Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The agribusiness has been incorporating new technologies in the production of meat, including good management of farms, health, balanced diet, breeding and integrated production. Allied to this, there is a growing concern with issues related to residues and contaminants in animals intended for food production. In the study, were compared four extraction methods based on the method QuEChERS for the determination of 79 pesticides and 15 veterinary drugs analyzed by Liquid Chromatography coupled to tandem Mass Spectrometry in samples of meat and pork liver, chicken and fish. The parameters evaluated were: linear range (6 concentration levels and 6 injections each), limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), decision limit (CCα), capability of detection (CCβ) and matrix effect, as well as precision and accuracy, in terms of recovery. For this, we performed the fortification of matrices previously homogenized with solutions containing compounds at 3 levels of fortification (20, 50 and 100 μg kg-1), 6 replicates for each level, were performade. The modified QuEChERS extraction method consists in the extraction of 10 g of the matrix with 10 mL of acetonitrile containing 1% (v/v) of acetic acid and shaking vigorously by hand for 1 min. After, 4 g of anhydrous magnesium sulfate and 1.7 g anhydrous sodium acetate were added and the agitation repeated. After the extract was centrifugated for 8 min (3500 rpm) and 2 mL of the extract was transferred to another tube containing 300 mg of anhydrous magnesium sulfate and 50 mg of sorbent PSA, repeating the agitation and centrifugation. The extract was diluted (1:1 v/v) in the mobile phase and then analyzed by LC-MS/MS. Analytical curves prepared in solvent and in extracts of matrices evaluated showed adequate linearity between 5 and 200 μg kg-1, with coefficients of determination greater than 0.99. The method showed satisfactory recovery values between 70 and 120% (RSD ≤ 20%) to about 95% of compounds in all matrices, except for liver showed satisfactory values to about 80% of the compound at levels of 20, 50 and 100 μg kg-1. The LOQ of method was 10 μg kg-1. CCα values were between 1.1 and 102.9 μg kg-1 and CCβ values were in the range 1.9 to 105.9 μg kg-1. The results of this study showed that the modified method QuEChERS is fast, simple and efficient and can be applied to the determination of pesticides and veterinary drugs in samples of meat and liver pork, chicken and fish fillet for routine analysis. Furthermore, the use of LC-MS/MS was efficent, allowing the determination and confirmation of a large number of compounds simultaneously at residues livels. / O agronegócio nacional vem incorporando novas tecnologias na produção de carnes, incluindo bom manejo das granjas, sanidade, alimentação balanceada, melhoramento genético e produção integrada. Aliado a este fato, há uma preocupação crescente com questões relacionadas à presença de resíduos e contaminantes em animais destinados a produção de alimentos. Neste estudo, comparou-se quatro métodos de extração baseados no método QuEChERS para a determinação de 79 agrotóxicos e 15 medicamentos veterinários por Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de Massas em Série em amostras de carne e fígado suíno, carne de frango e filé de peixe. Os parâmetros avaliados foram: faixa de linear das curvas analíticas (6 níveis de concentração e 6 injeções cada), limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), limite de decisão (CCα), capacidade de detecção (CCβ) e efeito matriz, bem como precisão e exatidão, em termos de recuperação. Para isso, efetuou-se a fortificação das matrizes previamente homogeneizadas, com soluções contendo os compostos em 3 níveis de fortificação (20, 50 e 100 μg kg-1), 6 réplicas para cada nível, e aplicou-se o método proposto. A extração pelo método QuEChERS modificado consistiu na extração de 10,0 g da matriz com 10 mL de acetonitrila contendo 1% (v/v) de ácido acético sob agitação manual e vigorosa por 1 min. Acrescentou-se 4,0 g de sulfato de magnésio anidro e 1,7 g de acetato de sódio anidro, repetindo-se a agitação. O extrato foi centrifugado por 8 min (3500 rpm) e após 2 mL de extrato foram transferidos para outro tubo contendo 300 mg de sulfato de magnésio anidro e 50 mg de sorvente PSA, repetindo-se a agitação e a centrifugação. O extrato foi diluído (1:1) na fase móvel e em seguida analisado por LC-MS/MS. As curvas analíticas, preparadas no solvente e nos extratos das matrizes avaliadas, apresentaram linearidade adequada entre 5 e 200 μg L-1, com valores de coeficiente de determinação maiores que 0,99. O método apresentou valores de recuperação satisfatórios entre 70 e 120% e (RSD ≤ 20%) para cerca de 95% dos compostos em todas as matrizes, exceto para fígado que apresentou valores satisfatórios para cerca de 80% dos compostos nos níveis de 20, 50 e 100 μg kg-1. O valor de LOQ do método foi de 10 μg kg-1. Os valores de CCα ficaram entre 1,1 e 102,9 μg kg-1 e os valores de CCβ ficaram na faixa de 1,9 a 105,9 μg kg-1. Os resultados desse estudo mostraram que o método QuEChERS modificado é rápido, simples e eficiente, podendo ser aplicado para a determinação de agrotóxicos e medicamentos veterinários em amostras de carne e fígado suíno, carne de frango e filé de peixe em análise de rotina. Além disso, o emprego da LC-MS/MS mostrou-se eficiente, permitindo a determinação e confirmação de um grande número de compostos simultaneamente em níveis de resíduos.

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Coorientador: Nájla Mohamad Kassab / Banca: Paulo César Pires Rosa / Banca: Cristiane Masetto Gaitani / Banca: Paulo Clairmont Feitosa de Lima Gomes / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: O mercado farmacêutico veterinário tem crescido acentuadamente nos últimos anos, sendo liderado, principalmente, pelo segmento destinado aos animais de produção. As associações de oxitetraciclina com diclofenaco ou com piroxicam, na forma farmacêutica de soluções injetáveis, são amplamente empregadas na medicina veterinária. Apesar da importância clínica dessas associações, não foi encontrado na literatura científica nenhuma metodologia analítica capaz de quantificar simultaneamente esses fármacos nos medicamentos veterinários. Portanto, este trabalho objetivou desenvolver e validar métodos analíticos para determinação simultânea de oxitetraciclina associada ao diclofenaco de sódio ou ao piroxicam em soluções injetáveis veterinárias, empregando a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e Espectrofotometria no ultravioleta (UV). As matérias-primas desses fármacos foram caracterizadas por Cromatografia em Camada Delgada (CCD), Espectrofotometria na região do Ultravioleta (UV) e do Infravermelho (IV), Termogravimetria (TG), Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC), Difração de Raios X (DRX), Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas (CLAE-EM). O estudo de degradação forçada foi conduzido em condições hidrolíticas (alcalina, ácida, neutra e oxidativa) e fotolíticas, a estabilidade acelerada e de longa duração foram analisadas durante 6 meses (40 ± 2ºC) e 24 meses (30 ± 2ºC), respectivamente.... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The veterinary pharmaceutical market has grown markedly in the last years, being led, mainly, by the segment destined to the production animals. Fixed-dose combinations of oxytetracycline with diclofenac or piroxicam, available as injectable solutions, are widely used in veterinary medicine. Despite the clinical importance of these combinations, no analytical methodology could be found in the scientific literature capable of quantifying these drugs simultaneously in veterinary pharmaceuticals. Therefore, this work aimed to develop and validate analytical methods for the simultaneous determination of the oxytetracycline, diclofenac sodium and piroxicam in injectable veterinary solutions by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and UV spectrophotometry. The raw materials of these drugs were characterized by Thin Layer Chromatography (TLC), Ultraviolet (UV) and Infrared (IR) Spectrophotometry, Thermogravimetry (TG), Differential Scanning Calorimetry (DSC), X-ray Diffraction (XRD), Scanning Electron Microscopy (SEM) and High Performance Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry (HPLC-MS). The forced degradation study was conducted under hydrolytic (alkaline, acid, neutral and oxidative) and photolytic conditions. The accelerated and the long term stability studies were carried out during 6 months (40 ± 2ºC) and 24 months (30 ± 2ºC), respectively.... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Um total de 168 machos Bos indicus foram abatidos depois de 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 e 154 dias após a aplicação de eprinomectina e ivermectina (convencional e longa ação), e 18 diferentes tecidos comestíveis foram avaliados quanto à concentração de resíduos dessas moléculas para verificar se o período de carência estabelecido garante o esgotamento em todos eles, em níveis abaixo dos limites máximos estabelecidos por agências reguladoras internacionais, com o objetivo de abordar questões relacionadas à barreiras técnico-comerciais entre países. Além disso, visou analisar se a concentração desses resíduos é afetada pelo processamento térmico, para avaliar a coerência de se considerar para produtos enlatados, os mesmos limites determinados para produtos crus. As análises de concentração de resíduos foram feitas por HPLC (sistema LC-MS/MS). Os dados foram transformados para escala \"logaritmo natural\" e foi realizada análise de variância, teste de comparação múltipla, análises de regressão e de correlação. Os resultados demonstraram que os níveis de eprinomectina encontrados foram abaixo de todos os limites máximos de resíduos (LMR), ao longo de todos os períodos e tecidos avaliados. Com relação à ivermectina, padrões diferenciados de distribuição foram observados, porém ao final do período de carência, dos 18 tecidos avaliados, 17 apresentaram concentrações dentro dos LMR, com exceção do sítio de aplicação, em que se observou alto nível de dispersão e valores acima de alguns LMR, mesmo após cumprido o período de carência indicado na bula. Foram observadas correlações significativas (P<0,01) entre concentrações residuais em fígado e em tecidos musculares, sendo que as equações obtidas podem ser úteis em programas de vigilância. O processamento térmico afetou os resultados de concentração de resíduos de ivermectina em alguns músculos testados, que apresentaram concentração significativamente mais elevada (P<0,05) após a esterilização. Conclui-se que a eprinomectina é mais recomendada que a ivermectina, no que tange ao propósito de se evitar violações de LMR; que foram distintos os padrões de distribuição de resíduos em cada tecido avaliado, mas que se respeitado o período de carência, praticamente todos os tecidos estarão abaixo dos LMR estabelecidos internacionalmente, exceto pelo sítio de aplicação; portanto, que o tempo de depleção de resíduos do sítio de aplicação (até abaixo dos LMR) deveria ser considerado para a determinação do período de carência dos medicamentos; e que é fundamental haver uma harmonização dos LMR em esfera global. Além disso, observou-se que o processamento térmico a que os enlatados são submetidos provoca níveis discrepantes (mais elevados) de resíduos em relação aos produtos crus e isso deve ser levado em consideração nas análises de vigilância, pois pode gerar incertezas quanto à possibilidade de violação em mercados importadores. / A total of 168 Bos indicus males were slaughtered after 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 and 154 days post-application of eprinomectin and ivermectin (conventional and long-acting), and 18 different edible tissues were evaluated for the residue concentration of these molecules to verify if the established withdrawal period guarantees depletion in all of them, at levels below the maximum limits established by regulatory agencies around the world, in order to address issues related to technical trade barriers between countries. In addition, it aimed to analyze if the concentration of these residues is affected by thermal processing, to evaluate the consistency of considering for canned goods, the same limits determined for raw products. Residue concentration analyzes were performed using HPLC (LC-MS / MS system). Data were converted into \"natural logarithm\" scale and analysis of variance, multiple comparison test, regression and correlation analysis were performed. Results showed that eprinomectin levels were found to be below all maximum residue limits (MRL) throughout all periods and tissues evaluated. Regarding ivermectin, differentiated distribution patterns were observed, but at the end of the withdraw period, 17 of the 18 tissues evaluated had concentrations within the MRLs, except for the injection site, where a high level of dispersion was observed and values above some of MRLs recommended by the main international regulations, even after having been completed the withdraw period indicated in the instructions. Significant correlations (P <0.01) were observed between residual concentrations in liver and muscle tissues, and the equations obtained may be useful in surveillance programs. The thermal processing affected ivermectin concentration results in some tested muscle types, which had a significantly higher residue concentration (P <0.05) after sterilization. It was concluded that eprinomectin is more recommended than ivermectin for the purpose of avoiding MRL violations; that the residue distribution patterns in each tissue were different, but if the withdrawal period is met, almost all tissues will be below internationally established MRLs except for the application site; therefore, that the depletion time of injection site residues (to below the MRL) should be considered for the determination of the drug withdrawal period; and that harmonization of MRLs is essential in the global sphere. In addition, it has been observed that the thermal processing to which the canned products are subjected causes discrepant (higher) levels of residues in relation to the raw products and this must be taken into account in surveillance analyzes, since it may generate uncertainties as to the possibility of violation in importers markets.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Typically, soil is the final destination of pesticides applied in agriculture and of veterinary drugs employed in animal production. The global concern about the possible consequences of the increased use of these compounds is reflected in increasingly stringent regulations on the levels of residues in agricultural products, animal products and in the environment. This results in intensifying the demand for environmental certification, reduction of Maximum Residue Levels in food and the introduction of procedures for traceability in production processes. In this study, we compared different extraction methods: mechanical agitation, ultrasound and QuEChERS for the determination of 76 pesticides and 9 veterinary drugs in soil using Ultra High Performance Liquid Chromatography coupled to tandem Mass Spectrometry (UHPLC-MS/MS). The extraction method that showed the best results consisted of weighing 10 g of soil followed by the addition of 10 mL of water and kept at rest for 10 min. Then added 10 mL of acetonitrile containing 1% (v/v) acetic acid and proceeded with mechanical shaking for 15 min. Then, it was added 4 g of anhydrous magnesium sulfate and 1.7 g of anhydrous sodium acetate and shaked manually and vigorously for 1 min. Subsequently, the tube was centrifuged for 8 min (3400 rpm) and the extract was filtered and diluted (1:4, v/v) in water before analysis by UHPLC-MS/MS. The method was validated by evaluating several parameters, such as linearity of analytical curves, limits of detection and quantification (LOD and LOQ), matrix effect, as well as accuracy an precision in terms of percentage of recovery and RSD. The analytical curves prepared in solvent and in the blank matrix extract showed linearity for most compounds, with coefficients of determination greater than 0.99, and the standard curves prepared in "blank" matrix extract were used to evaluate the matrix effect. To verify the accuracy and precision of the method, fortification in four concentration levels (10, 25, 50 and 100 μg kg-1) we performed, and extracted in replicate (n = 6), resulting in recovery values between 70 to 120%, with RSD lower than 20% for most of the compounds. Values of method LOQ and LOD were from 3.0 to 7.5 μg kg-1 and from 10 to 25 μg kg-1, respectively. After validation, the method was applied to the determination of pesticides and veterinary drugs in real samples, it showed to be very efficient to be applied in routine analysis. / Normalmente, o solo é o destino final dos agrotóxicos utilizados na agricultura e dos medicamentos veterinários utilizados na criação de animais. A preocupação mundial com as possíveis consequências do aumento do uso destes compostos se reflete em regulamentações cada vez mais exigentes sobre os níveis de resíduos nos produtos agrícolas, produtos de origem animal e no ambiente. Isso resulta na intensificação da demanda por certificação ambiental, redução dos limites máximos de resíduos em alimentos e a introdução de procedimentos que permitam a rastreabilidade nos processos produtivos. Neste estudo, comparou-se diferentes métodos de extração, sendo eles, agitação mecânica, ultrassom e QuEChERS para a determinação de 76 agrotóxicos e 9 medicamentos veterinários em solo utilizando Cromatografia Líquida de Ultra Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas em Série (UHPLC-MS/MS). O método de extração que apresentou os melhores resultados consistiu na pesagem de 10 g de solo, seguido da adição de 10 mL de água e mantido em repouso por 10 min. Em seguida adicionou-se 10 mL de acetonitrila contendo 1% (v/v) de ácido acético e procedeu-se a agitação mecânica por 15 min. Logo após, acrescentou-se 4 g de sulfato de magnésio anidro e 1,7 g de acetato de sódio anidro e agitou-se manual e vigorosamente por 1 min. Posteriormente, o tubo foi centrifugado por 8 min (3400 rpm) e o extrato foi filtrado e diluído (1:4, v/v) em água antes da análise por UHPLC-MS/MS. O método foi validado avaliando-se vários parâmetros, como linearidade das curvas analíticas, limites de detecção e quantificação (LOD e LOQ), efeito matriz, assim como exatidão e precisão, em termos de percentual de recuperação e RSD. As curvas analíticas preparadas no solvente e no extrato branco da matriz apresentaram linearidade adequada para a maioria dos compostos, com valores de coeficiente de determinação maiores que 0,99, sendo que as curvas analíticas preparadas no extrato branco da matriz foram utilizadas para compensar o efeito matriz. Para verificar a exatidão e precisão do método, efetuou-se a fortificação em quatro níveis de concentração (10, 25, 50 e 100 μg kg-1), e extração em replicata (n = 6), obtendo-se valores de recuperação entre 70 e 120%, com RSD menores que 20% para a grande maioria dos compostos. Os valores de LOD e LOQ do método variaram entre 3,0 e 7,5 μg kg-1 e 10 e 25 μg kg-1, respectivamente. Após a validação, o método foi aplicado para a determinação de agrotóxicos e medicamentos veterinários em amostras reais, mostrando-se bastante eficiente para ser aplicado em análises de rotina.

Um total de 168 machos Bos indicus foram abatidos depois de 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 e 154 dias após a aplicação de eprinomectina e ivermectina (convencional e longa ação), e 18 diferentes tecidos comestíveis foram avaliados quanto à concentração de resíduos dessas moléculas para verificar se o período de carência estabelecido garante o esgotamento em todos eles, em níveis abaixo dos limites máximos estabelecidos por agências reguladoras internacionais, com o objetivo de abordar questões relacionadas à barreiras técnico-comerciais entre países. Além disso, visou analisar se a concentração desses resíduos é afetada pelo processamento térmico, para avaliar a coerência de se considerar para produtos enlatados, os mesmos limites determinados para produtos crus. As análises de concentração de resíduos foram feitas por HPLC (sistema LC-MS/MS). Os dados foram transformados para escala \"logaritmo natural\" e foi realizada análise de variância, teste de comparação múltipla, análises de regressão e de correlação. Os resultados demonstraram que os níveis de eprinomectina encontrados foram abaixo de todos os limites máximos de resíduos (LMR), ao longo de todos os períodos e tecidos avaliados. Com relação à ivermectina, padrões diferenciados de distribuição foram observados, porém ao final do período de carência, dos 18 tecidos avaliados, 17 apresentaram concentrações dentro dos LMR, com exceção do sítio de aplicação, em que se observou alto nível de dispersão e valores acima de alguns LMR, mesmo após cumprido o período de carência indicado na bula. Foram observadas correlações significativas (P<0,01) entre concentrações residuais em fígado e em tecidos musculares, sendo que as equações obtidas podem ser úteis em programas de vigilância. O processamento térmico afetou os resultados de concentração de resíduos de ivermectina em alguns músculos testados, que apresentaram concentração significativamente mais elevada (P<0,05) após a esterilização. Conclui-se que a eprinomectina é mais recomendada que a ivermectina, no que tange ao propósito de se evitar violações de LMR; que foram distintos os padrões de distribuição de resíduos em cada tecido avaliado, mas que se respeitado o período de carência, praticamente todos os tecidos estarão abaixo dos LMR estabelecidos internacionalmente, exceto pelo sítio de aplicação; portanto, que o tempo de depleção de resíduos do sítio de aplicação (até abaixo dos LMR) deveria ser considerado para a determinação do período de carência dos medicamentos; e que é fundamental haver uma harmonização dos LMR em esfera global. Além disso, observou-se que o processamento térmico a que os enlatados são submetidos provoca níveis discrepantes (mais elevados) de resíduos em relação aos produtos crus e isso deve ser levado em consideração nas análises de vigilância, pois pode gerar incertezas quanto à possibilidade de violação em mercados importadores. / A total of 168 Bos indicus males were slaughtered after 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 and 154 days post-application of eprinomectin and ivermectin (conventional and long-acting), and 18 different edible tissues were evaluated for the residue concentration of these molecules to verify if the established withdrawal period guarantees depletion in all of them, at levels below the maximum limits established by regulatory agencies around the world, in order to address issues related to technical trade barriers between countries. In addition, it aimed to analyze if the concentration of these residues is affected by thermal processing, to evaluate the consistency of considering for canned goods, the same limits determined for raw products. Residue concentration analyzes were performed using HPLC (LC-MS / MS system). Data were converted into \"natural logarithm\" scale and analysis of variance, multiple comparison test, regression and correlation analysis were performed. Results showed that eprinomectin levels were found to be below all maximum residue limits (MRL) throughout all periods and tissues evaluated. Regarding ivermectin, differentiated distribution patterns were observed, but at the end of the withdraw period, 17 of the 18 tissues evaluated had concentrations within the MRLs, except for the injection site, where a high level of dispersion was observed and values above some of MRLs recommended by the main international regulations, even after having been completed the withdraw period indicated in the instructions. Significant correlations (P <0.01) were observed between residual concentrations in liver and muscle tissues, and the equations obtained may be useful in surveillance programs. The thermal processing affected ivermectin concentration results in some tested muscle types, which had a significantly higher residue concentration (P <0.05) after sterilization. It was concluded that eprinomectin is more recommended than ivermectin for the purpose of avoiding MRL violations; that the residue distribution patterns in each tissue were different, but if the withdrawal period is met, almost all tissues will be below internationally established MRLs except for the application site; therefore, that the depletion time of injection site residues (to below the MRL) should be considered for the determination of the drug withdrawal period; and that harmonization of MRLs is essential in the global sphere. In addition, it has been observed that the thermal processing to which the canned products are subjected causes discrepant (higher) levels of residues in relation to the raw products and this must be taken into account in surveillance analyzes, since it may generate uncertainties as to the possibility of violation in importers markets.

O presente trabalho visa desenvolver métodos analíticos que permitam determinar as concentrações de oxitetraciclina por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, no leite, plasma e líquido sinovial, além de analisar as concentrações correspondentes em gado leiteiro em lactação portadoras de doença do casco submetidos aos tratamentos intramuscular e tópico. Adicionalmente, são tecidos comentários sobre a eficácia clínica destes tratamentos. Desta forma, objetivando determinar a depuração de oxitetraciclina no organismo dos animais tratados, a concentração no sítio de ação e a quantidade residual em leite, as amostras biológicas foram colhidas e quantificadas em diferentes tempos pré e pós-administração do fármaco. Os métodos analíticos validados apresentaram linearidade, limite de detecção, quantificação, exatidão, precisão e recuperação adequadas à quantificação do antibiótico nas matrizes estudadas. Através da administração do medicamento por via intramuscular, observou-se resíduos acima dos limites máximos (100ppb) estabelecidos pela legislação brasileira para oxitetraciclina no leite até 120 horas após a última administração do medicamento pelo esquema seriado de doses. Já pela via tópica, não foram observados valores residuais na matriz biológica. Do ponto de vista clínico, o tratamento tópico foi eficiente nos animais tratados, levando a cura das lesões. Com relação ao tratamento intramuscular, não foram observados resultados satisfatórios, pois a maioria das lesões não regrediu após as administrações. / The purpose of the present work is to develop methods which allow the determination of oxytetracycline by High Pressure Liquid Chromatography in milk, serum and synovial fluid, as well as analyze the corresponding concentration in milk cattle with foot lameness subjected to intramuscular and topical administration of the antibiotic. It is also commented the clinical efficacy of these two treatments. Thus, to determine the clearance of oxytetracycline in the body of the treated animals, the concentration on the site of action, and the antibiotic residue in milk, biological samples have been collected and analyzed for the oxytetracycline content at different times before and after the drug administrations. The validated analytical methods showed suitable linearity, detection and quantification limits, accuracy, precision and recovery, allowing proper quantification of the antibiotic in the studied biological matrices. When administered intramuscular1y, oxytetracycline residues were observed in milk above the maximum limits (100ppb) established by the brazilian legislation up to 120 hour after the last administration of the medicine using multiple doses treatment, whereas on topical use, residues were not observed in this matrix. When analyzing the clinical aspects, topical treatment was very efficient, leading to the healing of the treated animals. In relation to intramuscular treatment, non satisfactory results were observed, as most of lesion did not disappear after the antibiotic administration.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thaysa dos Santos Silva.pdf: 1435457 bytes, checksum: 4745e5a89c1abe5f3e29a10d0aa47fe5 (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / Milk is considered one of the nutritionally complete foods, consumers and inspection organizations require that this product has innocuousness and good quality. The veterinary medicinal products, in particular antimicrobials have been widely used in stockfarming to treat and preventi diseases (mastitis). However, when they are used in an inappropriate manner, the presence of residues of antimicrobials such as sanitizers, antibiotics or chemotherapic drugs, endanger animals´ and humans´ health, predisposing the population to allergic reactions, carcinogenic activity, microbial resistance, in addition to causing economic losses to industries, producers and governments. Furthermore, the analysis of titratable acidity in milk is one of the parameters used by dairy industry for the indirect determination of its quality, being compulsory in the milk reception platforms the industries. In this study 992 samples (441 of raw, 327 of pasteurized and 224 of Ultra High Temperature (UHT) milk) were collected from April to November 2010 in the properties and places of commercialization, and analyzed in the State of Goias. The commercial kit Delvotest® SP-NP was used to carry out the antimicrobials research, a methodology according the federal law for the titratable acidity, and the software SPSS version 15.0 for data analysis. Out of the analyzed samples 8.47% (5.34% of raw milk, 1.92% of pasteurized milk and 1.21% UHT milk) were positive for the presence of antimicrobials residues. As for titratable acidity, 25.30% of the samples (12.10 % raw milk, 9.57% of pasteurized milk and 3.63% UHT milk) were not within standard values. Among these samples, 10.48% were below the recommendation and 14.82% were above. The analyzes results confirm that the quality of raw, pasteurized and UHT milk produced and consumed in Goias is not within the standard values recommended by federal law, as regards the presence of antimicrobial residue and titratable acidity, which represents risk to public health, besides causing economic losses in milk processing. / O leite é considerado um dos alimentos mais completos nutricionalmente, assim os consumidores e órgãos fiscalizadores, exigem que este produto seja inócuo e de qualidade. Os medicamentos veterinários, em particular os antimicrobianos, têm sido amplamente utilizados na pecuária para tratamento e prevenção de doenças (mastites), no entanto, quando utilizados em desrespeito às boas práticas, a presença de resíduos de antimicrobianos sejam eles sanitizantes, antibióticos ou quimioterápicos colocam em risco tanto a saúde animal como a humana, predispondo a população a eventuais reações alérgicas, ação carcinogênica e resistência microbiana, além de causar prejuízos econômicos para as indústrias, produtores e governos. Além disso, a análise de acidez titulável no leite também é um dos parâmetros utilizados pelos laticínios para a determinação indireta de sua qualidade, sendo obrigatória nas plataformas de recepção de leite dos laticínios. Neste trabalho foram analisadas 992 amostras de leite no Estado de Goiás, sendo 441 de leite cru, 327 de pasteurizado e 224 de Ultra Higth Temperature (UHT), de abril a novembro de 2010, coletadas nas propriedades fornecedoras de leite e locais de comercialização do produto. Para realização da pesquisa de antimicrobianos foi utilizado o kit comercial Delvotest® SP-NP, já para a acidez titulável utilizou-se metodologia segundo legislação federal, e para análise dos dados o software SPSS versão 15.0. Das amostras analisadas 8,47% se mostraram positivas para a presença de resíduos de antimicrobianos (5,34% de leite cru, 1,92% de leite pasteurizado e 1,21% de leite UHT), já 25,30% das amostras apresentaram-se fora do padrão para acidez titulável (12,10 % leite cru, 9,57% de leite pasteurizado e 3,63% de leite UHT). Dentre as amostras que estavam fora do padrão para acidez titulável, 10,48% estavam abaixo do recomendado e 14,82% estavam acima. Os resultados das análises da pesquisa confirmam que a qualidade do leite cru, pasteurizado e UHT produzido e consumido em Goiás, estão apresentando resultados fora dos padrões recomendados pela legislação federal, no que se refere à presença de resíduo de antimicrobiano e acidez titulável, o que gera preocupação, pois representa risco a saúde pública, além de causar prejuízos no processamento do leite.

O presente trabalho visa desenvolver métodos analíticos que permitam determinar as concentrações de oxitetraciclina por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, no leite, plasma e líquido sinovial, além de analisar as concentrações correspondentes em gado leiteiro em lactação portadoras de doença do casco submetidos aos tratamentos intramuscular e tópico. Adicionalmente, são tecidos comentários sobre a eficácia clínica destes tratamentos. Desta forma, objetivando determinar a depuração de oxitetraciclina no organismo dos animais tratados, a concentração no sítio de ação e a quantidade residual em leite, as amostras biológicas foram colhidas e quantificadas em diferentes tempos pré e pós-administração do fármaco. Os métodos analíticos validados apresentaram linearidade, limite de detecção, quantificação, exatidão, precisão e recuperação adequadas à quantificação do antibiótico nas matrizes estudadas. Através da administração do medicamento por via intramuscular, observou-se resíduos acima dos limites máximos (100ppb) estabelecidos pela legislação brasileira para oxitetraciclina no leite até 120 horas após a última administração do medicamento pelo esquema seriado de doses. Já pela via tópica, não foram observados valores residuais na matriz biológica. Do ponto de vista clínico, o tratamento tópico foi eficiente nos animais tratados, levando a cura das lesões. Com relação ao tratamento intramuscular, não foram observados resultados satisfatórios, pois a maioria das lesões não regrediu após as administrações. / The purpose of the present work is to develop methods which allow the determination of oxytetracycline by High Pressure Liquid Chromatography in milk, serum and synovial fluid, as well as analyze the corresponding concentration in milk cattle with foot lameness subjected to intramuscular and topical administration of the antibiotic. It is also commented the clinical efficacy of these two treatments. Thus, to determine the clearance of oxytetracycline in the body of the treated animals, the concentration on the site of action, and the antibiotic residue in milk, biological samples have been collected and analyzed for the oxytetracycline content at different times before and after the drug administrations. The validated analytical methods showed suitable linearity, detection and quantification limits, accuracy, precision and recovery, allowing proper quantification of the antibiotic in the studied biological matrices. When administered intramuscular1y, oxytetracycline residues were observed in milk above the maximum limits (100ppb) established by the brazilian legislation up to 120 hour after the last administration of the medicine using multiple doses treatment, whereas on topical use, residues were not observed in this matrix. When analyzing the clinical aspects, topical treatment was very efficient, leading to the healing of the treated animals. In relation to intramuscular treatment, non satisfactory results were observed, as most of lesion did not disappear after the antibiotic administration.

Submitted by MICHAEL PÉREZ RODRÍGUEZ null (michaelpr@iq.unesp.br) on 2016-09-16T20:43:06Z No. of bitstreams: 1 TESE MICHAEL VERSÃO FINAL.pdf: 4495815 bytes, checksum: 5d4a4f8ffcd143bb08ad336b289fe7ab (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-09-22T14:44:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 perezrodriguez_m_dr_araiq_par.pdf: 1340231 bytes, checksum: 9e639833f42ff1e6fc87e7f9f965f8fc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-22T14:44:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 perezrodriguez_m_dr_araiq_par.pdf: 1340231 bytes, checksum: 9e639833f42ff1e6fc87e7f9f965f8fc (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Pró-Reitoria de Pós-Graduação (PROPG UNESP) / Este trabalho descreve o desenvolvimento de métodos analíticos ambientalmente mais amigáveis utilizando sistemas de screening e procedimentos de análise por injeção em fluxo para a detecção e quantificação de antibióticos, da classe das tetraciclinas, em amostras de medicamentos veterinários e alimentos de origem animal como leite bovino e suplementos de ovos. Os métodos desenvolvidos foram baseados na reação de acoplamento diazo obtida entre as tetraciclinas e o ácido p-sulfanílico diazotado em meio básico, resultando na formação de azo compostos com máximos de absorção em torno de 435 nm, permitindo determinar esses antibióticos por espectrofotometria. As condições analíticas foram otimizadas através de análise multivariada utilizando planejamentos experimentais fatoriais e o desempenho dos métodos propostos foi avaliado através de parâmetros como linearidade, efeito matriz, precisão, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação, recuperação e estudo de interferências. O primeiro trabalho desenvolvido fez uso de um procedimento de injeção em fluxo contínuo para a rápida determinação de tetraciclinas em formulações veterinárias comerciais, visando maior eficiência no controle de qualidade na indústria farmacêutica. Na sequência, foi desenvolvido um método de screening mediante análise por injeção em fluxo empregando uma cela capilar de longo caminho óptico (LWCC) para a detecção de resíduos de tetraciclinas em amostras de leite bovino, sem a necessidade de passos de extração dispendiosos e demorados ou complicados tratamentos de amostras. Finalmente, um novo método de microextração líquido-líquido dispersiva assistida por ultrassom (US-DLLME) foi desenvolvido para a simples, rápida e eficiente extração de resíduos de tetraciclinas a partir de amostras de suplemento de ovos e, posterior análise por injeção em fluxo baseada em uma cela capilar de longo caminho óptico (LWCC), empregando um banho de aquecimento com controle de temperatura. Os métodos descritos apresentaram importantes características como simplicidade operacional, possibilidade de automação, rapidez e baixo custo das análises. Além disso, estes métodos seguiram os princípios da química verde, de modo que permitiram realizar determinações ambientalmente mais limpas, através da redução considerável do consumo de reagentes e amostras, evitando ou minimizando o emprego de solventes tóxicos. Também, os métodos desenvolvidos para a análise de resíduos mostraram excelente desempenho para aplicação no controle de qualidade dos produtos alimentares estudados na indústria alimentícia, a fim de proteger os consumidores. / This work describes the development of environmentally friendly analytical methods using screening systems and flow injection procedures for detection and quantification of tetracycline antibiotics in veterinary pharmaceuticals and animal-derived foods such as bovine milk and egg-based protein supplements. The developed methods were based on the diazo coupling reaction between the tetracyclines and diazotized p-sulfanilic acid in basic medium, resulting in the formation of azo compounds that present maximum absorption around 435 nm, which allows determining these antibiotics by spectrophotometry. The analytical conditions were optimized by means of multivariate analysis using factorial experimental designs. Performance of the proposed methods was assessed through parameters such as linearity, selectivity, precision, accuracy, detection limit, quantification limit, matrix effect and recovery. The first developed work used a continuous flow injection procedure for the rapid determination of tetracyclines in commercial veterinary formulations, aiming greater efficiency in quality control in the pharmaceutical industry. Thereafter, it was developed a screening method by flow injection analysis using a liquid waveguide capillary cell (LWCC) for detecting tetracyclines residues in bovine milk samples, without the need for expensive extraction steps that are time-consuming or complicated sample treatments. Finally, a new ultrasound-assisted dispersive liquid-liquid microextraction (US-DLLME) method was developed for simple, rapid, and efficient extraction of tetracyclines residues from egg supplement samples, followed by flow injection analysis based on a liquid waveguide capillary cell (LWCC), using a controlled temperature heating bath. The described methods presented important features such as operational simplicity, possibility of automation, quickness and low cost of the analysis. Furthermore, these methods followed the principles of green chemistry, making possible to perform environmentally cleaner determinations, due to the considerable reduction of reagents and samples consumption, avoiding or minimizing the use of toxic solvents. Besides, the methods developed for residues analysis showed excellent performance for application in the food industry for quality control of the studied food products in order to protect consumers.