En un grupo de tumores de mama se decidió estudiar si la pérdida de función de la proteína Bax podía ser debida a la existencia de mutaciones frameshift. Los resultados obtenidos sugieren que en cáncer de mama, las mutaciones del gen bax no serían críticas para la carcinogénesis y el proceso de progresión tumoral. Este tipo de mutaciones sólo se han detectado en tumores con inestabilidad de microsatélites, por lo tanto decidimos estudiar cual era la incidencia de este tipo de alteración en nuestro grupo de tumores, encontrando que un 11,6 % eran inestables. La inestabilidad detectada quedó delimitada a las secuencias que afectaban a dinucleótidos, no se encontró ninguna alteración en las secuencias de mononucleótidos analizadas. Se encontró una asociación estadísticamente significativa entre la existencia de inestabilidad de microsatélites y la pérdida de apoptosis observada en los tumores. La mayor supervivencia celular resultado de la pérdida de apoptosis podría favorecer la existencia de este tipo de alteración en los tumores.Para corroborar si la pérdida de apoptosis se podía asociar a la existencia de inestabilidad de forma genérica en los tumores de mama, se decidió estudiar si la sobreexpresión de las proteínas antiapoptóticas Bcl-2 y Bcl-xL era capaz de inducir un acúmulo de alteraciones genéticas, y el efecto que las mismas podían tener sobre el proceso de progresión tumoral.Al analizar el daño genómico en las líneas transfectadas con respecto a la línea parental, los transfectantes con genes antiapotóticos tenían un GDF mayor que los transfectantes con el gen control. Por lo tanto, la inhibición de la apoptosis era capaz de inducir un aumento en el número de alteraciones genéticas detectables por AP-PCR, contribuyendo así a la inestabilidad genética que caracteriza a las células tumorales. El análisis filogenético de las líneas transfectadas, con respecto a la línea parental indicaba que los transfectantes con genes antiapoptóticos tenían un parentesco más cercano, originado por una mayor similitud de las alteraciones genéticas, mientras que las alteraciones de la línea control presentaban un mayor grado de divergencia. El análisis de los resultados mediante un programa de clusters mostraba la presencia de 3 zonas donde el tipo de alteraciones presentes en las líneas transfectadas con los genes antiapoptóticos y con el gen control son divergentes.Al analizar el GDF de las diferentes variantes tumorales y metastáticas, tomando como referencia las líneas derivadas de la generación anterior los resultados indicaban que a medida que avanzaba el proceso de progresión tumoral, el número de alteraciones genéticas detectadas iba en aumento, tanto a nivel de tumores como de metástasis. Este aumento de inestabilidad se correlaciona con una mayor capacidad tumorigénica y metastática de las líneas celulares. Sin embargo, las variantes celulares con mayor capacidad tumorigénica y metastática no son las que presentan un mayor número de alteraciones. Estos resultados indicarían que sólo una parte de las alteraciones detectadas son responsables del fenotipo tumoral y metastático. Por lo tanto quizá las alteraciones detectadas en el control son más aleatorias y sin repercusión biológica, mientras que la sobreexpresión de moléculas antiapopotóticas da de entrada una ventaja de crecimiento, con lo cual la célula es capaz de progresar con un menor número de alteraciones genéticas, pero de mayor efectividad biológica.El daño genómico de las metástasis con diferente organoespecificidad mostraba un comportamiento diferencial, tanto en relación con el número como la naturaleza de las mismas, en función del órgano de origen. Finalmente, decidimos estudiar si la organoespecificidad de las metástasis podía ser debida a cambios en la expresión génica. Estos estudios se hicieron utilizando la técnica de microarrays. Una vez hecho el análisis estadístico se determinaron genes asociados a actividad metastática, que serían aquellos genes que aparecían diferencialmente expresados en las cuatro variantes metastáticas analizadas. También se identificaron los genes cuya expresión se modificaba conjuntamente en las dos metástasis ganglionares, y aquellos cuya expresión diferencial se asociaba a la presencia de metástasis ósea. / We studied in a group of breast cancer samples if the loss of function of Bax protein was due to frameshift mutations. Our results show that in breast cancer, bax mutations are not relevant for tumoral progression. This kind of alterations was only found in tumors with microsatellite instability, so we decide to know the incidence of this kind of instability in our samples, the result was that 11,6 % of the tumors show instability. The instability was detected only in dinucleotide sequences, no alteration was found in the mononucleotides analyzed. There was an association, with stadistic significance, between the microsatellite instability and the loss of apoptosis detected in the tumors. Loss of apoptosis can promote survival and this could favour the induction of this kind of alteration in tumors.To confirm if there is an association between loss of apoptosis and genetic instability in breast cancer cells, we studied if the overexpression of the antiapoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-xL was able to induce an accumulation of genetic alterations, and which will be the effect of this alterations in tumor progression.The analysis of the genomic damage in transfected cells with regard to the parental line, show that cell lines overexpressing antiapoptotic genes have a greater GDF than control cells. So, the inhibition of apoptosis can induce an increase in the amount of genetic alterations detectable by AP-PCR, and can contribute to the genetic instability of tumoral cells.The philogenetic analysis of the transfected cells with regard to the parental line show that cell lines overexpressing antiapoptotic genes have a nearest relationship, due to a greater similarity between the genetic alterations. On the other hand, the alterations of the control cells are more divergent. The analysis of these results with a cluster software shows the existence of at least 3 regions with different kind of genetic alterations between cells transfected with antiapoptotic genes and control cell.The GDF analysis in the tumoral and metastatic variants, taking as a reference the cell lines derived from the previous generation, show that with the advance of tumor progression, there was an increase in the number of genetic alterations, both, in tumors and in metastasis. This increase in the detected instability correlates with a greater tumorigenic and metastatic ability of the cell lines. Nevertheless, the cell variants with a greater tumorigenic and metastatic ability show less genetic alterations. These results indicate that only some of the genetic alterations detected are responsible of the tumoral and metastatic phenotype. So, perhaps the alterations detected in the control cells are more random, and without biological significance. On the other hand, the overexpression of antiapoptotic genes could give the cells and inicial advantage, so the tumoral cell will be able to progress with less alterations, but more eficient ones.The genomic damage in metastasis with different organospecificity show a differential behaviour with regard to the organ of origin both, with regard to the number and the nature of the genetic alterations detected.Finally, we studied if the organospecificity of metastasis could be due to changes at gene expression level. These experiments have been performed using microarrays. After the analysis of the data, we have determined wich genes were associated to the metastatic ability of the cells. These genes will be those whose expression was modified simultaneously in the 4 metastatic variants studied. We have also determined wich genes were differentially expressed in lymh node metastasis, and those that were associated to bone metastasis.

Submitted by REJANE GUERRA RIBEIRO null (rejane.guerra.vet@hotmail.com) on 2016-08-26T00:58:28Z No. of bitstreams: 3 DEFESA REJANE prontissima.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) DEFESA REJANE prontissima.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) DEFESA REJANE prontissima.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 6 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 6 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-08-29T17:26:20Z (GMT) / Submitted by REJANE GUERRA RIBEIRO null (rejane.guerra.vet@hotmail.com) on 2016-08-29T21:20:42Z No. of bitstreams: 3 DEFESA REJANE prontissima.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) DEFESA REJANE prontissima.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) DEFESA REJANE prontissima.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-30T18:27:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 simm_rgr_dr_jabo.pdf: 1740796 bytes, checksum: 636e38027d66190d89b4310dcd64cc92 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T18:27:17Z (GMT). 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Usando transdutor linear em frequência de 12MHz e ganho de 58%, foram avaliados 30 linfonodos axilares (direito e esquerdo) de 16 cadelas hígidas, peso corporal, médio de 12,8Kg. Em apenas um animal não foi possível visibilizar o linfonodo axilar, pois a presença de gordura em excesso impediu sua visibilização. Todos os linfonodos apresentaram características normais: formato ovalado, contorno regular, hipoecogênico e vascularização hilar. Concluiu-se que o exame ultrassonográfico do linfonodo axilar deva fazer parte do estadiamento de cadelas com tumor de mama, pois é um exame exequível quando se tem conhecimento anatômico da região explorada. Após este estudo prévio, foram selecionadas 30 cadelas com tumores de mama, que foram submetidas a avaliação ultrassonográfica dos linfonodos axilares e inguinais, a fim de classificá-los em metastático ou não metastático. As características ultrassonográficas dos tumores mamários também foram descritas, visando diferenciar os critérios ecográficos relacionadas com o comportamento benigno e maligno destes tumores. Concluiu-se que a avaliação ultrassonográfica não permitiu predizer a malignidade dos tumores mamários (p=0,99) e nem a presença de metástase (p>0,5) e reatividade (p>0,5) em linfonodos locorregionais. / The dogs, as well as women, have a high incidence of breast cancer, so the constant search for earlier diagnosis. The evaluation of locoregional lymph nodes should be part of the clinical staging of bitches with mammary neoplasia. As the ultrasound examination is an important tissue valuation technique, the goal of this work is to standardize the scanning technique of axillary lymph node in dogs, and so help the sonographer to identify it more easily for further assessment of the parenchyma. Using linear transducer frequency of 12MHz and gain 58% were evaluated 30 axillary lymph nodes (right and left) of 16 otherwise healthy dogs, body weight, average 12,8Kg. In only one animal was not possible to visualize the axillary lymph nodes, because the presence of excess fat prevented their visualization. All lymph nodes were normal characteristics: oval shape, regular contour, hypoechoic and hilar vascularization. It was concluded that the sonographic examination of axillary lymph node should be part of the staging of bitches with breast tumor, it is a workable test when it has anatomical knowledge of the explored region. After this preliminary study, we selected 30 dogs with breast tumors, who underwent sonographic evaluation of the axillary and inguinal lymph nodes in order to classify them in metastatic or nonmetastatic. The ultrasonographic features of breast tumors have also been described, aiming to differentiate the sonographic criteria related to benign and malignant behavior of these tumors. It was concluded that the sonographic evaluation not possible to predict the malignancy of breast tumors (p = 0.99) nor the presence of metastasis (p> 0.5) and reactivity (p> 0.5) in locoregional lymph nodes.