Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Tecnologias Química e Biológica, 2014. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-02-19T14:51:08Z No. of bitstreams: 1 2014_NaamãEliasAugustoAlves.pdf: 1229706 bytes, checksum: 9ffb180525b0472209d2fe2cf1d95fe2 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-05-17T19:45:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_NaamãEliasAugustoAlves.pdf: 1229706 bytes, checksum: 9ffb180525b0472209d2fe2cf1d95fe2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-17T19:45:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_NaamãEliasAugustoAlves.pdf: 1229706 bytes, checksum: 9ffb180525b0472209d2fe2cf1d95fe2 (MD5) / O fármaco veterinário endectocida conhecido como ivermectina ou 22,23-dihidroavermectina B1a + 22,23-dihidroavermectina B1b, apesar da sua recente proibição, continua a ser usado largamente no Brasil tanto em bovinos como em suíno e bubalino, porém a grande maioria se deve aos bovinos, devido ao fato do Brasil possuir o segundo maior rebanho mundial. A problemática da utilização deste fármaco está associada a uma possível excreção da ivermectina no leite desses animais, o qual é amplamente utilizado na dieta diária dos brasileiros, e os efeitos devido à exposição crônica a esse fármaco ainda não são bem estudados. Este trabalho adaptou uma metodologia para determinação da ivermectina em leite de bovinos. Foi realizada a validação da metodologia com leitura de amostra de leite fortificada. A amostra de leite integral foi coletada direto do animal para que permanecesse a quantidade total de gordura, devido ao caráter lipofílico do fármaco. O método validado baseou-se em cromatografia líquida com detecção UV/VIS. A extração foi realizada em duas partes, a primeira líquido-líquido, onde há a separação das gorduras e proteínas, e a segunda em fase sólida com o auxílio de cartuchos SPE C18. Para a leitura das amostras utilizou-se cromatógrafo líquido, com detector de UV-Vis, com coluna Phenomenex C18, 10cm, ID 46µm. Os resultados de validação mostraram que o método é linear, com coeficiente de determinação (R2) igual à 0,991, seletivo, preciso, com coeficientes de variação entre 3,98 e 9,42%, exato, com valores de recuperação variando entre 98 e 110% e com limites de detecção e quantificação de 19,825 µg/L e 49,350 µg/L respectivamente. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The veterinary drug called ivermectin or endectocide 22.23-22.23-dihydroavermectin B1a + B1b dihydroavermectin, despite its recent ban, continues to be used widely in Brazil both in cattle and in pigs and buffalo, but the vast majority is due to cattle, due to the fact that Brazil has the second largest herd. The issue of use of this drug is associated with a possible excretion of ivermectin in milk of these animals, which is widely used in daily diet of Brazilians, and the effects due to chronic exposure to this drug are not well studied. This study adapted a method for determining the milk of bovine ivermectin. Validate the methodology with sample reading of fortified milk was performed. The sample of whole milk was collected directly from the animal to remain on the total amount of fat, due to the lipophilic nature of the drug. The validated method was based on liquid chromatography with UV detection / VIS. The extraction was performed in two parts, the first liquid-liquid, where there is a separation of fat and protein, and the second solid phase with the aid of C18 SPE cartridges. To read the samples we used liquid chromatography with UV-Vis detector with Phenomenex C18, 10cm, 46μm ID column. The validation results showed that the method is linear, with a coefficient of determination (R2) equal to 0.991, selective, precise, with coefficients of variation between 3.98 and 9.42%, exact, with recovery values ranging between 98 and and 110% limits of detection and quantification of 19,825 mg / L and 49,350 mg / l respectively.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Pós-Graduação em Química, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-05-28T16:04:36Z No. of bitstreams: 1 2013_EricaPachecoSilva.pdf: 4969485 bytes, checksum: 976df8dcaaf53e3fccc2efe29f301d35 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-06-05T15:35:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_EricaPachecoSilva.pdf: 4969485 bytes, checksum: 976df8dcaaf53e3fccc2efe29f301d35 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-05T15:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_EricaPachecoSilva.pdf: 4969485 bytes, checksum: 976df8dcaaf53e3fccc2efe29f301d35 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi otimizar e validar métodos multirresíduos para determinação por LC-MS/MS de resíduos de 19 medicamentos veterinários, incluindo 4 metabólitos de nitrofuranos, em amostras de leite e ovos. Na etapa de otimização, as condições ideais de extração foram determinadas empregando planejamento experimental 2n com ponto central. No procedimento baseado no método QuEChERS para determinação de 15 medicamentos em ambas matrizes, 10 mL de acetonitrila acidificada foram adicionados a 10 g de amostra, 4 g de MgSO4 e 1 g de NaAc. O sobrenadante foi submetido à etapa de clean up com 150 mg de MgSO4 e 50 mg de PSA para cada mL de extrato, filtrado e analisado por LC-MS/MS. O procedimento utilizando extração líquido-líquido com purificação em baixa temperatura (ELLPBT) em amostras de leite foi feito com 8,0 mL de acetonitrila/4 g de amostra, ultrassom por 15 minutos e congelamento por 16 h. Nas amostras de ovos, acrescentou-se 0,8 g de NaCl junto com 8 mL de acetonitrila e o tempo de ultrasson foi de 5 minutos. A determinação de nitrofuranos envolveu hidrólise ácida destes medicamentos na amostra, derivatização dos metabólitos com 2- nitrobenzaldeído (2-NBA) por 16 h/40 ºC e ELL com acetato de etila. Para leite, fez-se necessário adicionar 1,25 g de NaCl e resfriar o extrato para diminuir a formação de emulsão. Os métodos QuEChERS e ELL para nitrofuranos otimizados foram satisfatoriamente validados, com LOQ entre 0,30 (cloranfenicol) a 5,0 ng/g ou mL (QuEChERS) e 0,50 ng/g ou mL (nitrofuranos). No total, 51 amostras de ovos coletadas no comércio foram analisadas. Duas amostras foram positivas, uma continha lincomicina (110 ng/g), substância sem limite máximo de resíduo (LMR) estabelecido no país, e outra sulfametazina (242 ng/g), em níveis acima do LMR (10 ng/g). A avaliação do risco indicou ser improvável que a ingestão desses compostos pelo consumo de ovos represente um risco para a saúde. Porém, é necessário um monitoramento mais efetivo desses medicamentos em produtos de origem animal pelos órgãos competentes, incluindo carne e leite, para garantir o uso de boas práticas pelos produtores e uma avaliação da eposição na dieta mais completa. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this work was to optimize and validate multiresidue methods for the LC-MS/MS analysis of 19 veterinary drugs residues, including 4 nitrofuran metabolites in milk and eggs. The optimal method conditions were selected using experimental planning. The QuEChERS method, used to determine the 19 drugs in both matrices, was conducted using extraction of 10 g sample with 10 mL of acidic acetonitrile, 4 g MgSO4 and 1 g NaAc, followed by a clean-up step with150 mg of MgSO4 and 50 mg of PSA per mL of the extract, which was filtered and analyzed by LC-MS/MS. The procedure for milk using liquid–liquid extraction with purification at low temperature (LLE-LTP) was conducted with 8 mL acetonitrile/4 g sample, ultrasound for 15 min and freezeing for 16 hours. For egg samples, further addition of 0.8 g of NaCl and 5 min of ultrasound were necessary. The method for nitrofurans involved the acid hydrolysis of the drug present in 1 g sample, derivatization of the metabolites with 2-nitrobenzaldehyde (2-NBA) for 16 h/ 40 ºC and ELL with 8 mL of ethyl acetate. For milk, the addition of 1.25 g of NaCl during the extraction and cooling of the sample extract were needed to decrease emulsion formation. The QuECHERS and nitrofurans methods were satisfactorily validated, with LOQ ranging from 0.3 (chloramphenicol) to 5 ng/g or mL (QuECHERS) and 0.5 ng/g or mL (nitrofurans). In total, 51 samples of eggs were analyzed. Two samples were positive, one containing lincomycin (110 μg/kg), substance with no established MRL in Brazil, and the other sulfamethazine (242 μg/kg), at levels above the MRL (10 ng/g). The risk assessment indicated that it is unlikely that the intake of these compounds from the consumption of eggs represents a human risk to consumers. However, government authorities should monitor more effectively these veterinary drugs in animal products, including also milk and mean, to garanttee the application of good practices by food producers and allow a more complet dietary exposure assessment.

Orientador: Susanne Rath / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arantes_JoelFernandoMagri_M.pdf: 2000946 bytes, checksum: 776f3525265b262b985b62608957a362 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A ivermectina (IVM) e um antiparasitário da classe das avermectinas mundialmente utilizado na produção animal. Quando os fármacos apresentam teores fora das especificações, estes podem comprometer a saúde animal e/ou deixar resíduos no produto animal destinado ao consumo humano. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver e validar um método analítico usando a cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de fotodiodos (HPLC-DAD) e avaliar um método alternativo, espectroscopia no infravermelho próximo (NIR) associada a quimiometria, para a quantificação de IVM em medicamentos veterinários. Os parâmetros cromatográficos foram estabelecidos seguindo as especificações da Farmacopéia Britânica e a validação foi baseada na Resolução n° 899 de 29/05/03 da ANVISA. A separação da IVM de seu homólogo foi realizada em uma coluna cromatográfica C18 Purospher STAR RP-18e (55 mm x 4,0 mm, 3 mm), fase móvel metanol:água (83:17, v/v), vazão de 1,0 mL min, temperatura de 30 °C e comprimento de onda de detecção de 245 nm. O método foi seletivo com os seguintes parâmetros de validação: linearidade (r = 0,9995), intervalo de linearidade: 40 a 60 mg mL, exatidão: 96 - 104 %, precisão intra-dia: 0,5 a 4,8% e precisão inter-dia: 2,7%. Trinta e uma amostras (formulações injetáveis) foram analisadas e 45,2% estavam fora das especificações (valor declarado). Os estudos empregando a NIR foram executados na faixa espectral de 4000 a 14000 cm. Os espectros obtidos (média de 100 espectros) foram tratados com a ferramenta quimiométrica PCA (Principal Component Analysis) para a análise exploratória dos dados e um modelo de calibração foi construído por PLS (Partial Least Squares). O modelo de calibração baseou-se em validação cruzada usando 66 variáveis (4104,2 a 4354,9 cm), 5 componentes principais e 25 amostras. Embora o método NIR tenha mostrado algumas vantagens sobre o metodo cromatográfico, o emprego da HPLC ainda é necessário para confirmação de identidade / Abstract: Ivermectin (IVM) is an antiparasitic compound of the class of avermectins worldwide used in livestock production. When veterinary drugs present levels outside their specifications, they may compromise animal health and/or leave residues in animal products destined for human consumption. The aims of this work were the development and validation of an analytical method using high performance liquid chromatography with photodiode array detection (HPLC-DAD) and evaluation of an alternative method, near infrared spectroscopy (NIR) associated to chemometry, to the quantification of IVM in veterinary drugs. The chromatographic parameters were established according to the specifications of the British Pharmacopoeia and the validation was based on the Resolution n° 899 of 29/05/03 of ANVISA. The separation of IVM from his homologue was achieved using a C18 column Purospher STAR RP-18e (55 mm x 4,0 mm, 3 mm), mobile phase of methanol:water (83:17, v/v), flow rate of 1.0 mL min, temperature of 30 °C and detection wavelength of 245 nm. The method was selective with the following validation parameters: linearity (r= 0.9995), linear range: 40 a 60 mg mL, accuracy: 96 - 104%, intra-day precision: 0.5 to 4.8 % and inter-day precision: 2.7%. Thirty one samples (injectable formulations) were analyzed and 45.2% were outside their specifications (declared value). Near infrared studies were carried out in the spectral range of 4000 to 14000 cm. The NIR spectra obtained (average of 100 spectra) were treated with a chemometric tool Principal Component Analysis (PCA) for exploratory data analysis and a calibration model by Partial Least Square (PLS) was built. For this purpose, cross validation with 66 variables (4104.2 a 4354.9 cm), 5 principal components and 25 samples were employed. Even though, the NIR method had shown some advantages regarding to the chromatographic method, HPLC is still required for identity confirmation / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2016-09-14T16:05:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE_Oficial_CD.pdf: 6220766 bytes, checksum: ca33c77348ed681cd430fc8f67c5590c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-14T16:05:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE_Oficial_CD.pdf: 6220766 bytes, checksum: ca33c77348ed681cd430fc8f67c5590c (MD5) Previous issue date: 2014-04-25 / As fontes potenciais de poluentes provenientes de operações agroindustriais incluem resíduos animais, medicamentos veterinários, pesticidas e outros produtos químicos, como detergentes e desinfetantes. As avermectinas são amplamente usadas em medicina veterinária e na agricultura. Estes agentes são excretados, em certa quantidade, nas fezes de animais tratados e tem sido demonstrado que os membros do grupo das avermectinas podem ter efeitos nocivos sobre os organismos não-alvo que utilizam as fezes. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da ivermectina em minhocas Eisenia foetida, através da análise de sobrevivência, desenvolvimento, produção de casulos, atividades enzimáticas e comportamento durante a vermicompostagem de esterco bovino em condições de laboratório. Além disso, as alterações químicas e a atividade microbiana do vermicomposto também foram estudadas. As minhocas (n = 10 e com três repetições) foram expostas aos substratos teste contaminados com ivermectina a 0, 1, 5, 10, 50 e 100 mg kg-1. Diferenças significativas foram testadas utilizando-se a análise de variância (ANOVA), seguidas pelo teste de Duncan. Além disso, foram aplicados modelos de regressão para verificar um efeito dose-resposta. Não houve efeitos negativos da ivermectina sobre a mortalidade de minhocas. Da mesma forma, as características químicas e a atividade microbiana do vermicomposto não foram afetados. Os resultados mostram que o teste de fuga não foi suficiente para determinar a toxicidade da ivermectina para Eisenia foetida em esterco bovino. No entanto, uma resposta hormética foi registrada em relação ao crescimento e a atividade relativa das enzimas acetilcolinesterase, catalase e fosfatase alcalina em minhocas. Além disso, os resultados mostram valores diminuídos da atividade enzimática da glutationa-s-transferase e aumento dos níveis de hidroperóxidos, em resposta às concentrações mais elevadas de ivermectina ao fim de 7 dias de tratamento. Por outro lado, depois de 28 dias, a atividade da glutationa-s-transferase foi significativamente aumentada (p <0,01) nas exposições a 50mg kg-1 e 100 mg kg-1. Portanto, pode-se concluir que a exposição aguda à elevadas concentrações de ivermectina ocasiona dano celular em minhocas. Adicionalmente, a presença da hormese induzida pela ivermectina em Eisenia foetida pode estar relacionada a ativação de vias de adaptação. / The potential sources of pollutants originating from agroindustry operations include animal wastes, veterinary drugs, pesticides and other chemicals such as detergents and disinfectants. The avermectins are extensively used in veterinary medicine and agriculture. Most of these agents are excreted to some extent in the faeces of treated animals and it has been demonstrated that members of the avermectin group may have deleterious effects on non-target organisms utilising the faeces. The objective of this study was to evaluate the influence of ivermectin on Eisenia foetida earthworms, by analyzing survival, growth, cocoon production, enzyme activities and behaviour during the vermicomposting of cattle manure under laboratory conditions. Furthermore, the chemical changes and microbial activity of the vermicompost were also studied. The earthworms (n = 10, with three replicates) were exposed to the test substrates contaminated with ivermectin 0, 1, 5, 10, 50 and 100 mg kg-1. Significant differences were tested using analysis of variance (ANOVA) followed by Duncan's test. Furthermore, regression models were applied to check a dose-response effect. In this study, there was no negative effects of ivermectin on mortality of earthworms. Likewise the chemical characteristics and microbial activity of vermicompost were not affected. The results show that avoidance test behaviour was not adequate to determine the toxicity of ivermectin for Eisenia foetida in cattle manure. However, a hormetic response was recorded on the growth and relative enzyme activity of acetylcholinesterase, catalase and alkaline phosphatase in earthworms. In addition, the results showed decreased values of the glutathione- s-transferase enzyme activity and increased levels of hydroperoxides levels in response to the higher concentrations of ivermectin at 7 days of treatment. On the other hand, after 28 days glutathione- s-transferase activity was significantly increased (p < 0.01) in the exposure to 50mg kg-1 and 100mg kg-1. In conclusion, acute exposure of ivermectin at high concentrations cause cellular injury in earthworms. Additionally, the presence of hormesis induced by ivermectin in Eisenia foetida may be related to activation of adaptive pathways.

152 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-03-05T13:17:55Z No. of bitstreams: 1 Jaff Ribeiro da Silva.pdf: 1914302 bytes, checksum: de500f900f84352a882084602fadf22d (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-05T21:02:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Jaff Ribeiro da Silva.pdf: 1914302 bytes, checksum: de500f900f84352a882084602fadf22d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-05T21:02:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jaff Ribeiro da Silva.pdf: 1914302 bytes, checksum: de500f900f84352a882084602fadf22d (MD5) / FAPESB / Em várias etapas da produção de alimentos de origem animal, antibióticos como cloranfenicol (CAP) podem ser utilizados. Na terapêutica humana, CAP somente é usado contra bactérias multiresistentes devido sua ação tóxica, que pode induzir anemia aplásica no homem. O objetivo deste estudo foi otimizar as condições de preparação das amostras; a separação cromatográfica por CG/DCE; e validar o método desenvolvido ao nível intralaboratorial com as condições otimizadas. O método foi otimizado por meio de ensaios com padrões e com as matrizes músculos de camarão e de tilápia; mel; pólen; carnes de avestruz, ovina e caprina; e leite caprino. As condições otimizadas obtidas foram: derivação com CAP liofilizado e em condições de baixa umidade, a reação de silanização do CAP foi conduzida durante 15 min a 80 °C; a melhor condição de purificação foi obtida por lavagens com hexano e limpeza com SPE-C18; para as condições cromatográficas o splitless deve ser realizado com um liner de 2 mm e com a abertura da válvula split em 0,5 min e deve-se utilizar uma coluna DB1 (60 m x 0,25 mm x 0,25 μm) sob as condições de temperatura de 90 °C / 1 min aumentando 60 °C/min até 200 °C / 7 min, aquecendo 5 °C/min até 230 °C / 3 min e então aquecendo 5 °C/min até 260 °C / 35,17 min. Os ensaios com as matrizes demonstraram que, nas condições avaliadas, o método não é indicado para aplicação para mel, pólen, camarão, tilápia e avestruz devido à presença de co-eluentes nas condições avaliadas. Entretanto, nas condições otimizadas, as matrizes pernil ovino, pernil caprino e leite caprino foram indicadas para o desenvolvimento de estudos de validação do método para determinar resíduos de CAP. Com isso, foi validado intralaboratorialmente o método para determinação de resíduos de CAP em leite caprino por CG/DCE. A identificação foi realizada por comparação de tempo de retenção e por CG/EM, e a quantificação foi obtida por padronização externa. O método validado para a matriz leite caprino foi específico, linear (0,998), preciso (5,8-13,4%), exato (69,87-73,71%) e robusto. O LD e LQ do método foram, respectivamente, 0,03 e 0,10 μg/kg. O método validado atende aos critérios de aceitabilidade estabelecidos pelo MERCOSUL e Codex Alimentarius. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2009.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The application of good livestock practices in the sheep industry is a growing concern on food security due to the increase of financial transactions in this sector in Brazil, mainly due to imports. To perform the monitoring Maximum Residue Limits (MRLs) are adopted such as suitable matrices for monitoring. The deposition of residues of veterinary drugs in sheep muscle is verified by appropriate analytical methods. In this work it were developed two methods aiming to determine avermectins residues in ovine muscle by HPLC-FD using QuEChERS method and also a method for the determination of different classes of veterinary drugs using UHPLC-MS / MS. The extraction was optimized by comparing the three most common variants of QuEChERS method and also the application of experimental design to select the best composition of the clean-up stage, varying amounts of PSA and C18. Some parameters such as derivatization step, the mobile phase composition, mobile phase flow, and the conditions of ionization source and ions entrance of the system were also optimized. The developed methods were validated by reference to Decision 657 of 2002 published by the European Community. The following parameters were evaluated: selectivity; linearity and working range; matrix effect; limits of detection and quantification; decision limit and detection capability; accuracy; and precision. The results were satisfactory, with the values of recovery in the concentration ranges required for each rated level, determination coefficients for curves prepared in solvent blank extract and white matrix were above 0.99 (except for ciprofloxacin) and linear working range was from 5 to 200 μg kg-1 for UHPLC-MS / MS and 2.5 to 112.5 μg kg-1 for HPLC-FD. There were no significant matrix effects only sulfamethoxazole, trichlorfon and albendazole by determining UHPLC-MS / MS. The limits of detection for HPLC-FD ranged from 4 to 18.4 μg kg-1 and decision limits from 10.7 to 59.4 μg kg-1 for UHPLC-MS / MS detection limits ranged from 1.7 to 33.3 μg kg-1 and for decision threshold from 5 to 100 μg kg-1. The method was considered suitable for routine analysis, and the confirmation was only possible using UHPLC-MS / MS, and the method was applied for determination of veterinary drug residues in sheep muscle in 11 samples by HPLC-FD and 36 UHPLC MS / MS / A aplicação das boas práticas agropecuárias na ovinocultura é uma preocupação crescente na segurança alimentar em virtude do aumento das movimentações financeiras neste setor no Brasil, principalmente em função das importações. Para realização do monitoramento são adotados Limites Máximos de Resíduo (LMR) e matrizes adequadas para monitoramento. A deposição de resíduos de medicamentos veterinários em músculo ovino é verificada através de métodos analíticos adequados. Neste trabalho desenvolveram-se dois métodos um buscando a determinação de resíduos de avermectinas em músculo ovino por HPLC-FD, utilizando o método QuEChERS e, também, um método para determinação de diferentes classes de medicamentos veterinários utilizando UHPLC-MS/MS. A extração foi otimizada pela comparação das 3 variações mais usuais do método QuEChERS e, também, aplicação de planejamento experimental para escolha da melhor composição da etapa de clean-up, variando as quantidades de PSA e C18 aplicadas. Alguns parâmetros como etapa de derivatização, composição da fase móvel, vazão da fase móvel e condições da fonte de ionização e entrada de íons no sistema também foram otimizadas. Os métodos desenvolvidos foram validados tomando como referência a Decisão 657 de 2002 publicada pela Comunidade Europeia. Foram avaliados os seguintes parâmetros: seletividade; linearidade e faixa de trabalho; efeito matriz; limites de detecção e quantificação; limite de decisão e capacidade de detecção; exatidão; e precisão. Os resultados obtidos foram satisfatórios, tendo como valores de recuperação nas faixas de concentração exigidas para cada nível avaliado, os coeficientes de determinação para curvas preparadas em solvente, em extrato branco e matriz branco ficaram acima de 0,99 (com exceção de ciprofloxacin) e a faixa linear de trabalho foi de 5 a 200 μg kg-1 para UHPLC-MS/MS e de 2,5 a 112,5 μg kg-1 para HPLC-FD. Não foram observados efeitos de matriz significativos apenas para sulfametoxazol, triclorfon e albendazol na determinação por UHPLC-MS/MS. Os limites de detecção para HPLC-FD variaram de 4 a 18,4 μg kg-1 e os limites de decisão de 10,7 a 59,4 μg kg-1, para UHPLC-MS/MS os limites de detecção variaram de 1,7 a 33,3 μg kg-1 e para limite de decisão de 5 a 100 μg kg-1. O método foi considerado adequado para análises de rotina, sendo que a confirmação só foi possível utilizando UHPLC-MS/MS, e o método foi aplicado para determinação de resíduos de medicamentos veterinários em músculo ovino em 11 amostras por HPLC-FD e 36 por UHPLC-MS/MS.

Orientador: Felix Guillermo Reys Reys / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-13T21:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RenataCabrerade_M.pdf: 696928 bytes, checksum: 7026171fdbd90be240a19f0afb58a12c (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A presença de resíduos de medicamentos veterinários em níveis acima dos limites máximos (LMR) estabelecidos apresentam riscos à saúde humana. O conhecimento da dimensão da exposição da população a esses compostos é necessário para garantir a proteção do consumidor. Para tanto, é imprescindível que métodos de análise validados estejam disponíveis, para assegurar a confiabilidade dos resultados. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar métodos analíticos para a determinação de resíduos de estreptomicina e diidroestreptomicina em leite e empregá-los na análise de amostras comercializadas na região de Campinas, São Paulo. Os métodos analíticos desenvolvidos e validados incluem o ensaio imunoenzimático (ELISA) e a cromatografia líquida associada à espectrometria de massas em tandem (LCMS/MS QToF). A validação analítica foi realizada de acordo com as recomendações da Comunidade Européia e IUPAC. Os seguintes parâmetros foram avaliados: seletividade, curva analítica, linearidade, sensibilidade, precisão (repetibilidade intra e inter-dias), exatidão e limites de detecção e de quantificação. Os resultados do procedimento de validação dos métodos de ELISA e LC-MS/MS demonstraram que estes são adequados para a análise de triagem e confirmatória, respectivamente, de resíduos de estreptomicina e diidroestreptomicina em leite pasteurizado, em níveis de concentração inferiores ao LMR estabelecido para essas substâncias (200 µg kg-1). Nas amostras analisadas não foram encontrados resíduos de estreptomicina e diidroestreptomicina em níveis detectáveis / Abstract: Veterinary drugs pose a risk to human health when there residual levels in foods exceed the maximum residue limit (MRL). Knowledge of the extent of human exposure to these compounds is necessary to provide consumer protection. To achieve this, it is essential that validated analytical methods are available to ensure reliable results. The aim of the present work was to develop and validate analytical methods for the analysis of streptomycin and dihydrostreptomycin residues in milk, and to employ these methods for analysis of samples marketed in the region of Campinas, São Paulo. The developed and/or validated methods include enzyme immunoassay (ELISA) and liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS QToF). Method validation was performed according to the recommendations established by European Community and IUPAC. The following parameters were evaluated: analytical curve, linearity, sensitivity, precision (intra and inter-day repeatability), accuracy and the detection and quantification limits. The results demonstrated the effectiveness of ELISA and LCMS/MS methods for trial and confirmatory analyses, respectively, of streptomycin and dihydrostreptomycin in milk at concentrations below the established MRL (200µg kg-1). In the analyzed samples streptomycin and dihydrostreptomycin were not found at detectable levels / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Susanne Rath / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-24T01:27:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MartinezMejia_MonicaJohanna_M.pdf: 2464111 bytes, checksum: 3b5ed561f639527706f188b968b06c29 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Medicamentos veterinários têm sido amplamente empregados na cadeia de produção animal a fim de assegurar a saúde do animal e aumentar a produtividade. O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento do Brasil (MAPA) tem como uma de suas prioridades atuais a fiscalização de medicamentos veterinários comercializados a nível nacional e este trabalho teve como objetivo fortalecer esta ação junto ao Lanagro de Campinas, SP. O principal foco foi o desenvolvimento e validação de método para a determinação dos antimicrobianos aminoglicosídeos estreptomicina e diidroestreptomicina por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à detecção por amperometria pulsada (HPLC-PAD). O comportamento eletroquímico dos compostos foi previamente estudado por voltametria cíclica, usando o eletrodo de ouro como eletrodo de trabalho. As condições ótimas do detector amperométrico foram definidas mediante planejamento experimental. A separação dos antimicrobianos foi realizada em uma coluna de troca aniônica (Carbopac PA1) e uma fase móvel composta de 0.070 mol L de NaOH. Como padrão interno foi usado a glicose. Os potenciais ótimos do pulso amperométrico foram: Edet= 0,1 V (tdet= 400 ms), Eoxid= 0,85 V (toxi= 400 ms) e Eativ= -0,65 V (tativ= 400 ms). O método foi validado conforme Guia de Validação publicado pelo MAPA em 2011 e aplicado na análise de amostras contendo estreptomicina e diidroestreptomicina associados a outros compostos, em formulações de pó solúvel, suspensão injetável e unguento intramamário. / Abstract: Veterinary drugs have been widely used in animal production in order to ensure both animal health and increase productivity. One of the current priorities of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply of Brazil (MAPA) is the inspection of veterinary drugs on the national market with the focus to enhance the practices of the National Laboratory Lanagro Campinas, SP. The main objective was the development and validation of a method for the determination of the aminoglycoside antimicrobials streptomycin and dihydrostreptomycin using high performance liquid chromatography coupled with pulsed amperometric detection (HPLC-PAD). The electrochemical behavior of the compounds was previously studied by cyclic voltammetry, using a gold electrode as working electrode. The optima conditions of the amperometric detector were defined by an experimental design. The separation of the antimicrobials was performed on an anion exchange column (Carbopac PA1) and a mobile phase of 0.070 mol L NaOH. Glucose was used as internal standard. The optimal potential of the triple pulse waveform of the amperometric detector were: Edet = 0.1 V (tdet = 400 ms and tint = 200 ms), Eoxid = 0.85 V (toxid = 400 ms) and Eativ = -0.65 V (tativ = 400 ms). The method was validated according to the Guide of Validation published by MAPA in 2011 and applied to the analyses of samples containing streptomycin and dihydrostreptomycin associated with other compounds in soluble powder formulations, injectable suspensions and intramammary ointments. / Mestrado / Quimica Analitica / Mestra em Química

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T10:37:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rezende_RenataAntunesEstaianode_M.pdf: 1522270 bytes, checksum: a0ea23b47147c504a5e5f70c7a0d1fbd (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A piscicultura no Brasil tem crescido de maneira significativa ao longo dos últimos 20 anos, refletido pelo aumento da produção com elevadas densidades de estocagem. Com a intensificação da atividade aquícola, o surgimento de surtos causados por vários agentes etiológicos tornam-se cada vez mais freqüentes, dentre eles as bacterioses. Para combater o agente responsável por essas enfermidades, muitos antibióticos são utilizados de maneira ilícita, podendo, além de não apresentar efetividade durante o tratamento, causar letalidade aos animais e danos ambientais. Atualmente, o Brasil possui apenas dois antimicrobianos aprovados para uso na aquicultura: florfenicol e oxitetraciclina. A enrofloxacina (ENR) é um antibiótico largamente utilizado na medicina veterinária por apresentar elevado potencial de eficácia no tratamento de bacterioses. Porém, apesar de no Brasil ainda não ter uso regulamentado na piscicultura, muitos produtores acabam utilizando-a de forma ilícita, sendo adicionada à ração ou em banhos de imersão. Esses procedimentos de administração favorecem a perda do fármaco por meio da lixiviação, promovem a mudança do ecossistema aquático, além de prejudicar a saúde animal e do consumidor. Possíveis alternativas para facilitar a administração da ENR, minimizando os problemas causados no meio ambiente, são os revestimentos na ração, um dos mais antigos processos farmacêuticos ainda existentes e com grande aplicabilidade em diversos segmentos. Para a formação desses revestimentos, os polímeros utilizados precisam ser compatíveis com as características químicas e físico-químicas do fármaco, garantindo homogeneidade ao produto final e redução de perda do medicamento ao longo do tempo de administração da ração. Para tanto, faz-se necessário o revestimento da ração medicada seguida da avaliação das taxas de lixiviação, a fim de avaliar as perdas do fármaco para o ambiente. Para alcançar este objetivo, é necessária a disponibilidade de um método analítico devidamente validado que garanta a determinação do teor, antes e depois do processo de lixiviação da ração medicada. O método desenvolvido para quantificação da ENR na ração foi baseado na técnica de cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD). O método foi validado considerando os seguintes parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, precisão intradia e interdias, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação. Os resultados obtidos apresentaram conformidade com as recomendações dos guias de validação da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA, 2003) e do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA, 2010), indicando que o método é apropriado para a determinação de ENR na ração medicada. O revestimento da ração medicada tanto com 0,5 % quanto com 2,0 % de polivinilpirrolidona (PVP-K30) reduziu a taxa de lixiviação da ENR na ração para a água, porém essa taxa de redução depende significativamente (p<0,05) da temperatura e do tempo de permanência da ração na água / Abstract: Fish farming in Brazil has grown significantly over the past 20 years, reflected by increased production at high stocking densities. With the intensification of aquaculture, the emergence of outbreaks caused by various etiological agents becomes increasingly frequent, including the bacterial diseases. To combat the agents responsible for those diseases, many antibiotics are used illicitly. Nonetheless, in addition to the possibility of no effectiveness during treatment, they can induce lethality to the animals and cause environmental damage. Currently, Brazil has only two antimicrobials approved for use in aquaculture: florfenicol and oxytetracycline. Enrofloxacin (ENR) is an antibiotic widely used in veterinary medicine for presenting a high potential for efficacy in treating bacterial diseases. However, although in Brazil it is not yet regulated for use in fish farming, many farmers use it unlawfully, being added to the feed or by immersion baths. These procedures favor the drug loss through leaching from the feed, induce changes at the aquatic ecosystem, and endanger consumer and animal health. Possible alternatives to facilitate the administration of ENR, minimizing the problems caused in the environment are the feed coating, one of the oldest processes still exist with great applicability in several pharmaceutical segments. For the coating, polymers must be compatible with the chemical end physic-chemical characteristics of the drug, ensuring homogeneity of the final product and reduction of drug loss over time of feed administration. For this purpose, after coating the medicated feed becomes necessary to evaluate the leaching rate of the drug from the feed. To accomplish this it is required to develop and validate an analytical method that guarantees the determination of the drug content, before and after the leaching process of the medicated feed. The method for quantification of ENR in the feed was based on the technique of high performance liquid chromatography with diode array detector (HPLC-DAD). The method was validated considering the following parameters: linearity, sensitivity, selectivity, intra-day and inter-day precision, accuracy, detection and quantification limits. The results showed compliance with the recommendations from the validation guide of the National Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA, 2003) and the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA, 2010), indicating that the method is suitable for the ENR determination on the medicated feed. The coating of the medicated feed with both: 0.5% and 2.0% polivinilpirrolydone (PVP-K30) reduced the leaching rate of the ENR from the feed to the water. However, the leaching rate reduction depends significantly (p<0.05) on the water temperature, as well as on the time residence of the feed in the water / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Jonas Augusto Rizzato Paschoal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-20T20:20:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PilcoQuesada_Silvia_M.pdf: 1450390 bytes, checksum: a021e048252c2afe9ae8f4892c08fc56 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A aquicultura é um setor de produção de alimentos que apresenta grande crescimento em todo o mundo. O Brasil possui um alto potencial de expansão da atividade aquícola, com produção promissora de espécies exóticas como a tilápia (Oreochromis niloticus) e nativas como o pacu (Piaractus mesapotamicus) e o tambaqui (Colossoma macropomum),. Como em todo sistema intensivo de produção, o uso de medicamentos veterinários na produção aquícola se faz necessário para o controle e tratamento de doenças, visando garantir os rendimentos de produção esperados. Essas doenças podem ser causadas por parasitas, bactérias, fungos e vírus. Dentre os medicamentos mais utilizados estão os antimicrobianos, uma vez que as bacterioses são indicadas como um dos fatores principais de limitação da produção aquícola no mundo todo. Dentre os antimicrobianos comumente utilizados na aquicultura mundial destaca-se o grupo das fluoroquinolonas (FQ). O risco potencial da presença de resíduos de antimicrobianos nos produtos aquícolas é um assunto preocupante. Dentre os fatores de preocupação estão o uso irresponsável e não controlado, a falta de respeito às boas práticas veterinárias e carência de alternativas de medicamentos veterinários específicos para uso na aquicultura. Como consequência, tem-se a preocupação com a questão da resistência microbiana, assunto este muito discutido mundialmente, e que aflige e impacta tanto o próprio sistema de produção aquícola, como a saúde humana e o meio ambiente. Quando os resíduos dos antimicrobianos estão acima dos valores de limites máximos de resíduos (LMR) estabelecidos, passam a representar risco potencial à saúde do consumidor. Deste modo, o desenvolvimento de métodos analíticos para determinar os resíduos de fármacos veterinários presentes em produtos de origem animal se faz necessário. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um método para a determinação simultânea de resíduos de norfloxacina (NOR), danofloxacina (DAN), enrofloxacina (ENR) e ciprofloxacina (CIP) em filés de tilápia (Oreochromis niloticus) e de pacu (Piaractus mesopotamicus), utilizando a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS QToF). Para a validação analítica foram considerados os seguintes parâmetros: linearidade, sensibilidade, seletividade, efeito matriz, precisão intra-dia (com amostras fortificadas e amostras incorridas) e inter-dias, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação, limite de decisão e capacidade de detecção. Os resultados obtidos a partir da validação apresentaram conformidade com as recomendações dos guias de validação da Comunidade Europeia e do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, indicando que o método é apropriado para a determinação de FQ em filé de peixe. Nenhuma das amostras (n=31) adquiridas do comércio e analisadas pelo método validado apresentou resíduos de DAN, NOR, ENR e CIP em níveis detectáveis / Abstract: Aquaculture is a food production sector that presents worldwide growth. Aquaculture activity in Brazil exhibits a high potential for expansion, that includes promising production of exotic as tilapia (Oreochromis niloticus) and native species pacu (Piaractus mesapotamicus) and tambaqui (Colossoma macropomum). As in every intensive production system, the use of veterinary drugs in aquaculture production is necessary for control and treatment of diseases, in order to guarantee the expected productivity. Those diseases can be caused by parasites, bacteria, fungi and viruses. Antibiotics are among the most widely used drugs, since bacterial diseases are listed as one of the main factors limiting the worldwide aquaculture production. The fluoroquinolones (FQ) antibiotic family is the most commonly used in aquaculture. The risk of the presence of antibiotics residues in aquaculture products is a matter of concern, the irresponsible and uncontrolled use of antibiotics, the disrespect to good veterinary practices, and the lack of alternatives of veterinary specific drugs for aquaculture use, are some of the matters of concern. As a consequence, it arises a current issue related to microbial resistance which may affect different areas such as aquaculture system, human health and the environment. Potential risk to the consumer health is presented when the antimicrobial residues in foods are above the established maximum residue limits (MRL). Therefore, it becomes necessary the development and validation of analytical methods in order to determine the veterinary drugs residues present in foods of animal origin. Thus, the objective of this work was to develop and validate a method for the simultaneous determination of norfloxacin (NOR), danofloxacin (DAN), enrofloxacin (ENR) and ciprofloxacin (CIP) residues in tilapia (Oreochromis niloticus) and pacu (Piaractus mesopotamicus) fillets, using liquid chromatography associated to mass spectrometry (LC-MS/MS QToF). To conduct the validation of the method the following parameters were considered: linearity, sensitivity, selectivity, matrix effect, intra-day (using spiked and incurred samples) and inter-day precision, accuracy, detection limit, quantification limit, decision limit and detection capability. The obtained results are in conformity with the guidelines recommendations from the European Community, and the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply, demonstrating that the method is suitable for the determination of FQ in fish fillet. None of the samples (n=31) acquired and analyzed by the validated method presented residues of DAN, NOR, ENR and CIP at detectable levels / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos