Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-18Bitstream added on 2014-06-13T19:20:13Z : No. of bitstreams: 1 calazans_sg_dr_jabo.pdf: 11128452 bytes, checksum: 6057c220293ff16d0d56a83a1af6d1e5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Sabendo-se da influência das mutações no gene TP53 no desenvolvimento das neoplasias e da discrepância entre os resultados obtidos pelas técnicas de sequenciamento e imunoistoquímica, esta pesquisa teve como objetivo avaliar a sequência do TP53 e a imunorreatividade da p53, relacionando-as com fatores clínicopatológicos em cães com linfoma. Foram avaliados 12 cães com linfoma e cinco cães sadios. Amostras de neoplasia/linfonodo e de bulbo piloso foram obtidas. O diagnóstico histopatológico foi determinado pela classificação de Kiel. O imunofenótipo e a imunomarcação da p53 foram determinados por imunoistoquímica. Para a imunomarcação com a p53, utilizou-se anticorpo policlonal anti-p53 (CM1) na diluição de 1:500. A região do gene TP53 compreendida entre os exons quatro e nove (incluindo íntrons) foi amplificada por PCR e submetida ao sequenciamento. A média da imunorreatividade da p53 nos cães com linfoma foi 27,33%±12,14%, diferente da média do grupo controle (0,75±0,5) (P<0,05). A ausência de marcação da p53 foi observada em apenas um caso de linfoma de baixo grau de malignidade, cujo cão apresentou um ano de sobrevida. O outro caso de linfoma de baixo grau de malignidade apresentou a menor marcação da p53 (14,12%). O linfoma com maior marcação da p53 (50,56%) consistiu em um linfoma alimentar cujo cão evoluiu para o óbito no dia da consulta. As maiores médias de marcação foram observadas nos linfomas cutâneos, estádio clínico V, subestádio “b”, imunofenótipo B e tempo de sobrevida de até trinta dias, sem diferença estatística (P>0,05). Apesar dos resultados obtidos pela imunoistoquímica, nenhuma mutação foi encontrada nas sequências analisadas... / TP53 mutations are usually involved in cancer, but sequencing and immunohistochemistry results are often controversial. Thus, the aim of this study was to analyse both TP53 sequence and p53 immunostaining and to associate their findings to clinical-pathological features in dogs with lymphoma. Twelve dogs with lymphoma and five healthy dogs were included in this study. Tumor and hair sample was collected. Histopathological diagnosis was performed according to Kiel classification. Immunohistochemistry was performed to identify immunophenotype as well as p53 expression. Polyclonal antibody anti-p53 (CM1) was used at a 1:500 dilution. The region that encompasses exons 4-9 was amplified by means of PCR reactions and sequencing was then performed. p53 immunolabeling mean was 27,33%±12,14 in canine lymphoma group. It was statistically different from control group mean (0,75±0,5) (P<0,05). Only one p53-negative case was observed in a dog with low grade lymphoma, which presented one-year survival. Other low grade lymphoma presented lowest p53 immunoreactivity (14,12%). Highest reactivity (50,56%) was observed in dog with alimentary lymphoma, which died in the day of diagnosis. The highest immunolabeling means were verified in cutaneous presentation, clinical stage V, substage “b”, immunophenotype B and survival time up to 30 days, but there was no significant difference (P>0,05). Nevertheless, gene mutations were not observed in any sequence. In conclusion, p53 immunostaining is not essentially related to mutation in the gene TP53, particularly to the region between exons 4-9

Um mecanismo de tolerância periférica estudado é mediado por células T reguladoras (Tregs) que expressa o marcador CD25 e o fator de transcrição FoxP3. Estudamos o papel das Tregs nos fenômenos de imunossupressão na resistência e susceptibilidade genética dos hospedeiros contra o fungo. Animais A/J e B10.A foram depletados de células CD25 e outro grupo recebeu Ig de rato. Na 2ª semana de infecção, a depleção de células CD25 resultou em doença menos grave em ambas as linhagens com intenso afluxo de linfócitos T e macrófagos somente nos animais A/J. Na 10ª semana, a depleção de células CD25 também resultou em doença menos grave com aumento dos níveis de citocinas em ambas as linhagens. Neste período, entre os grupos controle, somente os animais A/J apresentaram aumento de linfócitos T e macrófagos. Em conclusão, os animais A/J apresentaram aumento da ativação da resposta imune enquanto que animais B10.A não desenvolveram eficiente ativação da resposta adaptativa mas que podem ter apresentado uma imunidade inata mais eficiente no controle do crescimento fúngico. / A mechanism for studying peripheral tolerance is mediated by regulatory T cells (Tregs) expressing the marker CD25 and the transcription factor FoxP3. We studied the role of Tregs in the mechanism of immunosuppression in genetic susceptibility and resistance of host against the fungus. A/J and B10.A mice were depleted of CD25 and control group received rat Ig. In the second week post infection, the depletion of CD25 cells resulted in low severity of disease in both mouse strains, with an intense influx of T lymphocytes and macrophages only in A/J. At 10 weeks, the depletion of CD25 also resulted in low severity disease with increased levels of cytokines in both mouse strains. Moreover, between the control group, only A/J mice showed an increase of T lymphocytes and macrophages. In conclusion, A/J mice showed increased activation of the immune response, whereas B10.A mice that had not developed efficient activation of the adaptive immune response, but that probably had an innate immunity that was more effective in controlling fungal growth.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

A leucose bovina enzoótica (LBE) é uma enfermidade causada por um retrovírus que possui duas manifestações distintas em animais adultos, o linfossarcoma multicêntrico dos adultos e a linfocitose persistente (LP). O linfossarcoma multicêntrico dos adultos é caracterizado pela apresentação de tumores em diversos órgãos em bovinos com idade superior a dois anos. O presente trabalhou analisou o histórico clínico e os achados patológicos de 30 casos de leucose bovina enzoótica, diagnosticados de um total de 845 bovinos necropsiados no Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, entre o período de janeiro de 1999 a janeiro de 2011. Todos os bovinos afetados eram fêmeas de aptidão leiteira, com idade entre três e nove anos, sendo 27 da raça Holândes (90,0%), dois de raça mista (6,3%) e um Jersey (3,7%). Os principais sinais clínicos apresentados pelos bovinos foram alterações locomotoras caracterizadas por paresia progressiva dos membros, perda de peso, aumento do volume de linfonodos superficiais e exoftalmia. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por massas neoplásicas, de coloração branco-amareladas, acinzentadas ou róseas, encontradas nos linfonodos, coração, sobre a meninge da medula espinhal, abomaso, intestinos e rins. A infiltração tumoral sobre a meninge da medula espinhal foi observada em 24 animais, sendo que a região lombar (20/24) e cauda equina (11/24) foram frequentemente afetadas. Ocasionalmente as massas também foram observadas na região cervical (6/24), próximo à intumescência, e na região torácica (2/24). No exame histológico essas massas tumorais eram formadas por infiltrado difuso de linfócitos neoplásicos, sendo apresentada na maioria dos casos como células pequenas não clivadas. A ocorrência de linfossarcoma com infiltração na medula espinhal deve ser considerada no diagnóstico de enfermidades que cursam com alterações locomotoras em bovinos adultos de aptidão leiteira. / The enzootic bovine leukosis (EBL) is a disease caused by a retrovirus that has two distinct manifestations in adult animals, the multicentric lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in adults (LP). The multicentric lymphosarcoma in adults is characterized by the presentation of tumors in various organs in cattle older than two years. This study analyzed the clinical history and pathological findings in 30 cases of EBL, diagnosed a total of 845 cattle necropsied in the Setor de Patologia Veterinária of Universidade Federal do Rio Grande do Sul, between the period January 1999 to January 2011. All affected cattle were dairy females, between three and nine years old, and 27 Holstein (90,0%), two cross breed (6,3%) and Jersey (3,7%). The main clinical signs shown by the cattle were changes, locomotor characterized by progressive paralysis of the limbs, weight loss, most prominently superficial lymph nodes and exophthalmus. The gross lesions were characterized by neoplasms masses, pale yellowish-white, grayish or pinkish, found in lymph nodes, heart, on the meninges of the spinal cord, abomasum, intestines and kidneys. The tumor infiltration on the meninges of the spinal cord was observed in 24 animals, and the lumbar (20/24) and cauda equina (11/24) were commonly affected. Occasionally, the masses were also observed in the cervical region (6/24), near the swelling, and in the thoracic region (2/24). In histological examination, these tumor masses were composed of diffuse infiltration of neoplastic lymphocytes, and in most cases presented as small noncleaved cells. The occurrence of lymphosarcoma infiltrating the spinal cord should be considered in the diagnosis of diseases which lead to changes in locomotor adult dairy cattle.

Um mecanismo de tolerância periférica estudado é mediado por células T reguladoras (Tregs) que expressa o marcador CD25 e o fator de transcrição FoxP3. Estudamos o papel das Tregs nos fenômenos de imunossupressão na resistência e susceptibilidade genética dos hospedeiros contra o fungo. Animais A/J e B10.A foram depletados de células CD25 e outro grupo recebeu Ig de rato. Na 2ª semana de infecção, a depleção de células CD25 resultou em doença menos grave em ambas as linhagens com intenso afluxo de linfócitos T e macrófagos somente nos animais A/J. Na 10ª semana, a depleção de células CD25 também resultou em doença menos grave com aumento dos níveis de citocinas em ambas as linhagens. Neste período, entre os grupos controle, somente os animais A/J apresentaram aumento de linfócitos T e macrófagos. Em conclusão, os animais A/J apresentaram aumento da ativação da resposta imune enquanto que animais B10.A não desenvolveram eficiente ativação da resposta adaptativa mas que podem ter apresentado uma imunidade inata mais eficiente no controle do crescimento fúngico. / A mechanism for studying peripheral tolerance is mediated by regulatory T cells (Tregs) expressing the marker CD25 and the transcription factor FoxP3. We studied the role of Tregs in the mechanism of immunosuppression in genetic susceptibility and resistance of host against the fungus. A/J and B10.A mice were depleted of CD25 and control group received rat Ig. In the second week post infection, the depletion of CD25 cells resulted in low severity of disease in both mouse strains, with an intense influx of T lymphocytes and macrophages only in A/J. At 10 weeks, the depletion of CD25 also resulted in low severity disease with increased levels of cytokines in both mouse strains. Moreover, between the control group, only A/J mice showed an increase of T lymphocytes and macrophages. In conclusion, A/J mice showed increased activation of the immune response, whereas B10.A mice that had not developed efficient activation of the adaptive immune response, but that probably had an innate immunity that was more effective in controlling fungal growth.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The epidemiological, clinical and pathological aspects of 128 cases of bovine lymphoma are retrospectively described in this study (1965-2014).Out of the cases were the gender was informed (n=111), 84.7% of affected animals were females and 15.3% were males. Out of the cases were breed was informed (n=108), 63% of affected animals were Holstein cows. The age of affected cows (n=107) varied from 1 to 14 years, with most animals being adults (80.4%) with 5 to 8 years of age (57.9%). The most common clinical sign (n=89) was lymphadenomegaly (74.1%). Gross findings (n=125) included enlargement of lymph nodes in 71.2% of the cases; this finding was classified as localized in 89.6% of the cases and generalized in 10.3% of the cases. A retrospective study of 86 cases of bovine lymphoma classified as with diffuse pattern of distribution and verified by phenotypic (histology) and immunophenotypic (immunohistochemistry [IHC]) is presented. Based on these results, the lymphoma cases were classified by the Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin s Lymphomas for Clinical Usage as: diffuse large non-cleaved cell (46.5%), diffuse large cleaved cell (33.7%), diffuse mixed small and large cell (4.6%), diffuse small cell plasmacytoid (7%), immunoblastic (3.5%), diffuse small cell intermediate (2.3%), diffuse small non-cleaved cell (1.2%), and diffuse small non-cleaved cell Burkitt s (1.2%). According to the IHC, 27 out of 86 (31.4%) lymphomas were positive to monoclonal antibody CD79αcy, used to detect B cells, and none were positive for polyclonal antibody CD3, used to detect T cells. Based on this, the B-cell type lymphomas were distributed as follows: diffuse large B-cell lymphoma (81.5%), large cell immunoblastic lymphoma (11.1%), and lymphoplasmacytoid lymphoma (7.4%), according the Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms (REAL). The results of this retrospective study, similar to what has been described in other parts of the world, allow us to conclude that bovine lymphomas are basically diffuse and predominantly made of intermediate-grade, large cells, with cleaved or non-cleaved nuclei. These lymphomas are due to neoplastic proliferation of B cells and correspond to almost all (92.6%) to what is currently classified as diffuse large B-cell lymphoma by REAL. / Foi realizado um estudo retrospectivo dos arquivos do Laboratório de Patologia Veterinária (LPV) da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM) com base nos casos de necropsia e materiais de necropsia de bovinos dos últimos 50 anos (1965-2014). Foram incluídos nesse estudo somente os laudos que possuíam o diagnóstico de linfoma (n=128). Dos laudos que informavam o sexo (n=111), 84,7% correspondiam a fêmeas e 15,3% a machos. Dos laudos em que constava a raça (n=108), a mais prevalente foi a holandesa (63%). Em relação à idade (n=107), houve uma variação entre um e 14 anos. A maioria dos bovinos era adulta (80,4%) e a maior concentração dos casos ocorreu entre 5-8 anos (57,9%). Clinicamente (n=89), linfadenomegalia foi o achado mais frequentemente observado (74,1%). Na necropsia (n=125), 71,2% dos bovinos apresentavam aumento de volume dos linfonodos; essa linfadenomegalia foi classificada como localizada em 89,6% dos casos e generalizada em 10,3% dos casos. Realizou-se também a avaliação fenotípica (histologia) e imunofenotípica (imuno-histoquímica [IHQ]) de 86 casos de linfoma bovino. Com base nestes resultados, os linfomas foram assim distribuídos utilizando-se a classificação proposta pela Working Formulation (WF) of Non-Hodgkin s Lymphomas for Clinical Usage: difuso de grandes células não clivadas (46,5%), difuso de grandes células clivadas (33,7%), difuso de pequenas e grandes células (4,6%), difuso de pequenas células tipo plasmocitoide (7%), imunoblástico (3,5%), difuso de pequenas células tipo intermediário (2,3%), difuso de pequenas células não clivadas (1,2%) e difuso de pequenas células não clivadas tipo Burkitt (1,2%). Na IHQ, 27 dos 86 (31,4%) linfomas foram positivos para o anticorpo monoclonal CD79αcy, utilizado para detecção de linfócitos B, e nenhum caso foi positivo para o anticorpo policlonal CD3, utilizado para detecção de linfócitos T. Com base nestes resultados, os linfomas B foram assim distribuídos utilizando-se a Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms (REAL): linfoma difuso de grandes células B (81,5%), linfomas imunoblásticos de grandes células (11,1%) e linfomas linfoplasmocíticos (7,4%). Os resultados aqui apresentados permitem concluir que à semelhança do que vem sendo descrito em outras partes do mundo, os linfomas bovinos são basicamente difusos e predominantemente de grau intermediário, de grandes células, com núcleos clivados ou não clivados. Esses linfomas são decorrentes da proliferação neoplásica de linfócitos B e correspondem, em sua quase totalidade (92,6%), ao que atualmente é incluído na REAL como linfoma difuso de grandes células B.