Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2017-08-31T11:48:36Z No. of bitstreams: 2 cristiane Persel.pdf: 966698 bytes, checksum: 3cd3bbc33fd85ffcfae5c88b9acbec25 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-31T11:48:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 cristiane Persel.pdf: 966698 bytes, checksum: 3cd3bbc33fd85ffcfae5c88b9acbec25 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Wickerhamomyces anomalus is mycocin-producing yeast, these substances are glycoproteins secreted by some yeasts and have antimicrobial action with broad spectrum of activity. Escherichia coli is the predominant bacterium of the coliform group, its presence in the water indicates fecal contamination, being used as indicator in microbiological analyzes of water. Although belonging to the human and animal microbiota can be pathogenic, causing various types of infections. The immobilization of cells and substances shows great potential of biotechnological application in several areas. In this way, this work aimed to evaluate the activity of free and immobilized mycocins, obtained from W. anomalus, against strains of E. coli and fecal coliforms. The broth microdilution method was used to evaluate the action of the free mycocins, in different dilutions, against 45 multiresistant strains of E. coli isolated from clinical samples. Mycocins were immobilized at different concentrations of sodium alginate and calcium chloride and tested for antimicrobial activity against E. coli strain ATCC25922 and fecal coliforms present in fecal contaminated water samples. The free mycocins were able to inhibit all the strains used in the broth microdilution, with 100% of the strains being inhibited by the pure used mycocins and, even when diluted, the mycocins showed an inhibitory action, the dilution of 1:2 inhibited 78.2% of the multiresistant strains of E. coli. The concentration of sodium alginate influenced the shape of the granules obtained in immobilization, a result not observed when the calcium chloride concentration varied. The mycocins immobilized with 2% sodium alginate and 0.2 mol/L CaCl2 showed better antimicrobial activity against E. coli strain ATCC25922. Fecal coliforms were inhibited by immobilized mycocins after 48h of incubation. In summary, in this study, mycocins were able to inhibit E. coli and coliforms present in samples of water contaminated with feces. Considering the problem of multiresistant strains of antibiotics and the need for new alternatives to improve water quality and sewage effluents, these results demonstrate a possible application as an alternative to antimicrobial agents. / Wickerhamomyces anomalus é uma levedura produtora de micocinas, estas substâncias são glicoproteínas secretadas por algumas leveduras e possuem ação antimicrobiana com amplo espectro de atividade. Escherichia coli é a bactéria predominante do grupo de coliformes, sua presença na água indica contaminação fecal, sendo utilizada como indicador em análises microbiológicas de água. Apesar de pertencer à microbiota humana e animal pode ser patogênica, causando diversos tipos de infecções. A imobilização de células e substâncias demonstra grande potencial de aplicação biotecnológica em diversas áreas. Desta maneira, este trabalho objetivou avaliar a atividade de micocinas livres e imobilizadas, obtidas de W. anomalus, frente às cepas de E. coli e coliformes fecais. Utilizou-se o método de microdiluição em caldo para avaliar a ação das micocinas livres, em diferentes diluições, frente a 45 cepas multirresistentes de E. coli isoladas de amostras clínicas. As micocinas foram imobilizadas em diferentes concentrações de alginato de sódio e cloreto de cálcio, e testadas para verificar a atividade antimicrobiana frente à cepa de E. coli ATCC25922 e coliformes fecais presentes em amostras de água contaminadas com fezes. As micocinas foram capazes de inibir todas as cepas utilizadas na microdiluição em caldo, sendo que 100% das cepas foram inibidas pelas micocinas utilizadas puras e, mesmo diluídas, as micocinas apresentaram ação inibitória, a diluição de 1:2 inibiu 78,2% das cepas de E. coli multirresistentes. A concentração de alginato de sódio influenciou no formato dos grânulos obtidos na imobilização, resultado não observado ao variar a concentração de cloreto de cálcio. As micocinas imobilizadas com alginato de sódio a 2% e CaCl2 0,2 mol/L apresentaram melhor atividade antimicrobiana frente à cepa de E. coli ATCC25922. Os coliformes fecais foram inibidos pelas micocinas imobilizadas após 48h de incubação. Em síntese, neste estudo, as micocinas foram hábeis em inibir E. coli e coliformes presentes em amostras de água contaminada com fezes. Considerando a problemática de cepas multirresistentes a antibióticos e a necessidade de novas alternativas para melhorar a qualidade da água e efluentes de esgoto, tais resultados demonstram uma possível aplicação como alternativa para agente antimicrobiano.

Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2018-05-25T12:38:46Z No. of bitstreams: 2 Daniele Schaab Boff Junges.pdf: 1381190 bytes, checksum: 1006e297cb0095fbdf1ae5c2a265f559 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-25T12:38:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Daniele Schaab Boff Junges.pdf: 1381190 bytes, checksum: 1006e297cb0095fbdf1ae5c2a265f559 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The killer system is the production of substances by yeast killer able to inhibit other microorganisms, this occurs in the natural environment as a way of competition between species by ensuring nutrients. Wickerhamomyces anomalus is a producer of yeast mycocin widely distributed in the environment and resistant to extremes of pH, temperature and osmolarity. Due to these characteristics, this yeast has been used in various industrial processes, especially in the food industry to control contaminants microorganisms. Its action is considered to be minimally toxic to human cells and low potential to induce microorganisms resistance, characteristics that makes the mycocins of W. anomalus an interesting candidate for medical application. Acinetobacter baumannii is a worldwide concern due to its multiresistance, having a high mortality rate and morbidity, especially in hospital environments. This study had as objective to determine the antimicrobial action of mycocins produced by W. anomalus against multiresistant strains of A. baumannii and to evaluate the toxicity of these compounds. The supernatants of WA40, WA45 and WA92 were tested on A. baumannii using the methods of broth microdilution, solid medium test and viability of A. baumannii. To evaluate the toxicity, was made the test of hemolysis and brine shrimp toxicity test. Results evidenced the antimicrobial activity of mycocins of W. anomalus, since even at high dilutions they were able to inhibit A. baumannii. In solid medium, it was possible to observe the formation of zone of inhibition when testing WA40, WA45 and WA92 on A. baumannii, and finally, the viability test showed that in only 3 hours the mycocins of WA45 were able inhibit 100% of the multidrug-resistant cells of A. baumannii followed by 4 h for WA40 and 6 h for WA92. The three supernatants were not cytotoxic when tested on human erythrocytes and Artemia salina. Thus, the micocins of W. anomalus were effective in this study and can be used in the development of new antimicrobial substances. / O sistema killer consiste na produção de substâncias por leveduras killer capazes de inibir outros microrganismos. Isso ocorre no habitat natural como uma forma de competição entre as espécies pela garantia de nutrientes. Wickerhamomyces anomalus é uma levedura produtora de micocinas amplamente distribuída no ambiente e resistente a condições extremas de pH, temperatura e osmolaridade. Devido a essas características, esta levedura vem sendo utilizada em vários processos industriais, principalmente na indústria alimentícia como controle de microrganismos contaminantes. Sua ação é considerada minimamente tóxica às células humanas e de baixo potencial à indução de resistência aos microrganismos, características que tornam as micocinas de W. anomalus interessantes candidatas à aplicação médica. Acinetobacter baumannii é uma preocupação mundial devido à sua multirresistência, tendo por isso alta taxa de mortalidade e morbidade, principalmente em ambientes hospitalares. Este trabalho teve como objetivo verificar a ação antimicrobiana de micocinas produzidas por W. anomalus frente a cepas multirresistentes de A. baumannii e avaliar a toxicidade destes compostos. Os sobrenadantes de WA40, WA45 e WA92 foram testados sobre A. baumannii utilizando os métodos de microdiluição em caldo, testes em meio sólido e viabilidade de A. baumannii. Para avaliar a toxicidade, fez-se os testes de hemólise e de toxicidade em Artemia salina Leach. Resultados evidenciaram a atividade antimicrobiana de micocinas de W. anomalus, uma vez que, mesmo altamente diluídas, elas foram capazes de inibir A. baumannii. Em meio sólido, foi possível observar a formação de zona de inibição ao testar micocinas de WA40, WA45 e WA92 sobre A. baumannii. E por fim, o teste de viabilidade mostrou que em apenas 3 h as micocinas de WA45 foram capazes de inibir 100% das células multirresistentes de A. baumannii, seguido de 4 h para WA40 e 6 h para WA92. Os três sobrenadantes não foram citotóxicos quando testados sobre hemácias e Artemia salina. Sendo assim, as micocinas de W. anomalus mostraram-se efetivas neste estudo e podem ser utilizadas no desenvolvimento de novas substâncias antimicrobianas.