinct ALVE proviruses have been described in the Gallus gallus genome. In this report we describe the development of a software tool, which we call Vermillion, and the use of this tool in combination with targeted next-generation sequencing (NGS) to increase the number of known proviruses belonging to the ALVE family of ERVs in the chicken genome by 4-fold, including expanding the number of known ALVE elements on chromosome 1 (Gga1) from the current 9 to a total of 40. Although we focused on the discovery of ALVE elements in chickens, with appropriate selection of target sequences Vermillion can be used to develop profiles of other families of ERVs and TEs in chickens as well as in species other than the chicken. / Financial support was provided by the EW GROUP, as well as grants from the Canada Foundation for Innovation, Canada Research Chairs Program, and the Natural Sciences and Engineering Council of Canada to RGB, and Canada Institutes of Health Research funding to MGIL and CJM.

Diferentes populações de leucócitos desempenham papeis fundamentais na eliminação de agentes invasores através da sua fagocitose e destruição, utilizando-se de mecanismos dependentes (metabolismo oxidativo) e independentes de oxigênio. Baseando-se na hipótese de que o vírus da Leucose Enzoótica Bovina, uma enfermidade crônica, que afeta, particularmente, os órgãos ricos em tecido linfóide destes animais, altera quantitativa e qualitativamente as subpopulações de leucócitos circulantes dos bovinos, influenciando na qualidade da resposta imunológica inata destes animais, o presente estudo avaliou a produção intracelular de peróxido de hidrogênio (H2O2) por leucócitos circulantes, frente estímulo in vitro com forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), lipopolissacarídeos de Escherichia coil (LPS) e após fagocitose de Staphylococcus aureus conjugados com iodeto de propídio (Sa-PI). Para tal, células foram obtidas de cinco vacas negativas no diagnóstico para LEB, de cinco vacas naturalmente infectadas pelo vírus da leucose bovina (VLB), alinfocitóticas, e de cinco vacas infectadas, manifestando linfocitose persistente (LP), e analisadas por citometria de fluxo. Foi averiguada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se do teste de Anderson-Darling, e sua homoscedasticidade, utilizando-se do teste F ou do teste de Lavene. Para a análise das freqüências observadas, foi utilizado o teste Qui-quadrado. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram feitos os testes de análise de variância (One-way ANOVA), de Tukey-Kramer, teste t de Student, de Mann-Whitney ou de Kruskal-Wallis. A porcentagem média total de células produzindo H2O2, caracterizada pela intensidade de fluorescência da 2,7-diclorofluoresceína, no ensaio sem estímulo in vitro, de 30,60%, foi menor (p=0,005) que aquela observada no ensaio com adição in vitro de LPS, de 52,00%, e que aquela obtida no ensaio com adição in vitro de PMA, de 63,13%. A porcentagem média total de células produzindo H2O2 no ensaio com estímulo por fagocitose in vitro de SaPI, de 47,47%, não diferiu da observada no ensaio sem estímulo. As porcentagens médias totais de células produzindo H2O2 não diferiram entre os ensaios em que houve prévio estímulo in vitro. Não houve diferença na porcentagem de leucócitos que estavam produzindo H2O2, entre os grupos experimentais, todavia, a produção intracelular média de H2O2, sem estímulo in vitro (p=0,007), após adição in vitro de PMA (p<0,001), de LPS (p=0,001) ou após fagocitose (p=0,002), de leucócitos obtidos de animais apresentando LP, foi menor que aquela verificada em células provenientes de animais soronegativos e de animais soropositivos alinfocitóticos. A porcentagem de leucócitos realizando fagocitose, caracterizada pela intensidade de fluorescência do iodeto de propídio, entre as células obtidas de animais com LP, de 7,20%, foi menor que aquela verificada nas amostras coletadas de animais soronegativos, de 12,90%, e soropositivos alinfocitóticos, de 14,70% (p=0,047). Além disso, as células provenientes de animais com LP apresentaram uma menor intensidade de fagocitose que aquela observada em leucócitos de animais soronegativos e soropositivos alinfocitóticos (p<0,001). Assim, os resultados obtidos demonstram uma vulnerabilidade funcional em leucócitos sangüíneos obtidos de animais infectados pelo VLB, manifestando LP. / Different leukocyte populations play key roles on the elimination of foreign antigens through phagocytosis and killing by oxygen-independent and -dependent (respiratory burst) mechanisms. Assuming that Enzootic Bovine Leukosis virus (BLV), that causes a chronic disease, and affects, mainly, lymphoid tissues, alters bovine circulating leukocyte subpopulations quantitatively and qualitatively, and influences the innate immune response, this study evaluated the intracellular production of hydrogen peroxide (H2O2) of circulating leukocytes after in vitro stimuli with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), Escherichia coli lipopolysaccharides (LPS), or phagocytosis of propidium iodide-labeled Staphylococcus aureus (PI-Sa). Cells were obtained from five BLV-negative cows, five naturally BLV-infected, non-lymphocytotic cows, and five BLV-positive cows with persistent lymphocytosis (PL), and analyzed by flow cytometry. Normality was tested using the Anderson-Darling test, followed by an F test or a Lavene\'s test to analyze the equality of variances. Differences among frequencies were tested using the Qui-square test. Differences among means were verified by a one way analysis of variance (ANOVA), followed by a Turkey-Kramer test, or a Student t-test, a Mann-Whitney U-test, or a Kruskal-Wallis test. Mean total percentage of H2O2-producing cells, characterized by the intensity of 2,7-dichlorofluorescein fluorescence, in the assay without in vitro stimulus (30.60%) was smaller (p=0.005) than that verified in the assay after in vitro addition of LPS (52.00%), and after addition of PMA (63.13%). Mean total percentage of H2O2-producing cells in the assay with stimulus by in vitro phagocytosis of PI-Sa (47.47%) was not different from that verified in the assay without in vitro stimulus. Mean total percentages of H2O2-producing leukocytes did not differ among assays with previous in vitro stimuli. There was no difference in the percentages of H2O2-producing leukocytes, among cells obtained from cows that belonged to different groups. However, mean intracellular H2O2-production of leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, without in vitro stimulus (p=0.007), after in vitro addition of PMA (p<0.001), or LPS (p=0.001), or after phagocytosis (p=0.002) was smaller than that verified in leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. The percentage of leukocytes that were carrying out phagocytosis, characterized by the intensity of propidium iodide fluorescence, among cells obtained from BLV-infected cows, presenting PL (7.20%), was smaller (p=0.047) than that verified among cells obtained from non-infected and from BLV-infected (12.90%), non-lymphocytotic (14.70%), cows. Furthermore, leukocytes obtained from BLV-infected cows, presenting PL, showed smaller phagocytosis intensity (p<0.001) than leukocytes obtained from non-infected and from BLV-infected, non-lymphocytotic, cows. Therefore, results show a functional vulnerability of circulating leukocytes obtained from BLV-infected, lymphocytotic cows.