Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Evalúa los niveles de cfDNA en plasma mediante PCR digital en pacientes con cáncer de mama para implementar una técnica de diagnóstico temprano. Estandariza el método para obtener cfDNA en plasma. Evalúa los niveles de cfDNA en plasma por PCR digital a través de los genes PUM1 y RNasa P. Establece los niveles de cfDNA en plasma en pacientes con cáncer de mama e individuos sanos. Relaciona los niveles de cfDNA en plasma con el estadio neoplásico. Es una investigación descriptiva, prospectiva, cuantitativa, transversal, observacional y de caso-control. Utiliza una muestra de 16 mujeres con edades entre 28-80 años diagnosticadas con cáncer de mama y otra de 21 mujeres sin diagnóstico positivo para cáncer de mama, mayores de 40 años, las cuales son codificadas como grupo control. Encuentra que el cfDNA es un biomarcador apropiado como herramienta diagnóstica en cáncer de mama, la extracción de cfDNA con perlas magnéticas es un método idóneo que asegura la mayor concentración y pureza de la muestra y que la PCR digital está calificada para la cuantificación absoluta de cfDNA en muestras de pacientes y controles. Señala la existencia de diferencias significativas entre niveles de cfDNA de pacientes con cáncer de mama y controles. / Tesis

El cáncer de pulmón es la primera causa de muerte por cáncer en los países desarrollados. Cada año se diagnostican más de un millón de nuevos casos de cáncer de pulmón en todo el mundo. De ellos cerca del 80% corresponden a cáncer de pulmón no microcítico, siendo el hábito tabáquico uno de los principales factores etiológicos involucrado en el desarrollo de esta patología. La supervivencia de los pacientes con cáncer de pulmón no microcítico avanzado es muy pobre y hasta ahora sólo se han obtenido mejores índices de respuesta con los distintos esquemas terapéuticos empleados y se carece información sobre la supervivencia global de los pacientes después de recibir segundas líneas de tratamiento. El estudio de las distintas alteraciones genéticas y epigenéticas en ADN tumoral circulante en pacientes con cáncer de pulmón no microcítico avanzado podría ser de gran ayuda para el hallazgo de nuevos marcadores moleculares predictivos de respuesta a los distintos esquemas terapéuticos y encontrar subgrupos de pacientes que se beneficiarían. En este trabajo se analizó el estado de metilación de CHFR en suero de 308 pacientes incluidos en el estudio GILT del Grupo Español de Cáncer de Pulmón tratados con inhibidores de los microtúbulos y la influencia de segundas líneas de tratamiento en la supervivencia global de este grupo de pacientes. Posteriormente, en un panel de 7 líneas celulares de cáncer de pulmón se caracterizó el tratamiento secuencial de cisplatino con erlotinib y dichos resultados se correlacionaron con el estado de metilación de CHFR. No se encontró una asociación directa entre el estado de metilación de CHFR en suero y la supervivencia de los pacientes analizados. Sin embrago, el grupo de pacientes mayores de 66 años con CHFR metilado presentaron mayor supervivencia y tiempo a la progresión al recibir tratamiento con agentes antimicrotúbulos.Dos hallazgos fundamentales se desprenden del tratamiento en segunda línea de este grupo de pacientes. Aquellos pacientes que recibieron en primera línea docetaxel/cisplatino seguido de EGFR TKIs en segunda línea presentaron una supervivencia de 19,2 meses (p=0.0002), significativamente más prolongada que los 10,6 meses de aquellos tratados en segunda línea con quimioterapia. Sin embargo, en aquellos pacientes tratados en primera línea con gemcitabina/docetaxel no se halló diferencia significativa en la supervivencia según el tipo de tratamiento recibido en segunda línea. El otro dato interesante es la asociación entre el estado de metilación de CHFR y la supervivencia. La supervivencia media de los pacientes con CHFR no metilado tratados en segunda línea con EGFR TKIs fue de 21,3 meses, sorprendentemente más prolongada que los 11,2 meses de aquellos pacientes que recibieron quimioterapia (p=0.0001); no observándose diferencia para el grupo de pacientes con CHFR metilado de a cuerdo al tipo de segunda línea recibida. En los ensayos llevados a cabo en las líneas celulares de cáncer de pulmón, sólo aquella que no expresaba CHFR mostró un comportamiento antagónico al ser tratada secuencialmente con cisplatino y erlotinib. En conclusión:· Los pacientes mayores de 66 años y que presentan hipermetilación de CHFR pueden beneficiarse del tratamiento con agentes antimicrotúbulos. · El tratamiento en segunda línea con EGFR TKIs mejora la supervivencia de los pacientes que reciben un tratamiento en primera línea con cisplatino. · La expresión de CHFR confiere mayor supervivencia en los pacientes tratados en segunda línea con EGFR TKIs. / Lung Cancer is the leading cause of death by cancer in the developed countries. Each year more than one million of new cases of lung cancer are diagnosed. About 80% of these correspond to non- small cell lung cancer. Smoking is the major etiological factor involved in the development of this pathology. The survival of patients with advance non- small cell lung cancer is very poor. None of the combination therapy has been shown to be better. Moreover the potential impact of second line therapy in overall survival has not been fully investigated. The study of the different genetic and epigenetic alterations in circulating tumor DNA in cancer patients could be a tool for findings new molecular markers. These markers could be used in tailoring chemotherapy regimens and improving survival and responds in subgroups of patients. In this paper, we firstly analyzed the methylation status of CHFR in serum DNA of 308 patients included in a large randomized study of the Spanish Lung Cancer Group. Secondly, we investigated the outcome of second-line chemotherapy or EGFR TKIs and correlated the results with first-line treatment and CHFR methylation status. A panel of seven human NSCLC cell lines was characterized for their sensitivity to sequential treatment with cisplatin and erlotinib, and the results were correlated with CHFR. No differences in survival were observed according to CHFR methylation. However, when patients were broken down by methylation status and age, those patients older than 66 years old and with CHFR methylated showed better survival and longer time to progression. Two novel findings emerge from the study of second line treatment in this group of patients. Firstly, patients who received first-line cisplatin/docetaxel and second-line EGFR TKIs attained a median survival of 19.2 months, in contrast with 10.6 months for those receiving second-line chemotherapy (p = 0.0002). However, in patients who received first-line gemcitabine/docetaxel, no significant difference was observed between those receiving EGFR TKIs and those receiving chemotherapy. Secondly, median survival in patients with unmethylated CHFR who received second line therapy with EGFR TKIs was 21.3 months, remarkably longer than the 11.2 months for those patients receiving chemotherapy (p = 0.0001). No differences in survival were observed for the group of patients with methylated CHFR according to the type of second line received. In the only lung tumour cell line not expressing CHFR, pre-treatment with cisplatin was antagonistic to erlotinib, while it was synergistic in the other six lines.In conclusion: · Patients older than 66 years old with methylated CHFR could benefit from treatment with antimicrotúbulos agent· Second lines treatment with EGFR TKIs improves survival of patients received a first line treatment with cisplatin· The expression of CHFR confers increased survival in patients treated with second line EGFR TKIs.

El cáncer escamosos de cabeza y cuello (CECC) es un tumor de origen epitelial que representa un grave problema sociosanitario, debido a que cadaaño en el ámbito mundial se diagnostican 500.000 nuevos casos. En España la incidencia del CECC excede los 40 casos/100.000 hab./año. La supervivencia de estos pacientes está condicionada principalmente por la presencia demetástasis ganglionares. Hasta la fecha ningún medio diagnóstico (técnicas de imagen, marcadores bioquímicos) ha mostrado eficacia suficiente parapredecir la presencia de metástasis ganglionares. Hay nuevos marcadores relacionados con el proceso metastásico que todavía no se han evaluado suficientemente en el CECC. Mediante la determinación de diferentes marcadores tumorales de nueva aplicación, se trata de encontrar un perfil de éstos que sea aplicable en el CECC, así como tratar de predecir la evolución antes del tratamiento quirúrgico, relacionando los marcadores con la presencia de metástasis.

Colorectal tumors with mutations on Wnt family members show an overexpression of several Notch target genes, suggesting a link between Wnt and Notch signaling pathways. In this work, we have demonstrated that there is a direct relation between Wnt and Notch pathways that it is responsible for the maintenance of the intestinal proliferative compartment and crucial for intestinal tumorigenesis. We have identified two different mechanisms through β-catenin interacts with Notch to activate transcription: 1) β-catenin activates Notch through the transcriptional activation of Notch ligand Jagged1. Jagged1 expression leads the binding to the Notch receptor, promoting its cleavage and activation. This mechanism occurs in human colorectal tumors, with nuclear β-catenin, overexpressed Jagged1 and activated Notch. 2) β-catenin and Notch bind simultaneously to a specific group of gene promoters. We observed that this group of genes is overexpressed in tumours with mutations in Wnt signaling. Moreover, β-catenin and Notch physically interact in the nucleus of colorectal tumour cell lines. We have characterized a group of genes that are double target genes for β-catenin and Notch; in other words, these genes require the activation of both Wnt and Notch signaling pathways. These genes are expressed in the intestinal undifferentiated compartment. The loss of any of these signalling pathways reduced stem cell marker expression, reinforcing the importance of the interaction between both signalling pathways. The study of conditional knockouts mice for Jagged1 indicated that Jagged1 is not required for maintaining the intestinal homeostasis. However, Jagged1 is crucial during the tumorigenic process. Our data opens a new possibility for colorectal treatment, using inhibitors of Notch ligand Jagged1, avoiding side effects in the intestinal normal tissue.

Serum levels of several molecules associated to pancreatic adenocarcinoma (PDAC) pathophysiology are evaluated in this work, in order to determine their diagnostic value, distinguishing between PDAC patients and healthy controls (HC), different gastrointestinal tumours (GIT) and chronic pancreatitis (CP). Plasma mRNA levels in plasma of sialyltransferases (ST3Gal III and ST3Gal IV) could differentiate between HC and PDAC. Moreover, lower levels of ST3Gal III in early stages of PDAC compared to PDAC advanced stages were reported. The Glasgow Prognostic Score (GPS), inflammatory response quantification, differentiated between all the study groups. IGF-1 levels were lower in neoplasic groups of patient vs HC and CP. We assessed the diagnostic capacity of different markers alone or in combination and compared with that of CA 19.9. The best diagnostic capacity was found combining CEA, CA 19.9 and IGF-1 compared with CA 19.9 and it could be useful to distinguish PDAC from CP. / En este trabajo se analizan distintos parámetros séricos relacionados con la fisiopatología del adenocarcinoma pancreático (PDAC), para evaluar su uso como marcadores que permitan distinguir entre pacientes con PDAC y controles sanos (C), otras neoplasias del tracto gastrointestinal (ONEOS) y pancreatitis crónica (PC). La expresión en plasma de sialiltransferasas, ST3Gal III y ST3Gal IV diferencia entre controles y PDAC. Así mismo, los niveles de ST3Gal III permiten diferenciar en PDAC entre estadíos iniciales y metastáticos. El Glasgow Prognostic Score (GPS), medida de la respuesta inflamatoria, diferencia entre todos los grupos del estudio. Los valores de IGF-1 disminuyen en procesos neoplásicos vs C y PC.Se analiza la capacidad diagnóstica de los distintos parámetros individualmente y combinados entre sí respecto al CA19.9. La combinación de CA 19.9, CEA, IGF-1 aumenta la precisión diagnóstica frente al CA19.9 y podría ser útil para distinguir PDAC de PC.