Linfomas representam um grupo de neoplasias que tem em comum a origem em células linforreticulares, manifestando-se geralmente em tecidos linfóides. Em sua evolução há uma reação generalizada contra as alterações sistêmicas que comprometem a homeostase, conhecida como resposta de fase aguda. Citocinas são proteínas relacionadas à imunidade inata e adquirida que medeiam diversas funções e estão envolvidas na resposta inflamatória e são produzidas em resposta a vários estímulos. Foram objetivos desse estudo, verificar se existem diferenças no perfil das citocinas interleucina-2, interleucina-6, interleucina-10, MCP-1 e TNF-alfa nos animais com linfoma multicêntrico ao diagnóstico, quando comparados a um grupo controle e verificar se existe diferença entre os níveis apresentados no momento do diagnóstico e na 6ª semana, momento em que se avalia a remissão. Os grupos do estudo foram constituídos por 20 cães com linfoma (experimental) e 19 cães clinicamente normais (controle) sendo excluídos do estudo cães que apresentavam tratamento prévio e/ou doença concomitante. A quantificação das variáveis estudadas foi realizada utilizando-se kit comercial CCYTOMAG 90K (Milliplex®), sendo as mesmas determinadas no grupo controle uma única vez e no grupo experimental, quando do diagnóstico e na 6ª semana de tratamento. A análise estatística foi realizada através de teste não paramétrico de Mann-Whitney não pareado para o grupo controle e diagnóstico, bem como o diagnóstico e a 6ª semana de tratamento, enquanto que a análise de variância simples (ANOVA) não paramétrico Kruskal-Wallis foi aplicada na comparação dos três grupos (controle, ato do diagnóstico e 6ª semana de tratamento) para todas as citocinas. Foi observada diferença significante nos níveis de IL-10 entre o grupo controle e o experimental ao diagnóstico (p= 0,0033). Os valores do grupo linfoma ao diagnóstico foram elevados em relação ao controle, sem diferença significante entre os momentos do diagnóstico e 6ª semana. As IL-2 e IL-6 mostraram diferenças significantes entre o grupo controle e o grupo linfoma ao diagnóstico (p= 0,0037 e p=0,0017, respectivamente), mas os valores do controle apresentaram-se elevados em relação ao momento do diagnóstico e não houve diferença entre o diagnóstico e 6ª semana. As citocinas TNF-α e MCP-1 não apresentaram diferença significativa. Concluiu-se que os animais com linfoma no diagnóstico apresentaram níveis séricos mais elevados de IL-10, quando comparados ao diagnóstico e ao grupo controle e seus níveis mantiveram-se elevados na 6ª semana de tratamento. As concentrações de IL-2 e IL-6 estiveram mais elevadas no grupo controle quando comparadas aos animais do grupo experimental e as concentrações de TNF-α e de MCP-1 não apresentaram diferença significativa / Lymphomas belongs to a group of malignancies that have in common the origin in lymphoreticular cells, and is generally manifested in lymphoid tissues. In its evolution there is a generalized reaction against the systemic changes that compromise the homeostasis, known as acute phase response. Cytokines are proteins related to innate and acquired immunity which mediate several functions and are involved in inflammatory response and produced in response to several stimulant. This study was designed to verify if there are differences in the profile of cytokines interleukin-2, interleukin-6, interleukin-10, MCP-1 and TNF-alpha in dogs with multicentric lymphoma when compared to a control group and see if there is difference between the levels at the time of diagnosis and at the 6th week, when remission is achieve. The study group consisted of 20 dogs with lymphoma (experimental) and 19 clinically healthy dogs (control). We excluded patients who had previous treatments and/ or concomitant disease. For measurements of cytokines we use a commercial kits CCYTOMAG 90K (Milliplex®), the same being determined in the control group only once and in the experimental group at diagnosis and at 6 week of treatment. Statistical analysis was performed using nonparametric Mann-Whitney unpaired test for the control group and diagnosis, and the diagnosis and 6 week of treatment, while the simple analysis of variance (ANOVA) nonparametric Kruskal-Wallis test was applied when comparing the three groups (control, diagnosis and act 6th week of treatment) for all cytokines. There was a significant difference in IL-10 levels between the control group and the experimental diagnosis (p = 0.0033). The values of the lymphoma group at diagnosis were higher than the control, without significant difference between the time of diagnosis and 6th week. IL-2 and IL-6 showed significant differences between the control and lymphoma groups at diagnosis (p = 0.0037 and p = 0.0017, respectively), but the control had higher levels than the lymphoma group and there was no difference between diagnosis and 6th week. The TNF-α and MCP-1 cytokines showed no significant difference. It was concluded that animals with lymphoma had higher serum levels of IL-10 when compared to control and their levels remained high at 6 weeks of treatment. IL-2 and IL-6 concentrations were higher in the control group compared to lymphoma group and the concentrations of TNF-α and MCP-1 were not significantly different

Anemia é a anormalidade hematológica mais comum em pacientes com câncer. Aproximadamente 30% dos cães com linfoma são anêmicos. A anemia pode ocorrer devido substituição da medula óssea por células tumorais, sangramentos ou hemólise, porém mais frequentemente é associada à doença crônica. Estudos realizados em seres humanos com neoplasias hematopoiéticas demonstraram que a diminuição das defesas antioxidantes eritrocitárias e aumento na concentração de marcadores de peroxidação lipídica no plasma são responsáveis pelo estresse oxidativo e ocorrência da anemia. Foram objetivos deste estudo determinar as concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida e as atividades das enzimas antioxidantes eritrocitárias glutationa redutase, glutationa peroxidase, além de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico e o estado antioxidante total em cães hígidos e com linfoma multicêntrico com e sem anemia, para avaliar a influência dos mecanismos oxidativos no desenvolvimento das anemias associadas a essa neoplasia. Foram observadas reduções significativas nas concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida e glutationa peroxidase nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia (p < 0,001 e p < 0,01, respectivamente). Não houve diferença significativa na avaliação das concentrações eritrocitárias de glutationa redutase e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, entretanto as concentrações plasmáticas de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico eram maiores no grupo de cães com linfoma multicêntrico e com anemia (0,94 mol/L &plusmn; 0,72; média &plusmn; desvio padrão). Os valores do estado antioxidante total foram significativamente menores (p < 0,001) nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia (0,60 mol/L &plusmn; 0,12) do que nos animais hígidos (0,87 mol/L &plusmn; 0,11). Os resultados obtidos indicam um aumento do estresse oxidativo principalmente nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia pela diminuição das defesas antioxidantes, representadas pelo estado antioxidante total e glutationa reduzida intraeritrocitária e pela tendência a maior aumento das concentrações plasmáticas de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, podendo estas alterações contribuir para a ocorrência de anemia em cães com linfoma multicêntrico. / Anemia is the most common hematological abnormality in cancer patients. Approximately 30% of dogs with lymphoma are anemic. Anemia can occur due to bone marrow replacement by tumor cells, bleeding or hemolysis, but more often is associated with chronic disease. Researches in human hematopoietic malignancies demonstrated that reduction of erythrocyte antioxidant defenses and increased concentrations of markers of lipid peroxidation in the plasma are responsible for the occurrence of oxidative stress and anemia. This study was designed to measure the concentration of erythrocyte reduced glutathione and antioxidant enzyme activities of erythrocyte glutathione reductase, glutathione peroxidase, and thiobarbituric acid reactive substances and total antioxidant status in healthy dogs and with multicentric lymphoma with or without anemia, to evaluate the influence of oxidative mechanisms in the development of anemia associated with this neoplasia. Significant reductions were observed in erythrocyte concentrations of reduced glutathione and glutathione peroxidase in dogs with multicentric lymphoma and anemia (p < 0.001 and p < 0.01, respectively). There was no significant difference in the assessment of concentrations of erythrocyte glutathione reductase and thiobarbituric acid reactive substances, although concentrations of plasma thiobarbituric acid reactive substances were higher in dogs with multicentric lymphoma and anemia (0.94 mol/L &plusmn; 0.72, mean &plusmn; standard deviation). The values of total antioxidant status were significantly lower (p < 0.001) in dogs with multicentric lymphoma and anemia (0.60 mol/L &plusmn; 0.12) than in healthy animals (0.87 mmol/L &plusmn; 0.11). The results indicate an increased oxidative stress, especially in dogs with multicentric lymphoma with anemia and the decrease of antioxidant defenses, represented by the total antioxidant status and intraerythrocytic reduced glutathione and the trend to greater increase in plasma thiobarbituric acid reactive substances and may these changes contribute to the occurrence of anemia in dogs with multicentric lymphoma.

Linfomas são as neoplasias hematopoiéticas mais comumente relatadas em cães, podendo ocorrer em qualquer idade. A etiologia ainda é desconhecida, porém se aceita que seja multifatorial. São classificadas de acordo com sua localização anatômica, estadio clínico da Organização Mundial de Saúde (OMS), critérios cito-histológicos e imunofenotípicos. A anemia é a anormalidade hematológica mais observada em pacientes com câncer e manifesta-se em cerca dois terços dos cães com linfoma. Os radicais livres de oxigênio produzidos pelas células tumorais aumentam o estresse oxidativo, sendo este demonstrado por mudanças na atividade das enzimas antioxidantes, podendo ocorrer oxidação de proteínas de DNA, aumento da peroxidação de lipídeos e alterações da fragilidade osmótica eritrocitária, acarretando a diminuição da meia vida das hemácias e, sendo essa diminuição um dos fatores que pode levar à anemia nos casos de linfoma. A superoxido dismutase (SOD) é uma enzima antioxidante que catalisa a dismutação do radical superóxido em oxigênio e peróxido de hidrogênio, protegendo as células dos danos induzidos por estes radicais livres. O objetivo deste estudo foi determinar as concentrações eritrocitárias de superóxido dismutase, além de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (MDA), o estado antioxidante total (TAS) e a fragilidade osmótica eritrocitária, em cães hígidos e com linfoma multicêntrico com e sem anemia, para avaliar a influência desses mecanismos no desenvolvimento das anemias associadas a essa neoplasia. Amostras de sangue foram obtidas de 24 cães com linfoma multicêntrico, sendo 10 sem anemia e 14 com anemia, e 20 cães saudáveis. Foi observada diferença significante no estado antioxidante total entre os grupos controle, grupos experimentais com linfoma multicêntrico com anemia e sem anemia (p < 0,0001). Não houve diferença significante quando os cães com linfoma com anemia e sem anemia foram comparados, assim como na avaliação das concentrações plasmáticas do MDA entre o grupo controle, grupo experimental com linfoma multicêntrico com anemia e grupo experimental com linfoma multicêntrico sem anemia (p = 0,823). A diferença também não foi significante quando se comparou o grupo controle e o grupo dos animais doentes (p=0,671). A diferença não foi significante na avaliação das concentrações eritrocitárias de superoxido dismutase entre o grupo controle, grupo experimental com linfoma multicêntrico com anemia e grupo com linfoma multicêntrico sem anemia (p=0,0748.). Entretanto, foi observada diferença significante entre o grupo controle e o grupo experimental com linfoma multicêntrico (p=0,0168). Não foi observada diferença na fragilidade osmótica eritrocitária dos cães com linfoma multicêntrico com anemia e sem anemia, as concentrações de NaCl em que observou-se 50% de hemólise estavam dentro dos valores postulados por Jain, 1963. Os resultados obtidos indicam um aumento do estresse oxidativo em cães com linfoma e que a anemia observada nos pacientes com linfoma não esta relacionada diretamente a diminuição das defesas antioxidantes eritrocitárias ou à alterações nas propriedades de membrana secundarias a peroxidação lipídica, que poderiam interferir na fragilidade do eritrócito / Lymphoma is hematopoietic malignancies most commonly reported in dogs can occur at any age. The etiology is still unknown, but is accepted to be multifactorial. They are classified according to their anatomic location, clinical stage of the World Health Organization (WHO), cytological and histological criteria and immunophenotype. Anemia is the most commonly observed hematologic abnormalities in patients with cancer and manifests itself in about two thirds of dogs with lymphoma. The oxygen free radicals produced by tumor cells increases oxidative stress, which is demonstrated by changes in antioxidant enzyme activities, protein and DNA oxidation, increased lipid peroxidation and alterations of erythrocyte osmotic fragility, leading to a decrease in half life of red blood cells and this decrease is one factor that can lead to anemia in cases of lymphoma. The superoxide dismutase (SOD) is an antioxidant enzyme that catalyzes the dismutation of superoxide into oxygen and hydrogen peroxide, protecting cells from damage induced by these free radicals. The aim of this study was to determine erythrocyte superoxide dismutase, and thiobarbituric acid reactive substances (MDA), total antioxidant status (TAS) and erythrocyte osmotic fragility, and in healthy dogs with multicentric lymphoma with and without anemia, to evaluate the influence of these mechanisms in the development of anemia associated with this neoplasia. Blood samples were obtained from 24 dogs with multicentric lymphoma, 10 and 14 with anemia without anemia and 20 healthy dogs. Significant difference was observed in total antioxidant status between the control group, experimental groups with multicentric lymphoma with anemia and without anemia (p <0.0001). There was no significant difference when dogs with lymphoma with anemia and without anemia were compared no significant difference in assessment of plasma concentrations of MDA between the control group, experimental group with multicentric lymphoma with anemia and experimental group with multicentric lymphoma without anemia (p=0.823). The difference was not significant when comparing the control group and the group of sick animals (p = 0.671). The difference was not significant in the evaluation of erythrocyte superoxide dismutase concentrations between the control group, experimental group with multicentric lymphoma with anemia and patients with multicentric lymphoma without anemia (p = 0.0748).. However, significant difference was observed between the control and experimental group with multicentric lymphoma (p = 0.0168). No difference was observed in erythrocyte osmotic fragility of dogs with multicentric lymphoma with anemia and without anemia, the concentrations of NaCl in which there was 50% hemolysis were within the range postulated by Jain, 1963. The results indicate an increased oxidative stress in dogs with lymphoma and that the anemia observed in patients with lymphoma is not directly related to the decrease in erythrocyte antioxidant defenses or the changes in properties of secondary membrane lipid peroxidation, which could interfere with the fragility of erythrocyte

Linfomas representam um grupo de neoplasias que tem em comum a origem em células linforreticulares, manifestando-se geralmente em tecidos linfóides. Em sua evolução há uma reação generalizada contra as alterações sistêmicas que comprometem a homeostase, conhecida como resposta de fase aguda. Citocinas são proteínas relacionadas à imunidade inata e adquirida que medeiam diversas funções e estão envolvidas na resposta inflamatória e são produzidas em resposta a vários estímulos. Foram objetivos desse estudo, verificar se existem diferenças no perfil das citocinas interleucina-2, interleucina-6, interleucina-10, MCP-1 e TNF-alfa nos animais com linfoma multicêntrico ao diagnóstico, quando comparados a um grupo controle e verificar se existe diferença entre os níveis apresentados no momento do diagnóstico e na 6ª semana, momento em que se avalia a remissão. Os grupos do estudo foram constituídos por 20 cães com linfoma (experimental) e 19 cães clinicamente normais (controle) sendo excluídos do estudo cães que apresentavam tratamento prévio e/ou doença concomitante. A quantificação das variáveis estudadas foi realizada utilizando-se kit comercial CCYTOMAG 90K (Milliplex&#174;), sendo as mesmas determinadas no grupo controle uma única vez e no grupo experimental, quando do diagnóstico e na 6ª semana de tratamento. A análise estatística foi realizada através de teste não paramétrico de Mann-Whitney não pareado para o grupo controle e diagnóstico, bem como o diagnóstico e a 6ª semana de tratamento, enquanto que a análise de variância simples (ANOVA) não paramétrico Kruskal-Wallis foi aplicada na comparação dos três grupos (controle, ato do diagnóstico e 6ª semana de tratamento) para todas as citocinas. Foi observada diferença significante nos níveis de IL-10 entre o grupo controle e o experimental ao diagnóstico (p= 0,0033). Os valores do grupo linfoma ao diagnóstico foram elevados em relação ao controle, sem diferença significante entre os momentos do diagnóstico e 6ª semana. As IL-2 e IL-6 mostraram diferenças significantes entre o grupo controle e o grupo linfoma ao diagnóstico (p= 0,0037 e p=0,0017, respectivamente), mas os valores do controle apresentaram-se elevados em relação ao momento do diagnóstico e não houve diferença entre o diagnóstico e 6ª semana. As citocinas TNF-&#945; e MCP-1 não apresentaram diferença significativa. Concluiu-se que os animais com linfoma no diagnóstico apresentaram níveis séricos mais elevados de IL-10, quando comparados ao diagnóstico e ao grupo controle e seus níveis mantiveram-se elevados na 6ª semana de tratamento. As concentrações de IL-2 e IL-6 estiveram mais elevadas no grupo controle quando comparadas aos animais do grupo experimental e as concentrações de TNF-&#945; e de MCP-1 não apresentaram diferença significativa / Lymphomas belongs to a group of malignancies that have in common the origin in lymphoreticular cells, and is generally manifested in lymphoid tissues. In its evolution there is a generalized reaction against the systemic changes that compromise the homeostasis, known as acute phase response. Cytokines are proteins related to innate and acquired immunity which mediate several functions and are involved in inflammatory response and produced in response to several stimulant. This study was designed to verify if there are differences in the profile of cytokines interleukin-2, interleukin-6, interleukin-10, MCP-1 and TNF-alpha in dogs with multicentric lymphoma when compared to a control group and see if there is difference between the levels at the time of diagnosis and at the 6th week, when remission is achieve. The study group consisted of 20 dogs with lymphoma (experimental) and 19 clinically healthy dogs (control). We excluded patients who had previous treatments and/ or concomitant disease. For measurements of cytokines we use a commercial kits CCYTOMAG 90K (Milliplex&#174;), the same being determined in the control group only once and in the experimental group at diagnosis and at 6 week of treatment. Statistical analysis was performed using nonparametric Mann-Whitney unpaired test for the control group and diagnosis, and the diagnosis and 6 week of treatment, while the simple analysis of variance (ANOVA) nonparametric Kruskal-Wallis test was applied when comparing the three groups (control, diagnosis and act 6th week of treatment) for all cytokines. There was a significant difference in IL-10 levels between the control group and the experimental diagnosis (p = 0.0033). The values of the lymphoma group at diagnosis were higher than the control, without significant difference between the time of diagnosis and 6th week. IL-2 and IL-6 showed significant differences between the control and lymphoma groups at diagnosis (p = 0.0037 and p = 0.0017, respectively), but the control had higher levels than the lymphoma group and there was no difference between diagnosis and 6th week. The TNF-&#945; and MCP-1 cytokines showed no significant difference. It was concluded that animals with lymphoma had higher serum levels of IL-10 when compared to control and their levels remained high at 6 weeks of treatment. IL-2 and IL-6 concentrations were higher in the control group compared to lymphoma group and the concentrations of TNF-&#945; and MCP-1 were not significantly different

Linfomas são as neoplasias hematopoiéticas mais comumente relatadas em cães, podendo ocorrer em qualquer idade. A etiologia ainda é desconhecida, porém se aceita que seja multifatorial. São classificadas de acordo com sua localização anatômica, estadio clínico da Organização Mundial de Saúde (OMS), critérios cito-histológicos e imunofenotípicos. A anemia é a anormalidade hematológica mais observada em pacientes com câncer e manifesta-se em cerca dois terços dos cães com linfoma. Os radicais livres de oxigênio produzidos pelas células tumorais aumentam o estresse oxidativo, sendo este demonstrado por mudanças na atividade das enzimas antioxidantes, podendo ocorrer oxidação de proteínas de DNA, aumento da peroxidação de lipídeos e alterações da fragilidade osmótica eritrocitária, acarretando a diminuição da meia vida das hemácias e, sendo essa diminuição um dos fatores que pode levar à anemia nos casos de linfoma. A superoxido dismutase (SOD) é uma enzima antioxidante que catalisa a dismutação do radical superóxido em oxigênio e peróxido de hidrogênio, protegendo as células dos danos induzidos por estes radicais livres. O objetivo deste estudo foi determinar as concentrações eritrocitárias de superóxido dismutase, além de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (MDA), o estado antioxidante total (TAS) e a fragilidade osmótica eritrocitária, em cães hígidos e com linfoma multicêntrico com e sem anemia, para avaliar a influência desses mecanismos no desenvolvimento das anemias associadas a essa neoplasia. Amostras de sangue foram obtidas de 24 cães com linfoma multicêntrico, sendo 10 sem anemia e 14 com anemia, e 20 cães saudáveis. Foi observada diferença significante no estado antioxidante total entre os grupos controle, grupos experimentais com linfoma multicêntrico com anemia e sem anemia (p < 0,0001). Não houve diferença significante quando os cães com linfoma com anemia e sem anemia foram comparados, assim como na avaliação das concentrações plasmáticas do MDA entre o grupo controle, grupo experimental com linfoma multicêntrico com anemia e grupo experimental com linfoma multicêntrico sem anemia (p = 0,823). A diferença também não foi significante quando se comparou o grupo controle e o grupo dos animais doentes (p=0,671). A diferença não foi significante na avaliação das concentrações eritrocitárias de superoxido dismutase entre o grupo controle, grupo experimental com linfoma multicêntrico com anemia e grupo com linfoma multicêntrico sem anemia (p=0,0748.). Entretanto, foi observada diferença significante entre o grupo controle e o grupo experimental com linfoma multicêntrico (p=0,0168). Não foi observada diferença na fragilidade osmótica eritrocitária dos cães com linfoma multicêntrico com anemia e sem anemia, as concentrações de NaCl em que observou-se 50% de hemólise estavam dentro dos valores postulados por Jain, 1963. Os resultados obtidos indicam um aumento do estresse oxidativo em cães com linfoma e que a anemia observada nos pacientes com linfoma não esta relacionada diretamente a diminuição das defesas antioxidantes eritrocitárias ou à alterações nas propriedades de membrana secundarias a peroxidação lipídica, que poderiam interferir na fragilidade do eritrócito / Lymphoma is hematopoietic malignancies most commonly reported in dogs can occur at any age. The etiology is still unknown, but is accepted to be multifactorial. They are classified according to their anatomic location, clinical stage of the World Health Organization (WHO), cytological and histological criteria and immunophenotype. Anemia is the most commonly observed hematologic abnormalities in patients with cancer and manifests itself in about two thirds of dogs with lymphoma. The oxygen free radicals produced by tumor cells increases oxidative stress, which is demonstrated by changes in antioxidant enzyme activities, protein and DNA oxidation, increased lipid peroxidation and alterations of erythrocyte osmotic fragility, leading to a decrease in half life of red blood cells and this decrease is one factor that can lead to anemia in cases of lymphoma. The superoxide dismutase (SOD) is an antioxidant enzyme that catalyzes the dismutation of superoxide into oxygen and hydrogen peroxide, protecting cells from damage induced by these free radicals. The aim of this study was to determine erythrocyte superoxide dismutase, and thiobarbituric acid reactive substances (MDA), total antioxidant status (TAS) and erythrocyte osmotic fragility, and in healthy dogs with multicentric lymphoma with and without anemia, to evaluate the influence of these mechanisms in the development of anemia associated with this neoplasia. Blood samples were obtained from 24 dogs with multicentric lymphoma, 10 and 14 with anemia without anemia and 20 healthy dogs. Significant difference was observed in total antioxidant status between the control group, experimental groups with multicentric lymphoma with anemia and without anemia (p <0.0001). There was no significant difference when dogs with lymphoma with anemia and without anemia were compared no significant difference in assessment of plasma concentrations of MDA between the control group, experimental group with multicentric lymphoma with anemia and experimental group with multicentric lymphoma without anemia (p=0.823). The difference was not significant when comparing the control group and the group of sick animals (p = 0.671). The difference was not significant in the evaluation of erythrocyte superoxide dismutase concentrations between the control group, experimental group with multicentric lymphoma with anemia and patients with multicentric lymphoma without anemia (p = 0.0748).. However, significant difference was observed between the control and experimental group with multicentric lymphoma (p = 0.0168). No difference was observed in erythrocyte osmotic fragility of dogs with multicentric lymphoma with anemia and without anemia, the concentrations of NaCl in which there was 50% hemolysis were within the range postulated by Jain, 1963. The results indicate an increased oxidative stress in dogs with lymphoma and that the anemia observed in patients with lymphoma is not directly related to the decrease in erythrocyte antioxidant defenses or the changes in properties of secondary membrane lipid peroxidation, which could interfere with the fragility of erythrocyte

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Atualmente, poucos fatores prognósticos tem sido associados especificamente com LDGCB canino. A imunoexpressão de C-MYC e Bcl2 é reconhecida em humanos como fator prognóstico, devido a relação desses oncogenes com proliferação celular e evasão da apoptose nessa doença. O objetivo desse estudo foi avaliar a imunomarcação dos anticorpos C-MYC, Bcl2, e marcadores de proliferação celular Ki67 e índice mitótico (IM) em cães com LDGCB tratados com protocolo CHOP 19 semanas e correlacioná-la com o tempo de sobrevida e estadiamento clínico visando defini-los como possíveis fatores prognósticos. Trinta amostras de linfonodos de cães diagnosticados com LDGCB foram avaliadas. Para determinar a marcação de C-MYC, Bcl2 e Ki67 foi realizada a técnica de imuno-histoquímica utilizando-se os anticorpos C-MYC, Bcl2 (Santa Cruz Biotechnology) e MIB-1 (Dako), respetivamente. O IM foi calculado como descrito para outras neoplasias. A interpretação dos resultados da imuno-histoquímica para C-MYC e Bcl2, foi calculada no porcentagem de área do número de células marcadas, enquanto a contagem de Ki67 foi realizada com auxílio de uma gratícula, contando-se células positivas por área de 1 cm². Foram estabelecidos pontos de corte, calculando-se a média para todos os marcadores, e posteriormente os valores do C-MYC, Bcl2, Ki67 e a IM foram classificados e definidos como “baixo” ou “alto”. Amostras classificadas como alto C-MYC e alto Bcl2, concomitantemente, foram definidas como alvo duplo MYC/Bcl2. A média de C-MYC foi de 21 (intervalo: 2,5-53,5), de Bcl2 foi de 32,5 (intervalo: 16,9 – 76,8), de Ki67 foi de 107 (intervalo: 1 – 446) e de IM foi de 21 (intervalo: 0-73). Quando comparados os tempos de sobrevida para cada marcador, observou-se que o Ki67 apresentou diferença significativa entre as médias dos grupos baixo (281 dias) e alto (91 dias) (p<0,05). Não houve relação do alvo duplo MYC/Bcl2 com tempos de sobrevida (p>0,05), assim como não houve associação entre a imunomarcação dos anticorpos com o estadiamento clínico. Porém, houve correlação positiva entre C-MYC e Bcl2 (p<0,05) e entre Ki67 e IM (p<0,0001). A expressão imuno-histoquímica dos anticorpos C-MYC e Bcl2, individualmente ou em alvo duplo, não parece constituir um fator prognóstico em cães com LDGCB. Porém, valores acima de 107 células positivas de Ki67 podem estar associados com tempos de sobrevida mais curtos em cães com LDGCB tratados com protocolo CHOP 19 semanas. / Diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) is the most common type of lymphoma in dogs and humans, being characterized by its aggressive behavior with variable survival times, even when same therapeutic approach is used. Currently, few prognostic factors are described in the literature regarding canine DLBCL. Immunoexpression of C-MYC and Bcl2 is recognized in humans as a prognostic factor in DLBCL, product of the relationship between these oncogenes with cellular proliferation and apoptosis escape. The objective of this study is to evaluate the immunolabeling of C-MYC, Bcl2, and markers of cellular proliferation Ki67 and mitotic index (MI) in dogs with DLBCL treated with 19 weeks CHOP protocol and correlate them to survival times and clinical stage in order to identify new prognostic factors. Thirty lymphnode samples of dogs diagnosed with DLBCL were evaluated. For immunoexpression of C-MYC, Bcl2 and Ki67, we perform immunohistochemistry using the antibodies C-MYC, Bcl2 (Santa Cruz Biotechnology) and MIB-1 (Dako), respectively. MI was calculated as previously discussed in other tumors. The interpretation of the immunohistochemistry results for C-MYC and Bcl2 was based on the expression level of the area of positive cells, whereas a grid reticle was used for counting Ki67 positive cells in a total area of 1 cm². Cutoff values for all markers were established calculating the mean value and then the C-MYC Bcl2, Ki67 and MI values were classified and defined as “low” and “high”. Cases classified as high C-MYC and high Bcl2, were defined as double target MYC/Bcl2. Mean values were 21 (range: 2,5-53,5) for C-MYC, 32,5 (range: 16,9-76,8) for Bcl2, 107 (range: 1-446) for Ki67 and 21 (range: 0-73) for MI. Only Ki67 immunoexpression was found to be statistical different when survival times were compared between groups low and high (281 days vs 91 days). When double target MYC/Bcl2 was analyzed, no relationship was identified with survival times (p>0,05). Additionally, an association between the antibodies immunoexpression and clinical staging was not identified. However, a positive correlation between C-MYC and Bcl2 (p<0,05) and, Ki67 and MI (P<0,0001) was established. The immunohistochemistry expression of the antibodies C-MYC and Bcl2, individually or in double target, does not appear to constitute a prognostic factor in dogs with DLBCL, whereas a value of Ki67>107 positive cells can be used in dogs with DLBCL to foresee shorter survival times when treated with 19 weeks CHOP protocol.

Anemia é a anormalidade hematológica mais comum em pacientes com câncer. Aproximadamente 30% dos cães com linfoma são anêmicos. A anemia pode ocorrer devido substituição da medula óssea por células tumorais, sangramentos ou hemólise, porém mais frequentemente é associada à doença crônica. Estudos realizados em seres humanos com neoplasias hematopoiéticas demonstraram que a diminuição das defesas antioxidantes eritrocitárias e aumento na concentração de marcadores de peroxidação lipídica no plasma são responsáveis pelo estresse oxidativo e ocorrência da anemia. Foram objetivos deste estudo determinar as concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida e as atividades das enzimas antioxidantes eritrocitárias glutationa redutase, glutationa peroxidase, além de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico e o estado antioxidante total em cães hígidos e com linfoma multicêntrico com e sem anemia, para avaliar a influência dos mecanismos oxidativos no desenvolvimento das anemias associadas a essa neoplasia. Foram observadas reduções significativas nas concentrações eritrocitárias de glutationa reduzida e glutationa peroxidase nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia (p < 0,001 e p < 0,01, respectivamente). Não houve diferença significativa na avaliação das concentrações eritrocitárias de glutationa redutase e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, entretanto as concentrações plasmáticas de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico eram maiores no grupo de cães com linfoma multicêntrico e com anemia (0,94 mol/L &plusmn; 0,72; média &plusmn; desvio padrão). Os valores do estado antioxidante total foram significativamente menores (p < 0,001) nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia (0,60 mol/L &plusmn; 0,12) do que nos animais hígidos (0,87 mol/L &plusmn; 0,11). Os resultados obtidos indicam um aumento do estresse oxidativo principalmente nos cães com linfoma multicêntrico e com anemia pela diminuição das defesas antioxidantes, representadas pelo estado antioxidante total e glutationa reduzida intraeritrocitária e pela tendência a maior aumento das concentrações plasmáticas de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, podendo estas alterações contribuir para a ocorrência de anemia em cães com linfoma multicêntrico. / Anemia is the most common hematological abnormality in cancer patients. Approximately 30% of dogs with lymphoma are anemic. Anemia can occur due to bone marrow replacement by tumor cells, bleeding or hemolysis, but more often is associated with chronic disease. Researches in human hematopoietic malignancies demonstrated that reduction of erythrocyte antioxidant defenses and increased concentrations of markers of lipid peroxidation in the plasma are responsible for the occurrence of oxidative stress and anemia. This study was designed to measure the concentration of erythrocyte reduced glutathione and antioxidant enzyme activities of erythrocyte glutathione reductase, glutathione peroxidase, and thiobarbituric acid reactive substances and total antioxidant status in healthy dogs and with multicentric lymphoma with or without anemia, to evaluate the influence of oxidative mechanisms in the development of anemia associated with this neoplasia. Significant reductions were observed in erythrocyte concentrations of reduced glutathione and glutathione peroxidase in dogs with multicentric lymphoma and anemia (p < 0.001 and p < 0.01, respectively). There was no significant difference in the assessment of concentrations of erythrocyte glutathione reductase and thiobarbituric acid reactive substances, although concentrations of plasma thiobarbituric acid reactive substances were higher in dogs with multicentric lymphoma and anemia (0.94 mol/L &plusmn; 0.72, mean &plusmn; standard deviation). The values of total antioxidant status were significantly lower (p < 0.001) in dogs with multicentric lymphoma and anemia (0.60 mol/L &plusmn; 0.12) than in healthy animals (0.87 mmol/L &plusmn; 0.11). The results indicate an increased oxidative stress, especially in dogs with multicentric lymphoma with anemia and the decrease of antioxidant defenses, represented by the total antioxidant status and intraerythrocytic reduced glutathione and the trend to greater increase in plasma thiobarbituric acid reactive substances and may these changes contribute to the occurrence of anemia in dogs with multicentric lymphoma.