Pouco mais de 20 anos marcam a disseminação da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) em todo o mundo. Durante este período, avanços reais no diagnóstico, na clínica e na terapêutica podem ser observados como, por exemplo, a disponibilidade de 14 fármacos potencialmente ativos no combate direto ao vírus. Embora, nos últimos anos, os progressos no tratamento de pacientes infectados pelo HIV e/ou doentes com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) tenham sido significativos, novos estudos mostram-se importantes na área de Fármacos e Medicamentos. Este trabalho tem como objetivo aplicar a tecnologia farmacêutica à produção e controle de fármacos e medicamentos anti-HIV/AIDS, em especial a zidovudina (AZT). A utilização de diversas técnicas físico-químicas e analíticas possibilitou o desenvolvimento de estudos relacionados à avaliação da estabilidade e decomposição térmica do AZT, de excipientes e de misturas físicas utilizadas para a obtenção de formas farmacêuticas sólidas; caracterização dos produtos sólidos e voláteis do processo de degradação térmica do AZT; determinação do grau de pureza, faixa de fusão e variação dos valores de entalpia de fusão de princípios ativos de AZT de diferentes procedências; síntese e caracterização de compostos de inclusão de AZT com ciclodextrinas e com sais de lantanídeos caracteristicamente luminescentes; avaliação da estabilidade acelerada e a longo prazo de cápsulas de AZT disponíveis no mercado brasileiro; determinação dos parâmetros cinéticos da decomposição térmica do conteúdo das cápsulas de AZT. O método de planejamento fatorial foi utilizado na avaliação estatística dos dados de cinética obtidos por termogravimetria (TG) não-isotérmica. Os estudos de pré-formulação indicaram que não há interação entre o AZT e a maioria dos excipientes testados. Algumas alterações nos perfis termoanalíticos foram observadas em relação aos excipientes PEG 4000, 6000 e 20000, PVP, sorbitol e polióxido de etileno (polyox30®). No processo de decomposição térmica do AZT destaca-se a formação de timina. A utilização do sistema simultâneo e acoplado TG/DTA-GC/MS viabilizou a identificação de furano e 2-furanometanol como produtos voláteis. Os ensaios de calorimetria exploratória diferencial (DSC) permitiram a determinação da temperatura de fusão (118,0 a 122,9°C), do ΔHfusão (valor médio 30 kJ.min-1) e da percentagem de pureza (97,5 a 99,8%) para seis amostras comerciais do fármaco. O complexo de inclusão com β-ciclodextrina pode ser formado pela solubilização das espécies em meio aquoso e posterior obtenção do produto sólido por liofilização ou secagem à pressão reduzida. A interação não ocorre pela simples mistura mecânica das espécies. Foram preparados complexos de tenoiltrifluoracetonatos (TTA) de terras raras (Eu3+ e Sm3+) com AZT que apresentam alta luminescência. Os dados de absorção na região do infravermelho (IV) do complexo [RE(TTA)3·(AZT)2] sugerem que o ligante está coordenado ao íon de terra rara pelo átomo de nitrogênio do grupo azido. Os dados de difração de raios X (DRX) indicaram que o complexo [Eu(TTA)3·(AZT)2] mostra-se não cristalino, diferentemente do AZT livre, do sal precursor hidratado [RE(TTA)3·2H2O] e da mistura física. O estudo da variabilidade de condições experimentais em TG, empregando o planejamento fatorial, mostrou que nenhum dos efeitos avaliados é significativo. Os valores de energia de ativação para as amostras comerciais de AZT variaram entre 120 a 142 kJ.mol-1, para o método não-isotérmico e, de 100 a 112 kJ.mol-1, para o método isotérmico. Os resultados obtidos no estudo cinético se mostraram reprodutíveis configurando-se assim como um parâmetro importante, por exemplo, para avaliação da equivalência farmacêutica juntamente com os testes farmacopêicos. / For over twenty years the dissemination of the human immunodeficiency virus (HIV) appeared in the world. Since then, considerable advances in the diagnosis, clinic and therapy have been observed currently three classes of drugs 14 agents are in use for HIV infection. Therefore, the long-term effectiveness of potent three-drug antiretroviral regimens for the treatment of HIV infected patients and/or patients with adquired immunodeficiency syndrome (SIDA) is limited by problems related to compliance and tolerability. The aim of this work to apply the pharmaceutical technology to the production and control of anti-HIV/SIDA drugs and medicines, especially for zidovudine (AZT). The use of different physico-chemical and analytical techniques rnade it possible to develop some related studies for the stability evaluation and thermal decomposition of AZT, excipients and physical mixtures used for obtaining solid dosage forms; characterization of the solid and volatiles products of the thermal degradation process of AZT; determination of the purity, melting point and enthalpy variation of AZT obtained from different laboratories; synthesis and characterization of AZT inclusion compounds with cyclodextrins and with lanthanides salts characteristically luminescent; evaluation of the accelerated stability and the long-time of AZT capsules available in the Brazilian Market; determination of the degradation kinetics parameters of the different AZT samples. The factorial design method was used in the statistical evaluation of the kinetic data obtained from non-isothermal thermogravimetry (TG). The pre-formulation studies by thermal analysis indicated that there were no interaction between the AZT and the majority of the tested excipients. Some changes in the thermoanalytical profiles were observed in relation to PEG 4000, 6000 and 20000, PVP, sorbitol and ethylene polyoxide (polyox 30®) excipients. In the thermal decomposition process of AZT was observed the formation of thymine. The use of simultaneous and coupled system TG/DTA-GC/MS made it possible to identify of furan and 2-furanmethanol as volatiles products. The differential scanning calorimetry experiments permitted the determination of the melting point (118,0 to 122,9°C), ΔHmelting (medium value 30 kJ.min-1) and purity percentage (97,5 a 99,8%) for six commercial samples of the drug. The inclusion complex of AZT/β-cyclodextrin was obtained by the dissolution of the species in water and the mixture was dried by lyophilization or under vacuum at room temperature. The interaction between the species do not occur in the simple physical mixture. In this work, thenoyltrifluoroacetonate complexes with trivalent europium and samarium were prepared using AZT as a ligand. The complex presented high luminescence. According to the results of IR spectroscopy of the complexes [RE(TTA)3·(AZT)2], it was suggested that the metal ion be coordinated through the nitrogen of the azide group. The powder X-ray diffractometry (DRX) indicated that the complexes [Eu(TTA)3·(AZT)2] are not crystalline while free AZT, hydrate precursor salt [RE(TTA)3·2H2O] and physical mixture are. The variability study of the influence of different experimental conditions from TG, using Factorial Design, showed that none of the effects are significative. The kinetic energy values for the commercial AZT samples varied between 120 to 142 kJ.mol-1, by non-isothermal conditions, and 100 to 112 kJ.mol-1, by dynamic method. The results obtained in the kinetic studies are reproducible. These parameters are important for the evaluation of pharmaceutical equivalence together with bioequivalence studies.

Pouco mais de 20 anos marcam a disseminação da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) em todo o mundo. Durante este período, avanços reais no diagnóstico, na clínica e na terapêutica podem ser observados como, por exemplo, a disponibilidade de 14 fármacos potencialmente ativos no combate direto ao vírus. Embora, nos últimos anos, os progressos no tratamento de pacientes infectados pelo HIV e/ou doentes com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) tenham sido significativos, novos estudos mostram-se importantes na área de Fármacos e Medicamentos. Este trabalho tem como objetivo aplicar a tecnologia farmacêutica à produção e controle de fármacos e medicamentos anti-HIV/AIDS, em especial a zidovudina (AZT). A utilização de diversas técnicas físico-químicas e analíticas possibilitou o desenvolvimento de estudos relacionados à avaliação da estabilidade e decomposição térmica do AZT, de excipientes e de misturas físicas utilizadas para a obtenção de formas farmacêuticas sólidas; caracterização dos produtos sólidos e voláteis do processo de degradação térmica do AZT; determinação do grau de pureza, faixa de fusão e variação dos valores de entalpia de fusão de princípios ativos de AZT de diferentes procedências; síntese e caracterização de compostos de inclusão de AZT com ciclodextrinas e com sais de lantanídeos caracteristicamente luminescentes; avaliação da estabilidade acelerada e a longo prazo de cápsulas de AZT disponíveis no mercado brasileiro; determinação dos parâmetros cinéticos da decomposição térmica do conteúdo das cápsulas de AZT. O método de planejamento fatorial foi utilizado na avaliação estatística dos dados de cinética obtidos por termogravimetria (TG) não-isotérmica. Os estudos de pré-formulação indicaram que não há interação entre o AZT e a maioria dos excipientes testados. Algumas alterações nos perfis termoanalíticos foram observadas em relação aos excipientes PEG 4000, 6000 e 20000, PVP, sorbitol e polióxido de etileno (polyox30®). No processo de decomposição térmica do AZT destaca-se a formação de timina. A utilização do sistema simultâneo e acoplado TG/DTA-GC/MS viabilizou a identificação de furano e 2-furanometanol como produtos voláteis. Os ensaios de calorimetria exploratória diferencial (DSC) permitiram a determinação da temperatura de fusão (118,0 a 122,9°C), do ΔHfusão (valor médio 30 kJ.min-1) e da percentagem de pureza (97,5 a 99,8%) para seis amostras comerciais do fármaco. O complexo de inclusão com β-ciclodextrina pode ser formado pela solubilização das espécies em meio aquoso e posterior obtenção do produto sólido por liofilização ou secagem à pressão reduzida. A interação não ocorre pela simples mistura mecânica das espécies. Foram preparados complexos de tenoiltrifluoracetonatos (TTA) de terras raras (Eu3+ e Sm3+) com AZT que apresentam alta luminescência. Os dados de absorção na região do infravermelho (IV) do complexo [RE(TTA)3·(AZT)2] sugerem que o ligante está coordenado ao íon de terra rara pelo átomo de nitrogênio do grupo azido. Os dados de difração de raios X (DRX) indicaram que o complexo [Eu(TTA)3·(AZT)2] mostra-se não cristalino, diferentemente do AZT livre, do sal precursor hidratado [RE(TTA)3·2H2O] e da mistura física. O estudo da variabilidade de condições experimentais em TG, empregando o planejamento fatorial, mostrou que nenhum dos efeitos avaliados é significativo. Os valores de energia de ativação para as amostras comerciais de AZT variaram entre 120 a 142 kJ.mol-1, para o método não-isotérmico e, de 100 a 112 kJ.mol-1, para o método isotérmico. Os resultados obtidos no estudo cinético se mostraram reprodutíveis configurando-se assim como um parâmetro importante, por exemplo, para avaliação da equivalência farmacêutica juntamente com os testes farmacopêicos. / For over twenty years the dissemination of the human immunodeficiency virus (HIV) appeared in the world. Since then, considerable advances in the diagnosis, clinic and therapy have been observed currently three classes of drugs 14 agents are in use for HIV infection. Therefore, the long-term effectiveness of potent three-drug antiretroviral regimens for the treatment of HIV infected patients and/or patients with adquired immunodeficiency syndrome (SIDA) is limited by problems related to compliance and tolerability. The aim of this work to apply the pharmaceutical technology to the production and control of anti-HIV/SIDA drugs and medicines, especially for zidovudine (AZT). The use of different physico-chemical and analytical techniques rnade it possible to develop some related studies for the stability evaluation and thermal decomposition of AZT, excipients and physical mixtures used for obtaining solid dosage forms; characterization of the solid and volatiles products of the thermal degradation process of AZT; determination of the purity, melting point and enthalpy variation of AZT obtained from different laboratories; synthesis and characterization of AZT inclusion compounds with cyclodextrins and with lanthanides salts characteristically luminescent; evaluation of the accelerated stability and the long-time of AZT capsules available in the Brazilian Market; determination of the degradation kinetics parameters of the different AZT samples. The factorial design method was used in the statistical evaluation of the kinetic data obtained from non-isothermal thermogravimetry (TG). The pre-formulation studies by thermal analysis indicated that there were no interaction between the AZT and the majority of the tested excipients. Some changes in the thermoanalytical profiles were observed in relation to PEG 4000, 6000 and 20000, PVP, sorbitol and ethylene polyoxide (polyox 30®) excipients. In the thermal decomposition process of AZT was observed the formation of thymine. The use of simultaneous and coupled system TG/DTA-GC/MS made it possible to identify of furan and 2-furanmethanol as volatiles products. The differential scanning calorimetry experiments permitted the determination of the melting point (118,0 to 122,9°C), ΔHmelting (medium value 30 kJ.min-1) and purity percentage (97,5 a 99,8%) for six commercial samples of the drug. The inclusion complex of AZT/β-cyclodextrin was obtained by the dissolution of the species in water and the mixture was dried by lyophilization or under vacuum at room temperature. The interaction between the species do not occur in the simple physical mixture. In this work, thenoyltrifluoroacetonate complexes with trivalent europium and samarium were prepared using AZT as a ligand. The complex presented high luminescence. According to the results of IR spectroscopy of the complexes [RE(TTA)3·(AZT)2], it was suggested that the metal ion be coordinated through the nitrogen of the azide group. The powder X-ray diffractometry (DRX) indicated that the complexes [Eu(TTA)3·(AZT)2] are not crystalline while free AZT, hydrate precursor salt [RE(TTA)3·2H2O] and physical mixture are. The variability study of the influence of different experimental conditions from TG, using Factorial Design, showed that none of the effects are significative. The kinetic energy values for the commercial AZT samples varied between 120 to 142 kJ.mol-1, by non-isothermal conditions, and 100 to 112 kJ.mol-1, by dynamic method. The results obtained in the kinetic studies are reproducible. These parameters are important for the evaluation of pharmaceutical equivalence together with bioequivalence studies.

As hiperpigmentações da pele são devidas à abundante produção de melanina pelos melanócitos, sejam estes em número normal ou aumentado. Várias formulações cosméticas e medicamentosas têm sido produzidas nas formas de géis e cremes contendo hidroquinona como único princípio ativo, sendo de forma industrializada e manipulada. Conseqüentemente é necessário o desenvolvimento e validação de metodologias analíticas para determinações quantitativas da hidroquinona nos produtos comercializados a fim de ter métodos confiáveis, de baixo custo e de pouco impacto ambiental. Os objetivos da pesquisa foram caracterizar a hidroquinona matéria-prima para garantir seu uso nas formulações farmacêuticas bem como determiná-la quantitativamente em formulações cosméticas e medicamentos nas formas de géis e cremes. As metodologias propostas foram espectrofotometria derivada no UV e cromatografia líquida de alta eficiência. O método espectrofotométrico no UV derivado foi validado utilizando H2SO4 0,1 N como solvente, as leituras foram feitas a 302,0 nm na derivada de primeira ordem. O coeficiente de correlação foi de 0,9999; a média dos teores de hidroquinona nos géis e cremes foi de 101,7 e 97,6% respectivamente e as médias dos desvios padrões relativos de 0,839% para géis e 0,878% para cremes. A determinação pelo método cromatográfico, foi realizada utilizando uma coluna LiChrospher® 100 RP-18 (5 µm), fase móvel constituída por metanolágua (80:20 v/v), vazão de 1,0 mL/min e detecção UV a 289 nm. O coeficiente de correlação foi de 0,9999; a média dos teores de hidroquinona nos géis e cremes foi de 102,2 e 98,4% respectivamente e as médias dos desvios padrões relativos de 0,882% para géis e 1,252% para cremes. Os resultados das precisões e teores de hidroquinona foram tratados estatisticamente (testes de F e t respectivamente), e não se observou diferença significativa nos dois métodos propostos para um nível de confiança de 95%. / The excessive pigmentation of skin is due to abundant production of melanin by melanocytes located in the skin epidermal layers. Several cosmetic and pharmaceutical formulations had been industrialized as well as compounded in pharmacy such as gel and creams containing hydroquinone as a unique active ingredient. The quantitative determination of hydroquinones present in these formulations necessitates validated analytical methods that are reliable, economical and ecologically favorable. The objectives of this research were characterization of hydroquinone raw material to assure its use in pharmaceutical and cosmetic preparations as well as its quantitative determination in gel and cream formulations. A first derivative UV spectrophotometric and a high-performance liquid-chromatographic method are proposed. The UV first derivative spectrophotometric method was validated using H2SO4 0.1 N as solvent and absorptions were taken at 302.0 nm. The linearity data showed a correlation coefficient of 0.9999. The mean hydroquinone content of gels and creams were 101.7 and 97.6% with mean relative standard deviations of 0.839 and 0.878% respectively. The chromatographic method was validated using LiChrospher®, 100 RP-18 (5 µm) column, mobile phase composed of water:methanol (80:20 v/v), at a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 289 nm. The linearity correlation coefficient was 0.9999. The mean hydroquinone content of gels and creams were 102.2 and 98.4% with mean relative standard deviations of 0.882 and 1.252% respectively. The precisions and hydroquinone content data were statistically analyzed (F and t tests), no significant difference was observed between results obtained by proposed methods at 95% confidence level.

As hiperpigmentações da pele são devidas à abundante produção de melanina pelos melanócitos, sejam estes em número normal ou aumentado. Várias formulações cosméticas e medicamentosas têm sido produzidas nas formas de géis e cremes contendo hidroquinona como único princípio ativo, sendo de forma industrializada e manipulada. Conseqüentemente é necessário o desenvolvimento e validação de metodologias analíticas para determinações quantitativas da hidroquinona nos produtos comercializados a fim de ter métodos confiáveis, de baixo custo e de pouco impacto ambiental. Os objetivos da pesquisa foram caracterizar a hidroquinona matéria-prima para garantir seu uso nas formulações farmacêuticas bem como determiná-la quantitativamente em formulações cosméticas e medicamentos nas formas de géis e cremes. As metodologias propostas foram espectrofotometria derivada no UV e cromatografia líquida de alta eficiência. O método espectrofotométrico no UV derivado foi validado utilizando H2SO4 0,1 N como solvente, as leituras foram feitas a 302,0 nm na derivada de primeira ordem. O coeficiente de correlação foi de 0,9999; a média dos teores de hidroquinona nos géis e cremes foi de 101,7 e 97,6% respectivamente e as médias dos desvios padrões relativos de 0,839% para géis e 0,878% para cremes. A determinação pelo método cromatográfico, foi realizada utilizando uma coluna LiChrospher® 100 RP-18 (5 µm), fase móvel constituída por metanolágua (80:20 v/v), vazão de 1,0 mL/min e detecção UV a 289 nm. O coeficiente de correlação foi de 0,9999; a média dos teores de hidroquinona nos géis e cremes foi de 102,2 e 98,4% respectivamente e as médias dos desvios padrões relativos de 0,882% para géis e 1,252% para cremes. Os resultados das precisões e teores de hidroquinona foram tratados estatisticamente (testes de F e t respectivamente), e não se observou diferença significativa nos dois métodos propostos para um nível de confiança de 95%. / The excessive pigmentation of skin is due to abundant production of melanin by melanocytes located in the skin epidermal layers. Several cosmetic and pharmaceutical formulations had been industrialized as well as compounded in pharmacy such as gel and creams containing hydroquinone as a unique active ingredient. The quantitative determination of hydroquinones present in these formulations necessitates validated analytical methods that are reliable, economical and ecologically favorable. The objectives of this research were characterization of hydroquinone raw material to assure its use in pharmaceutical and cosmetic preparations as well as its quantitative determination in gel and cream formulations. A first derivative UV spectrophotometric and a high-performance liquid-chromatographic method are proposed. The UV first derivative spectrophotometric method was validated using H2SO4 0.1 N as solvent and absorptions were taken at 302.0 nm. The linearity data showed a correlation coefficient of 0.9999. The mean hydroquinone content of gels and creams were 101.7 and 97.6% with mean relative standard deviations of 0.839 and 0.878% respectively. The chromatographic method was validated using LiChrospher®, 100 RP-18 (5 µm) column, mobile phase composed of water:methanol (80:20 v/v), at a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 289 nm. The linearity correlation coefficient was 0.9999. The mean hydroquinone content of gels and creams were 102.2 and 98.4% with mean relative standard deviations of 0.882 and 1.252% respectively. The precisions and hydroquinone content data were statistically analyzed (F and t tests), no significant difference was observed between results obtained by proposed methods at 95% confidence level.

O princípio do ensaio turbidimétrico é simples: a solução-teste é adicionada à suspensão do microrganismo-teste em meio de cultura, a mistura é incubada em condições adequadas e o crescimento microbiano é medido através da leitura fotométrica. O emprego de método de microplacas com leitura cínética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizados. O objetivo deste trabalho é determinar as condições experimentais ideais para o desenvolvimento de metodologia para a dosagem microbiológica de apramicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, e validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, limite de detecção e quantificação, exatidão e precisão. As condições estabelecidas abrangem curva-padrão de apramicina com concentrações entre 5 e 35 µg/ml, e emprego de meio de cultura caldo de triptona-soja inoculado com Escherichia coli (ATCC 8739) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios após 2 horas de incubação. O método desenvolvido apresentou especificidade e seletividade adequadas, linearidade na faixa de 5 a 35 µg/ml, limite de detecção e quantificação de 0,1 e 0,4 µg/ml, respectivamente, exatidão (recuperação = 98,5%) e precisão (DPR = 6,0%) satisfatórias. O ensaio em microplaca agrega características dos ensaios microbiológicos (avaliação da atividade do antibiótico frente a microrganismo-teste sensível) e físico-químicos (facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultdos). / The turbidimetric assay principle is simple: the test-solution is added to a suspension of test-microorganism in culture media, the mixture is incubated in appropriate conditions and the microbial growth is measured by photometric reading. Microplate with kinetic reading mode employed in antibiotic assay is considerable interesting, once it allows reduction of material and analysis time and it permits that a great numbers of samples could be analyzed simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to determinate best experimental conditions to development of methodology for microbiological assay of apramycin employing microplate and kinetic reading mode, and to validate the developed method, through evaluation of parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, limit of detection and quantification, accuracy and precision. Established conditions considered standard-curve of apramycin in concentrations from 5 to 35 µg/ml, and tryptic soy broth inoculated with 5% of Escherichia coli (ATCC 8739) suspension. Satisfactory results were obtained with 2 hours incubation. The developed method showed appropriate specificity and selectivity, linearity in the range from 5 to 35 µg/ml, limit of detection and quantification of 0,1 and 0,4 µg/ml, respectively, satisfactory accuracy (recuperation = 98,5%) and precision (RSD = 6,0%). Microplate assay considered characteristics of microbiological assay (evaluation of antibiotic activity against sensible test-microorganism) and physical-chemistry (operational facility and quicker results).

O princípio do ensaio turbidimétrico é simples: a solução-teste é adicionada à suspensão do microrganismo-teste em meio de cultura, a mistura é incubada em condições adequadas e o crescimento microbiano é medido através da leitura fotométrica. O emprego de método de microplacas com leitura cínética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizados. O objetivo deste trabalho é determinar as condições experimentais ideais para o desenvolvimento de metodologia para a dosagem microbiológica de apramicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, e validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, limite de detecção e quantificação, exatidão e precisão. As condições estabelecidas abrangem curva-padrão de apramicina com concentrações entre 5 e 35 µg/ml, e emprego de meio de cultura caldo de triptona-soja inoculado com Escherichia coli (ATCC 8739) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios após 2 horas de incubação. O método desenvolvido apresentou especificidade e seletividade adequadas, linearidade na faixa de 5 a 35 µg/ml, limite de detecção e quantificação de 0,1 e 0,4 µg/ml, respectivamente, exatidão (recuperação = 98,5%) e precisão (DPR = 6,0%) satisfatórias. O ensaio em microplaca agrega características dos ensaios microbiológicos (avaliação da atividade do antibiótico frente a microrganismo-teste sensível) e físico-químicos (facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultdos). / The turbidimetric assay principle is simple: the test-solution is added to a suspension of test-microorganism in culture media, the mixture is incubated in appropriate conditions and the microbial growth is measured by photometric reading. Microplate with kinetic reading mode employed in antibiotic assay is considerable interesting, once it allows reduction of material and analysis time and it permits that a great numbers of samples could be analyzed simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to determinate best experimental conditions to development of methodology for microbiological assay of apramycin employing microplate and kinetic reading mode, and to validate the developed method, through evaluation of parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, limit of detection and quantification, accuracy and precision. Established conditions considered standard-curve of apramycin in concentrations from 5 to 35 µg/ml, and tryptic soy broth inoculated with 5% of Escherichia coli (ATCC 8739) suspension. Satisfactory results were obtained with 2 hours incubation. The developed method showed appropriate specificity and selectivity, linearity in the range from 5 to 35 µg/ml, limit of detection and quantification of 0,1 and 0,4 µg/ml, respectively, satisfactory accuracy (recuperation = 98,5%) and precision (RSD = 6,0%). Microplate assay considered characteristics of microbiological assay (evaluation of antibiotic activity against sensible test-microorganism) and physical-chemistry (operational facility and quicker results).

Os efeitos protetores da imunidade humoral são medidas por uma família de glicoproteínas chamadas anticorpos ou imunoglobulinas. As preparações de imunoglobulina G (IgG) utilizadas em nosso país são importantes. No Brasil, a primeira preparação de IgG foi obtida na Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo em 1993. O presente estudo avaliou preparações de IgG obtidas de misturas de plasma humano de variadas procedências, inclusive a preparação obtida no Brasil. Foram avaliados os seguintes parâmetros: concentração protéica, distribuição das subclasses da IgG, atividade de anticorpos específicos e segurança quanto a agentes patogênicos transmissíveis pelo sangue. Em algumas preparações, a concentração protéica de IgG e a distribuição das suas subclasses estavam fora das especificações. As preparações apresentaram atividade de anticorpos específicos contra os vírus das hepatites A e B, do herpes simples, da rubéola, citomegalovírus; contra a bactéria Streptococcus pyogenes β-hemolítico do grupo A e contra o parasita Toxoplasma gondii. A qualidade de matéria-prima utilizada em algumas das preparações de IgG não foi adequada em função de reações positivas para anticorpos contra alguns agentes infecciosos, tais como HTLV I/II, HAV, HBV, HCV e Treponema pallidum. Esse estudo também mostrou a necessidade de se implantar urgente um programa abrangente para avalição das preparações de IgG a serem consumidas pela população brasileira. / A family of glicoproteins, which are called antibodies or immunoglobulins (IgG), mediates the protective effects of humoral immunity. In Brazil, the IgG for intravenous use are imported from other countries. The first Brazilian immunoglobulin G for therapheutic use was obtained from human plasma at the Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo. The present study was carried out to evaluate different preparations of IgG, human plasmad-derived, include the preparation from Brazil. The protein concentration, IgG subclass distribution, specific antibody activities and safety regarding the main blood transmitted infectious diseases were analyzed. In some preparations, IgG protein concentration and subclass distribution were different from their specifications. Some preparations showed specific antibody activity against the following antigens: A and B hepatitis virus, rubella, herpes simplex virus, citomegalovirus, measles virus, Streptococcus pyogenes β-hemolytic group A and Toxoplasma gondii. The presence of antibodies against antigens such as HTLV I/II, HAV, HBV, HCV and Treponema pallidum has compromissed the quality guaranty of the material-source (plasma) used in some preparations. This study has also showed that a complete and effective program for the quality evaluation of IgG preparations used in Brazil is needed and should be urgently established

Os efeitos protetores da imunidade humoral são medidas por uma família de glicoproteínas chamadas anticorpos ou imunoglobulinas. As preparações de imunoglobulina G (IgG) utilizadas em nosso país são importantes. No Brasil, a primeira preparação de IgG foi obtida na Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo em 1993. O presente estudo avaliou preparações de IgG obtidas de misturas de plasma humano de variadas procedências, inclusive a preparação obtida no Brasil. Foram avaliados os seguintes parâmetros: concentração protéica, distribuição das subclasses da IgG, atividade de anticorpos específicos e segurança quanto a agentes patogênicos transmissíveis pelo sangue. Em algumas preparações, a concentração protéica de IgG e a distribuição das suas subclasses estavam fora das especificações. As preparações apresentaram atividade de anticorpos específicos contra os vírus das hepatites A e B, do herpes simples, da rubéola, citomegalovírus; contra a bactéria Streptococcus pyogenes β-hemolítico do grupo A e contra o parasita Toxoplasma gondii. A qualidade de matéria-prima utilizada em algumas das preparações de IgG não foi adequada em função de reações positivas para anticorpos contra alguns agentes infecciosos, tais como HTLV I/II, HAV, HBV, HCV e Treponema pallidum. Esse estudo também mostrou a necessidade de se implantar urgente um programa abrangente para avalição das preparações de IgG a serem consumidas pela população brasileira. / A family of glicoproteins, which are called antibodies or immunoglobulins (IgG), mediates the protective effects of humoral immunity. In Brazil, the IgG for intravenous use are imported from other countries. The first Brazilian immunoglobulin G for therapheutic use was obtained from human plasma at the Fundação Pró-Sangue Hemocentro de São Paulo. The present study was carried out to evaluate different preparations of IgG, human plasmad-derived, include the preparation from Brazil. The protein concentration, IgG subclass distribution, specific antibody activities and safety regarding the main blood transmitted infectious diseases were analyzed. In some preparations, IgG protein concentration and subclass distribution were different from their specifications. Some preparations showed specific antibody activity against the following antigens: A and B hepatitis virus, rubella, herpes simplex virus, citomegalovirus, measles virus, Streptococcus pyogenes β-hemolytic group A and Toxoplasma gondii. The presence of antibodies against antigens such as HTLV I/II, HAV, HBV, HCV and Treponema pallidum has compromissed the quality guaranty of the material-source (plasma) used in some preparations. This study has also showed that a complete and effective program for the quality evaluation of IgG preparations used in Brazil is needed and should be urgently established