Šio tyrimo tikslas buvo įvertinti Malassezia pachydermatis paplitimą sveikų ir kliniškai dermatitu sergančių šunų tarpe. Tyrimo metodika. Tyrimas atliktas su 118 šunimis. 33 šunys buvo kliniškai sveiki, o 85 – turėjo dermatitus įvairiose kūno vietose. Šunims buvo atliekamas odos citologinis tyrimas. Mėginys tyrimui buvo imamas objektinį stiklelį priglaudus prie odos ir gautą mėginį nudažius Diff-Quik® (Dade AG, Dudingen, Switzerland) dažais. Tyrimo metu buvo ieškoma M. pachydermatis mielių. Mėginiai kliniškai sveikiems šunims buvo imami nuo kaklo, alkūnių, kirkšnių, tarpupirščių ir iš ausų. Sergantiems dermatitu mėginiai buvo paimti iš ausų, alkūnių, kaklo, kirkšnių, kojų, krūtinės, nugaros, pilvo, snukio. Tyrimo rezultatai ir išvados. Nustatėme, kad kliniškai dermatitu sergančiųjų tarpe M. pachydermatis paplitimas buvo didesnis 59% (p<0,05), negu kliniškai sveikų šunų tarpe. M. pachydermatis mielės sergančių šunų grupėje daugiausia buvo paplitusios ausyse (p<0,05). Tokie veiksniai kaip šunų lytis, veislė, amžiaus grupė, plauko ilgis, ausų kaušelio tipas M. pachydermatis paplitimo neįtakojo (p<0,05). Lauke laikomų šunų tarpe M. pachydermatis paplitimas buvo 21 % didesnis (p<0,05), negu tarp patalpose laikomų šunų. O tarp dažnai maudomų šunų M. pachydermatis pasireiškia 2,5 karto dažniau, nei tarp retai maudomų (p<0,05). Išsiaiškinome, kad konkurentinės ligos ir gydymas gliukokortikoidais įtakoja M. pachydermatis mielių sukeltą dermatitą. Šunys, sergantys konkurentinėmis... [toliau žr. visą tekstą] / The objective of the study was to assess the prevalence of Malassezia pachydermatis in clinically healthy and ill dogs that were suffering from dermatitis Research methodology. The test was performed with 118 dogs. 33 dogs were clinically healthy but 85 had dermatitis in various body areas. The dogs were examined by performing skin cytological examination. The sample for examination was taken by touching glass slide on the skin and staining the resulting sample with Diff-Quik® (Dade AG, Dudingen, Switzerland) paint. During the investigation was sought to find M. pachydermatis yeast. The samples of clinically healthy dogs were taken from the neck, elbows, groin, toes and ears. Dogs that were suffering from dermatitis, samples were taken from the ears, elbows, neck, groin, legs, chest, back, abdomen and foot. The research results and conclusions. We determined that among patients that were clinically ill with dermatitis M. pachydermatis prevalence was higher by 59 % (p<0.05) than among clinically healthy dogs. The group of dogs with M. pachydermatis was mostly prevalent in the ears (p<0.05). Factors such as gender, breed, length of hair, earlobes and age group type of dogs did not affect the incidence of M. pachydermatis (p<0.05). Among dogs that were held outdoor the prevalence of M. pachydermatis was 21 % higher (p<0.05) than for dogs in the premises. For dogs that were often bathed M. pachydermatis occurs 2.5 times more often than rarely bathed (p<0.05). We found out that... [to full text]

Malassezia spp. são fungos lipofílicos, reconhecidos há mais de cem anos como membros da microbiota cutânea normal humana, bem como agentes de doenças dermatológicas. Desde 1980, são relatados como causadores de infecções sistêmicas oportunistas. Estas leveduras são frequentemente encontradas em uma grande variedade de animais homeotérmicos, e sua ampla distribuição no meio ambiente agora está sendo explorada através de técnicas moleculares e bioquímicas. O enfoque deste estudo foi a espécie não lipido-dependente Malassezia pachydermatis, e a sua caracterização através do perfil enzimático pelo sistema Api-Zym®. Deste modo, utilizaram-se 30 amostras de M. pachydermatis isoladas de cães, com e sem sinais clínicos, identificadas pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). As amostras foram cultivadas em meio de Dixon modificado, incubadas a 37°C durante 48 horas, para posterior quantificação através de espectrofotometria. Um inóculo de 65 μl foi colocado em cada orifício do kit comercial de verificação enzimática e, após, incubado a 37ºC por 4 horas. Os resultados foram obtidos através da leitura visual e interpretação das titulações por escalas pré-determinadas, também foram avaliadas as reações através de “escaneamento” eletrônico. Todos os testes foram realizados em triplicata. Os resultados demonstraram a atividade de enzimas específicas pertencentes ao grupo das peptídeo hidrolases (100%), fosfohidrolases (98,3%) e éster hidrolases (91,6%), enquanto que as enzimas α-galactosidase, β-galactosidase, β-glicuronidase, α-manosidase e α-fucosidase caracterizaram 10% de todos os isolados. Além disso, não se comprovou a viabilidade do sistema utilizado no estudo para a caracterização enzimática da levedura. / Malassezia spp. are lipophilic fungi, which have been recognised for over a century as members of the normal human cutaneous flora, and also as agents of certain skin diseases. In addition, since the 1980s, they have been reported as causing opportunistic systemic infections. These yeasts have frequently been found on a diverse range of other warm-blooded animals, and their wider distribution in nature is now being explored using molecular techniques. The focus of the present study was the species no lipid-dependent Malassezia pachydermatis, and its characterization through the enzymatic profile by the Api-Zym® system. Then 30 isolated samples of dogs had been used, with and without clinical signals, identified by the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). The samples were cultivated into Dixon’s modified medium, incubated at 37°C during 48 hours, for posterior quantification through spectrophotometry. An inocula of 65 μl was placed in each microwell of the commercial kit of enzymatic verification and, after, it was incubated at 37ºC for 4h. The results were obtained through the visual reading and interpretation of the titulations by predetermined scales, it were also evaluated the reactions through electronic scanning. All the tests were performed in triplicate. The results demonstrated the activity of specific enzymes pertaining to the group of the peptide hydrolases (100%), phosphohydrolases (98,3%) and ester hydrolases (91,6%), while the enzymes α-galactosidase, β-galactosidase, β-glucuronidase, α-mannosidase and α-fucosidase characterized 10% off all the isolates. Moreover, it was not proven the viability of the system used in the study for the enzymatic characterization of the yeast.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The yeast Malassezia pachydermatis belongs to the normal microbiota of animals, and is usually implicated as responsible for otitis media and recently by various forms of dermatitis, mainly in dogs. This study aimed to evaluate the in vitro susceptibility of 26 M. pachydermatis isolates against the antifungals fluconazole, itraconazole, ketoconazole, clotrimazole, miconazole, terbinafine and nystatin, and to the combinations of these with thymol, carvacrol and cinnamaldehyde by the checkerboard method, based on document M27-A3. The activity of itraconazol, ketoconazole and clotrimazole against 20 isolates of M. pachydermatis, through simultaneous and sequential exposure of these agents, was also evaluated by the disk-diffusion technique. The minimum inhibitory concentration (MIC) for fluconazole ranged from 1-64 μg/mL, itraconazole 0.01-1 μg/mL, ketoconazole 0.01-0.5 μg/mL, clotrimazole 0.5-32 μg/mL, miconazole 2-32 μg/mL, terbinafine 0.12-32 μg/mL and nystatin 16-64 μg/mL. High rates of synergism were observed in the combinations of nystatin + thymol (88.46%), nystatin + carvacrol (88.46%), nystatin + cinnamaldehyde (73.07%), clotrimazole + thymol (69.23%), clotrimazole + carvacrol (69.23%), miconazole + thymol (65.38%), miconazole + carvacrol (76.92%) and miconazole + cinnamaldehyde (65.38%). However, high rates of indifference were observed in the combinations of fluconazole + thymol (53.84%), carvacrol + fluconazole (46.15%), fluconazole + cinnamaldehyde (65.38%), thymol + itraconazole (61.53%), carvacrol + itraconazole (69.23%), itraconazole + cinnamaldehyde (65.38%), terbinafine + thymol (73.07%), terbinafine + carvacrol (65.38%), terbinafine + cinnamaldehyde (73.07%) and clotrimazole + cinnamaldehyde (61.53%). Ketoconazole combined with thymol, carvacrol and cinnamaldehyde had the highest rates of antagonism (42.3%). The prior exposure of M. pachydermatis to itraconazole resulted in a reduction of the inhibition halo when compared with itraconazole and ketoconazole used simultaneously (p <0.01). Moreover, prior exposure of clotrimazole significantly increased the zone of inhibition (p <0.001) when compared to the simultaneous exposure of itraconazole and clotrimazole. The most significant associations deserve in vivo evaluation in order to verify their potential in the treatment of infections caused by M. pachydermatis. / Malassezia pachydermatis é uma levedura pertencente à microbiota normal de animais e, usualmente, apontada como responsável por otites externas e recentemente por diversas formas de dermatites, principalmente em cães. Este estudo teve como objetivo avaliar a suscetibilidade in vitro de 26 isolados de M. pachydermatis frente aos antifúngicos fluconazol, itraconazol, cetoconazol, clotrimazol, miconazol, terbinafina e nistatina, e combinações desses com timol, carvacrol e cinamaldeído, através do método de checkerboard , baseado no documento M27-A3. Também foram avaliadas a atividade do itraconazol, cetoconazol e clotrimazol, em 20 isolados de M. pachydermatis, através da exposição simultânea e sequencial desses agentes utilizando-se a técnica de disco-difusão. Isoladamente, as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) para o fluconazol variaram de 1- 64 μg/mL, para o itraconazol 0,01-1 μg/mL, para o cetoconazol 0,01-0,5 μg/mL, para o clotrimazol 0,5-32 μg/mL, para o miconazol 2-32 μg/mL, para a terbinafina 0,12-32 μg/mL e para a nistatina 16-64 μg/mL. Altas taxas de sinergismo foram observadas nas combinações de nistatina + timol (88,46%), nistatina + carvacrol (88,46%), nistatina + cinamaldeído (73,07%), clotrimazol + timol (69,23%), clotrimazol + carvacrol (69,23%), miconazol + timol (65,38%), miconazol + carvacrol (76,92%) e miconazol + cinamaldeído (65,38%). No entanto, fluconazol + timol (53,84%), fluconazol + carvacrol (46,15%), fluconazol + cinamaldeído (65,38%), itraconazol + timol (61,53%), itraconazol + carvacrol (69,23%), itraconazol + cinamaldeído (65,38%), terbinafina + timol (73,07%), terbinafina + carvacrol (65,38%), terbinafina + cinamaldeído (73,07%) e clotrimazol + cinamaldeído (61,53%) tiveram altas taxas de indiferença. Cetoconazol combinado com timol, carvacrol e cinamaldeído apresentaram as maiores taxas de antagonismo (42,3%). A exposição prévia de M. pachydermatis ao itraconazol resultou em uma diminuição da zona de inibição, quando comparado com o itraconazol e cetoconazol usados simultaneamente (p <0,01). Por outro lado, a exposição prévia do clotrimazol aumentou significativamente a zona de inibição (p <0,001), quando comparado à exposição simultânea de clotrimazol e itraconazol. As associações de maior relevância merecem avaliação in vivo, a fim de verificar o potencial das mesmas no tratamento de infecções por M. pachydermatis.

Malassezia spp. são fungos lipofílicos, reconhecidos há mais de cem anos como membros da microbiota cutânea normal humana, bem como agentes de doenças dermatológicas. Desde 1980, são relatados como causadores de infecções sistêmicas oportunistas. Estas leveduras são frequentemente encontradas em uma grande variedade de animais homeotérmicos, e sua ampla distribuição no meio ambiente agora está sendo explorada através de técnicas moleculares e bioquímicas. O enfoque deste estudo foi a espécie não lipido-dependente Malassezia pachydermatis, e a sua caracterização através do perfil enzimático pelo sistema Api-Zym®. Deste modo, utilizaram-se 30 amostras de M. pachydermatis isoladas de cães, com e sem sinais clínicos, identificadas pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). As amostras foram cultivadas em meio de Dixon modificado, incubadas a 37°C durante 48 horas, para posterior quantificação através de espectrofotometria. Um inóculo de 65 μl foi colocado em cada orifício do kit comercial de verificação enzimática e, após, incubado a 37ºC por 4 horas. Os resultados foram obtidos através da leitura visual e interpretação das titulações por escalas pré-determinadas, também foram avaliadas as reações através de “escaneamento” eletrônico. Todos os testes foram realizados em triplicata. Os resultados demonstraram a atividade de enzimas específicas pertencentes ao grupo das peptídeo hidrolases (100%), fosfohidrolases (98,3%) e éster hidrolases (91,6%), enquanto que as enzimas α-galactosidase, β-galactosidase, β-glicuronidase, α-manosidase e α-fucosidase caracterizaram 10% de todos os isolados. Além disso, não se comprovou a viabilidade do sistema utilizado no estudo para a caracterização enzimática da levedura. / Malassezia spp. are lipophilic fungi, which have been recognised for over a century as members of the normal human cutaneous flora, and also as agents of certain skin diseases. In addition, since the 1980s, they have been reported as causing opportunistic systemic infections. These yeasts have frequently been found on a diverse range of other warm-blooded animals, and their wider distribution in nature is now being explored using molecular techniques. The focus of the present study was the species no lipid-dependent Malassezia pachydermatis, and its characterization through the enzymatic profile by the Api-Zym® system. Then 30 isolated samples of dogs had been used, with and without clinical signals, identified by the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). The samples were cultivated into Dixon’s modified medium, incubated at 37°C during 48 hours, for posterior quantification through spectrophotometry. An inocula of 65 μl was placed in each microwell of the commercial kit of enzymatic verification and, after, it was incubated at 37ºC for 4h. The results were obtained through the visual reading and interpretation of the titulations by predetermined scales, it were also evaluated the reactions through electronic scanning. All the tests were performed in triplicate. The results demonstrated the activity of specific enzymes pertaining to the group of the peptide hydrolases (100%), phosphohydrolases (98,3%) and ester hydrolases (91,6%), while the enzymes α-galactosidase, β-galactosidase, β-glucuronidase, α-mannosidase and α-fucosidase characterized 10% off all the isolates. Moreover, it was not proven the viability of the system used in the study for the enzymatic characterization of the yeast.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Malassezia pachydermatis is opportunistic yeast that primarily affects animals, being associated with dermatomycoses and ear diseases in dogs and cats. This is important yeast in veterinary medicine and therefore the knowledge of its susceptibility profile against various antifungal agents, is necessary to obtain success in treating and preventing relapses of infection. The aim of this study was to compare the susceptibility between pathogenic and commensal M. pachydermatis strains against ketoconazole, miconazole, clotrimazole, itraconazole, fluconazole, voriconazole, amphotericin B and nystatin. All isolates were tested by the broth microdilution method using the CLSI M27-A3 (2008). The strains isolated from infectious processes (G1) showed higher MICs than commensals strains (G2). The azoles ketoconazole, itraconazole and voriconazole showed excellent effectiveness against M. pachydermatis isolates. Differences in susceptibility to amphotericin B, nystatin, miconazole, clotrimazole and fluconazole were observed between G1 and G2 groups. It can be explained by the variation in the lipid content of the capsule surrounding the organism and the concentration of intracellular antioxidant enzymes. M. pachydermatis is important yeast in veterinary medicine and therefore the knowledge of its susceptibility profile against various antifungal agents, is necessary to obtain success in treating and preventing relapses of infection. / Malassezia pachydermatis é uma levedura oportunista que acomete principalmente animais, estando associada a dermatomicoses e otopatias em cães e gatos. Por se tratar de um fungo de grande importância na medicina veterinária, o conhecimento do seu perfil de suscetibilidade frente a diversos antifúngicos se faz necessário para obtermos sucesso no tratamento e na prevenção de recidivas da malasseziose. Este estudo teve como objetivo principal comparar o perfil de suscetibilidade de isolados de M. pachydermatis, patógenos e comensais, frente aos antimicóticos cetoconazol, miconazol, clotrimazol, itraconazol, fluconazol, voriconazol, nistatina e anfotericina B utilizando a técnica de microdiluição em caldo RPMI 1640 tamponado, proposta pelo protocolo M27-A3 do CLSI (2008). Através da avaliação das CIMs, constatou-se menor sensibilidade dos isolados oriundos de processos infecciosos (G1) a todos os antifúngicos testados. As melhores respostas foram observadas frente aos azólicos cetoconazol, itraconazol e voriconazol, sendo o itraconazol considerado o mais eficiente, visto que a maioria dos isolados testados se mostraram sensíveis às menores concentrações deste antifúngico. Ao comparar o perfil de suscetibilidade dos dois grupos, foi observada diferença significativa entre eles frente aos antifúngicos miconazol, clotrimazol, fluconazol, anfotericina B e nistatina, fato que poderia ser explicado pela variação do conteúdo lipídico da cápsula que envolve o microrganismo e da concentração de enzimas antioxidantes intracelulares.

Malassezia spp. são fungos lipofílicos, reconhecidos há mais de cem anos como membros da microbiota cutânea normal humana, bem como agentes de doenças dermatológicas. Desde 1980, são relatados como causadores de infecções sistêmicas oportunistas. Estas leveduras são frequentemente encontradas em uma grande variedade de animais homeotérmicos, e sua ampla distribuição no meio ambiente agora está sendo explorada através de técnicas moleculares e bioquímicas. O enfoque deste estudo foi a espécie não lipido-dependente Malassezia pachydermatis, e a sua caracterização através do perfil enzimático pelo sistema Api-Zym®. Deste modo, utilizaram-se 30 amostras de M. pachydermatis isoladas de cães, com e sem sinais clínicos, identificadas pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). As amostras foram cultivadas em meio de Dixon modificado, incubadas a 37°C durante 48 horas, para posterior quantificação através de espectrofotometria. Um inóculo de 65 μl foi colocado em cada orifício do kit comercial de verificação enzimática e, após, incubado a 37ºC por 4 horas. Os resultados foram obtidos através da leitura visual e interpretação das titulações por escalas pré-determinadas, também foram avaliadas as reações através de “escaneamento” eletrônico. Todos os testes foram realizados em triplicata. Os resultados demonstraram a atividade de enzimas específicas pertencentes ao grupo das peptídeo hidrolases (100%), fosfohidrolases (98,3%) e éster hidrolases (91,6%), enquanto que as enzimas α-galactosidase, β-galactosidase, β-glicuronidase, α-manosidase e α-fucosidase caracterizaram 10% de todos os isolados. Além disso, não se comprovou a viabilidade do sistema utilizado no estudo para a caracterização enzimática da levedura. / Malassezia spp. are lipophilic fungi, which have been recognised for over a century as members of the normal human cutaneous flora, and also as agents of certain skin diseases. In addition, since the 1980s, they have been reported as causing opportunistic systemic infections. These yeasts have frequently been found on a diverse range of other warm-blooded animals, and their wider distribution in nature is now being explored using molecular techniques. The focus of the present study was the species no lipid-dependent Malassezia pachydermatis, and its characterization through the enzymatic profile by the Api-Zym® system. Then 30 isolated samples of dogs had been used, with and without clinical signals, identified by the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). The samples were cultivated into Dixon’s modified medium, incubated at 37°C during 48 hours, for posterior quantification through spectrophotometry. An inocula of 65 μl was placed in each microwell of the commercial kit of enzymatic verification and, after, it was incubated at 37ºC for 4h. The results were obtained through the visual reading and interpretation of the titulations by predetermined scales, it were also evaluated the reactions through electronic scanning. All the tests were performed in triplicate. The results demonstrated the activity of specific enzymes pertaining to the group of the peptide hydrolases (100%), phosphohydrolases (98,3%) and ester hydrolases (91,6%), while the enzymes α-galactosidase, β-galactosidase, β-glucuronidase, α-mannosidase and α-fucosidase characterized 10% off all the isolates. Moreover, it was not proven the viability of the system used in the study for the enzymatic characterization of the yeast.

Otite externa é uma enfermidade comumente observada em cães encaminhados a clínica veterinária e a etiologia desta doença varia em função de diversas combinações entre os fatores predisponentes, primários e perpetuantes responsáveis pela enfermidade. Este trabalho teve como objetivo pesquisar a presença da Malassezia pachydermatis em otite externa canina e avaliar a suscetibilidade in vivo e in vitro da levedura frente ao cetoconazol e tiabendazol. Para isto foi pesquisada a presença da levedura M. pachydermatis em otite externa de 168 cães encaminhados aos Hospitais de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul e da Universidade Federal de Pelotas, assim como em clínicas e canis particulares. Após identificação morfológica e bioquímica da levedura, foi realizada extração de DNA pelo método de fenol-clorofórmio de amostras selecionadas para análise pela técnica de RAPD- PCR, para verificação de heterogeneidade molecular. Foi realizada a reprodução experimental de malasseziose ótica em 14 cães inoculados com a levedura para posterior tratamento. Dois grupos de 30 cães com malasseziose ótica foram selecionados para tratamento com os produtos comerciais otológicos contendo tiabendazol e cetoconazol (Otodem plus® e Aurivet® respectivamente). Com os isolados de M. pachydermatis obtidos desses animais tratados foi realizado antifungigrama através da técnica de Microdoluição em Caldo (MC) para o tiabendazol e técnica do ETEST para o cetoconazol. Os resultados deste último foram comparados com a técnica de MC. A M. pachydermatis foi isolada em 139 (82,7%) casos de otite externa, sendo que molecularmente, a levedura apresentou diferenças, recebendo nove subdivisões a partir do primer utilizado. Os animais inoculados com a levedura desenvolveram a otite externa e o tratamento realizado com os produtos comerciais Aurivet® e Otodem plus® foi eficaz. Dos 60 animais tratados para malasseziose, 86,7% apresentaram cura clínica. A CIM do tiabendazol através da técnica de MC variou de 0,03 a >4mg/ml, com média de 3,67mg/ml. A CIM do cetoconazol, através do ETEST, variou de 0,004 a 0,75mg/ml, com média de 0,156mg/ml. A CIM do cetoconazol, através do método MC variou de 0,0009375 a 0,06mg/ml, com CIM média de 0,00815mg/ml. Através do cálculo de CIM50 e CIM90, observou-se frente ao tiabendazol, resistência em 13,7% dos isolados, sensibilidade intermediária em 47,1% e 39,2% isolados foram sensíveis. Quanto ao cetoconazol, através da técnica do ETEST, a resistência foi observada em 11,1% dos isolados, sensibilidade intermediária foi encontrada em 41,7% e 47,2% isolados foram sensíveis. Pela MC, foi observada resistência em 15,4% isolados, sensibilidade intermediária em 35,9% isolados e 48,7% foram sensíveis. As médias das CIMs observadas entre os 17 isolados testados simultaneamente frente ao cetoconazol com as duas metodologias, ETEST e MC, foi 0,103mg/ml e 0,0119mg/ml respectivamente. Nesta comparação podemos observar a concordância de resultados em apenas seis amostras (35,3%), quatro sensíveis e duas, sensibilidade intermediária. As combinações terapêuticas testadas nos animais foram eficazes no tratamento da malasseziose ótica canina, porém não houve relação entre resultado do teste in vitro e a resposta in vivo dos antifúngicos frente a levedura.

Malassezia pachydermatis pode ser isolada da pele de cães saudáveis e daqueles com dermatites, porém, os critérios para o diagnóstico da malasseziose cutânea ainda não estão padronizados e a intensidade das lesões de pele entre portadores ou não dessas leveduras nunca foi investigada. O mecanismo que promove a mudança de status de organismo comensal para patógeno, também, ainda não está totalmente elucidado, embora fatores como diversidade genética e atividade enzimática sejam citados como possíveis causas. A presença de outras espécies de Malassezia na pele de cães já foi relatada, porém sem confirmação molecular. Este estudo objetivou identificar e quantificar a presença de Malassezia na pele de cães com e sem dermatopatias; avaliar a possível associação entre a presença e a quantidade destas leveduras na pele de cães dermatopatas e o grau de intensidade das lesões cutâneas; identificar os isolados por PCR-REA; identificar genótipos e subtipos genéticos de M. pachydermatis através do sequenciamento parcial do gene chs-2, e das regiões LSU e ITS-1 do rDNA, e avaliar sua possível associação com graus de comprometimento cutâneo e atividade fosfolipásica. Amostras para citologia e cultivo fúngico foram obtidas de 297 cães (180 saudáveis e 117 com lesões de pele), dentre os quais 28 (15,6%) dos animais saudáveis e 62 (52,9%) daqueles com dermatite foram isoladas colônias de Malassezia spp. (P 0,001). O cultivo fúngico apresentou maior sensibilidade para a detecção de leveduras na pele do que a citologia. A avaliação do grau de intensidade das lesões de pele nos cães com dermatite revelou que animais positivos e com maior densidade populacional de Malassezia spp. apresentaram maior grau de comprometimento cutâneo. A análise por PCR-REA identificou M. pachydermatis em 100% dos isolados de cães saudáveis e em 98,4% daqueles com dermatites. Em somente um cão com dermatite foi identificada M. furfur. Cento e sessenta e oito isolados de M. pachydermatis de 56 cães (28 saudáveis e 28 com dermatites – três isolados de cada animal) foram analisados por sequenciamento parcial do gene chs-2, e das regiões LSU e ITS-1 do rDNA. Foram identificados os genótipos e subtipos classificados como “A” e “C”. As diferenças de genótipos ou subtipos não foram significativas entre cães saudáveis e com dermatites, nem com a atividade fosfolipásica ou com grau de intensidade das lesões de pele nos cães com dermatite. O número de isolados de M. pachydermatis produtores de fosfolipase foi estatisticamente significante nos animais com dermatite. / Malassezia pachydermatis can be isolated from the skin of healthy dogs and those with dermatitis, but the diagnostic pattern to Malassezia dermatitis has been not yet established and the severity of skin damage between carriers or not of these yeasts was never investigated. The mechanisms that allow the normally commensal yeast to become a pathogen are not also yet understood, although factors as genetic diversity and enzymatic activity have been cited as possible causes. The presence of other Malassezia species on dog skin have been related, but without molecular confirmation. The purpose of this study was to identify and quantify Malassezia yeasts on the skin of dogs with and without dermatitis; to evaluate the association between the presence and population size of theses yeasts with the severity of skin damage in dogs with dermatitis; to identify the isolates by PCR-REA; to identify M. pachydermatis genotypes and subtypes by partial sequencing of chs-2 gene and the LSU and ITS-1 of rDNA sequences; and to evaluate the possible association between genotypes/subtypes and severity of skin damage and phospholipase activity. Samples to cytology and fungal culture were taken from 297 dogs (180 healthy and 117 with skin lesions), from witch 28 (15.6%) healthy and 62 (52.9%) with skin lesions dogs were positive to Malassezia spp. (P 0,001). Fungal culture showed more sensitivity to detect yeasts on the skin than cytology. The evaluation of severity of skin damage in dogs with dermatitis showed that dogs with positive cultures and higher population sizes presented higher grades of skin damage than dogs with negative cultures. From healthy dogs all isolates were identified as M. pachydermatis and from dogs with dermatitis 98.4% were identified as M. pachydermatis, and one isolate yielded a restriction pattern compatible with M. furfur. One hundred-sixty-eight Malassezia isolates from 56 dogs (28 healthy; 28 with dermatitis - three from each dog) were analyzed by partial sequencing of chs-2 gene and LSU and ITS-1 of nuclear ribosomal DNA sequences. Genotypes and subtypes A and C were identified. No significant difference between genotypes/subtypes and healthy and diseased dogs, nor with severity of skin damage or phospolipase activity in dogs with dermatitis were found. The number of Malassezia pachydermatis isolates producing phospholipase was statistically significant in dogs with dermatitis.

Malassezia pachydermatis pode ser isolada da pele de cães saudáveis e daqueles com dermatites, porém, os critérios para o diagnóstico da malasseziose cutânea ainda não estão padronizados e a intensidade das lesões de pele entre portadores ou não dessas leveduras nunca foi investigada. O mecanismo que promove a mudança de status de organismo comensal para patógeno, também, ainda não está totalmente elucidado, embora fatores como diversidade genética e atividade enzimática sejam citados como possíveis causas. A presença de outras espécies de Malassezia na pele de cães já foi relatada, porém sem confirmação molecular. Este estudo objetivou identificar e quantificar a presença de Malassezia na pele de cães com e sem dermatopatias; avaliar a possível associação entre a presença e a quantidade destas leveduras na pele de cães dermatopatas e o grau de intensidade das lesões cutâneas; identificar os isolados por PCR-REA; identificar genótipos e subtipos genéticos de M. pachydermatis através do sequenciamento parcial do gene chs-2, e das regiões LSU e ITS-1 do rDNA, e avaliar sua possível associação com graus de comprometimento cutâneo e atividade fosfolipásica. Amostras para citologia e cultivo fúngico foram obtidas de 297 cães (180 saudáveis e 117 com lesões de pele), dentre os quais 28 (15,6%) dos animais saudáveis e 62 (52,9%) daqueles com dermatite foram isoladas colônias de Malassezia spp. (P 0,001). O cultivo fúngico apresentou maior sensibilidade para a detecção de leveduras na pele do que a citologia. A avaliação do grau de intensidade das lesões de pele nos cães com dermatite revelou que animais positivos e com maior densidade populacional de Malassezia spp. apresentaram maior grau de comprometimento cutâneo. A análise por PCR-REA identificou M. pachydermatis em 100% dos isolados de cães saudáveis e em 98,4% daqueles com dermatites. Em somente um cão com dermatite foi identificada M. furfur. Cento e sessenta e oito isolados de M. pachydermatis de 56 cães (28 saudáveis e 28 com dermatites – três isolados de cada animal) foram analisados por sequenciamento parcial do gene chs-2, e das regiões LSU e ITS-1 do rDNA. Foram identificados os genótipos e subtipos classificados como “A” e “C”. As diferenças de genótipos ou subtipos não foram significativas entre cães saudáveis e com dermatites, nem com a atividade fosfolipásica ou com grau de intensidade das lesões de pele nos cães com dermatite. O número de isolados de M. pachydermatis produtores de fosfolipase foi estatisticamente significante nos animais com dermatite. / Malassezia pachydermatis can be isolated from the skin of healthy dogs and those with dermatitis, but the diagnostic pattern to Malassezia dermatitis has been not yet established and the severity of skin damage between carriers or not of these yeasts was never investigated. The mechanisms that allow the normally commensal yeast to become a pathogen are not also yet understood, although factors as genetic diversity and enzymatic activity have been cited as possible causes. The presence of other Malassezia species on dog skin have been related, but without molecular confirmation. The purpose of this study was to identify and quantify Malassezia yeasts on the skin of dogs with and without dermatitis; to evaluate the association between the presence and population size of theses yeasts with the severity of skin damage in dogs with dermatitis; to identify the isolates by PCR-REA; to identify M. pachydermatis genotypes and subtypes by partial sequencing of chs-2 gene and the LSU and ITS-1 of rDNA sequences; and to evaluate the possible association between genotypes/subtypes and severity of skin damage and phospholipase activity. Samples to cytology and fungal culture were taken from 297 dogs (180 healthy and 117 with skin lesions), from witch 28 (15.6%) healthy and 62 (52.9%) with skin lesions dogs were positive to Malassezia spp. (P 0,001). Fungal culture showed more sensitivity to detect yeasts on the skin than cytology. The evaluation of severity of skin damage in dogs with dermatitis showed that dogs with positive cultures and higher population sizes presented higher grades of skin damage than dogs with negative cultures. From healthy dogs all isolates were identified as M. pachydermatis and from dogs with dermatitis 98.4% were identified as M. pachydermatis, and one isolate yielded a restriction pattern compatible with M. furfur. One hundred-sixty-eight Malassezia isolates from 56 dogs (28 healthy; 28 with dermatitis - three from each dog) were analyzed by partial sequencing of chs-2 gene and LSU and ITS-1 of nuclear ribosomal DNA sequences. Genotypes and subtypes A and C were identified. No significant difference between genotypes/subtypes and healthy and diseased dogs, nor with severity of skin damage or phospolipase activity in dogs with dermatitis were found. The number of Malassezia pachydermatis isolates producing phospholipase was statistically significant in dogs with dermatitis.

Otite externa é uma enfermidade comumente observada em cães encaminhados a clínica veterinária e a etiologia desta doença varia em função de diversas combinações entre os fatores predisponentes, primários e perpetuantes responsáveis pela enfermidade. Este trabalho teve como objetivo pesquisar a presença da Malassezia pachydermatis em otite externa canina e avaliar a suscetibilidade in vivo e in vitro da levedura frente ao cetoconazol e tiabendazol. Para isto foi pesquisada a presença da levedura M. pachydermatis em otite externa de 168 cães encaminhados aos Hospitais de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul e da Universidade Federal de Pelotas, assim como em clínicas e canis particulares. Após identificação morfológica e bioquímica da levedura, foi realizada extração de DNA pelo método de fenol-clorofórmio de amostras selecionadas para análise pela técnica de RAPD- PCR, para verificação de heterogeneidade molecular. Foi realizada a reprodução experimental de malasseziose ótica em 14 cães inoculados com a levedura para posterior tratamento. Dois grupos de 30 cães com malasseziose ótica foram selecionados para tratamento com os produtos comerciais otológicos contendo tiabendazol e cetoconazol (Otodem plus® e Aurivet® respectivamente). Com os isolados de M. pachydermatis obtidos desses animais tratados foi realizado antifungigrama através da técnica de Microdoluição em Caldo (MC) para o tiabendazol e técnica do ETEST para o cetoconazol. Os resultados deste último foram comparados com a técnica de MC. A M. pachydermatis foi isolada em 139 (82,7%) casos de otite externa, sendo que molecularmente, a levedura apresentou diferenças, recebendo nove subdivisões a partir do primer utilizado. Os animais inoculados com a levedura desenvolveram a otite externa e o tratamento realizado com os produtos comerciais Aurivet® e Otodem plus® foi eficaz. Dos 60 animais tratados para malasseziose, 86,7% apresentaram cura clínica. A CIM do tiabendazol através da técnica de MC variou de 0,03 a >4mg/ml, com média de 3,67mg/ml. A CIM do cetoconazol, através do ETEST, variou de 0,004 a 0,75mg/ml, com média de 0,156mg/ml. A CIM do cetoconazol, através do método MC variou de 0,0009375 a 0,06mg/ml, com CIM média de 0,00815mg/ml. Através do cálculo de CIM50 e CIM90, observou-se frente ao tiabendazol, resistência em 13,7% dos isolados, sensibilidade intermediária em 47,1% e 39,2% isolados foram sensíveis. Quanto ao cetoconazol, através da técnica do ETEST, a resistência foi observada em 11,1% dos isolados, sensibilidade intermediária foi encontrada em 41,7% e 47,2% isolados foram sensíveis. Pela MC, foi observada resistência em 15,4% isolados, sensibilidade intermediária em 35,9% isolados e 48,7% foram sensíveis. As médias das CIMs observadas entre os 17 isolados testados simultaneamente frente ao cetoconazol com as duas metodologias, ETEST e MC, foi 0,103mg/ml e 0,0119mg/ml respectivamente. Nesta comparação podemos observar a concordância de resultados em apenas seis amostras (35,3%), quatro sensíveis e duas, sensibilidade intermediária. As combinações terapêuticas testadas nos animais foram eficazes no tratamento da malasseziose ótica canina, porém não houve relação entre resultado do teste in vitro e a resposta in vivo dos antifúngicos frente a levedura.