A criopreservaÃÃo à a metodologia de escolha em muitos bancos de microrganismos pois conduz a uma situaÃÃo de dormÃncia metabÃlica e em conseqÃÃncia as culturas mantÃm-se estÃveis por longos perÃodos. Ao reduzir a temperatura pode todavia ocorrer a formaÃÃo de cristais de gelo que tendem a promover lesÃo celular A lesÃo celular por sua vez pode ser evitada pelo processo de vitrificaÃÃo que ocorre, combinando uma soluÃÃo concentrada com o congelamento rÃpido A literatura relata o uso de carboidratos como agentes vitrificadores e crioprotetores TambÃm informa que a tÃcnica de imobilizaÃÃo de cÃlulas em alginato de sÃdio permite o fracionamento da cultura e favorece a preservaÃÃo de microrganismos O objetivo deste trabalho consiste em avaliar a viabilidade dos fungos dos gÃneros Malassezia spp e do grupo dos Zigomicetos imobilizados em alginato de sÃdio utilizando glicose e lactose como crioprotetores Doze cepas de espÃcies de Malassezia spp (9 M furfur 2 M globosa 1 M simpodialis) e doze cepas de Zigomicetos (7 Mucor s e 5 Rhizopus sp) pertencentes à micoteca do Centro Especializado em Micologia MÃdica da Universidade Federal do Cearà O gÃnero Malassezia abrange leveduras lipodependentes associadas a vÃrias enfermidades dermatolÃgicas compreendem na atualidade 13 espÃcies Zigomicetos, por sua vez sÃo fungos saprÃfitas e ubÃquos cujas hifas por apresentarem elevado tamanho e reduzido conteÃdo protÃico estÃo mais vulnerÃveis a danos mecÃnicos Dessa forma constituem grupos fÃngicos de preservaÃÃo difÃcil em estoque portanto uma metodologia que mantenham a viabilidade de Malassezia spp e Zigomicetos tambÃm poderia ser empregada com eficiÃncia para a estocagem de outros fungos As estruturas fÃngicas foram removidas e transferidas para duas soluÃÃes de estoque, formadas por 3% de caldo Sabouraud 15% de alginato de sÃdio e diferenciadas nas concentraÃÃes de glicose e lactose de 9% ou 23% Em seguida, foram adicionadas esferas plÃsticas, medindo 07cm de diÃmetro com orifÃcio central e 0,5cm de comprimento ApÃs a gelificaÃÃo iÃnica com cloreto de cÃlcio, cada cepa foi estocada à temperatura de -20 ÂC e -80 ÂC distribuÃdas em cinco tubos criogÃnicos de 15mL contendo cinco esferas cada uma sendo avaliados em cinco perÃodos ApÃs nove meses foi verificado que nÃo houve recuperaÃÃo de nenhuma cepa de Malassezia spp Com relaÃÃo Ãs espÃcies de Zigomicetos observou-se que apÃs nove meses de estoque quatro cepas mostraram viÃveis a -80 ÂC empregando glicose a 9%, seis cepas foram preservadas a -80 ÂC, utilizando glicose a 23% finalmente seis e sete exemplares foram recuperados a -80 ÂC utilizando lactose a 9% e 23% respectivamente. Dessa forma, o uso de carboidratos como crioprotetores em conjunto com a tÃcnica de imobilizaÃÃo de cÃlulas em alginato de sÃdio constitui alternativa à manutenÃÃo de algumas espÃcies fÃngicas / Cryopreservation is the method of choice in many banks of microorganisms because it leads to a situation of metabolic dormancy and consequently cultures are stable for long periods. By reducing the temperature may however be formed of ice crystals which tend to cause cell damage to cell damage in turn can be avoided by vitrification process which takes place by combining a solution with the quick freezing the literature reports the use of carbohydrates vitrificadores cryoprotectants agents and also advises that the technique of immobilization of cells in sodium alginate allows the fractionation of culture and promotes the preservation of microorganisms The objective of this study is to assess the viability of the fungi of the genus Malassezia spp and the Zygomycetes group of assets in sodium alginate and lactose using glucose as cryoprotectants Twelve strains of species of Malassezia spp (9 M furfur 1 M 2 M globosa simpodialis) and twelve strains of zygomycetes (seven Mucor Rhizopus sp is 5) belonging to the mycology collection of the Specialized Center for Medical Mycology Federal University of Cearà The genus Malassezia comprises yeasts lipodependent associated with various dermatologic diseases currently comprise 13 Zygomycetes species, in turn, are ubiquitous and saprophytic fungi whose hyphae because they have high protein content and reduced size are more vulnerable to mechanical damage this way are groups of fungi in stock so hard to preserve a methodology to maintain the viability of Malassezia spp and Zygomycetes could also be used effectively for the storage of other fungi fungal structures were removed and transferred to two stock solutions, formed by 3% broth Sabouraud 15% sodium alginate and different concentrations of glucose and 9% lactose and 23% were then added plastic spheres, measuring 07cm in diameter and 0.5 cm center hole length After ionic gelation with calcium chloride Each strain was stored at -20  C and -80  C cryogenic distributed in five tubes containing 15 mL each of five levels being evaluated in five periods after nine months it was found that there was no recovery of any strain of Malassezia spp Regarding Zygomycetes species showed that after nine months of inventory four strains were viable at -80  C using glucose 9%, six strains were preserved at -80  C, using 23% glucose last six seven specimens were recovered at -80  C using a 9% lactose and 23% respectively. Thus, the use of cryoprotectants such as carbohydrates in conjunction with the technique of immobilization of cells in sodium alginate is an alternative to maintaining some fungal species

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O objetivo deste trabalho foi estudar a preparaÃÃo de biocatalisadores utilizando lipase de Candida antarctica tipo B (CALB) imobilizada covalentemente em quitosana, uma matÃria-prima abundante e de baixo custo no CearÃ, em quitosana-alginato e em agarose, com o intuito de utilizÃ-los na sÃntese de Ãsteres de vitamina A. Diversas estratÃgias de imobilizaÃÃo foram realizadas com o intuito de obter um derivado com elevada atividade enzimÃtica e com alta estabilidade tÃrmica e operacional. TrÃs tipos de suportes (agarose, quitosana e quitosana-alginato) foram preparados a partir de tais estratÃgias, sendo que um estudo aprofundado foi realizado com dois desses suportes (quitosana e quitosana-alginato). Apenas uma estratÃgia de imobilizaÃÃo foi realizada com agarose para testÃ-lo na sÃntese de palmitato de retinila, juntamente com dois derivados comerciais (lipase imobilizada de Thermomyces lanuginosus (Lipozyme TL IM) e lipase imobilizada de Mucor miehei (Lipozyme RM IM)), com o objetive de definir algumas condiÃÃes operacionais. Uma condiÃÃo avaliada que apresentou bons resultados na sÃntese foi o uso de peneira molecular para a retirada de Ãgua no meio reacional, sendo, portanto, utilizada nos estudos posteriores. ApÃs os estudos de imobilizaÃÃo e estabilidade tÃrmica a 60 ÂC, dois derivados (J8: quitosana ativada com glicidol seguido de etilenodiamina (EDA) e glutaraldeÃdo, e G10: quitosana-alginato ativada com glutaraldeÃdo) foram escolhidos, por apresentarem maiores atividades especÃficas (422,44 Â 50,4 U/g e 378,30 Â 34,7 U/g, respectivamente) e melhores estabilidades tÃrmicas (fatores de estabilizaÃÃo de 10,25 e 29,00, respectivamente), para estudos de estabilidade operacional de hidrÃlise e para sÃntese de palmitato de retinila. O derivado que apresentou melhor estabilidade tÃrmica a 60ÂC foi o G10, CALB imobilizada em quitosana-alginato, sendo aproximadamente 29 vezes mais estÃvel que a enzima solÃvel, e mais de 2 vezes mais estÃvel do que a enzima comercial Novozyme 435. PorÃm, o derivado J8 apresentou melhor estabilidade operacional de hidrÃlise, semelhante ao derivado comercial Novozyme 435. Um planejamento experimental 22 foi realizado para se avaliar a sÃntese de palmitato de retinila. Avaliou-se a influÃncia da temperatura (37 ÂC e 45 ÂC) e da razÃo entre os substratos, retinol:Ãcido palmÃtico (1:3 e 1:5), no rendimento de sÃntese, catalisada pelo derivado J8. Uma reaÃÃo utilizando o derivado G10 utilizando a melhor condiÃÃo do planejamento experimental foi realizada para ver o comportamento desse derivado. Com uma anÃlise estatÃstica dos resultados, pÃde-se observar que a razÃo entre os substratos teve efeito significativo no rendimento de sÃntese. Maiores foram obtidos quando a razÃo entre substratos foi igual a 1:5. Como os resultados nas temperaturas de 37 ÂC e 45 ÂC foram semelhantes, selecionou-se a temperatura de 37 ÂC para reaÃÃes posteriores, por necessitar de um menor gasto de energia para atingi-la / The objective of this work was to study the preparation of biocatalysts using lipase of Candida antarctica type B (CALB) covalently immobilized in agarose, chitosan, an abundant and low cost raw material, to be used in the synthesis of ester of Vitamin A. Several strategies of immobilization were studied in order to obtain a biocatalyst with good enzymatic activity and high thermal and operational stabilities. Three types of supports (agarose, chitosan and chitosanalginate) were activated by different strategies, but most of attention was given to the supports chitosan and chitosan-alginate. Only one derivative was prepared by immobilizing CALB in agarose and results of synthesis were compared to commercial derivatives (immobilized lipase of Thermomyces lanuginosus - Lipozyme TL IM - and immobilized lipase of Mucor miehei - Lipozyme RM IM), for the definition of some operational conditions. The operational condition that presented good results in the synthesis was used in further studies, such as removal of water from the reacional media by molecular sieves. After immobilization and thermal stabilities at 60 ÂC tests, two derivatives (J8: chitosan actived with glicidol follow by EDA and glutaraldehyde; G10: chitosan-alginate actived with glutaraldehyde) were selected: the ones that presented higher specific activities (422.44 Â 50.4 U/g and 378.30 Â 34.7 U/g, respectively) and best thermal stabilities (factors of stabilization of 10.25 and 29.0, respectively). Operational hydrolytic stabilities and the performance of these biocatalysts on the synthesis of retinyl palmitate were evaluated. One factorial design 22 was carried out to evaluate the synthesis of retinyl palmitate. The influence of the temperature (37 ÂC and 45 ÂC) and ratio between substrates concentration, retinol: palmitic acid (1:3 and 1:5), in the yield of synthesis, catalyzed for the J8 derivative, were evaluated. A statistical analysis of the results showed that the the most significant effect was the rate of substrates concentration. Higher yields of synthesis were obtained when the ratio of substrates concentration was equal to 1:5. Results of reaction yields at 37ÂC and 45 ÂC were very similar. Therefore, 37 ÂC was selected for further studies. Best results for thermal stability at 60ÂC were obtained for G10, CALB immobilized in chitosan-alginate, being approximately 29-fold more stable than soluble enzyme, and 2-fold more stable than the commercial enzyme (Novozyme 435). On the other hand, J8, CALB immobilized in chitosan, presented higher operational hydrolysis stability, with a similar deactivation profile to Novozyme 435