Thesis (doctoral)--München, 1979.

O gênero Maytenus, pertencente à família Celastraceae é um dos maiores da família, constituído por cerca de 225 espécies distribuídas nos trópicos. Espécies de Maytenus são utilizadas na medicina popular de diversos países. No Brasil, M. iliciflolia e M. aquifolium são amplamente usadas pela população como antiulcerogênicas, anti-inflamatórias e antitumorais. Desta forma, este trabalho propôs-se a estudar as folhas das espécies vegetais M. dasyclada Mart. e M. cassineformis Reiss., nativas do Rio Grande do Sul, caracterizando-as quanto a aspectos químicos e biológicos. Para isso, obteve-se extratos das folhas das espécies utilizando o aparelho de soxhlet e os seguintes solventes: hexano, acetato de etila e etanol, em ciclos de 12 horas consecutivas para cada solvente. Também foi obtido um extrato aquoso por decocção das folhas da espécie. Estes extratos foram analisados por técnicas cromatográficas (CLAE-UV e CLAE-UV-IES-MS) e quantificados através de espectroscopia no UV. Os extratos hexânico, acetato de etila e etanólico, de ambas as espécies, foram caracterizados quanto as atividades antioxidante (ensaios de TRAP, inibição de radicais hidroxil e óxido nítrico, e inibição da peroxidação lipídica e oxidação de proteínas) e anti-inflamatória (ensaio de quimiotaxia leucocitária), ambos in vitro. Através do ensaio cometa, in vitro, avaliouse o potencial genotóxico dos extratos. Por fim, os mesmos foram testados quanto a atividade antiulcerogênica in vivo, por meio de indução de úlceras agudas por etanol e anti-inflamatórios não esteróides (AINEs). Parâmetros de secreção gástrica também foram avaliados (volume, pH e acidez total) pelo modelo de ligadura de piloro, e a produção de muco no conteúdo gástrico foi determinado. No intuito de elucidar possíveis mecanismos de ação gastroprotetor os ensaios de L-NAME e NEM foram desenvolvidos. As análises químicas revelaram a presença dos flavonoides quercetina e canferol nos extratos acetato de etila e etanólico das espécies, bem como a presença de derivados da galocatequina e derivados 3-7-Odiglicosilados de canferol e 3-O-triglicosilado de quercetina. O extrato acetato de etila de ambas as espécies demonstraram o maior conteúdo de polifenóis totais (53,58 ± 0,43 e 43,65 ± 0,80 mg/g de ácido gálico equivalente) e o maior conteúdo de flavonoides totais (3,72 ± 0,27 e 3,19 ± 0,32 mg/g de quercetina equivalente), para extratos de M. cassineformis e M. dasyclada, respectivamente. Os extratos das duas espécies demonstraram ainda um efeito inibidor importante da migração de leucócitos, obtendo valores de IC50 de 0,2594 μg/mL, 0,6114 μg/mL e 0,7560 μg/mL, para os extratos etanólico, acetato de etila e hexânico de M. dasyclada, respectivamente. Para M. cassineformis os valores de IC50 foram de 0,3182 μg/mL, 0,3751 μg/mL e 0,2916 μg/mL, para os extratos etanólicos, acetato de etila e hexânico, respectivamente. A atividade antioxidante dos extratos acetato de etila e etanólico das duas espécies foi demonstrada nos ensaios de atividade antioxidante total (TRAP), em que houve inibição significativa da quimioluminescência formada pelo luminol; e atividade contra os radicais hidroxil demonstrando efeito significativo na prevenção da degradação da desoxirribose. Os extratos foram ainda capazes de inibir a peroxidação lipídica, pelo ensaio de formação de TBARS, e oxidação de proteínas, pelo método do carbonil. Nenhum dos extratos pesquisados evidenciou efeito genotóxico no ensaio cometa in vitro. Os extratos acetato de etila e etanólico de M. dasyclada exerceram atividade antiulcerogênica demonstrada nos ensaios de úlcera induzida por etanol e AINEs, interferindo na secreção de ácido, e, também, interferindo nos mecanismos citoprotetores, aumentando a secreção de muco. Os mecanismos gastroprotetores podem estar relacionados ao efeito antioxidante, demonstrados pela inibição de óxido nítrico e compostos sulfidrila. Os resultados obtidos neste trabalho representam as primeiras contribuições para elucidar compostos químicos e potenciais atividades biológicas das espécies M. cassineformis e M. dasyclada. Os extratos demonstraram atividades biológicas promissoras, relacionadas ao alto conteúdo de compostos fenólicos presentes nas espécies. / The genus Maytenus, belonging to the Celastraceae family is one of the largest family, comprising about 225 species distributed in the tropics. Maytenus species are used in folk medicine in many countries. In Brazil, M. iliciflolia and M. aquifolium are widely used by the population as antiulcer, anti-inflammatory and antitumor. Thus, this project aimed to study the leaves of the plant species M. dasyclada Mart. and M. cassineformis Reiss., natives from Rio Grande do Sul, characterizing them as the chemical and biological aspects. Therefore, was held the extraction of the leaves of species using soxhlet and the following solvents: hexane, ethyl acetate and ethanol, in cycles of 12 hours consecutives for each solvent. Also an aqueous extract was obtained by decoction of the leaves of the species. These extracts were analyzed by chromatographic techniques (HPLC-DAD and HPLC-DAD-ESI-MS) and quantified by UV spectroscopy. The extracts hexane, ethyl acetate and ethanolic of both species were characterized for antioxidant activity (TRAP assay, inhibition of hydroxyl and nitric oxide radicals, and inhibition of lipid peroxidation and protein oxidation) and anti-inflammatory (chemotaxis assay), both in vitro. Through the comet assay in vitro, we evaluated the genotoxic potential of the extracts. Finally, they were tested for antiulcer activity in vivo, by induction of acute ulcers by ethanol and anti-inflammatory drugs. Gastric secretion parameters were also evaluated (volume, total acidity and pH) at pylorus ligature model, and the production of mucus in the gastric contents was determined. In order to elucidate possible mechanisms of gastroprotective action assays of L-NAME and NEM were developed. Chemical analysis revealed the presence of flavonoids quercetin and kaempferol in ethyl acetate and ethanolic extracts of species and the presence of gallocatechin derivatives and kaempferol 3- 7-O-diglicosidic and quercetin 3-O-triglicosidic. The ethyl acetate extracts of both species showed the highest amount of total polyphenols (53.58 ± 0.43 and 43.65 ± 0.80 mg gallic acid equivalent/g) and highest content of flavonoids (3.72 ± 0.27 and 3.19 ± 0.32 mg quercetin equivalents/g), for M. cassineformis and M. dasyclada extracts, respectively. The extracts of both species also showed an inhibitory effect on leukocyte migration importantly, getting IC50 values of 0.2594 μg/mL, 0.6114 μg/mL and 0.7560 μg/mL for ethanolic, ethyl acetate hexane and M. dasyclada respectively. For M. cassineformis the IC50 values were 0.3182 μg/mL, 0.3751 μg/mL and 0.2916 μg/mL, the ethanol extracts, ethyl acetate and hexane, respectively. The antioxidant activity of the ethyl acetate and ethanol extracts from both species was demonstrated in tests of total antioxidant activity (TRAP), in which there was significant inhibition of luminol chemiluminescence, and activity against hydroxyl radicals demonstrating significant effect in preventing the degradation of deoxyribose. The extracts were still able to inhibit lipid peroxidation by TBARS formation assay, and protein oxidation as measured by the carbonyl. Extract showed no genotoxic effects in the comet assay in vitro. The ethyl acetate and ethanolic M. dasyclada extracts exerted antiulcer activity demonstrated in the experimental ulcer induced by ethanol and NSAIDs, interfering in acid secretion, and also interfering with the cytoprotective mechanisms, increasing mucus secretion. Gastroprotector mechanisms may be related to antioxidant effects, demonstrated by the inhibition of nitric oxide and sulfhydryl compounds. The results obtained in this study represent the first contributions to elucidate chemical compounds and biological activities potential of the species M. cassineformis and M. dasyclada. The extracts showed promising biological activities, related to the high content of phenolic compounds present in the species.

O gênero Maytenus, pertencente à família Celastraceae é um dos maiores da família, constituído por cerca de 225 espécies distribuídas nos trópicos. Espécies de Maytenus são utilizadas na medicina popular de diversos países. No Brasil, M. iliciflolia e M. aquifolium são amplamente usadas pela população como antiulcerogênicas, anti-inflamatórias e antitumorais. Desta forma, este trabalho propôs-se a estudar as folhas das espécies vegetais M. dasyclada Mart. e M. cassineformis Reiss., nativas do Rio Grande do Sul, caracterizando-as quanto a aspectos químicos e biológicos. Para isso, obteve-se extratos das folhas das espécies utilizando o aparelho de soxhlet e os seguintes solventes: hexano, acetato de etila e etanol, em ciclos de 12 horas consecutivas para cada solvente. Também foi obtido um extrato aquoso por decocção das folhas da espécie. Estes extratos foram analisados por técnicas cromatográficas (CLAE-UV e CLAE-UV-IES-MS) e quantificados através de espectroscopia no UV. Os extratos hexânico, acetato de etila e etanólico, de ambas as espécies, foram caracterizados quanto as atividades antioxidante (ensaios de TRAP, inibição de radicais hidroxil e óxido nítrico, e inibição da peroxidação lipídica e oxidação de proteínas) e anti-inflamatória (ensaio de quimiotaxia leucocitária), ambos in vitro. Através do ensaio cometa, in vitro, avaliouse o potencial genotóxico dos extratos. Por fim, os mesmos foram testados quanto a atividade antiulcerogênica in vivo, por meio de indução de úlceras agudas por etanol e anti-inflamatórios não esteróides (AINEs). Parâmetros de secreção gástrica também foram avaliados (volume, pH e acidez total) pelo modelo de ligadura de piloro, e a produção de muco no conteúdo gástrico foi determinado. No intuito de elucidar possíveis mecanismos de ação gastroprotetor os ensaios de L-NAME e NEM foram desenvolvidos. As análises químicas revelaram a presença dos flavonoides quercetina e canferol nos extratos acetato de etila e etanólico das espécies, bem como a presença de derivados da galocatequina e derivados 3-7-Odiglicosilados de canferol e 3-O-triglicosilado de quercetina. O extrato acetato de etila de ambas as espécies demonstraram o maior conteúdo de polifenóis totais (53,58 ± 0,43 e 43,65 ± 0,80 mg/g de ácido gálico equivalente) e o maior conteúdo de flavonoides totais (3,72 ± 0,27 e 3,19 ± 0,32 mg/g de quercetina equivalente), para extratos de M. cassineformis e M. dasyclada, respectivamente. Os extratos das duas espécies demonstraram ainda um efeito inibidor importante da migração de leucócitos, obtendo valores de IC50 de 0,2594 μg/mL, 0,6114 μg/mL e 0,7560 μg/mL, para os extratos etanólico, acetato de etila e hexânico de M. dasyclada, respectivamente. Para M. cassineformis os valores de IC50 foram de 0,3182 μg/mL, 0,3751 μg/mL e 0,2916 μg/mL, para os extratos etanólicos, acetato de etila e hexânico, respectivamente. A atividade antioxidante dos extratos acetato de etila e etanólico das duas espécies foi demonstrada nos ensaios de atividade antioxidante total (TRAP), em que houve inibição significativa da quimioluminescência formada pelo luminol; e atividade contra os radicais hidroxil demonstrando efeito significativo na prevenção da degradação da desoxirribose. Os extratos foram ainda capazes de inibir a peroxidação lipídica, pelo ensaio de formação de TBARS, e oxidação de proteínas, pelo método do carbonil. Nenhum dos extratos pesquisados evidenciou efeito genotóxico no ensaio cometa in vitro. Os extratos acetato de etila e etanólico de M. dasyclada exerceram atividade antiulcerogênica demonstrada nos ensaios de úlcera induzida por etanol e AINEs, interferindo na secreção de ácido, e, também, interferindo nos mecanismos citoprotetores, aumentando a secreção de muco. Os mecanismos gastroprotetores podem estar relacionados ao efeito antioxidante, demonstrados pela inibição de óxido nítrico e compostos sulfidrila. Os resultados obtidos neste trabalho representam as primeiras contribuições para elucidar compostos químicos e potenciais atividades biológicas das espécies M. cassineformis e M. dasyclada. Os extratos demonstraram atividades biológicas promissoras, relacionadas ao alto conteúdo de compostos fenólicos presentes nas espécies. / The genus Maytenus, belonging to the Celastraceae family is one of the largest family, comprising about 225 species distributed in the tropics. Maytenus species are used in folk medicine in many countries. In Brazil, M. iliciflolia and M. aquifolium are widely used by the population as antiulcer, anti-inflammatory and antitumor. Thus, this project aimed to study the leaves of the plant species M. dasyclada Mart. and M. cassineformis Reiss., natives from Rio Grande do Sul, characterizing them as the chemical and biological aspects. Therefore, was held the extraction of the leaves of species using soxhlet and the following solvents: hexane, ethyl acetate and ethanol, in cycles of 12 hours consecutives for each solvent. Also an aqueous extract was obtained by decoction of the leaves of the species. These extracts were analyzed by chromatographic techniques (HPLC-DAD and HPLC-DAD-ESI-MS) and quantified by UV spectroscopy. The extracts hexane, ethyl acetate and ethanolic of both species were characterized for antioxidant activity (TRAP assay, inhibition of hydroxyl and nitric oxide radicals, and inhibition of lipid peroxidation and protein oxidation) and anti-inflammatory (chemotaxis assay), both in vitro. Through the comet assay in vitro, we evaluated the genotoxic potential of the extracts. Finally, they were tested for antiulcer activity in vivo, by induction of acute ulcers by ethanol and anti-inflammatory drugs. Gastric secretion parameters were also evaluated (volume, total acidity and pH) at pylorus ligature model, and the production of mucus in the gastric contents was determined. In order to elucidate possible mechanisms of gastroprotective action assays of L-NAME and NEM were developed. Chemical analysis revealed the presence of flavonoids quercetin and kaempferol in ethyl acetate and ethanolic extracts of species and the presence of gallocatechin derivatives and kaempferol 3- 7-O-diglicosidic and quercetin 3-O-triglicosidic. The ethyl acetate extracts of both species showed the highest amount of total polyphenols (53.58 ± 0.43 and 43.65 ± 0.80 mg gallic acid equivalent/g) and highest content of flavonoids (3.72 ± 0.27 and 3.19 ± 0.32 mg quercetin equivalents/g), for M. cassineformis and M. dasyclada extracts, respectively. The extracts of both species also showed an inhibitory effect on leukocyte migration importantly, getting IC50 values of 0.2594 μg/mL, 0.6114 μg/mL and 0.7560 μg/mL for ethanolic, ethyl acetate hexane and M. dasyclada respectively. For M. cassineformis the IC50 values were 0.3182 μg/mL, 0.3751 μg/mL and 0.2916 μg/mL, the ethanol extracts, ethyl acetate and hexane, respectively. The antioxidant activity of the ethyl acetate and ethanol extracts from both species was demonstrated in tests of total antioxidant activity (TRAP), in which there was significant inhibition of luminol chemiluminescence, and activity against hydroxyl radicals demonstrating significant effect in preventing the degradation of deoxyribose. The extracts were still able to inhibit lipid peroxidation by TBARS formation assay, and protein oxidation as measured by the carbonyl. Extract showed no genotoxic effects in the comet assay in vitro. The ethyl acetate and ethanolic M. dasyclada extracts exerted antiulcer activity demonstrated in the experimental ulcer induced by ethanol and NSAIDs, interfering in acid secretion, and also interfering with the cytoprotective mechanisms, increasing mucus secretion. Gastroprotector mechanisms may be related to antioxidant effects, demonstrated by the inhibition of nitric oxide and sulfhydryl compounds. The results obtained in this study represent the first contributions to elucidate chemical compounds and biological activities potential of the species M. cassineformis and M. dasyclada. The extracts showed promising biological activities, related to the high content of phenolic compounds present in the species.

O gênero Maytenus, pertencente à família Celastraceae é um dos maiores da família, constituído por cerca de 225 espécies distribuídas nos trópicos. Espécies de Maytenus são utilizadas na medicina popular de diversos países. No Brasil, M. iliciflolia e M. aquifolium são amplamente usadas pela população como antiulcerogênicas, anti-inflamatórias e antitumorais. Desta forma, este trabalho propôs-se a estudar as folhas das espécies vegetais M. dasyclada Mart. e M. cassineformis Reiss., nativas do Rio Grande do Sul, caracterizando-as quanto a aspectos químicos e biológicos. Para isso, obteve-se extratos das folhas das espécies utilizando o aparelho de soxhlet e os seguintes solventes: hexano, acetato de etila e etanol, em ciclos de 12 horas consecutivas para cada solvente. Também foi obtido um extrato aquoso por decocção das folhas da espécie. Estes extratos foram analisados por técnicas cromatográficas (CLAE-UV e CLAE-UV-IES-MS) e quantificados através de espectroscopia no UV. Os extratos hexânico, acetato de etila e etanólico, de ambas as espécies, foram caracterizados quanto as atividades antioxidante (ensaios de TRAP, inibição de radicais hidroxil e óxido nítrico, e inibição da peroxidação lipídica e oxidação de proteínas) e anti-inflamatória (ensaio de quimiotaxia leucocitária), ambos in vitro. Através do ensaio cometa, in vitro, avaliouse o potencial genotóxico dos extratos. Por fim, os mesmos foram testados quanto a atividade antiulcerogênica in vivo, por meio de indução de úlceras agudas por etanol e anti-inflamatórios não esteróides (AINEs). Parâmetros de secreção gástrica também foram avaliados (volume, pH e acidez total) pelo modelo de ligadura de piloro, e a produção de muco no conteúdo gástrico foi determinado. No intuito de elucidar possíveis mecanismos de ação gastroprotetor os ensaios de L-NAME e NEM foram desenvolvidos. As análises químicas revelaram a presença dos flavonoides quercetina e canferol nos extratos acetato de etila e etanólico das espécies, bem como a presença de derivados da galocatequina e derivados 3-7-Odiglicosilados de canferol e 3-O-triglicosilado de quercetina. O extrato acetato de etila de ambas as espécies demonstraram o maior conteúdo de polifenóis totais (53,58 ± 0,43 e 43,65 ± 0,80 mg/g de ácido gálico equivalente) e o maior conteúdo de flavonoides totais (3,72 ± 0,27 e 3,19 ± 0,32 mg/g de quercetina equivalente), para extratos de M. cassineformis e M. dasyclada, respectivamente. Os extratos das duas espécies demonstraram ainda um efeito inibidor importante da migração de leucócitos, obtendo valores de IC50 de 0,2594 μg/mL, 0,6114 μg/mL e 0,7560 μg/mL, para os extratos etanólico, acetato de etila e hexânico de M. dasyclada, respectivamente. Para M. cassineformis os valores de IC50 foram de 0,3182 μg/mL, 0,3751 μg/mL e 0,2916 μg/mL, para os extratos etanólicos, acetato de etila e hexânico, respectivamente. A atividade antioxidante dos extratos acetato de etila e etanólico das duas espécies foi demonstrada nos ensaios de atividade antioxidante total (TRAP), em que houve inibição significativa da quimioluminescência formada pelo luminol; e atividade contra os radicais hidroxil demonstrando efeito significativo na prevenção da degradação da desoxirribose. Os extratos foram ainda capazes de inibir a peroxidação lipídica, pelo ensaio de formação de TBARS, e oxidação de proteínas, pelo método do carbonil. Nenhum dos extratos pesquisados evidenciou efeito genotóxico no ensaio cometa in vitro. Os extratos acetato de etila e etanólico de M. dasyclada exerceram atividade antiulcerogênica demonstrada nos ensaios de úlcera induzida por etanol e AINEs, interferindo na secreção de ácido, e, também, interferindo nos mecanismos citoprotetores, aumentando a secreção de muco. Os mecanismos gastroprotetores podem estar relacionados ao efeito antioxidante, demonstrados pela inibição de óxido nítrico e compostos sulfidrila. Os resultados obtidos neste trabalho representam as primeiras contribuições para elucidar compostos químicos e potenciais atividades biológicas das espécies M. cassineformis e M. dasyclada. Os extratos demonstraram atividades biológicas promissoras, relacionadas ao alto conteúdo de compostos fenólicos presentes nas espécies. / The genus Maytenus, belonging to the Celastraceae family is one of the largest family, comprising about 225 species distributed in the tropics. Maytenus species are used in folk medicine in many countries. In Brazil, M. iliciflolia and M. aquifolium are widely used by the population as antiulcer, anti-inflammatory and antitumor. Thus, this project aimed to study the leaves of the plant species M. dasyclada Mart. and M. cassineformis Reiss., natives from Rio Grande do Sul, characterizing them as the chemical and biological aspects. Therefore, was held the extraction of the leaves of species using soxhlet and the following solvents: hexane, ethyl acetate and ethanol, in cycles of 12 hours consecutives for each solvent. Also an aqueous extract was obtained by decoction of the leaves of the species. These extracts were analyzed by chromatographic techniques (HPLC-DAD and HPLC-DAD-ESI-MS) and quantified by UV spectroscopy. The extracts hexane, ethyl acetate and ethanolic of both species were characterized for antioxidant activity (TRAP assay, inhibition of hydroxyl and nitric oxide radicals, and inhibition of lipid peroxidation and protein oxidation) and anti-inflammatory (chemotaxis assay), both in vitro. Through the comet assay in vitro, we evaluated the genotoxic potential of the extracts. Finally, they were tested for antiulcer activity in vivo, by induction of acute ulcers by ethanol and anti-inflammatory drugs. Gastric secretion parameters were also evaluated (volume, total acidity and pH) at pylorus ligature model, and the production of mucus in the gastric contents was determined. In order to elucidate possible mechanisms of gastroprotective action assays of L-NAME and NEM were developed. Chemical analysis revealed the presence of flavonoids quercetin and kaempferol in ethyl acetate and ethanolic extracts of species and the presence of gallocatechin derivatives and kaempferol 3- 7-O-diglicosidic and quercetin 3-O-triglicosidic. The ethyl acetate extracts of both species showed the highest amount of total polyphenols (53.58 ± 0.43 and 43.65 ± 0.80 mg gallic acid equivalent/g) and highest content of flavonoids (3.72 ± 0.27 and 3.19 ± 0.32 mg quercetin equivalents/g), for M. cassineformis and M. dasyclada extracts, respectively. The extracts of both species also showed an inhibitory effect on leukocyte migration importantly, getting IC50 values of 0.2594 μg/mL, 0.6114 μg/mL and 0.7560 μg/mL for ethanolic, ethyl acetate hexane and M. dasyclada respectively. For M. cassineformis the IC50 values were 0.3182 μg/mL, 0.3751 μg/mL and 0.2916 μg/mL, the ethanol extracts, ethyl acetate and hexane, respectively. The antioxidant activity of the ethyl acetate and ethanol extracts from both species was demonstrated in tests of total antioxidant activity (TRAP), in which there was significant inhibition of luminol chemiluminescence, and activity against hydroxyl radicals demonstrating significant effect in preventing the degradation of deoxyribose. The extracts were still able to inhibit lipid peroxidation by TBARS formation assay, and protein oxidation as measured by the carbonyl. Extract showed no genotoxic effects in the comet assay in vitro. The ethyl acetate and ethanolic M. dasyclada extracts exerted antiulcer activity demonstrated in the experimental ulcer induced by ethanol and NSAIDs, interfering in acid secretion, and also interfering with the cytoprotective mechanisms, increasing mucus secretion. Gastroprotector mechanisms may be related to antioxidant effects, demonstrated by the inhibition of nitric oxide and sulfhydryl compounds. The results obtained in this study represent the first contributions to elucidate chemical compounds and biological activities potential of the species M. cassineformis and M. dasyclada. The extracts showed promising biological activities, related to the high content of phenolic compounds present in the species.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:30:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5760_1.pdf: 5924728 bytes, checksum: 98761036eed36247d4f60fd6ed48d413 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Este trabalho compreende o estudo farmacognóstico comparativo (padronização botânica, avaliação fitoquímica e avaliação da atividade biológica) entre as espécies Maytenus ilicifolia Mart. ex. Reiss. e M. rigida Mart. (Celastraceae), esta última bastante utilizada popularmente, em nosso estado, para o tratamento de distúrbios gástricos (gastrite e úlceras gástricas), indicações idênticas àquelas registradas através de vários estudos para M. ilicifolia. A padronização botânica é imprescindível ao controle de qualidade da matéria prima, já que há semelhança morfológica com outras espécies, todas com bordas foliares espinhosas, leva não raro a casos de utilização indevida, seja em processos fraudulentos ou acidentais. Na avaliação fitoquímica evidenciou-se a similaridade entre os extratos e frações das referidas espécies para os diversos grupos de metabólitos ensaiados, constatando-se grande semelhança quanto aos triterpenos e esteróides e, ainda, aos flavonóides presentes. Os ensaios biológicos foram divididos em duas partes: quanto à atividade antimicrobiana e quanto à atividade farmacológica antiulcerogênica. Na atividade antimicrobiana, os extratos brutos das duas espécies apresentaram-se ativos, destacando-se a eficácia demonstrada frente às várias cepas de Staphylococcus aureus. O teste da atividade antiulcerogênica revelou a proteção contra úlceras induzidas por etanol, como os os extratos e frações ensaiadas. Baseados nos resultados obtidos nos experimentos acima descritos, a M. rigida se qualifica como uma possível opção para a substituição da M. ilicifolia, visando emprego em paralelo ou substituindo a referida espécie, no todo ou em parte

A padronização de fitoterápicos leva a garantia de sua eficácia. Inicia-se na secagem, estabilização, moagem e acondicionamento. Devem ser estabelecidas técnicas de reconhecimento e manutenção das substâncias ativas, tanto na droga vegetal como em suas formas derivadas. Maytenus ilicifolia Martius ex. Reiss. (Celastraceae) é planta popularmente conhecida como espinheira santa, cancerosa ou cancorosa. Tem sido empregada como analgésico, contraceptivo oral, cicatrizante e nas gastralgias. Encontra-se no elenco de 20 plantas medicinais propostas pela Central de Medicamentos para estudos, já tendo sido comprovadas suas ações cicatrizante e protetora em dispepsias altas, bem como a baixa toxicidade e ausência de ação mutagênica. Para caracterização da droga vegetal, estabeleceram-se parâmetros de qualidade, inicialmente como avaliação anatômica da droga onde puderam ser observadas estruturas características para M. ilicifolia como por exemplo a existência de parênquima paliçádico em três camadas. Na análise química preliminar foi detectada a presença de carotenóides, flavonóides, taninóides e substâncias nitrogenadas. As duas últimas foram empregadas como substâncias referência no desenvolvimento de técnicas para quantificação. A técnica de quantificação utilizada para taninos, é preconizada em farmacopéia, já para as metilxantinas, método de extração descrito por Stahl e por coluna Extrelut seguido de quantificação em espectrometria no ultravioleta. Foram avaliados melhor os efeitos de diversos fatores tecnológicos sobre os macerados e submetidos a análise fatorial 4x2 e 3x2, onde foi possível avaliar o rendimento de extração das substâncias e de grupos específicos. Esta análise possibilitou avaliar qual fator que influencia a extração, selecionando o macerado que contém 50% de álcool e com 5 dias de contato, sendo o álcool responsável pelo efeito predominante. O macerado padronizado foi submetido a estudos preliminares de estabilidade através de ensaios de degradação térmica, a 30, 40 e 60°C, com acompanhamento cromatográfico e doseamento de substâncias taninóides, observando-se degradação deste grupo, que ocorreu aparentemente sob cinética de primeira ordem. / The standardization of phytotherapeutic drugs guarantees their efficacy and safety. Such standardization begins in the steps of drying, stabilizing, grinding and storing. Techniques of recognizing and maintaining the active substances, both in plant and in derived forms must be established. The leaves of Maytenus ilicifolia Martius ex. Reiss. (Celastraceae), popularly known as "espinheira santa", "cancerosa" or "cancorosa", have been used as analgesics, oral contraceptives, in wound healing and in alleviating gastric distress. The plant is among the 20 medicinal plants proposed for study by "CEME", the Brazilian national drug supply administration. To date, its beneficial actions in wound healing and in the treatment of dyspepsia have been clinical proven, as well as its low toxicity and absence of mutagenicity. In this study, quality control parameters for the plant form were established, initially using Maytenus ilicifolia's anatomic characteritics as for example, its three-layered palisadic parenchyma. Preliminary chemical analyses of the plant revealed carotenoids, flavonoids, tanninoids and nitrogenous compounds. The latter two substances were used as references in the development of quantification techniques. Quantification by tanninoids, used in this work, is well recognized in the pharmacopoeial literature. For methyl-xanthines, extraction techniques described by Stahl employing Extrelut column extraction followed , by UV spectrophotometric quantification were utilized. To better evaluate the effects of various techniques on 4 the maceration of the plant, 4x2 and 3x2 factorial analyses were employed, permitting evaluation of the extractive yield of both specific substances and specific groups of substances. The analysis revealed alcohol to be of paramount importance, with the best extraction occurring with a maceration containing 50% alcohol with five days of contact. A standardized macerate was submitted to preliminary stability studies through heat degradation experiments at 30, 40 and 60 degrees centigrade, degradation be followed by chromatography and by dosing of tanninoid substances. Degradation of these substances apparently followed first order kinetics.

A padronização de fitoterápicos leva a garantia de sua eficácia. Inicia-se na secagem, estabilização, moagem e acondicionamento. Devem ser estabelecidas técnicas de reconhecimento e manutenção das substâncias ativas, tanto na droga vegetal como em suas formas derivadas. Maytenus ilicifolia Martius ex. Reiss. (Celastraceae) é planta popularmente conhecida como espinheira santa, cancerosa ou cancorosa. Tem sido empregada como analgésico, contraceptivo oral, cicatrizante e nas gastralgias. Encontra-se no elenco de 20 plantas medicinais propostas pela Central de Medicamentos para estudos, já tendo sido comprovadas suas ações cicatrizante e protetora em dispepsias altas, bem como a baixa toxicidade e ausência de ação mutagênica. Para caracterização da droga vegetal, estabeleceram-se parâmetros de qualidade, inicialmente como avaliação anatômica da droga onde puderam ser observadas estruturas características para M. ilicifolia como por exemplo a existência de parênquima paliçádico em três camadas. Na análise química preliminar foi detectada a presença de carotenóides, flavonóides, taninóides e substâncias nitrogenadas. As duas últimas foram empregadas como substâncias referência no desenvolvimento de técnicas para quantificação. A técnica de quantificação utilizada para taninos, é preconizada em farmacopéia, já para as metilxantinas, método de extração descrito por Stahl e por coluna Extrelut seguido de quantificação em espectrometria no ultravioleta. Foram avaliados melhor os efeitos de diversos fatores tecnológicos sobre os macerados e submetidos a análise fatorial 4x2 e 3x2, onde foi possível avaliar o rendimento de extração das substâncias e de grupos específicos. Esta análise possibilitou avaliar qual fator que influencia a extração, selecionando o macerado que contém 50% de álcool e com 5 dias de contato, sendo o álcool responsável pelo efeito predominante. O macerado padronizado foi submetido a estudos preliminares de estabilidade através de ensaios de degradação térmica, a 30, 40 e 60°C, com acompanhamento cromatográfico e doseamento de substâncias taninóides, observando-se degradação deste grupo, que ocorreu aparentemente sob cinética de primeira ordem. / The standardization of phytotherapeutic drugs guarantees their efficacy and safety. Such standardization begins in the steps of drying, stabilizing, grinding and storing. Techniques of recognizing and maintaining the active substances, both in plant and in derived forms must be established. The leaves of Maytenus ilicifolia Martius ex. Reiss. (Celastraceae), popularly known as "espinheira santa", "cancerosa" or "cancorosa", have been used as analgesics, oral contraceptives, in wound healing and in alleviating gastric distress. The plant is among the 20 medicinal plants proposed for study by "CEME", the Brazilian national drug supply administration. To date, its beneficial actions in wound healing and in the treatment of dyspepsia have been clinical proven, as well as its low toxicity and absence of mutagenicity. In this study, quality control parameters for the plant form were established, initially using Maytenus ilicifolia's anatomic characteritics as for example, its three-layered palisadic parenchyma. Preliminary chemical analyses of the plant revealed carotenoids, flavonoids, tanninoids and nitrogenous compounds. The latter two substances were used as references in the development of quantification techniques. Quantification by tanninoids, used in this work, is well recognized in the pharmacopoeial literature. For methyl-xanthines, extraction techniques described by Stahl employing Extrelut column extraction followed , by UV spectrophotometric quantification were utilized. To better evaluate the effects of various techniques on 4 the maceration of the plant, 4x2 and 3x2 factorial analyses were employed, permitting evaluation of the extractive yield of both specific substances and specific groups of substances. The analysis revealed alcohol to be of paramount importance, with the best extraction occurring with a maceration containing 50% alcohol with five days of contact. A standardized macerate was submitted to preliminary stability studies through heat degradation experiments at 30, 40 and 60 degrees centigrade, degradation be followed by chromatography and by dosing of tanninoid substances. Degradation of these substances apparently followed first order kinetics.

A padronização de fitoterápicos leva a garantia de sua eficácia. Inicia-se na secagem, estabilização, moagem e acondicionamento. Devem ser estabelecidas técnicas de reconhecimento e manutenção das substâncias ativas, tanto na droga vegetal como em suas formas derivadas. Maytenus ilicifolia Martius ex. Reiss. (Celastraceae) é planta popularmente conhecida como espinheira santa, cancerosa ou cancorosa. Tem sido empregada como analgésico, contraceptivo oral, cicatrizante e nas gastralgias. Encontra-se no elenco de 20 plantas medicinais propostas pela Central de Medicamentos para estudos, já tendo sido comprovadas suas ações cicatrizante e protetora em dispepsias altas, bem como a baixa toxicidade e ausência de ação mutagênica. Para caracterização da droga vegetal, estabeleceram-se parâmetros de qualidade, inicialmente como avaliação anatômica da droga onde puderam ser observadas estruturas características para M. ilicifolia como por exemplo a existência de parênquima paliçádico em três camadas. Na análise química preliminar foi detectada a presença de carotenóides, flavonóides, taninóides e substâncias nitrogenadas. As duas últimas foram empregadas como substâncias referência no desenvolvimento de técnicas para quantificação. A técnica de quantificação utilizada para taninos, é preconizada em farmacopéia, já para as metilxantinas, método de extração descrito por Stahl e por coluna Extrelut seguido de quantificação em espectrometria no ultravioleta. Foram avaliados melhor os efeitos de diversos fatores tecnológicos sobre os macerados e submetidos a análise fatorial 4x2 e 3x2, onde foi possível avaliar o rendimento de extração das substâncias e de grupos específicos. Esta análise possibilitou avaliar qual fator que influencia a extração, selecionando o macerado que contém 50% de álcool e com 5 dias de contato, sendo o álcool responsável pelo efeito predominante. O macerado padronizado foi submetido a estudos preliminares de estabilidade através de ensaios de degradação térmica, a 30, 40 e 60°C, com acompanhamento cromatográfico e doseamento de substâncias taninóides, observando-se degradação deste grupo, que ocorreu aparentemente sob cinética de primeira ordem. / The standardization of phytotherapeutic drugs guarantees their efficacy and safety. Such standardization begins in the steps of drying, stabilizing, grinding and storing. Techniques of recognizing and maintaining the active substances, both in plant and in derived forms must be established. The leaves of Maytenus ilicifolia Martius ex. Reiss. (Celastraceae), popularly known as "espinheira santa", "cancerosa" or "cancorosa", have been used as analgesics, oral contraceptives, in wound healing and in alleviating gastric distress. The plant is among the 20 medicinal plants proposed for study by "CEME", the Brazilian national drug supply administration. To date, its beneficial actions in wound healing and in the treatment of dyspepsia have been clinical proven, as well as its low toxicity and absence of mutagenicity. In this study, quality control parameters for the plant form were established, initially using Maytenus ilicifolia's anatomic characteritics as for example, its three-layered palisadic parenchyma. Preliminary chemical analyses of the plant revealed carotenoids, flavonoids, tanninoids and nitrogenous compounds. The latter two substances were used as references in the development of quantification techniques. Quantification by tanninoids, used in this work, is well recognized in the pharmacopoeial literature. For methyl-xanthines, extraction techniques described by Stahl employing Extrelut column extraction followed , by UV spectrophotometric quantification were utilized. To better evaluate the effects of various techniques on 4 the maceration of the plant, 4x2 and 3x2 factorial analyses were employed, permitting evaluation of the extractive yield of both specific substances and specific groups of substances. The analysis revealed alcohol to be of paramount importance, with the best extraction occurring with a maceration containing 50% alcohol with five days of contact. A standardized macerate was submitted to preliminary stability studies through heat degradation experiments at 30, 40 and 60 degrees centigrade, degradation be followed by chromatography and by dosing of tanninoid substances. Degradation of these substances apparently followed first order kinetics.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-25T15:48:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Pablo Elleres.pdf: 5489693 bytes, checksum: b9a04e1146c232be81cf39a48ae1634d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-09-21T15:54:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Pablo Elleres.pdf: 5489693 bytes, checksum: b9a04e1146c232be81cf39a48ae1634d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-21T15:54:39Z (GMT). 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The barks were collected in the Adolpho Ducke Forest Reserve, in Manaus, the state capital of Amazonas, Brazil. Subsequently, they were properly dried and ground, and subjected to extraction in Soxhlet apparatus with different solvents according to the degree of polarity. The isolation and purification of the chemical constituents of the extract from the barks were performed through column chromatography, using silica gel as fixed phase. The development of the chromatographed substances in Thin Layer Chromatography was made by exposing the cromatoplates to ultraviolet light (250 nm) and by pulverization using a universal indicator, followed by heating in an oven at 100 °C. The structural identification of the isolated chemical constituents of M. guianensis was performed using spectroscopic methods of nuclear magnetic resonance Hydrogen-1 (1H-NMR) and Carbon-13 (13C-NMR), one- and two-dimensional, mass spectroscopy, and spectroscopy in the infrared region. To evaluate the antimicrobial potential effect on ATCC bacteria, pathogenic bacteria, and fungi, it was applied the agar well diffusion technique using specific protocols for the experiments. The design was completely randomized with three replicates per treatment. The test evaluation consisted of measuring the growth of bacteria and fungi colonies, 24 hours after the beginning of the experiment. The results obtained from this phytochemical study, until now, allowed the isolation of four substances: two friedelin and friedelanol triterpenes (triterpene 3-oxo-29-hydroxyfriedelane and triterpene 3-oxo-16β-hydroxyfriedelane) and quinonamethide triterpenes (tingenine B and tingenone). Phytochemicals results of this work in conjunction with the data described in literature clearly show that M. guianensis is a rich source of triterpenes classes of fridelanos and quinonamethide, they are restricted to Celastraceae family. In addition, extracts and compounds isolated from the bark of M. guianensis presented inhibitory effect against at least four of the five tested bacteria and fungi ATCC, noting satisfactory inhibition halos being novel antimicrobial testing. However, negative results were found for pathogenic bacteria. Thus, M. guianensis plant is a promising for the development of new antimicrobial herbal, and further studies must be made on the chemical composition and understanding of activity on virulence factors of multiresistant bacteria. The results indicate the antimicrobial potential of this plant, which may be promising for drug development studies. / Maytenus guianensis Klotzsch ex Reissek é uma planta da Amazônia Brasileira muito utilizada na medicina popular contra enfermidades como malária, leishmaniose e câncer. Acredita-se que essa ação farmacológica pode estar relacionada à presença de terpenoides presentes no gênero Maytenus. Com o aumento dos micro-organismos resistentes às substâncias antimicrobianas já conhecidas, vários extratos de plantas medicinais estão sendo testados com a finalidade de procurar novos compostos com atividade antimicrobiana. Assim, este trabalho visou realizar um estudo fitoquímico e avaliar o potencial antimicrobiano dos extratos e das substâncias isoladas das cascas de M. guianensis sobre bactérias e fungos. As cascas foram coletadas na Reserva Florestal Adolpho Ducke em Manaus-AM, devidamente secas e trituradas, sendo submetidas à extração em aparelho de Soxhlet com diferentes solventes de acordo com o aumento do grau de polaridade. O isolamento e purificação dos constituintes químicos do extrato das cascas foram realizados por meio de cromatografia em coluna utilizando-se como fase fixa sílica gel. As revelações das substâncias cromatografadas de camada delgada se deram por exposição das cromatoplacas à luz ultravioleta (250 nm) e por pulverização com revelador universal seguido de aquecimento em estufa a 100ºC. A identificação estrutural dos constituintes químicos isolados das cascas de M. guianensis foi realizada por meio de métodos espectroscópicos de Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio-1 (RMN-1H) e Carbono-13 (RMN-13C), uni e bidimensional, espectroscopia de massa e espectroscopia na região do infravermelho. Para avaliar o potencial antimicrobiano sobre as bactérias ATCC e patogênicas e fungos, utilizou-se a técnica de difusão em ágar utilizando protocolos específicos para os experimentos. O delineamento foi o inteiramente casualizado, com três repetições por tratamento. A avaliação do teste consistiu em medir o crescimento das colônias das bactérias e fungos, após 24 horas do início do experimento. Os resultados obtidos do estudo fitoquímico até o presente momento permitiram isolar quatro substâncias, sendo dois triterpenos friedelina e friedelanol (triterpeno 29-hidroxifriedelan-3-ona, triterpeno 16β-hidroxifrielan-3-ona) e triterpenos quinonametídeos (tingenina B e tingenona). Os resultados fitoquímicos deste trabalho em conjunto com os dados descritos na literatura, mostram nitidamente que M. guianensis é uma rica fonte de triterpenos das classes dos fridelanos e quinonametídeos, que estes são restritos a família Celastraceae. Além disso, os extratos e as substâncias isoladas das cascas de M. guianensis apresentaram efeito inibitório contra pelo menos quatro das cinco bactérias ATCC testadas e fungos, notando-se halos de inibição satisfatórios sendo inéditos os testes antimicrobianos demonstrando que M. guianensis é uma promissora planta para o desenvolvimento de um novo fitoterápico antimicrobiano, e mais estudos devem ser realizados quanto à composição química e entendimento da atividade sobre fatores de virulência das bactérias multirresistentes. Porém, resultados negativos foram encontrados para bactérias patogênicas. Os resultados sinalizam o potencial antimicrobiano dessa planta, podendo esta ser promissora para os estudos de desenvolvimento de novos fármacos.

Written records about medicinal plants date back at least 5,000 years to the Sumerians. The objected plants for present investigation were indigenous to South Africa and as explored, only a few biological studies were found on the previous studies on Hyaenanche globosa and Maytenus procumbens. Phytochemical studies of the ethanol extract of the fruits of H. g/obosa (F.E) resulted in isolation of two known pure sesquiterpene lactones; 'tutin 1' and 'hyenanchin 2'. The crude extract and its isolated constituents were tested on four cancerous and a normal cell lines. F.E exhibited the highest antiproliferative activity on Hela cells which followed by Caco-2 cells. None of the isolated compounds were found to be toxic to the cells tested in this experiment. F.E demonstrated potent inhibition of DPPH radical activity similar to vitamin C. 'Tutin 1' and 'hyenanchin 2' were found with marginal antioxidant activity of which 'compound 1' presented more potent activity than 'compound 2'. The amounts of ROS radicals formed by pure compounds (1 and 2) were not significantly higher than those of controls. This is the first report on phytochemical index, anticancer, antioxidant and antibacterial properties of F.E and its purified compounds. The possible biochemical activities of the acetonic/ethanolic extract of the leaves of Maytenus procumbens (L.M.P), and its isolated compounds were investigated in the present study. L.M.P showed IC50 values of 68.79, 51.22, 78.49, 76.59 and 76.64 ì/ml on Caco-2, Hela, HT29, NIH3T3 and T47D cells by use of MTT cytotoxicity assay. Bioassay guided fractionation led to the isolation and identification of two new triterpenes: '30-hydroxy-11á-hydroxy-18â-olean-12-en-3-one 3' and '30-hydroxy-11á-methoxy- 18â-olean-12-en-3-one 5'. In addition, a known terpenoid: 'asiatic acid 4' was purified. Due to the unavailability of sufficient amount of 'asiatic acid 4', this compound was not tested. Pure compounds 3 and 5 exhibited the most cytotoxicity against Hela cells and were further investigated for their abilities for induction of apoptosis (at the concentration of their IC sub>50) in Hela cells using flow cytometric method. Both compounds induced apoptosis up to 73.20%, (compound 3) and 20.40% (compound 5) in Hela cells versus control group (0.40%). Antioxidant/oxidative properties of L.M.P and its isolated compounds were investigated using extracellular (DPPH), and intracellular reactive oxygen species (ROS) assays. L.M.P and the isolated compounds exhibited marginal DPPH discoloration. Experimental samples represented a time and concentrationdependent function of ROS formation in Hela cells. ROS generation might be a part of the mechanisms by which compounds 3 and 5 induced apoptosis in Hela cells. It can therefore be concluded that the active components in L.M.P might serve as a mediator of the reactive oxygen scavenging system and have the potential to act as a prooxidant and an antioxidant, depending on the biological environment of the cells. There is no report until date on phytochemical index, anticancer, antioxidant and antibacterial properties of L.M.P and its isolated compounds. / Thesis (PhD)--University of Pretoria, 2012. / Plant Science / unrestricted