Introduction et objectifs : Les méningiomes sont des tumeurs intracrâniennes pour la plupart de bas grade, dont les récidives sont cependant fréquentes. Le premier objectif de cette étude est d'évaluer la valeur pronostique de marqueurs de prolifération dans une série de 60 méningiomes. HuR (ELAV-like 1) est une protéine pro-oncogène pouvant stimuler la prolifération et la survie cellulaire. Dans la seconde partie de cette étude, nous analysons l'expression de HuR et les effets de l'inhibition de HuR sur la prolifération, l'apoptose et la résistance à l'hypoxie. Résultats : Il existe une corrélation significative entre le grade histologique et l'expression nucléaire de MCM6 (p<0,001), Ki-67 (p<0,001) et PHH3 (p<0,001), et une corrélation inverse entre ces marqueurs et la survie sans récidive (Cox ; MCM6 : p<0,001 ; Ki-67 : p=0,003 ; PHH3 : p=0,037). L'expression cytoplasmique de HuR est corrélée négativement avec la survie sans récidive (p=0,028), et positivement avec le grade (I vs II : p=0,0007), l'indice mitotique (p=0,0001), Ki-67 (p=0,0007) et MCM6 (p=0,0009). In vitro, l'inhibition de HuR (siRNA) entraîne une diminution de la croissance cellulaire (p=0,0004) et de la prolifération (Ki-67, p=0,0004), et une augmentation de l'apoptose (caspase 3 clivée, p=0,002), ces différents effets étant significativement augmentés en hypoxie. L'inhibition de HuR entraîne également une diminution de SIRT1 en normoxie (p=0,01) et en hypoxie (p=0,0006). Conclusion : MCM6 est un marqueur efficace pour identifier les méningiomes à haut risque de récidive. HuR est un marqueur de mauvais pronostic, dont l'inhibition permet de diminuer la prolifération cellulaire et d'augmenter l'apoptose / Introduction and objectives: Meningiomas are frequent and in most of cases low grade intracranial tumors, with frequent recurrences. The first objective of this study was to evaluate the prognostic value of proliferation and cell cycle markers in a series of 60 meningiomas. HuR (ELAV-like 1) is a pro-oncogenic protein that stimulates cell proliferation and survival. In the second part of this study, the objective was to evaluate HuR expression, and the effects of HuR inhibition on proliferation, apoptosis and resistance to hypoxia. Results: We found a significant correlation between histological grade and nuclear staining for MCM6 (p<0.001), Ki-67 (p<0.001) and PHH3 (p<0.001), and an inverse correlation between these markers and reccurence free survival (Cox; MCM6: p<0.001; Ki-67: p=0.003; PHH3: p=0.037). Cytoplasm staining for HuR was significantly stronger in atypical meningiomas (grades I vs II: p=0.0007), inversely correlated with progression free survival (p=0.028), and was positively correlated with mitotic index (p=0.0001), Ki-67 (p=0.0007) and MCM6 (p=0.0009). In vitro, HuR inhibition (siRNA) led to a significant decrease of cell growth (p=0.0004) and proliferation (Ki-67, p=0.0004), and an increase of apoptosis (cleaved caspase 3, p=0.002). These effects were significantly increased under hypoxia, comparing with normoxia. When HuR was inhibited, SIRT1 was decreased, both under normoxia (p=0.01) and hypoxia (p=0.0006). Conclusion: In conclusion, MCM6 is an efficient marker to identify meningiomas with high risk of recurrence. HuR is correlated with a poor prognosis. Its inhibition allows to decrease cell proliferation and to increase apoptosis

Le récepteur de haute affinité 1 (NTSR1) et son agoniste, la neurotensine (NTS), sont corrélés avec l’agressivité tumorale dans la plupart des tumeurs solides, y compris les cancers hormono-dépendants. Comme l’endomètre et l’ovaire sont également soumis à une régulation hormonale, nous avons évalué la contribution de NTS/NTSR1 à la carcinogenèse de l’endomètre et de l’ovaire. L’expression du récepteur de la neurotensine 1 (NTSR1) et la méthylation du promoteur NTSR1 (HM450) ont été analysées dans 385 cas de carcinome de l’endomètre du Cancer Genome Atlas (TCGA). De plus, à partir d’une série de 100 carcinomes de l’endomètre et de 66 échantillons d’endomètre bénin, l’expression de NTS et NTSR1 a été évalué par immunohistochimie. La série TCGA d’adénocarcinomes ovariens séreux de haut grade et une série de 46 tissus ovariens ont également été analysés. Dans la série TCGA de carcinomes de l’endomètre, le taux d’ARN messager de NTSR1 (ARNm) était négativement corrélé avec la survie globale (SG) et la survie sans progression (SSP) (p = 0,0012 et p = 0,0116, respectivement), et positivement corrélé avec le grade (p = 0,0008). En incluant seulement les carcinomes endométrioïdes, le niveau d’ARNm de NTSR1 était également négativement corrélé avec la SG (log-rank:p < 0.0001) et la SSP (log-rank: p = 0.002). Une forte expression d’ARNm de NTSR1 était significativement associée à une perte de méthylation du promoteur NTSR1. L’expression immunohistochimique de NTS et NTSR1 était significativement augmentée dans l’adénocarcinome (n = 100), par rapport à l’endomètre bénin (p <0,001). L’expression de NTSR1 était positivement corrélée avec le grade (p = 0,004). Une forte expression du NTSR1 cytoplasmique était significativement corrélée avec une SG et une SSP plus courtes (p < 0,001 et p = 0,001, respectivement). Cette corrélation restait significative en excluant les sous-types non-endométrioïdes (p = 0,04 et p = 0,02, respectivement). En analyse multivariée, l’expression de NTSR1 était un facteur de mauvais pronostic indépendant (p = 0,004). Nos résultats indiquent également la présence d’une corrélation positive entre l’expression du marqueur de prolifération MCM6 et le grade histologique dans le sous-type endométrioïde (grade I, 66,7 %, grade II, 75,3 %, grade III, 81,4 %, p <0,001) et une corrélation inverse à la SG et à la SSP (p = 0,02 pour les deux). Dans la cohorte TCGA, les analyses de Cox univariées et multivariées (p = 0,003 et p = 0,03, respectivement) ont révélé que les z-scores élevés de l’ARNm de MCM6 étaient associés à une SG réduite. Ces associations étaient absentes pour Ki-67. Il n’y avait pas de corrélation significative entre NTSR1 et MCM6 ou Ki-67. Dans l’adénocarcinome de l’ovaire, la NTS et NTSR1 ont été détectés dans 72 % et 74 % des cancers de l’ovaire, respectivement. En outre, dans la grande série d’adénocarcinomes ovariens séreux de haut grade, l’ARNm de NTSR1 s’est avéré être en corrélation avec des stades plus élevés et la résistance au platine (p = 0.02). Ceci est concordant avec les résultats expérimentaux montrant que l’antagoniste très spécifique de NTSR1, le SR48692, a augmenté la réponse au carboplatine dans les cellules cancéreuses de l’ovaire et les tumeurs expérimentales induites. Lorsque le SR48692 est combiné avec du carboplatine, une augmentation majeure des dommages à l’ADN induits par le platine et de la mort cellulaire, ainsi qu’une diminution de la croissance tumorale, a été notée. La surexpression de NTSR1 est un facteur de mauvais pronostic dans les cancers de l’endomètre et de l’ovaire, mettant en évidence la contribution de NTS dans la progression du cancer et ses utilisations en tant que marqueur pronostique, et en tant que cible thérapeutique potentielle. L’ajout d’un inhibiteur de NTSR1 en association avec une thérapie à base de sel de platine pourrait améliorer la réponse au traitement / The high affinity receptor 1 (NTSR1) and its agonist, neurotensin (NTS), are correlated with tumor cell aggressiveness in most solid tumors, including hormone-dependent cancers. As the endometrium and ovary are also subjected to hormonal regulation, we evaluated the contribution of NTS to endometrial and ovarian carcinogenesis. Neurotensin receptor 1 (NTSR1) expression and NTSR1 promoter methylation (HM450) were analyzed in 385 cases of endometrial carcinoma from The Cancer Genome Atlas (TCGA). Additionally, from a series of 100 endometrial carcinomas, and 66 benign endometrium samples, NTS and NTSR1 labeling was evaluated by immunohistochemistry. The TCGA series for ovarian high-grade serous adenocarcinoma and a series of 46 ovarian tissues were also analyzed. Using TCGA series, NTSR1 messenger RNA (mRNA) level was negatively correlated with overall survival (OS) and progression-free survival (PFS) (p = 0.0012 and p = 0.0116, respectively), and positively correlated with the grade (p = 0.0008). When including only endometrioid carcinomas, NTSR1 mRNA level continued to be negatively correlated with OS (log-rank: p < 0.0001) and PFS (log-rank: p = 0.002). A higher NTSR1 mRNA level was significantly associated with a loss of NTSR1 promoter methylation. Immunohistochemical expression of NTS and NTSR1 was significantly increased in adenocarcinoma (n = 100), as compared to benign endometrium (p < 0.001). NTSR1 expression was positively correlated with grade (p = 0.004). High immunohistochemical expression of cytoplasmic NTSR1 was significantly correlated with a shorter OS and PFS (p < 0.001 and p = 0.001, respectively). This correlation remained significant when excluding non-endometrioid subtypes (p = 0.04 and p = 0.02, respectively). In multivariate analysis, the expression of NTSR1 was an independent prognostic factor (p = 0.004). Our evidence indicated also the presence of a positive correlation between expression of proliferation marker, MCM6 and the histological grade of endometrioid endometrial adenocarcinoma (grade I, 66.7 %; grade II, 75.3 %; grade III, 81.4 %; p < 0.001) and an inverse correlation with OS ans PFS (p = 0.02 for both). For in silico analyses of the TCGA cohort, both univariate and multivariate Cox analyses (p = 0.003 and p = 0.03, respectively) revealed high MCM6 mRNA Z-scores associated with reduced OS. These associations were absent for Ki-67. No significant correlation between NTSR1 and MCM6 or Ki-67 was found. In ovarian adenocarcinoma, NTS and NTSR1 were detected in 72 % and 74 % of ovarian cancer, respectively. Furthermore, in a large series of high-grade ovarian cancer, NTSR1 mRNA was shown to correlate with higher stages and platinum resistance (p = 0.02). This correlates with experimental results showing the very specific NTSR1 antagonist, SR48692, enhanced the response to carboplatin in ovarian cancer cells and experimental tumors. When SR48692 is combined with carboplatin, a major improvement of platinum-induced DNA damage and cell death, as well as a decrease in tumor growth, was noted. NTSR1 overexpression is a poor prognostic factor in endometrial and ovarian cancer, highlighting the contribution of NTS in cancer progression and its uses as a prognostic marker, and as a potential therapeutic target. The addition of NTSR1 inhibitor in combination with platinum salt-based therapy could improve the response to the drug

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 martaalvesdasilvaarroyo_tese.pdf: 1264627 bytes, checksum: 85d0ef94c2a034728b5c60ca84368d6a (MD5) Previous issue date: 2010-05-17 / Lactose intolerance has been, for many years, considered as a worldwide problem in many children and adults. Objective: The aim is to investigate the prevalence of polymorphism -13910C/T, in a neonatal tracking, for early diagnosis of lactose tolerance/intolerance. Material and Methods: A cross-sectional case study of 310 Brazilian newborns. DNA was extracted from leukocyte umbilical cord and specific primers were used to amplify the region that encloses the -13910C/T polymorphism of the MCM6 gene, using the polymerase chain reaction and the restriction fragment length polymorphism tests. Results: One hundred and sixty (52%) male newborns and 150 (48%) female were evaluated. From these, 191 (62%) presented CC genotype (lactose intolerant), 95 (31%) CT genotype, and 24 (7%) TT genotype, comprising a total of 119 (38%) lactose tolerant newborns. According the newborns´ gender distribution in relation to the phenotypes has been found 97 (32%) of male gender and 94 (30%) of female gender lactose intolerant, and 63 (20%) male and 56 (18%) female lactose tolerant newborns, not being such distribution statistically significant (p = 0.801). Conclusions: The molecular analysis made possible the identification of the presence or absence of lactase persistence variant in Brazilian newborns. The neonatal molecular diagnosis can optimize the follow-up of positive results in newborn screening for lactose intolerance. / A intolerância à lactose tem sido considerada, por muitos anos, como um problema mundial em muitas crianças e adultos. Objetivos: investigar a prevalência do polimorfismo -13910 C/T, em um rastreamento neonatal, para o diagnóstico precoce da tolerância/intolerância à lactose. Material e Métodos: Estudo de casos em corte transversal em 310 neonatos brasileiros. O DNA foi extraído de leucócitos de sangue de cordão umbilical e primers específicos foram usados para amplificar a região do gene MCM6 que abrange o polimorfismo -13910 C/T, usando as técnicas da Reação em Cadeia da Polimerase e do Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de Restrição. Resultados: Foram avaliados 160 (52%) recém-nascidos do gênero masculino e 150 (48%) do gênero feminino. Destes, 191 recém-nascidos (62%) apresentaram o genótipo CC (intolerantes à lactose), 95 (31%) o genótipo CT e 24 (7%) o genótipo TT, perfazendo um total de 119 (38%) neonatos tolerantes à lactose. A distribuição do gênero dos recém-nascidos em relação aos fenótipos determinou 97 (32%) do gênero masculino e 94 (30%) do feminino intolerantes à lactose, e 63 (20%) recém-nascidos do gênero masculino e 56 (18%) do feminino tolerantes à lactose não sendo, essa distribuição, estatisticamente significante (p=0,801). Conclusão: A análise molecular permitiu identificar a presença ou ausência da variante persistência da lactase em neonatos brasileiros. O diagnóstico molecular pode otimizar o seguimento dos resultados positivos no rastreamento neonatal para a intolerância à lactose.