Made available in DSpace on 2014-06-12T18:31:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8078_1.pdf: 1930607 bytes, checksum: 332bdebb35ef2d06c2f91633bc8c1b4c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / A Pitiríase Versicolor (PV) é o distúrbio de pigmentação cutânea mais freqüente no mundo. Apresenta tendência a cronicidade e recidiva o que compromete a efetividade do tratamento. Atualmente, são reconhecidas sete espécies de Malassezia: M. furfur, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta, M. slooffiae e M. pachydermatis. Dessas, as seis primeiras podem causar a PV. Há uma carência de estudos que avaliem a ocorrência das espécies de Malassezia , assim como a sua suscetibilidade aos antifúngicos no Brasil. Por essa razão, realizou-se o presente estudo tendo por principais objetivos: verificar a distribuição das espécies de Malassezia de acordo com a localização das lesões de PV; avaliar se há correlação entre a distribuição das espécies e as car cterísticas clínicas das lesões; testar a sensibilidade das espécies identificadas aos antifúngicos cetoconazol, itraconazol e fluconazol. O desenho do estudo foi do tipo série de casos, sendo incluídos 389 pacientes com PV de set/2002 a jun/2003 atendidos no ambulatório de Dermatologia do CAME-Primavera João Pessoa/PB. Foram identificadas 127 cepas de Malassezia spp baseando-se nas características de lipodependência, produção de catalase, assimilação de Tween e micromorfologia. O teste de susceptibilidade aos antifúngicos foi realizado utilizando o método de difusão em ágar com discos em 36 cepas identificadas. A foi a mais freqüentemente encontrada (n=82/62,2%), seguida da M. sympodialis (n=17/13,5%). A M. globosa, M. restricta, M. obtusa, M sloofiae foram identificadas respectivamente em quatro, seis, oito e dez amostras. A M. pachydermatis foi a única não iden ficada, visto ser tipicamente encontrada em animais (cães e gatos). A maior parte das espécies testadas foi sensível (n=28/87%) ao cetoconazol e resistente (n=30/93%) ao fluconazol

O gÃnero Malassezia abrange leveduras lipofÃlicas e lipodependentes que, apÃs vÃrias mudanÃas em sua classificaÃÃo taxonÃmica, compreende na atualidade 13 espÃcies, incluindo M. pachydermatis, M. furfur, M. globosa, M. obtusa, M. sympodialis, M. slooffiae, M. restricta, M. dermatis, M. japonica, M. yamatoensis, M. nana, M. caprae e M. eqÃina. Estas leveduras estÃo associadas a vÃrias enfermidades que incluem infecÃÃes, como a pitirÃase versicolor ou dermatoses, dermatite seborrÃica e dermatite atÃpica, entre outras. O objetivo geral deste trabalho foi contribuir para melhor entendimento sobre a identificaÃÃo fenotÃpica, manutenÃÃo em micoteca e sensibilidade a antifÃngicos in vitro de Malassezia spp.. A fenotipagem baseou-se nas caracterÃsticas macro e micromorfolÃgicas, bem como anÃlises em bioquÃmicas e nutricionais. Doze cepas de diferentes espÃcies de Malassezia spp. sofreram estocagem a -80ÂC sob Ãleos vegetais. A tÃcnica de microdiluiÃÃo foi realizada em caldo RPMI 1640, suplementado com bile, glicerol e Tween 20, sendo complementada com subcultivo em Ãgar Dixon, para determinaÃÃo da concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) e da concentraÃÃo fungicida mÃnima (CFM). As drogas testadas foram Cetoconazol (CET), Itraconazol (ITR), Fluconazol (FLU), Voriconazol (VOR), Anfotericina B (ANB) e Caspofungina (CAS). Com a anÃlise fenotÃpica convencional das cepas (n=38), pode-se sugerir a presenÃa de M. furfur/ M. dermatis (n=17), M. sympodialis (n=8), M. slooffiae (n=5) e M. pachydermatis (n=8). O estoque realizado em Ãleos vegetais a -80ÂC demonstrou significativas taxas de recuperaÃÃo, no entanto caracterÃsticas fisiolÃgicas foram alteradas como _-glicosidase e assimilaÃÃo de Chremophor EL. A maioria das cepas estudadas (84,21%), M. pahydermatis e cepas lipodependentes, foram sensÃveis ao CET e ITR, obtendo valores de CIM &#61603;&#61472;0,03&#956;g/mL. Para o FLU, os valores de CIM variaram de 4 a 64&#956;g/mL e frente ao VOR as cepas de M. pachydermatis obtiveram CIMs que variaram de <0,03 a 2&#956;g/mL, enquanto as cepas lipodependentes de Malassezia spp. obtiveram resultados mais dispersos que variaram de <0,03 a >16&#956;g/mL. Perante ANB, o intervalo de CIM encontrado foi de 1 a >16&#956;g/mL. NÃo foi possÃvel determinar os valores de CIM e CFM frente à caspofungina. Os extratos oriundos das sementes do abacate foram ativos contra as cepas de M. pachydermatis. / The genus Malassezia enclose lipophylic and lipid-dependent yeast that after many changes in its taxonomic classification, comprises in the atuality 13 species, including M. pachydermatis, M. furfur, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta, M. slooffiae, M. dermatis, M. japonica, M. yamatoensis, M. nana, M. equine, and M. caprae. These yeasts are associated to several diseases including, such as pityriasis versicolor, or dermatoses, seborrheic dermatitis and atopic dermatitis, among others. The general aim of this study was to contribute to better knowledgement about the phenotypical identification, storage in fungal collection and in vitro antifungal susceptibility of Malassezia spp. The phenotiping was based on macro and micromorphologics characteristics, as well as biochemistry and nutritional analisys. Twenteen strains suffers storage at -80ÂC in vegetables oils. The microdilution technique was accomplished in RPMI 1640 broth, supplemented with ox bile, Tween 20 and glycerol, being complemented with subculture on Dixon agar, for determination of the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (CFM). The drugs tested were ketoconazole (KET), itraconazole (ITR), fluconazole (FLC), amphotericin B (AMB) and caspofungine (CAS). With the conventional phenotypical analysis of the strains (n=38), could suggest the presence of the M. furfur/ M. dermatis (n=17), M. sympodialis (n=8), M. slooffiae (n=5) and M. pachydermatis (n=8). The stored accomplished in vegetable oils at -80ÂC showed meaningful rate of recorver, but physiologic characteristics was modified, such as _-glicosidase activity and Chremophor EL assimilation. Most of the strains (84,21%) was sensitive for KET and ITR, obtaining values of MIC &#61603;&#61472;0.03&#956;g/mL. For FLC the MIC range was 4 to 64&#956;g/mL, against VOR the strains of M. pachydermatis obtained MIC range <0,03 a 2&#956;g/mL, therefore the lipid-dependents strains of Malassezia spp. obtained dispersive results from <0.03 to >16&#956;g/mL. Against ANB, the MIC range was 1 to >16&#956;g/mL. It was not possible determinate the MIC and MFC values for caspofungine. The extracts from avocado seeds were active against strains of M. pachydermatis.

A criopreservaÃÃo à a metodologia de escolha em muitos bancos de microrganismos pois conduz a uma situaÃÃo de dormÃncia metabÃlica e em conseqÃÃncia as culturas mantÃm-se estÃveis por longos perÃodos. Ao reduzir a temperatura pode todavia ocorrer a formaÃÃo de cristais de gelo que tendem a promover lesÃo celular A lesÃo celular por sua vez pode ser evitada pelo processo de vitrificaÃÃo que ocorre, combinando uma soluÃÃo concentrada com o congelamento rÃpido A literatura relata o uso de carboidratos como agentes vitrificadores e crioprotetores TambÃm informa que a tÃcnica de imobilizaÃÃo de cÃlulas em alginato de sÃdio permite o fracionamento da cultura e favorece a preservaÃÃo de microrganismos O objetivo deste trabalho consiste em avaliar a viabilidade dos fungos dos gÃneros Malassezia spp e do grupo dos Zigomicetos imobilizados em alginato de sÃdio utilizando glicose e lactose como crioprotetores Doze cepas de espÃcies de Malassezia spp (9 M furfur 2 M globosa 1 M simpodialis) e doze cepas de Zigomicetos (7 Mucor s e 5 Rhizopus sp) pertencentes à micoteca do Centro Especializado em Micologia MÃdica da Universidade Federal do Cearà O gÃnero Malassezia abrange leveduras lipodependentes associadas a vÃrias enfermidades dermatolÃgicas compreendem na atualidade 13 espÃcies Zigomicetos, por sua vez sÃo fungos saprÃfitas e ubÃquos cujas hifas por apresentarem elevado tamanho e reduzido conteÃdo protÃico estÃo mais vulnerÃveis a danos mecÃnicos Dessa forma constituem grupos fÃngicos de preservaÃÃo difÃcil em estoque portanto uma metodologia que mantenham a viabilidade de Malassezia spp e Zigomicetos tambÃm poderia ser empregada com eficiÃncia para a estocagem de outros fungos As estruturas fÃngicas foram removidas e transferidas para duas soluÃÃes de estoque, formadas por 3% de caldo Sabouraud 15% de alginato de sÃdio e diferenciadas nas concentraÃÃes de glicose e lactose de 9% ou 23% Em seguida, foram adicionadas esferas plÃsticas, medindo 07cm de diÃmetro com orifÃcio central e 0,5cm de comprimento ApÃs a gelificaÃÃo iÃnica com cloreto de cÃlcio, cada cepa foi estocada à temperatura de -20 ÂC e -80 ÂC distribuÃdas em cinco tubos criogÃnicos de 15mL contendo cinco esferas cada uma sendo avaliados em cinco perÃodos ApÃs nove meses foi verificado que nÃo houve recuperaÃÃo de nenhuma cepa de Malassezia spp Com relaÃÃo Ãs espÃcies de Zigomicetos observou-se que apÃs nove meses de estoque quatro cepas mostraram viÃveis a -80 ÂC empregando glicose a 9%, seis cepas foram preservadas a -80 ÂC, utilizando glicose a 23% finalmente seis e sete exemplares foram recuperados a -80 ÂC utilizando lactose a 9% e 23% respectivamente. Dessa forma, o uso de carboidratos como crioprotetores em conjunto com a tÃcnica de imobilizaÃÃo de cÃlulas em alginato de sÃdio constitui alternativa à manutenÃÃo de algumas espÃcies fÃngicas / Cryopreservation is the method of choice in many banks of microorganisms because it leads to a situation of metabolic dormancy and consequently cultures are stable for long periods. By reducing the temperature may however be formed of ice crystals which tend to cause cell damage to cell damage in turn can be avoided by vitrification process which takes place by combining a solution with the quick freezing the literature reports the use of carbohydrates vitrificadores cryoprotectants agents and also advises that the technique of immobilization of cells in sodium alginate allows the fractionation of culture and promotes the preservation of microorganisms The objective of this study is to assess the viability of the fungi of the genus Malassezia spp and the Zygomycetes group of assets in sodium alginate and lactose using glucose as cryoprotectants Twelve strains of species of Malassezia spp (9 M furfur 1 M 2 M globosa simpodialis) and twelve strains of zygomycetes (seven Mucor Rhizopus sp is 5) belonging to the mycology collection of the Specialized Center for Medical Mycology Federal University of Cearà The genus Malassezia comprises yeasts lipodependent associated with various dermatologic diseases currently comprise 13 Zygomycetes species, in turn, are ubiquitous and saprophytic fungi whose hyphae because they have high protein content and reduced size are more vulnerable to mechanical damage this way are groups of fungi in stock so hard to preserve a methodology to maintain the viability of Malassezia spp and Zygomycetes could also be used effectively for the storage of other fungi fungal structures were removed and transferred to two stock solutions, formed by 3% broth Sabouraud 15% sodium alginate and different concentrations of glucose and 9% lactose and 23% were then added plastic spheres, measuring 07cm in diameter and 0.5 cm center hole length After ionic gelation with calcium chloride Each strain was stored at -20  C and -80  C cryogenic distributed in five tubes containing 15 mL each of five levels being evaluated in five periods after nine months it was found that there was no recovery of any strain of Malassezia spp Regarding Zygomycetes species showed that after nine months of inventory four strains were viable at -80  C using glucose 9%, six strains were preserved at -80  C, using 23% glucose last six seven specimens were recovered at -80  C using a 9% lactose and 23% respectively. Thus, the use of cryoprotectants such as carbohydrates in conjunction with the technique of immobilization of cells in sodium alginate is an alternative to maintaining some fungal species

Les levures du genre Malassezia font partie intégrale de la flore normale de la peau où ils représentent 50-80% du mycobiome total de l’épiderme. Ce champignon se distingue des autres organismes de par son absence de synthase d’acides gras (FAS), ce qui le rend dépendant à une source externe de lipides. De récents travaux ont démontré la présence de cette levure au niveau des organes internes, comme la muqueuse intestinale, où elle pourrait jouer un rôle dans le développement de la maladie de Crohn. Les circonstances amenant Malassezia à passer de commensal à pathogène restent, de nos jours, nébuleuses. Afin de mieux comprendre la niche écologique de Malassezia, nous avons effectué une caractérisation physiologique de l’assimilation lipidique de différentes espèces de Malassezia en contrôlant la source de lipides. Notre analyse a révélé que la présence du profil lipidique est hétérogène entre les espèces ainsi qu’entre les souches de la même espèce. Nos observations sont cohérentes avec la littérature, c’est-à-dire que l’acide palmitique (C16), l’acide stéarique (C18), l’acide oléique (C18:1) et l’acide linoléique (C18:2) sont extrêmement importants pour la croissance des différentes espèces. Dans l’ensemble, notre étude nous a permis de générer un nouveau milieu de croissance qui nous a permis de tester différents composés, seuls et en combinaison, pouvant avoir des propriétés antifongiques. La combinaison entre l’itraconazole, la terbinafine et un nouvel inhibiteur de protéase (BMZ2-134B) s’est avérée particulièrement efficace afin d’inhiber Malassezia. Avec le nombre grandissant de données démontrant un lien étroit entre la dysbiose du microbiote, l’inflammation et les maladies cardiovasculaires, il devient impératif de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques afin de prévenir les maladies cardiovasculaires en tirant profit de nos connaissances sur le mycobiome. / Yeasts of the genus Malassezia are an integral part of the normal flora of skin, where they represent 50-80 % of the total epidermis mycobiota. This fungus is distinguishable from other organisms by the fact that it lacks a fatty acid synthase (FAS), making it dependent on an external source of lipids. Recent work has shown the presence of this yeast in internal organs, such as the intestinal mucosa, where it could play a potential role in the development of Crohn’s disease. The circumstances leading Malassezia to switch from commensal to pathogen remain, nowadays, nebulous. In order to better understand the ecological niche of Malassezia, we carried out a physiological characterization of lipid assimilation of different species of Malassezia by controlling the lipid source. Our analysis revealed that the lipid assimilation profile is heterogeneous between species as well as between strains of the same species. Our observations are consistent with the literature, i.e., palmitic acid (C16), stearic acid (C18), oleic acid (C18:1) and linoleum acid (C18:2) are extremely important for the growth of the different species. Overall, our study allowed us to generate a new growth medium where we could test different compounds, alone and in combination, that could have antifungal properties. The combination of itraconazole, terbinafine and a new protease inhibitor proved to be particularly effective in inhibiting Malassezia’s growth. With the growing evidence demonstrating a strong link between microbiota dysbiosis, inflammation and cardiovascular diseases, it becomes imperative to develop new therapeutic strategies by leveraging our knowledge of the mycobioma.