Orientadores: José Francisco Hofling, Marta Cristina Teixeira Duarte / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peixoto_IzaTeixeiraAlves_D.pdf: 4732148 bytes, checksum: cd8cbf98531ac28e12f9feba2f8edd34 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar a ação antimicrobiana de óleos essenciais e frações de diferentes acessos de Mentha spp. contra Candida spp., identificando seus compostos e verificando sua citotoxicidade. Os 64 óleos essenciais de diferentes acessos de Mentha spp. foram extraidos utilizando as partes aéreas da planta fresca, por hidrodestilaçãoo em sistema tipo Clevenger. Os óleos foram testados contra isolados clínicos e de referência de Candida albicans (CBS 562) e Candida dubliniensis (CBS 7987). A CIM foi determinada por meio do método de microdiluição (CLSI, 2002). Os melhores acessos testados em células planctônicas foram fracionados em 5 partes em cromatografia de coluna seca e testados posteriormente contra biofilme de C. albicans (SC 5314). Com o inoculo padronizado em meio RPMI-1640, os biofilmes foram produzidos em placas esterilizadas de polietileno de 96 pocos, para testes dos óleos e frações em biofilme maduro e biofilme em formação, sendo quantificados com solução de XTT e analisados através de microscopia óptica e confocal a laser. Os compostos dos melhores óleos e frações foram identificados por cromatografia em camada delgada e cromatografia a gas com detector de massas. A citotoxicidade também foi provada em painel de diferentes linhagens celulares células epiteliais, por meio da avaliação da atividade antiproliferativa, in vitro, utilizando-se o ensaio de sulforrodamina B para avaliação do crescimento celular. O melhor rendimento em óleo essencial (base seca) foi observado para o acesso de M. rotundifolia CM 31 (1,5 %). Quatro óleos se destacaram, apresentando forte atividade com amplo espectro, sendo M. canadensis (CM 05) - (<0,007 a 0,500 mg/mL); M. spicata (CM 30) (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL); M. arvensis CM 36 (<0,007 mg/mL a 1 mg/mL) e M. suaveolens x spicata (CM 52) - (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL). As frações F2 e F3 de M. suaveolens x spicata CM 52 demonstraram a melhor atividade dentre os óleos e frações testadas, apresentando 49 % e 38 % de inibição na concentração de 0,5 mg/mL para biofilme maduro e 70 % de inibição (a 0,062 mg/mL) e 61 % de inibição (a 0,125 mg/mL), respectivamente, para inibição de biofilme em formação. Esses resultados foram confirmados pelas analises microscópicas. Os compostos majoritários do óleo de M. canadensis CM 05 foram carvona (74,84 %) e linalol (4,84 %);de M. spicata CM 30 oxido de piperitenona (28,05 %), beta-E-farneseno (18,58 %) e gama-muuroleno (17,38 %); M. arvensis CM 36 Linalol (33,24 %), acetato de linalol (21,97 %) e alfaterpineol (11,77 %); de M. suaveolens x spicata CM 52 pulegona (52,20 %), piperitenona (29,51 %) e gama-muuroleno (4,44 %). Os óleos essenciais de Mentha spp. apresentam atividade antimicrobiana contra células planctônicas de Candida spp. (de moderada a fraca), exceto os óleos originados dos acessos de M. canadensis CM 05, M. spicata CM 30, M. arvensis CM 36 e M. suaveolens x spicata CM 52. As fracoes F2 e F3 de Mentha suaveolens x spicata CM 52 demonstram efeito antimicrobiano inibitório sobre biofilme em formação e sobre biofilme maduro, alem de ausência de citotoxicidade para células testadas / Abstract: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils and fractions of different accessions of Mentha spp. against Candida spp., identifying compounds and verifying its cytotoxicity.The essential oils of 64 different accessions of Mentha spp. were extracted using the fresh aerial parts of the plant by hydrodistillation cleavenger type system Then, The the oils were tested against clinical isolates and reference strains Candida albicans (CBS 562) and Candida dubliniensis (CBS 7987). The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by microdilution method, using the CLSI protocol. The best accessions tested on planktonic cells were separated into 5 parts by dry column, and oils and fractions were subsequently tested against biofilms of C. albicans (SC 5314). With standardized inoculum in RPMI-1640, the biofilms were produced in sterile polyethylene plates with 96 wells, for to evaluate the oils and fractions in preformed biofilm and inhibition biofilm formation. After the biofilm was quantified with XTT solution and analyzed by optical and confocal microscopy. The compounds were further identified by thin layer chromatography (TLC) and gas chromatography mass spectrometry (GC-MS). The cytotoxicity was also tested in epithelial cells as well as antitumor activity, by evaluating the antiproliferative activity in different cell lines using the test sulforrodamina B (SBR) for evaluation of cell growth.The best yield in essential oil (dry basis) was observed for the accessions M. rotundifolia CM 31 (1.5% dry basis). Among the 64 oils, four stood out, showed strong activity with broad spectrum, inhibiting all strains tested, and these, M. canadensis (CM 05) - (<0.007 to 0.187 mg/mLto 0.500 mg/ml), M. spicata (CM 30) - (0.062 mg/mL to 0.500 mg/ml), M. arvensis CM 36 (<0.007 mg/mL to 1 mg/mL) and M. spicata x suaveolens (CM 52) - (0.062 mg/mL to 0.500 mg/mL). Fractions F2, F3 M. spicata x suaveolens CM 52 showed the best activity among the tested oils and fractions, showing 49% and 38% inhibition at 0.5 mg/mL for preformed biofilm and 70% inhibition (at 0.062 mg/mL) and 61% inhibition (at 0.125 mg/mL), respectively, for inhibitory biofilm formation. These results were confirmed by microscopic analysis. The mainly oil M. canadensis 05 CM were carvone (74.84%), linalool (4.84 %); M. spicata CM piperitenone oxide were 30 (28.05%), beta-E-farnesene (18.58%) and gamma-muuroleno (17.38%); M. arvensis CM 36 were Linalool (33.24%), acetate, linalool (21.97%) and alphaterpineol (11.77%); M. spicata x suaveolens CM 52 were pulegone (52.20 %), piperitenone (29.51 %) and gamma-muurolene (4.44 %). Fractions F2 and F3 showed antiproliferative activity for most strains, showing lack of cytotoxicity in epithelial cells tested.The essential oils of Mentha spp. exhibit antimicrobial activity against planktonic cells of Candida spp. (moderate to weak), except oils originating from accessions of M. canadensis CM 05, M. spicata CM 30, M. arvensis CM 36 and M. suaveolens x spicata CM 52. The fractions F2 and F3 of Mentha spicata x suaveolens CM 52 shows antimicrobial effect on preformed biofilm and inhibition biofilm, and absence of cytotoxicity to mammalian cells / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-27T15:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BusatodeFeiria_SimoneNataly_M.pdf: 4206047 bytes, checksum: a3eb9ecd9d5d79dbc2d0c70b9963370d (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Estudos com espécies de Mentha spp. em vários laboratórios de pesquisa, presentes também em nossa área, têm demonstrado um potencial de ação antimicrobiano, em especial, atividade antifúngica contra espécies do gênero Candida. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade antifúngica do óleo essencial de diferentes espécies de Mentha spp. obtidos em períodos sazonais ao longo de um ano de coleta, contra leveduras do gênero Candida e avaliar a inibição de formação de hifas por Candida albicans após exposição ao óleo. As espécies de Mentha (M. aquatica, M. arvensis e M. piperita) foram coletadas mensalmente e o óleo essencial extraído através do método de hidrodestilação por arraste de vapor de água. Os óleos obtidos foram analisados de acordo com seu rendimento e composição através da cromatografia gasosa- CG-MS. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada através do método de microdiluição seriada (CLSI, 2008) e a formação de hifas foi analisada através da leitura da densidade óptica em espectrometria através do aparelho de ELISA, após exposição da levedura, Candida albicans (CBS 562) ao soro fetal bovino e 10% de CO2. Os óleos essenciais de Mentha testados se mostraram biologicamente ativos contra espécies de Candida spp., demonstrando atividade antimicrobiana contra células planctônicas de Candida spp. na concentração de 2mg/ml nos meses de abril a setembro; ainda, revelaram atividade de inibição de formação de hifas, fator de virulência encontrado para Candida albicans em até 38%. Os rendimentos dos óleos essenciais de Mentha spp. foram dependentes de variações ambientais ocorridas nas diferentes estações do ano, sendo menor nos períodos de abril à setembro e maior nos períodos de outubro à março. A detecção de determinados componentes bioativos resultantes do metabolismo secundário de espécies de Mentha se mostraram dependentes de condições climáticas sazonais. As condições climáticas mais favoráveis para a obtenção da atividade antifúngica dos óleos de Mentha spp. contra leveduras do gênero Candida estão relacionados ao período em que ocorreram temperaturas mais baixas (abril à setembro). Os resultados encontrados nessa pesquisa demonstram que estudos envolvendo plantas com potencial antimicrobiano, devem ser encorajados como alternativas clínicas de substâncias potencialmente ativas contra microrganismos / Abstract: Studies with species of Mentha spp. in many research laboratories, also present in our area, they have demonstrated antimicrobial action potential, in particular antifungal activity against Candida species. The purpose of this study was to evaluate the antifungal activity of the essential oil of different species of Mentha spp. obtained from seasonal periods over a year of collection, against yeasts of the genus Candida and to evaluate the inhibition of hyphae formation by Candida albicans after exposure to oil. The Mentha species (M. aquatica, M. arvensis and M. piperita) were collected monthly and the essential oil extracted by hydrodistillation method in clevenger. The oils were analyzed according to their yield and composition by gas chromatography GC-EMS. The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined through of the serial microdilution method (CLSI, 2008) and the formation of hyphae was analyzed by the optical density spectrometry by ELISA after exposure of the yeast, Candida albicans (CBS 562) in fetal bovine serum and 10% CO2. The Mentha essential oils tested showed to be biologically active against species of Candida spp., because demonstrated antimicrobial activity against planktonic cells of Candida spp. at a concentration of 2mg/ml in the months from April to September; still showed inhibition activity hyphal formation, virulence factor found for Candida albicans in 38%. The yields of essential oils of Mentha spp. were dependent on environmental variations in different seasons, being lower in the period april to september and higher in periods from october to march. The detection of certain bioactive components from the secondary metabolism is shown Mentha species dependent to seasonal climatic conditions. The most favorable climatic conditions for obtaining the antifungal activity of the oils of Mentha spp. against yeasts Candida was related to the period in which occur lower temperatures (april to september). The results in this study demonstrate that studies involving plants with antimicrobial potential, should be encouraged as alternative clinics of potentially active substances against microorganisms. / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestra em Biologia Buco-Dental