PAES, F. A. Análise de comunidades microbianas de solo de manguezal por T-RFLP e microarranjos de DNA. 2008. XVI; 128 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Marinhas Tropicais) - Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Solange Gomes (solagom@yahoo.com.br) on 2013-02-06T18:56:41Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Araujo Paes.pdf: 880237 bytes, checksum: 6153306cc4bd44febecb7ee196c60094 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid(nadsa@ufc.br) on 2013-06-04T19:13:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Fernanda Araujo Paes.pdf: 880237 bytes, checksum: 6153306cc4bd44febecb7ee196c60094 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-04T19:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Araujo Paes.pdf: 880237 bytes, checksum: 6153306cc4bd44febecb7ee196c60094 (MD5) Previous issue date: 2008 / Os manguezais são ecossistemas importantes e produtivos, encontrados ao longo da linha da costa de regiões tropicais e subtropicias. Processos importantes, como a ciclagem de nutrientes, estão diretamente conectados à atividade das comunidades microbianas desses solos. Dada sua posição estratégica, os manguezais são bastante impactados no mundo todo. No Brasil, áreas importantes como a da Baía de todos os Santos (BA) são severamente afetadas pela presença do petróleo. Compreender as adaptações da microbiota local e sua dinâmica, frente às alterações ambientais, é essencial para que se consiga manter ou restaurar esses ecossistemas. A presente dissertação investigou a estrutura e a função de comunidades microbianas em uma área do manguezal da baía de Todos os Santos, poluída pela indústria do petróleo. Dois locais foram amostrados – um, situado na área de refinamento dessa indústria e o outro, distante desse local e usado como controle. Além dos dados abióticos medidos, dois métodos independentes de cultivo foram utilizados: T-RFLP e microarranjos de DNA. Os resultados de ambos os sítios, nos experimentos de T-RFLP, mostraram que as duas comunidades bacterianas diferem quanto à sua estrutura. Para o sítio amostrado na área da refinaria, um número maior de OTUs sugere um estímulo ambiental, na comunidade bacteriana, fato associável ao alto teor de matéria orgânica desse local. Para os microarranjos de DNA, categorias similares de genes foram detectadas, em ambos os locais, mas a especificidade de suas sequências foi distinta. Os genes que codificam para a remediação orgânica foram os mais representativos, mais de 40% do total nos dois sítios. Mesmo detectando categorias semelhantes, apenas 4% das sequências genéticas foram comuns aos sítios. Estes dados mostram que organismos diferentes são responsáveis por funções similares em cada ponto. A diferença entre os locais, observada nos experimentos, pode ser relacionada com o fato do sítio 1 situar-se numa região fortemente afetada por hidrocarbonetos. Utilizando-se índices ecológicos, os dados de T-RFLP indicaram o sítio 1 como mais diverso, enquanto os resultados dos microarranjos de DNA mostraram o oposto. Concluindo, a estrutura e função da microbiota local são afetadas pela presença da indústria do petróleo. Estudos adicionais poderão ajudar a compreender a dinâmica dessas comunidades microbianas, frente às futuras exposições ao óleo e/ou derivados.

A contaminação por metais e agentes microbiológicos na água de hemodiálise pode ocasionar manifestações clínicas nos pacientes em tratamento, como anemia, dor óssea, picos hipertensivos, distúrbios neurológicos, episódios de hipotensão, náuseas e vômitos. Avaliar e garantir níveis mínimos de contaminação por metais e micro-organismos na água de hemodiálise pode, assim, aumentar a segurança do paciente. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre a qualidade da água tratada para hemodiálise e as intercorrências clínicas apresentadas pelos pacientes. Foi utilizado um questionário para a coleta de informações referentes aos aspectos demográficos e hábitos de consumo, e um instrumento de registro mensal de intercorrências clínicas e parâmetros clínico-laboratoriais; tais informações foram obtidas por meio de entrevista e no prontuário do paciente, respectivamente. As dosagens de metais em sangue foram realizadas por EAA (Chama/ Forno de Grafite) no Setor de Metais do HCFMRP/USP, e em água por ICP/MS no Laboratório de Toxicologia e Saúde Ambiental da Universidade Rovira i Virgili, Espanha. A quantificação de bactérias heterotróficas foi realizada pelo Método \"Pour Plate\", a de Coliformes totais e E. coli por Tubos Múltiplos e a detecção de fungos filamentosos por Membrana Filtrante no Laboratório de Ecotoxicologia e Parasitologia Ambiental da EERP/USP. A quantificação de endotoxina foi realizada pela técnica cromogênica do lisado de Limulus Amebocyte, no Laboratório de Vacinas Gênicas da FMRP/USP. Para a análise dos dados foi aplicado o teste Wilcoxon- Mann Whitney bilateral ou Teste t bilateral no software R®, o teste de Kruskal-Wallis no software GraphPad Prism 6®, e ajustados modelos de regressão no software SAS/STAT®. Verificou-se que a concentração de Pb sérico entre os pacientes que exercem/exerciam atividades relacionadas à maior exposição a metais foi significativamente maior (p-valor = 0,0208) que aqueles que nunca realizaram tais atividades. A concentração média de Cu, Pb e Zn na água após filtração por osmose reversa (AFOR) foi inferior ao preconizado na RDC nº 154/2004 e RDC nº 11/2014 da ANVISA, somente o Al (15,35 ± 14,53 µg/L) apresentou concentração média superior a tais normativas. Não foi detectado presença, durante todo o período do estudo, de Cd, coliformes totais, E. coli e endotoxina na água AFOR. A contagem de bactérias heterotróficas foi significativamente maior (p-valor <0,0001) na água após a pré- filtração (APF) do que na água potável (AP) e na água AFOR. As concentrações de cloro total e nitrato foram significativamente maiores (p-valor <0,0001) na AP em relação à água APF e na água AFOR. A contagem de bactérias heterotróficas e a concentração de nitrato na água AFOR foi inferior ao preconizado nas normativas, o cloro total apresentou concentração média superior ao estabelecido na RDC nº 11/2014, mas dentro do limite preconizado pela RDC nº 154/2004. Foi verificado presença de fungos filamentosos em todos os pontos de coleta. Constatou-se que a diminuição da concentração de Cu e nitrato em água de hemodiálise foram significativos (p-valor = 0,001 e 0,0354, respectivamente) para explicar o aumento da concentração de hemoglobina em sangue. Embora a água utilizada no preparo do dialisato tenha apresentado excelente qualidade microbiológica e físico-química é importante o monitoramento contínuo para garantia dos parâmetros de qualidade e prevenção de intercorrências clínicas / The contamination by metals and microbiological agents in hemodialysis water can cause clinical manifestations in hemodialysis patients, such as anemia, bone pain, hypertensive peaks, neurological disturbances, hypotension episodes, nausea and vomiting. Evaluating and assuring minimum levels of contamination by metals and microorganisms in hemodialysis water can improve patient safety. The aim of the study was assess the relationship between the quality of treated water for hemodialysis and the clinical intercurrences presented by patients. A questionnaire was used to collect information about demographic characteristics and consumer habits, and an instrument was applied for monthly recording of clinical intercurrences and clinical laboratorial parameters. The data were obtained by interviews and from clinical records, respectively. Concentrations of metals in blood were determined by AAS (flame/graphite furnace) in the Metals Sector of HCFMRP/USP, and in water by ICP/MS in the Laboratory of Toxicology and Environmental Health of University Rovira i Virgili, Spain. The quantification of heterotrophic bacteria was performed by the pour plate method, the total coliforms and E. coli by multiple tubes, and filamentous fungi by the membrane filter at the Laboratory of Ecotoxicology and Environmental Parasitology of the EERP/USP. The quantification of endotoxin was performed by the chromogenic technique of Limulus Amebocyte lysate, at the Gene Vaccine Laboratory of the FMRP/USP. For data analysis, the bilateral Wilcoxon-Mann-Whitney or bilateral t-test was applied using the R® software, the Kruskal-Wallis test using GraphPad Prism 6®, and adjusted regression models with SAS/STAT®. The results showed that patients who reported having or having had job activities with high exposure to metals showed serum concentrations of Pb significantly higher (p-value = 0.0208) than patients without job exposure to metals. The mean concentrations of Cu, Pb and Zn in the water after reverse osmosis (ARO) were below the threshold limits set by RDC nº 154/2004 and RDC nº 11/2014 from the ANVISA; only Al (15.35 ± 14.53 µg/L) was present in average concentration higher than resolutions. The presence of Cd, total coliforms, E. coli and endotoxins in the water ARO during the study was not detected. The counting of heterotrophic bacteria was significantly higher (p-value <0.0001) in the water after the pre-filtration (APF) than the potable water (PW) and the wate ARO. The concentrations of total chlorine and nitrate were significantly higher (p-value <0.0001) in the PW than the water APF and the water ARO. The counting of heterotrophic bacteria and concentration of nitrate in the water ARO were below the reference limits, while the total chlorine was present in higher concentration than the established in RDC nº 11/2014 but lower than that in RDC nº 154/2004. Filamentous fungi were detected at all sampling points. The decrease in the levels of Cu and nitrate in hemodialysis water were significant (p value = 0.001 and 0.0354, respectively) to explaining the increase of hemoglobin concentration in the blood samples. Although the water used for dialysis showed excellen microbiological and physicochemical quality, it is important to monitor it regularly to assure the quality parameters and prevent clinical intercurrences

A contaminação por metais e agentes microbiológicos na água de hemodiálise pode ocasionar manifestações clínicas nos pacientes em tratamento, como anemia, dor óssea, picos hipertensivos, distúrbios neurológicos, episódios de hipotensão, náuseas e vômitos. Avaliar e garantir níveis mínimos de contaminação por metais e micro-organismos na água de hemodiálise pode, assim, aumentar a segurança do paciente. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre a qualidade da água tratada para hemodiálise e as intercorrências clínicas apresentadas pelos pacientes. Foi utilizado um questionário para a coleta de informações referentes aos aspectos demográficos e hábitos de consumo, e um instrumento de registro mensal de intercorrências clínicas e parâmetros clínico-laboratoriais; tais informações foram obtidas por meio de entrevista e no prontuário do paciente, respectivamente. As dosagens de metais em sangue foram realizadas por EAA (Chama/ Forno de Grafite) no Setor de Metais do HCFMRP/USP, e em água por ICP/MS no Laboratório de Toxicologia e Saúde Ambiental da Universidade Rovira i Virgili, Espanha. A quantificação de bactérias heterotróficas foi realizada pelo Método \"Pour Plate\", a de Coliformes totais e E. coli por Tubos Múltiplos e a detecção de fungos filamentosos por Membrana Filtrante no Laboratório de Ecotoxicologia e Parasitologia Ambiental da EERP/USP. A quantificação de endotoxina foi realizada pela técnica cromogênica do lisado de Limulus Amebocyte, no Laboratório de Vacinas Gênicas da FMRP/USP. Para a análise dos dados foi aplicado o teste Wilcoxon- Mann Whitney bilateral ou Teste t bilateral no software R®, o teste de Kruskal-Wallis no software GraphPad Prism 6®, e ajustados modelos de regressão no software SAS/STAT®. Verificou-se que a concentração de Pb sérico entre os pacientes que exercem/exerciam atividades relacionadas à maior exposição a metais foi significativamente maior (p-valor = 0,0208) que aqueles que nunca realizaram tais atividades. A concentração média de Cu, Pb e Zn na água após filtração por osmose reversa (AFOR) foi inferior ao preconizado na RDC nº 154/2004 e RDC nº 11/2014 da ANVISA, somente o Al (15,35 ± 14,53 µg/L) apresentou concentração média superior a tais normativas. Não foi detectado presença, durante todo o período do estudo, de Cd, coliformes totais, E. coli e endotoxina na água AFOR. A contagem de bactérias heterotróficas foi significativamente maior (p-valor <0,0001) na água após a pré- filtração (APF) do que na água potável (AP) e na água AFOR. As concentrações de cloro total e nitrato foram significativamente maiores (p-valor <0,0001) na AP em relação à água APF e na água AFOR. A contagem de bactérias heterotróficas e a concentração de nitrato na água AFOR foi inferior ao preconizado nas normativas, o cloro total apresentou concentração média superior ao estabelecido na RDC nº 11/2014, mas dentro do limite preconizado pela RDC nº 154/2004. Foi verificado presença de fungos filamentosos em todos os pontos de coleta. Constatou-se que a diminuição da concentração de Cu e nitrato em água de hemodiálise foram significativos (p-valor = 0,001 e 0,0354, respectivamente) para explicar o aumento da concentração de hemoglobina em sangue. Embora a água utilizada no preparo do dialisato tenha apresentado excelente qualidade microbiológica e físico-química é importante o monitoramento contínuo para garantia dos parâmetros de qualidade e prevenção de intercorrências clínicas / The contamination by metals and microbiological agents in hemodialysis water can cause clinical manifestations in hemodialysis patients, such as anemia, bone pain, hypertensive peaks, neurological disturbances, hypotension episodes, nausea and vomiting. Evaluating and assuring minimum levels of contamination by metals and microorganisms in hemodialysis water can improve patient safety. The aim of the study was assess the relationship between the quality of treated water for hemodialysis and the clinical intercurrences presented by patients. A questionnaire was used to collect information about demographic characteristics and consumer habits, and an instrument was applied for monthly recording of clinical intercurrences and clinical laboratorial parameters. The data were obtained by interviews and from clinical records, respectively. Concentrations of metals in blood were determined by AAS (flame/graphite furnace) in the Metals Sector of HCFMRP/USP, and in water by ICP/MS in the Laboratory of Toxicology and Environmental Health of University Rovira i Virgili, Spain. The quantification of heterotrophic bacteria was performed by the pour plate method, the total coliforms and E. coli by multiple tubes, and filamentous fungi by the membrane filter at the Laboratory of Ecotoxicology and Environmental Parasitology of the EERP/USP. The quantification of endotoxin was performed by the chromogenic technique of Limulus Amebocyte lysate, at the Gene Vaccine Laboratory of the FMRP/USP. For data analysis, the bilateral Wilcoxon-Mann-Whitney or bilateral t-test was applied using the R® software, the Kruskal-Wallis test using GraphPad Prism 6®, and adjusted regression models with SAS/STAT®. The results showed that patients who reported having or having had job activities with high exposure to metals showed serum concentrations of Pb significantly higher (p-value = 0.0208) than patients without job exposure to metals. The mean concentrations of Cu, Pb and Zn in the water after reverse osmosis (ARO) were below the threshold limits set by RDC nº 154/2004 and RDC nº 11/2014 from the ANVISA; only Al (15.35 ± 14.53 µg/L) was present in average concentration higher than resolutions. The presence of Cd, total coliforms, E. coli and endotoxins in the water ARO during the study was not detected. The counting of heterotrophic bacteria was significantly higher (p-value <0.0001) in the water after the pre-filtration (APF) than the potable water (PW) and the wate ARO. The concentrations of total chlorine and nitrate were significantly higher (p-value <0.0001) in the PW than the water APF and the water ARO. The counting of heterotrophic bacteria and concentration of nitrate in the water ARO were below the reference limits, while the total chlorine was present in higher concentration than the established in RDC nº 11/2014 but lower than that in RDC nº 154/2004. Filamentous fungi were detected at all sampling points. The decrease in the levels of Cu and nitrate in hemodialysis water were significant (p value = 0.001 and 0.0354, respectively) to explaining the increase of hemoglobin concentration in the blood samples. Although the water used for dialysis showed excellen microbiological and physicochemical quality, it is important to monitor it regularly to assure the quality parameters and prevent clinical intercurrences

Orientador: Orlando Necchi Junior / Banca: Luis Henrique Zanini Branco / Banca: Inessa Lacativa Bagatini / Banca: Mariana Cabral de Oliveira / Banca: Valéria Cassano / Resumo: A seção Virescentia do gênero Batrachospermum corresponde a espécies com aparência esverdeada e verticilos bem desenvolvidos, carposporófitos grandes produzidos isoladamente ou em pares e inseridos no eixo principal, ramos carpogoniais retos e curtos originados das células pericentrais ou células fasciculares proximais, e carpogônio com tricogínios alongados e pedicelados. O presente estudo teve como objetivo inferir as relações filogenéticas, bem como os limites de variação intra e interespecífico das espécies da seção Virescentia com base na análise morfológica e molecular, utilizando caracteres diagnósticos atualmente aceitos e dois marcadores moleculares: gene plastidial que codifica a subunidade grande da RUBISCO (rbcL - 1.282 pares de base, pb) e as regiões de "barcode" (664 pb) e "mini-barcode" (246 pb) do gene mitocondrial que codifica a subunidade 1 da citocromo c oxidase (cox1). Foram analisadas amostras provenientes das regiões biogeográficas neotropical, neártica e paleártica, além de exsicatas dos espécimes-tipo da seção provenientes do Herbário PC (Paris, França) e exsicatas de espécimes do Brasil e Japão. Análises baseadas nas sequências de rbcL, cox1 e "mini-barcode" foram congruentes, indicando níveis de divergência suficientes para distinguir espécies dentro da seção. Análises moleculares revelaram a seção Virescentia como monofilética e evidenciaram clados bem definidos, com nítida repartição biogeográfica e associados a uma divergência relativamente alta... / Abstract: Section Virescentia of genre Batrachospermum comprises species with a greenish appearance and well-developed whorls, carposporophytes are produced singly or in pairs along the main axis, carpogonial branches are straight and short, arise from pericentral cells or proximal fascicle cells and carpogonia are elongate with cylindrical and pedicellate trichogynes. The goals of this study were to infer the phylogenetic relationships, as well as the limits of intra and interspecific variation among the species of Virescentia section, based on morphological and molecular analyses, using the diagnostic characters currently accepted and two molecular markers: the plastidial gene that encodes the RUBISCO large subunit (rbcL - 1282 bp) and the "barcode" (664 bp) and "mini-barcode" (246 bp) regions of the mitochondrial gene cox1 that encodes the cytochrome c oxidase sub-unity 1. We analyzed samples from the neotropical, neartic and paleartic biogeographic realms and dried archival samples (type specimens) from PC Herbarium (Paris, France) and dried archival samples from Brazil and Japan. Analyses based on rbcL, cox1 and mini-barcode sequences were congruent and showed section Virescentia as a clear monophyletic group, with enough divergence to distinguish species among the section. Molecular analyses revealed the Virescentia section as monophyletic and showed well-defined clades, with distinct biogeographical distribution and associated with a relatively high divergence in sequences between these groups, suggesting that the samples of the different parts of the world correspond to at least five distinct species: B. viride-brasiliense, B. vogesiacum, B. helminthosum, Batrachospermum sp.1 and Batrachospermum sp.2. The examination of types, as well as critical samples in the history of the group, allowed to recognize ten species for the Virescentia section based on diagnostics ... / Doutor

Orientador: Orlando Necchi / Banca: Luis Henrique Zanini Branco / Banca: Mariana Cabral de Olievira / Banca: Daniela Milstein / Banca: Inessa Lacativa Bagatini / Resumo: A filogeografia de sete espécies de Batrachospermales (Batrachospermum viride-brasiliense, Kumanoa ambigua, Setacea puiggariana, Sirodotia delicatula e Sirodotia spp.) foi investigada em populações brasileiras com base em dois marcadores mitocondriais: a região espaçadora cox2-3 e a região de "barcode" cox1. As espécies apresentaram níveis de divergência genética semelhantes para ambos os marcadores utilizados. B. viride-brasiliense apresentou dez haplótipos de cox2-3 e nove haplótipos, de cox1, com variação entre os haplótipos de 0,3 - 2,4% e 0,6 - 1,8%, respectivamente. K. ambigua apresentou três haplótipos para cada um dos marcadores analisados, com variação de 0,6 - 2,4% para cox2-3 e 1,3 - 2,0% para cox1. S. puiggariana apresentou seis haplótipos de cox-2-3 e oito haplótipos de cox1, com variação entre os haplótipos de 0,3 - 2,4% e 0,2 - 2,4%, respectivamente. Sirodotia apresentou uma alta variação entre os haplótipos para ambos marcadores, mostrando uma espécie (S. delicatula), com baixa variação para cox2-3 e cox1 (0,3 - 2,2% e 0,2 - 0,4%; respectivamente) e um complexo (Sirodotia spp. formado por três espécies crípticas), com divergência de 0,3 - 7,0% para cox2-3 e 0,2 - 6,2% para cox1. Para a região espaçadora cox2-3, as sequências de K. ambigua apresentaram 335 pb, enquanto para as outras espécies, todas as sequências tiveram comprimento de 376 pb. Os haplótipos de cox2-3 diferiram em 13 posições para B. viride-brasiliense, nove para K. ambigua, 12 para S. puiggariana e oito para S. delicatula e 33 posições para Sirodotia spp. Para a região de "barcode" cox1, todas as espécies apresentaram sequencias de 664 pb de comprimento, com um número mais elevado de posições variáveis para os haplótipos: 28 para B. viride-brasiliense, 16 para K. ambigua, 25 para S. puiggariana, apenas quatro para S. delicatula e 48 para... / Abstract: The phylogeography of seven species of Batrachospermales (Batrachospermum viride-brasiliense, Kumanoa ambigua, Setacea puiggariana, Sirodotia delicatula e Sirodotia spp.) was investigated in Brazilian populations based on two mitochondrial markers: the spacer region cox2-3 and the cox1 barcode region. The species showed similar levels of genetic divergence for both markers used. B. viride-brasiliense had ten haplotypes of cox2-3 and nine haplotypes of cox1, with haplotypes ranging from 0.3 to 2.4% and 0.6 to 1.8%, respectively. Three haplotypes for each marker were observed for K. ambigua, ranging from 0.6 to 2.4% and 1.3 to 2.0% for cox2-3 and cox1, respectively. Setacea puiggariana had six haplotypes for cox2-3 and eight haplotypes for cox1, with haplotypes ranging from 0.3 to 2.4% for cox2-3 and 0.2 to 2.4, respectively. A high variation between haplotypes of Sirodotia were found for both markers, showing one group (S. delicatula), with low variation for cox2-3 and cox1 (from 0.3 to 2.2 and 0.2 to 0.4%, respectively), and Sirodotia spp, species complex with divergence from 0.2 to 7.0% for cox2-3 and 0.2 to 6.2 % for cox1, including three cryptic species. For the cox2-3 spacer region, K. ambigua sequences showed 335 bp, whereas for other species, all sequences have of 376 bp in length. The cox2-3 haplotypes differed in 13 positions for B. viride-brasiliense, nine for K. ambigua, 12 for S. puiggariana, eight for S. delicatula and 33 positions for Sirodotia spp. Sequences of the cox1 barcode region, for all species were 664 bp in length, with a higher number of variable positions among the haplotypes: 28 for B. viride-brasiliense, 16 for K. ambigua, 25 for S. puiggariana, only four for S. delicatula, and 48 for Sirodotia spp.. Analyses of the two markers used and the geographical distribution of populations showed that each species had different phylogeographic patterns, ... / Doutor

Microcistinas são potentes hepatotoxinas e promotoras de tumores encontradas em águas doces que causam riscos à saúde pública e, portanto, representam um sério problema para as estações de tratamento de água. O gênero de cianobactéria Microcystis é o mais conhecido produtor dessas toxinas e também o mais comumente encontrado formando florações em reservatórios de água usados para abastecimento público. Entretanto, algumas bactérias são capazes de utilizar essas toxinas como fonte de carbono o que pode contribuir para a sua remoção da água. Neste estudo foi avaliado o potencial de degradação da microcistina-XR (MCYST-XR) por bactérias heterotróficas isoladas de um sistema de abastecimento público de água da cidade de Piracicaba-SP. A cianotoxina MCYST-XR avaliada foi isolada da linhagem Microcystis aeruginosa NPLJ-4 e purificada. Culturas puras de 35 bactérias isoladas do sistema de abastecimento de água foram testadas. Para isso, cada bactéria foi inoculada em meio mínimo de sais contendo 60 g mL-1 de MCYST-XR purificada e após 144 horas a degradação da toxina foi avaliada por análise em LC-MS/MS. Os picos indicando a massa da microcistina-XR (m/z 1037) não foram detectados no meio de cultura de seis bactérias, as quais foram identificadas pelo sequenciamento quase completo do gene de RNAr 16S como pertencentes aos gêneros Pseudomonas sp., Sphingomonas sp., Microbacterium sp., Agromyces sp., Bacillus sp. e Acinetobacter sp. Este é o primeiro relato de uma linhagem de Acinetobacter capaz de degradar MCYST. A cinética de biodegradação da MCYST-XR mostrou redução de 80% em 72 horas, período em que as bactérias apresentaram o máximo crescimento. A presença do gene mlrA codificante da enzima microcistinase envolvida no metabolismo da microcistina foi avaliada nos genomas dos seis isolados bacterianos usando iniciadores de PCR específicos. Fragmentos de aproximadamente 800 pb foram amplificados em dois isolados, Bacillus sp.e Microbacterium sp. Ensaios de toxicidade utilizando o cládocero Daphnia similis foram realizados para verificar a efetiva remoção da MCYST-XR e a não formação de subprodutos tóxicos na via de biodegradacão. Os resultados negativos dos bioensaios após 48 horas indicaram a ausência de subprodutos tóxicos na via da degradação. / Microcystins are potent hepatotoxins and tumor promoters found in freshwaters that cause public health risks and thus represent a serious problem for water treatment plants. The cyanobacterium genus Microcystis is the most known toxin-producer and the most common bloom-forming in water reservoirs used for public supply. However, some bacteria are able to use these toxins as carbon source, which can contribute to its removal from water. This study assessed the potential for degradation of microcystin-XR (MCYST-XR) by heterotrophic bacteria isolated from a public water supply system of the city of Piracicaba-SP. The cyanotoxin MCYSTXR evaluated was isolated from Microcystis aeruginosa strain NPLJ-4 and purified. Pure cultures of 35 bacteria isolated from the water supply system were tested. For this, each bacterium was inoculated in minimal medium salts containing 60 g mL-1 of purified MCYST-XR and after 144 hours the toxin degradation was evaluated by LC-MS/MS analysis. The peaks indicating the mass of microcystin-XR (m/z 1037) were not detected in the culture medium of six bacteria, which were identified by almost complete sequencing of the 16S rRNA gene as belonging to the genera Pseudomonas sp., Sphingomonas sp., Microbacterium sp., Agromyces sp., Bacillus sp. and Acinetobacter sp. This is the first report of an Acinetobacter strain able to degrade MCYST. The kinetic of the MCYST-XR biodegration showed 80% reduction in 72 hours, period in which the bacteria showed the maximum growth. The presence of the mlrA gene encoding the microcystinase enzyme involved in the metabolism of microcystin was evaluated in the genomes of the six bacterial isolates using specific PCR primers. Fragments of approximately 800 bp were amplified in two isolates, Bacillus sp. and Microbacterium sp. Toxicity assays using the cladoceran Daphnia similis were conducted to verify the effective removal of MCYST-XR and the non formation of toxic by-products in the biodegradation pathway. The negative results of the bioassays after 48 hours indicated absence of toxic by-products in the biodegradation pathway.

O consumo de moluscos bivalves pode representar sérios riscos à saúde pública, pois refletem diretamente as condições do meio ambiente. Desta forma considera-se de extrema importância o consumo de mexilhões livres de contaminação. Esta pesquisa objetivou estudar a qualidade microbiológica das águas e mexilhões de três pontos de cultivo do município de Ubatuba, SP, a saber: Engenho da Almada, Barra Seca e Costão do Cedro em um período compreendido entre novembro de 2002 e março de 2003, totalizando 5 coletas mensais. Analisou-se na água: Bacillus cereus, Clostrídios Sulfito Redutores, Aeróbios Mesófilos, Staphylococcus aureus, Coliformes totais e fecais, Enterococos e Salmonella. Nos mexilhões foram analisados os mesmos microrganismos citados para água mais o Clostridium perfringens. Os resultados encontrados tanto para as análises de água como dos mexilhões foram satisfatórios, condizentes com a legislação brasileira em vigor, salvo a coleta do mês de março, do cultivo da Barra Seca, onde a média dos valores encontrados para coliformes fecais na água (5,7x101 NMP/100mL) foi superior ao recomendado pela legislação sendo detectado também neste mesmo cultivo e mês, presença de Salmonella em 25 g nas amostras de mexilhões. Mesmo que as contagens de S. aureus e B. cereus na carne estejam de acordo com a legislação em vigor, cuidados devem ser tomados quanto ao armazenamento e a forma de consumo. Averiguou-se a intensidade de interferências sazonais na contagem microbiana na água e constatou-se que a tábua de marés e o índice de insolação diária tiveram uma correlação negativa baixa, ao contrário do índice pluviométrico que apresentou correlação positiva alta. / The consumption of bivalve mollusks can represent serious risks to the public health, because they reflect the conditions of the environment directly. This way it is considered of extreme importance the consumption of mussels without contamination. This work aims of studing the water and mussels microbiology quality from three different seafood farms in Ubatuba, SP, to know: Engenho da Almada, Barra Seca and Costão do Cedro from November 2002 to March 2003, totaling five monthly. It was analyzed in the water: Bacillus cereus, Total Clostridia, Aerobic Mesophilic, Staphylococcus aureus, total and fecal coliforms, Enterococci and Salmonella. In the mussels the same microorganisms were analyzed mentioned for water more Clostridium perfringens. The results found in the water and in the mussels were satisfactory, suitable with the Brazilian legislation, except for the sample at Barra Seca’s beach, in March. The average of the values found at that place for fecal coliformes in the water was higher (5,7x101 MPN/100mL) than the recommended by the legislation. Even in this collection, it was also detected Salmonella in 25 g of mussels. Even if the counts of S. aureus and B. cereus in the mussesls are in agreement with the legislation in vigor cares they should be taken with relationship to the storage and the consumption form. The intensity of seasonal interferences was discovered in the microbial count in the water, in which was verified that the board of tides and the index of daily heatstroke had a low negative correlation unlike the index pluviometric it presented high positive correlation

Espera-se que a água esteja dentro de um padrão de qualidade após passar pelos processos de tratamento, que deve ser mantido durante a distribuição chegando aos pontos de consumo em condições de jamais prejudicar a saúde humana e animal. Contudo, há vários problemas de saúde que mundialmente vêm sendo associados ao suprimento público de água, fato que tem exigido um controle de qualidade cada vez mais rigoroso. Apesar dos recursos analíticos disponíveis, que facilitam a detecção e quantificação de agentes físicos, químicos e microbiológicos potencialmente perigosos à saúde, há grande dificuldade em estabelecer parâmetros de qualidade e definir índices toleráveis daquilo que se consideram como agentes potencialmente perigosos à saúde. Muitas doenças veiculadas pela água são causadas por bactérias principalmente do grupo entérico, cuja presença é determinada através de indicadores como os coliformes totais e termotolerantes. Outros microrganismos patogênicos podem estar presentes e não serem detectados por não estarem associados a estes indicadores. Como somente uma pequena quantidade de bactérias pode ser cultivada, como demonstrado pela avaliação direta de fragmentos de genomas, tornou-se evidente que em várias situações muitas espécies microbianas embora presentes deixem de ser detectadas. Como ainda não se dispõe de informações suficientes a este respeito, este trabalho teve o objetivo de comparar métodos de identificação de bactérias cultiváveis e incultiváveis que possam comprometer a qualidade da água, analisando-se amostras coletadas ao longo do sistema de abastecimento da cidade de Piracicaba, desde a captação e processo de tratamento, distribuição e estocagem residencial da água de abastecimento, o que permitiria avaliar possíveis fontes de contaminação ao longo do trajeto nas redes de distribuição até os pontos de consumo. Amostras foram coletadas nas épocas de chuvas e seca para avaliar a qualidade da água de abastecimento e os resultados mostram que as bactérias presentes no sistema de abastecimento da cidade é 61,29% maior como estimado por SSCP em relação aos métodos de cultivo testados, sendo que o cultivo em meio R2A apresentou contagens medias superiores ao cultivo em meio TSA. Bactérias patogênicas potenciais como Shigela flexneri e Sphingomonas sp. mostraram resistência aos processos de tratamento e purificação da água, sendo identificadas em muitos pontos no sistema de abastecimento de água da cidade e nas amostras dos reservatórios domiciliares. Bactérias como Salmonella typhi, Salmonella sp. e Staphylococcus aureus foram identificadas apenas em amostras coletadas na rede, ou seja, não detectadas na amostra do ponto de captação, indicando uma provável contaminação no trajeto de distribuição da água tratada. Contudo uma maior preocupação é voltada aos reservatórios domiciliares, pois algumas amostras apresentaram uma concentração de cloro abaixo do limite mínimo exigido em Portaria e, também, a presença de microrganismos patogênicos potenciais como os pertencentes ao Grupo Entérico. Estes dados revelam que apesar do eficiente sistema de tratamento da cidade, existem microrganismos que resistem aos processos de tratamento disseminando-se pela rede e que há possíveis focos de contaminação na rede de distribuição da água, podendo comprometer a qualidade da água disponível ao consumo publico. / It is expected that the water be within the quality standards after being through the treatment processes, which must be maintained along its distribution system up to the consumption points under the same conditions. However, there are several health problems worldwide associated to the public water supply. This fact has required a more and more rigorous quality control. It is difficult to set quality parameters and to define tolerant levels of what is considered as agents potentially dangerous to health, even if the analytical resources used to detect and quantify these chemical, physical, and microbiological agents are available. Bacteria, mainly from the enteric group, cause many diseases disseminated through water. Its presence is determined by using indicators, such as, total and thermo-tolerant coliforms. Other pathogenic microorganisms can be present in water without being detected, because they are not associated to those indicators. Just a small amount of bacteria can be cultivated, as demonstrated by direct evaluation of genome fragments. It is evident that in several situations many microbial species are not detected, even being present in the environment. As there is not enough information available, this work aimed to compare the identification methods of cultivated and non-cultivated bacteria that can damage the water quality. The samples were collected along the water supply system from Piracicaba, São Paulo, from the collection site, treatment process, and distribution to domestic reservoirs in order to check possible sources of contamination throughout the distribution system up to the consumption points. Samples were collected in the rainy and dry seasons to evaluate the quality of water supply. The results demonstrated that the population of bacteria present in the supply system from the city is 61.29% higher than that estimated by SSCP. In relation to the cultivation methods under testing, R2A medium presented higher average counting when compared to TSA medium. Potentially pathogenic bacteria, such as, Shigela flexneri and Sphingomonas sp., demonstrated resistance to water treatment and purification processes. These microorganisms were identified in several points along the city water supply system and in the samples collected from the domestic reservoirs. Bacteria, such as, Salmonella typhi, Salmonella sp. and Staphylococcus aureus were identified only in some samples collected along the distribution system, that is, they were not detected in the samples from the collecting point. This fact indicates that there might have been a contamination along the distribution of treated water. However, an important concern is towards the domestic reservoirs, because some samples presented a lower concentration of Chlorine than the minimum amount required by law, and the presence of potentially pathogenic microorganisms from the enteric group. These data reveal that, despite the efficiency of the water treatment system in the city, there are microorganisms resistant to the treatment processes, and they are disseminated through the distribution pipes. There might be possible contamination focuses along the distribution pipes that can damage the quality of water available to the public consumption.

Espera-se que a água esteja dentro de um padrão de qualidade após passar pelos processos de tratamento, que deve ser mantido durante a distribuição chegando aos pontos de consumo em condições de jamais prejudicar a saúde humana e animal. Contudo, há vários problemas de saúde que mundialmente vêm sendo associados ao suprimento público de água, fato que tem exigido um controle de qualidade cada vez mais rigoroso. Apesar dos recursos analíticos disponíveis, que facilitam a detecção e quantificação de agentes físicos, químicos e microbiológicos potencialmente perigosos à saúde, há grande dificuldade em estabelecer parâmetros de qualidade e definir índices toleráveis daquilo que se consideram como agentes potencialmente perigosos à saúde. Muitas doenças veiculadas pela água são causadas por bactérias principalmente do grupo entérico, cuja presença é determinada através de indicadores como os coliformes totais e termotolerantes. Outros microrganismos patogênicos podem estar presentes e não serem detectados por não estarem associados a estes indicadores. Como somente uma pequena quantidade de bactérias pode ser cultivada, como demonstrado pela avaliação direta de fragmentos de genomas, tornou-se evidente que em várias situações muitas espécies microbianas embora presentes deixem de ser detectadas. Como ainda não se dispõe de informações suficientes a este respeito, este trabalho teve o objetivo de comparar métodos de identificação de bactérias cultiváveis e incultiváveis que possam comprometer a qualidade da água, analisando-se amostras coletadas ao longo do sistema de abastecimento da cidade de Piracicaba, desde a captação e processo de tratamento, distribuição e estocagem residencial da água de abastecimento, o que permitiria avaliar possíveis fontes de contaminação ao longo do trajeto nas redes de distribuição até os pontos de consumo. Amostras foram coletadas nas épocas de chuvas e seca para avaliar a qualidade da água de abastecimento e os resultados mostram que as bactérias presentes no sistema de abastecimento da cidade é 61,29% maior como estimado por SSCP em relação aos métodos de cultivo testados, sendo que o cultivo em meio R2A apresentou contagens medias superiores ao cultivo em meio TSA. Bactérias patogênicas potenciais como Shigela flexneri e Sphingomonas sp. mostraram resistência aos processos de tratamento e purificação da água, sendo identificadas em muitos pontos no sistema de abastecimento de água da cidade e nas amostras dos reservatórios domiciliares. Bactérias como Salmonella typhi, Salmonella sp. e Staphylococcus aureus foram identificadas apenas em amostras coletadas na rede, ou seja, não detectadas na amostra do ponto de captação, indicando uma provável contaminação no trajeto de distribuição da água tratada. Contudo uma maior preocupação é voltada aos reservatórios domiciliares, pois algumas amostras apresentaram uma concentração de cloro abaixo do limite mínimo exigido em Portaria e, também, a presença de microrganismos patogênicos potenciais como os pertencentes ao Grupo Entérico. Estes dados revelam que apesar do eficiente sistema de tratamento da cidade, existem microrganismos que resistem aos processos de tratamento disseminando-se pela rede e que há possíveis focos de contaminação na rede de distribuição da água, podendo comprometer a qualidade da água disponível ao consumo publico. / It is expected that the water be within the quality standards after being through the treatment processes, which must be maintained along its distribution system up to the consumption points under the same conditions. However, there are several health problems worldwide associated to the public water supply. This fact has required a more and more rigorous quality control. It is difficult to set quality parameters and to define tolerant levels of what is considered as agents potentially dangerous to health, even if the analytical resources used to detect and quantify these chemical, physical, and microbiological agents are available. Bacteria, mainly from the enteric group, cause many diseases disseminated through water. Its presence is determined by using indicators, such as, total and thermo-tolerant coliforms. Other pathogenic microorganisms can be present in water without being detected, because they are not associated to those indicators. Just a small amount of bacteria can be cultivated, as demonstrated by direct evaluation of genome fragments. It is evident that in several situations many microbial species are not detected, even being present in the environment. As there is not enough information available, this work aimed to compare the identification methods of cultivated and non-cultivated bacteria that can damage the water quality. The samples were collected along the water supply system from Piracicaba, São Paulo, from the collection site, treatment process, and distribution to domestic reservoirs in order to check possible sources of contamination throughout the distribution system up to the consumption points. Samples were collected in the rainy and dry seasons to evaluate the quality of water supply. The results demonstrated that the population of bacteria present in the supply system from the city is 61.29% higher than that estimated by SSCP. In relation to the cultivation methods under testing, R2A medium presented higher average counting when compared to TSA medium. Potentially pathogenic bacteria, such as, Shigela flexneri and Sphingomonas sp., demonstrated resistance to water treatment and purification processes. These microorganisms were identified in several points along the city water supply system and in the samples collected from the domestic reservoirs. Bacteria, such as, Salmonella typhi, Salmonella sp. and Staphylococcus aureus were identified only in some samples collected along the distribution system, that is, they were not detected in the samples from the collecting point. This fact indicates that there might have been a contamination along the distribution of treated water. However, an important concern is towards the domestic reservoirs, because some samples presented a lower concentration of Chlorine than the minimum amount required by law, and the presence of potentially pathogenic microorganisms from the enteric group. These data reveal that, despite the efficiency of the water treatment system in the city, there are microorganisms resistant to the treatment processes, and they are disseminated through the distribution pipes. There might be possible contamination focuses along the distribution pipes that can damage the quality of water available to the public consumption.

Microcistinas são potentes hepatotoxinas e promotoras de tumores encontradas em águas doces que causam riscos à saúde pública e, portanto, representam um sério problema para as estações de tratamento de água. O gênero de cianobactéria Microcystis é o mais conhecido produtor dessas toxinas e também o mais comumente encontrado formando florações em reservatórios de água usados para abastecimento público. Entretanto, algumas bactérias são capazes de utilizar essas toxinas como fonte de carbono o que pode contribuir para a sua remoção da água. Neste estudo foi avaliado o potencial de degradação da microcistina-XR (MCYST-XR) por bactérias heterotróficas isoladas de um sistema de abastecimento público de água da cidade de Piracicaba-SP. A cianotoxina MCYST-XR avaliada foi isolada da linhagem Microcystis aeruginosa NPLJ-4 e purificada. Culturas puras de 35 bactérias isoladas do sistema de abastecimento de água foram testadas. Para isso, cada bactéria foi inoculada em meio mínimo de sais contendo 60 g mL-1 de MCYST-XR purificada e após 144 horas a degradação da toxina foi avaliada por análise em LC-MS/MS. Os picos indicando a massa da microcistina-XR (m/z 1037) não foram detectados no meio de cultura de seis bactérias, as quais foram identificadas pelo sequenciamento quase completo do gene de RNAr 16S como pertencentes aos gêneros Pseudomonas sp., Sphingomonas sp., Microbacterium sp., Agromyces sp., Bacillus sp. e Acinetobacter sp. Este é o primeiro relato de uma linhagem de Acinetobacter capaz de degradar MCYST. A cinética de biodegradação da MCYST-XR mostrou redução de 80% em 72 horas, período em que as bactérias apresentaram o máximo crescimento. A presença do gene mlrA codificante da enzima microcistinase envolvida no metabolismo da microcistina foi avaliada nos genomas dos seis isolados bacterianos usando iniciadores de PCR específicos. Fragmentos de aproximadamente 800 pb foram amplificados em dois isolados, Bacillus sp.e Microbacterium sp. Ensaios de toxicidade utilizando o cládocero Daphnia similis foram realizados para verificar a efetiva remoção da MCYST-XR e a não formação de subprodutos tóxicos na via de biodegradacão. Os resultados negativos dos bioensaios após 48 horas indicaram a ausência de subprodutos tóxicos na via da degradação. / Microcystins are potent hepatotoxins and tumor promoters found in freshwaters that cause public health risks and thus represent a serious problem for water treatment plants. The cyanobacterium genus Microcystis is the most known toxin-producer and the most common bloom-forming in water reservoirs used for public supply. However, some bacteria are able to use these toxins as carbon source, which can contribute to its removal from water. This study assessed the potential for degradation of microcystin-XR (MCYST-XR) by heterotrophic bacteria isolated from a public water supply system of the city of Piracicaba-SP. The cyanotoxin MCYSTXR evaluated was isolated from Microcystis aeruginosa strain NPLJ-4 and purified. Pure cultures of 35 bacteria isolated from the water supply system were tested. For this, each bacterium was inoculated in minimal medium salts containing 60 g mL-1 of purified MCYST-XR and after 144 hours the toxin degradation was evaluated by LC-MS/MS analysis. The peaks indicating the mass of microcystin-XR (m/z 1037) were not detected in the culture medium of six bacteria, which were identified by almost complete sequencing of the 16S rRNA gene as belonging to the genera Pseudomonas sp., Sphingomonas sp., Microbacterium sp., Agromyces sp., Bacillus sp. and Acinetobacter sp. This is the first report of an Acinetobacter strain able to degrade MCYST. The kinetic of the MCYST-XR biodegration showed 80% reduction in 72 hours, period in which the bacteria showed the maximum growth. The presence of the mlrA gene encoding the microcystinase enzyme involved in the metabolism of microcystin was evaluated in the genomes of the six bacterial isolates using specific PCR primers. Fragments of approximately 800 bp were amplified in two isolates, Bacillus sp. and Microbacterium sp. Toxicity assays using the cladoceran Daphnia similis were conducted to verify the effective removal of MCYST-XR and the non formation of toxic by-products in the biodegradation pathway. The negative results of the bioassays after 48 hours indicated absence of toxic by-products in the biodegradation pathway.