L’obésité est responsable de diverses complications médicales, notamment respiratoires. Elle favorise l’apparition de maladies bronchiques chroniques (asthme, BPCO) et complique leur prise en charge. Elle s’accompagne de troubles respiratoires du sommeil et augmente la susceptibilité aux infections respiratoires.Le tissu adipocytaire est désormais reconnu comme un tissu hormonal, source de nombreux médiateurs dont font partie les adipokines, cytokines produites principalement par les adipocytes. Parmi celles-ci, l’adiponectine (APN) est une protéine de 30kDa qui peut s’associer en multimères de plus ou moins haut poids moléculaire. Ses taux circulants sont élevés mais sa concentration sérique diminue avec le gain de poids.L’adiponectine est impliquée dans les phénomènes d’immunorégulation associés aux modifications nutritionnelles et également dans le développement pulmonaire. Mais le rôle pro ou anti-inflammatoire de l’APN est toujours un sujet à débat. L’association entre les taux sériques d’APN et la survenue de maladies bronchiques n’est pas clairement démontrée chez l’homme.Nous nous sommes intéressés au rôle que joue l’APN au sein du système respiratoire, dans la régulation du fonctionnement des macrophages et cellules épithéliales bronchiques. Nous avons plus particulièrement étudié l’effet de l’APN sur la sécrétion de cytokines par ces deux types cellulaires.Nous disposons de pièces opératoires pulmonaires de patients opérés pour un cancer bronchique, à partir desquelles nous réalisons des cultures primaires d’explants de parenchyme, de macrophages pulmonaires ou de cellules épithéliales bronchiques et nous disséquons des anneaux bronchiques.Nous avons montré qu’il existait une production d’APN in situ par du tissu pulmonaire humain et que cette production était corrélée, à l’instar de la forme circulante, au poids du patient. Nous avons vérifié que les récepteurs à l’APN (AdipoR1 et AdipR2) étaient tous les deux exprimés par des macrophages pulmonaires, des explants de bronches et des cellules épithéliales bronchiques.Nous avons soumis les macrophages pulmonaires humains à un traitement par de l’APN à différentes concentrations (3-10-30 microg/ml) avant de les stimuler par du LPS (10 ng/ml ou Poly I:C 10 ng/ml) ou d’IL-4 (10 ng/ml). Nous avons montré que l’adiponectine diminuait la sécrétion des cytokines M1 induites par le LPS et le Poly I:C (IL6, CCL3, CCL4, CCL5, CXCL8, TNF). tout comme celles des cytokines M2 induites par l’IL-4 (CCL13, CCL18, CCL22). L'adipoRon, agoniste synthétique des récepteurs de l'adiponectine, a montré les mêmes effets que la protéine recombinante.Nous avons comparé avec l’effet d’autres adipokines : la leptine à sa plus grande concentration (1000 ng/ml) induisait la production de cytokines de type M1 (IL6, CCL3, CCL4, CCL5, TNFa) par des macrophages non stimulés alors que la visfatine et la chémérine n’avaient aucun effet sur la production de cytokines par les macrophages.Seule l’adiponectine a démontré un effet sur les cellules épithéliales bronchiques, en modulant de façon opposée la production de certaines cytokines : diminution de la sécrétion de CXCL1 et CCL2 en situation basale et après traitement par TNF (50 ng/ml) mais augmentation de celle d’IL6 et CXCL8 en situation basale.Nous avons complété ce travail par des expériences sur la régulation du tonus bronchique par les adipokines, en utilisant des anneaux bronchiques dans des cuves à organes isolées. Ces résultats ont fait l'objet d’un dépôt de brevet européen.Ces travaux sont les premiers à s’intéresser à l’effet de l’APN et de l’AdipoRon sur un modèle de culture primaire de macrophages et cellules épithéliales bronchiques humains. L’APN est capable de moduler la polarisation de ces cellules. Les adipokines régulent aussile tonus bronchique. Les adipokines sont essentielles à la compréhension du retentissement pulmonaire de l’obésité. / Obesity promotes the development of chronic bronchial diseases (asthma, COPD) and complicates their management, induces sleep breathing disorders and increases susceptibility to respiratory infections. Adipocytea are a source of mediator production including adipokines. Among these, adiponectin (APN) is a 30kDa protein that can associate in multimers of variable molecular weight. It circulates at high level but its serum concentration decreases with weight gain. APN is involved in immunoregulation and pulmonary development. But the pro or anti-inflammatory role of the APN is still a matter for debate. The association between serum levels of APN and the occurrence of bronchial diseases is not clearly demonstrated in humans. We explored the role of adipokines within the respiratory system. In particular, we studied the effect of the APN on the production of cytokines by pulmonary macrophages and bronchial epithelial cells. We obtained lung specimens from patients operated for carcinoma, from which we carried out primary cultures of parenchymal explants, pulmonary macrophages or bronchial epithelial cells and we also prepared bronchial rings for study in organ bath. We have revealed an in situ production of APN by human lung tissue, which is correlated with patient weight. We have verified that APN receptors (AdipoR1 and AdipR2) were both expressed by pulmonary macrophages, bronchial explants, and bronchial epithelial cells. We have treated human lung macrophages with APN (3-10-30 μg/ml) before stimulation with LPS (10 ng / ml) or Poly I: C (10 ng/ml) or IL-4 (10 ng/ml).We have shown that the APN decreased the production of M1 cytokines induced by LPS and Poly I: C (IL-6, CCL3, CCL4, CCL5, CXCL8, TNFa) as well as those of M2 cytokines induced by IL-4 (CCL13, CCL18, CCL22). AdipoRon, a synthetic adiponectin receptor agonist, exhibited the same effects as the recombinant protein. In comparison, leptin at its highest concentration (1000 ng/ml) induced the production of M1-type cytokines (IL-6, CCL3, CCL4, CCL5, TNF-α) by unstimulated macrophages whereas visfatin and chemerin did not reveal any effect on cytokine production by macrophages. Only APN demonstrated an effect on bronchial epithelial cells: decreasing the production of CXCL1 and CCL2 at basal state and after stimulationwith TNF (50 ng / ml) but increasing production of IL6, CCL20 and CXCL8 in the basal situation. We have completed this work by experiments on the regulation of bronchial tone by adipokines, using bronchial rings in isolated organ baths. These results have been the subject of a European patent application. This work is the first looking at the effect of APN and AdipoRon on primary human pulmonary macrophages and bronchial epithelial cells. APN is able to modulate the polarization of these cells. Adipokines are essential for understanding the respiratory burden of obesity.

Les macrophages jouent un rôle dans l'inflammation de certaines pathologies pulmonaires comme l'asthme et la broncho pneumopathie chronique obstructive. Selon la dichotomie Th1 et Th2, les macrophages s'activent en phénotype M1/M2 en fonction du microenvironnement. Sous l'influence du lipopolysaccharide (LPS) les macrophages s'activent en phénotype M1. A l'inverse, l'exposition aux cytokines Th2 (interleukine (IL)-4/IL-13) induit un phénotype M2 des macrophages. Nous avons réalisé une étude transcriptomique des marqueurs de la polarisation M1/M2 des macrophages pulmonaires humains. La polarisation M1 induite par le LPS augmente la production des cytokines (TNF-α, IL-1β, CCL2, 3, 4, 5, CXCL1, 8, 10), de la PGE2 et l'expression du CD38 et CD197. La polarisation M2 induite par l'IL-4/IL-13 augmente l'expression des cytokines (CCL13, 17, 22, 26), de la 15-lipoxygénase (15-LOX) et du CD206. Nous avons évalué l'expression des 15-LOX-1 et 15-LOX-2 et leur rôle dans la régulation de la polarisation des macrophages pulmonaires. Le LPS augmente l'expression de la 15-LOX-2 alors que l'IL-4/IL-13 augmente l'expression de la 15-LOX-1. L'inhibition des 15-lipoxygénases diminue la production des cytokines M1/M2. Enfin, nous avons étudié l'expression et le rôle du récepteur nicotinique α7 dans la polarisation des macrophages pulmonaires humains. Ces derniers expriment les récepteurs nicotiniques α7 dont la stimulation par des agonistes nicotiniques α7 diminue la production des cytokines M1/M2. Ce travail apporte de nouvelles connaissances sur la polarisation des macrophages, dont certaines voies de régulation peuvent être impliquées dans les pathologies inflammatoire pulmonaires / In pulmonary diseases such as asthma and chronic obstructive pulmonary disease, macrophages orchestrate inflammatory reactions. In response to environmental signals, macrophages exhibit a phenotypic polarization that mirrors the Th1/Th2 polarization. Upon exposure to bacterial lipopolysaccharide (LPS), macrophages undergo M1 polarization. In contrast, interleukin (IL)-4/IL-13 induce M2 polarization.In our first study, we characterized the phenotypic differentiation of human lung macrophages (LM) using a whole-transcriptome approach. Cytokines, lipid metabolism and membrane markers were among the most affected genes. LPS-induced M1 polarization was associated with an increase in the production of cytokines (TNF-α, IL-1β, CCL2, 3, 4, 5, CXCL1, 8, 10), in PGE2 signalling and in the expression of CD38 and CD197. IL-4/IL-13-induced M2 macrophages increased expression of cytokines (CCL13, 17, 22, 26), 15-lipoxygenase (15-LOX) and CD206. In the second study, we investigated the expression of 15-LOX-1 and 15-LOX-2 and their roles in regulating the polarization of human LM. LPS increased the expression of 15-LOX-2 whereas IL-4/IL-13 induced the expression of 15-LOX-1. Inhibition of the 15-LOX pathways decreased the production of both M1 and M2 cytokines. The third study investigated the expression of α7 nicotinic receptors (α7nAChR) and their regulating roles in the polarization of LM. Expression of α7nAChR was found in unstimulated LM. Specific α7nAChR agonists decreased the in vitro production of both M1 and M2 cytokines. Our work adds new insights in the macrophage polarization and some of the regulatory pathways that may be involved in pulmonary diseases