(Uncorrected OCR) Abstract Porphobilinogen (PBG) synthase condenses two molecules of aminolaevulinic acid (ALA) to form PBG in heme biosynthesis. The enzyme activity is sensitive to inhibition by heavy metals such as lead. It can act as a biological indicator of chronic lead POis~r\g to identify the risk group, especially in children, so that early treatment can be given to prevent possible permanent damages. A reversed-phase ion-pair HPLC analytical method for the assay of the PBG synthase activity based on detection of PBG production has been validated. A Hypersil CN column (150 x 4.6 mm; 5 urn) was employed together with a mixture of acetonitrile-40 mM phosphate buffer at pH 2.4 with 5 mM 1-heptanesulphonic acid (8:92, v/v). UV detection was performed at 240 nm. PBG was eluted as a spectrally pure peak resolved from its impurities in the methanol-inhibited enzyme reaction. The method was sensitive with a limit of quantitation of 2 ~M. The within-run and between-run precisions were 8.2% and 13.8% respectively. The recovery was 93.4 �7.1% (n=6). The preliminary reference range of the PBG synthase activities in the local pediatric population were from 21.5 to 26.3 ~mol/L RBC/min. Bland and Altman statistical analysis showed that the HPLC assay and the colorimetric assay could not be used interchangeably. The HPLC assay was an alternative way to assess the PBG synthase activities in the human erythrocyte samples. IV / abstract / toc / Medical Sciences / Master / Master of Medical Sciences

Thesis (Ph. D.)--University of Hong Kong, 2008. / Also available in print.

Thesis (M.Sc.(Chemistry))--University of Pretoria, 1999. / Includes abstract in English and Afrikaans. Includes bibliographical references.

Undergraduate honors paper--Mount Holyoke College, 2007. Dept. of Biological Sciences. / Includes bibliographical references (leaves 46-50).

Thesis (Ph. D.)--University of Texas at Austin, 2007. / Vita. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Texas at Austin, 2007. / Vita. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-16Bitstream added on 2014-06-13T20:03:10Z : No. of bitstreams: 1 vieira_dcm_dr_arafcf.pdf: 1317618 bytes, checksum: ac08bac3ba14ebc0cb17729af3a88219 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A cefuroxima sódica (CAS 56238-63-2) é uma cefalosporina de segunda geração, indicada nas infecções provocadas por micro-organismos Gram-positivos e Gram-negativos. Apesar deste fármaco ser altamente estudado e pesquisado no que concerne à atividade antimicrobiana, farmacocinética e farmacodinâmica, há poucos estudos na literatura em relação ao desenvolvimento de metodologia analítica para esta cefalosporina. Desta forma, pesquisas envolvendo métodos analíticos são de fundamental importância e altamente relevantes para otimizar sua análise na indústria farmacêutica e garantir a qualidade do produto já comercializado. Neste trabalho foram desenvolvidas e validadas técnicas de análise para cefuroxima sódica forma farmacêutica injetável: (i) espectrofotometria na região do UV a 280,0 nm com faixa de concentração 5,0 a 14,0 μg/mL, utilizando água como solvente, com exatidão de 100,82% e teor de 99,49%; (ii) doseamento microbiológico, método de difusão em ágar na faixa de concentração de 30,0 a 120,0 μg/mL, utilizando Micrococcus luteus ATCC 9341, com exatidão de 100,77% e teor de 99,96%; (iii) doseamento microbiológico, método turbidimétrico na faixa de concentração de 30,0 a 120,0 μg/mL, utilizando Micrococcus luteus ATCC 9341, com exatidão 100,21% e teor de 99,97%; (iv) espectrofotometria na região do visível a 510,0 nm, com concentração de 100,0 a 300,0 μg/mL utilizando o-fenantrolina como ligante, com exatidão de 99,98% e teor de 99,82%; (v) espectrofotometria na região do IV, com exatidão de 99,83% e teor de 100,25%; (vi) acidimetria, com exatidão de 100,32% e teor de 100,51%; (vii) volumetria em meio nãoaquoso, com exatidão de 100,40% e teor de 100,86%; (viii) iodometria, com exatidão de 99,97% e teor de 100,27%; (ix) cromatografia líquida de alta eficiência com detector UV a 280,0 nm, utilizando metanol:água (70:30) como fase... / Cefuroxime sodium (CAS 56238-63-2) is a second generation cephalosporin indicated in the infections caused by Gram-positive and Gram-negative microorganisms. Although this drug highly to be studied and to be searched with respect to the antimicobial pharmacokinetics and pharmacodynamics activity, there are few studies in relation to the development of analytical methodology for this cephalosporin in literature. In such a way, research involving highly excellent analytical methods is very important to optimize its analysis in the pharmaceutical industry and to guarantee the commercialized product quality. In this work, analytical methods for determination of cefuroxime injectable were validated: (i) UV spectrophotometry at 280 nm with concentration range of 5.0 a 14.0 μg/mL using water as solvent, with accuracy of 100.8% and quantitation of 99.49%; (ii) microbiological assay, agar diffusion method and (iii) turbidimetric method at concentration range 30.0 to 120.0 μg/mL, using Micrococcus luteus ATCC 9341 as indicator microorganism, accuracy 100.77%, quantitation of 99.96% and accuracy of 100.21% and quantitation 99.97%, respectively; (iv) visible spectrophotometric method at 510.0 nm with concentration range of 100.0 at 300.0 μg/mL, using o-phenantrolin as reagent, with accuracy of 99.98% and quantitation of 99.82%; (v) IR spectrophotometry, accuracy of 99.83% and quantitation of 100.25%; (vi) acidimetry, accuracy of 100.32% and quantitation of 100.51%; (vii) volumetry ina a non aqueous, accuracy of 100.40% and quantitation of 100.86%; (viii) iodometry accuracy of 99.97% and quantitation of 100.27%; (ix) HPLC method with UV detector at 280.0 nm using methanol and water (70:30), v/v) as mobile phase and concentration range of 10.0 a 15.0 μg/mL, flow of 0.8 ml/min, accuracy of 100.10% and quantitation of 99.84% and mean retention time of 1.8 minutes. Preliminary study of sodium cefuroxime...(Complete abstract click electronic access below)

Resumo: A cefuroxima sódica (CAS 56238-63-2) é uma cefalosporina de segunda geração, indicada nas infecções provocadas por micro-organismos Gram-positivos e Gram-negativos. Apesar deste fármaco ser altamente estudado e pesquisado no que concerne à atividade antimicrobiana, farmacocinética e farmacodinâmica, há poucos estudos na literatura em relação ao desenvolvimento de metodologia analítica para esta cefalosporina. Desta forma, pesquisas envolvendo métodos analíticos são de fundamental importância e altamente relevantes para otimizar sua análise na indústria farmacêutica e garantir a qualidade do produto já comercializado. Neste trabalho foram desenvolvidas e validadas técnicas de análise para cefuroxima sódica forma farmacêutica injetável: (i) espectrofotometria na região do UV a 280,0 nm com faixa de concentração 5,0 a 14,0 μg/mL, utilizando água como solvente, com exatidão de 100,82% e teor de 99,49%; (ii) doseamento microbiológico, método de difusão em ágar na faixa de concentração de 30,0 a 120,0 μg/mL, utilizando Micrococcus luteus ATCC 9341, com exatidão de 100,77% e teor de 99,96%; (iii) doseamento microbiológico, método turbidimétrico na faixa de concentração de 30,0 a 120,0 μg/mL, utilizando Micrococcus luteus ATCC 9341, com exatidão 100,21% e teor de 99,97%; (iv) espectrofotometria na região do visível a 510,0 nm, com concentração de 100,0 a 300,0 μg/mL utilizando o-fenantrolina como ligante, com exatidão de 99,98% e teor de 99,82%; (v) espectrofotometria na região do IV, com exatidão de 99,83% e teor de 100,25%; (vi) acidimetria, com exatidão de 100,32% e teor de 100,51%; (vii) volumetria em meio nãoaquoso, com exatidão de 100,40% e teor de 100,86%; (viii) iodometria, com exatidão de 99,97% e teor de 100,27%; (ix) cromatografia líquida de alta eficiência com detector UV a 280,0 nm, utilizando metanol:água (70:30) como fase... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cefuroxime sodium (CAS 56238-63-2) is a second generation cephalosporin indicated in the infections caused by Gram-positive and Gram-negative microorganisms. Although this drug highly to be studied and to be searched with respect to the antimicobial pharmacokinetics and pharmacodynamics activity, there are few studies in relation to the development of analytical methodology for this cephalosporin in literature. In such a way, research involving highly excellent analytical methods is very important to optimize its analysis in the pharmaceutical industry and to guarantee the commercialized product quality. In this work, analytical methods for determination of cefuroxime injectable were validated: (i) UV spectrophotometry at 280 nm with concentration range of 5.0 a 14.0 μg/mL using water as solvent, with accuracy of 100.8% and quantitation of 99.49%; (ii) microbiological assay, agar diffusion method and (iii) turbidimetric method at concentration range 30.0 to 120.0 μg/mL, using Micrococcus luteus ATCC 9341 as indicator microorganism, accuracy 100.77%, quantitation of 99.96% and accuracy of 100.21% and quantitation 99.97%, respectively; (iv) visible spectrophotometric method at 510.0 nm with concentration range of 100.0 at 300.0 μg/mL, using o-phenantrolin as reagent, with accuracy of 99.98% and quantitation of 99.82%; (v) IR spectrophotometry, accuracy of 99.83% and quantitation of 100.25%; (vi) acidimetry, accuracy of 100.32% and quantitation of 100.51%; (vii) volumetry ina a non aqueous, accuracy of 100.40% and quantitation of 100.86%; (viii) iodometry accuracy of 99.97% and quantitation of 100.27%; (ix) HPLC method with UV detector at 280.0 nm using methanol and water (70:30), v/v) as mobile phase and concentration range of 10.0 a 15.0 μg/mL, flow of 0.8 ml/min, accuracy of 100.10% and quantitation of 99.84% and mean retention time of 1.8 minutes. Preliminary study of sodium cefuroxime...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Coorientador: Magali Benjamim de Araújo / Banca: Maria Virginia Costa Scarpa / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Pierina Sueli Bonato / Banca: Maria José Vieira Fonseca / Doutor

O ensaio turbidimétrico tem como princípio a redução da densidade óptica em suspensões microbianas, decorrente o incremento na concentração do antibiótico. No ensaio convencional trabalha-se com tubos de ensaio que demandam longo tempo para visualização da resposta. Assim, o método empregando microplacas com leitura cinética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizado. O objetivo deste trabalho é desenvolver o método de doseamento microbiológico de vancomicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, assim como validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, exatidão e precisão. Adicionalmente foi contemplado desenvolvimento paralelo entre o método convencional e o cinético, de forma a permitir respaldo positivo quanto à validação. Sendo assim, através do estudo dos parâmetros de validação do método cinético, trabalhou-se em condições estabelecidas abrangendo curva-padrão de vancomicina com concentrações entre 0,6 e 1,0 µg/mL, e emprego de meio de cultura caldo de caseína-soja inoculado com Bacillus subtilis (ATCC 6633) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios em 5 horas de incubação. Conclui-se que o ensaio em microplacas permite avaliar, com vantagens, a atividade do antibiótico frente ao microrganismo-teste, permitindo facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados. / The principle of the turbidimetric assay is to reduce the optical density of microbial suspensions, due to the increase in the concentration of antibiotic. In the conventional test works with tubes that require long time to display the answer. Thus, the method using microplates with kinetic reading for the dosage of antibiotics is of considerable interest, since it allows possible to reduce the amount of material and analysis time required and allows for testing of large numbers of samples simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to develop the method of microbiological assay of vancomycin using microplates and kinetic reading mode, and to validate the method developed by evaluating the parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, accuracy and precision. Also included was the parallel development between the conventional method and the kinetic, to enable positive support for the validation. Thus, by studying the validation parameters of the kinetic method, worked under conditions laid down covering vancomycin standard curve with concentrations between 0.6 and 1.0 mg / mL, and soybean-casein broth inoculated with 5% of Bacillus subtilis (ATCC 6633). Satisfactory results were obtained with 5 hours incubation. In conclusion, the microplate assay allows to evaluate, with advantages, the activity of the antibiotic against the microorganism, allowing greater operational ease and rapidity of obtaining results.

A gentamicina é um complexo antibiótico de largo espectro, produzido por actinomicetos do gênero Micromonospora e classificado entre os antibióticos aminoglicosídeos, utilizado no tratamento de infecções graves, devidas a microrganismos Gram-negativos. Alterações da sua atividade antimicrobiana, não demonstradas pelos ensaios químicos, podem ser avaliadas pelos ensaios microbiológicos. O objetivo deste trabalho foi comparar os delineamentos experimentais 5 x 1, 2 x 2 e 3 x 1, avaliando-se os parâmetros de validação de especificidade, linearidade, faixa ou intervalo, precisão e exatidão para cada delineamento experimental em diferentes níveis de concentração, apresentações e lotes. O plano de trabalho constituiu-se na realização de 81 ensaios (em 3 réplicas) de doseamento microbiológico de gentamicina. As concentrações das soluções empregadas foram preparadas numa faixa de 1,0 µg/mL a 5,0 µg/mL, diluídos em tampão fosfato 0,1 M pH 8,0. O meio utilizado foi o meio antibiótico no. 11, com Staphyloccocus epidermidis (ATCC 12228). Empregou-se 21 mL de meio como camada base e 4 mL de meio inoculado à 1% como camada superfície. As placas foram incubadas por 16-18 horas à 37 ± 1 °C. Os três delineamentos empregados apresentaram especificidade adequada para análise de creme dermatológico e solução injetável contendo sulfato de gentamicina. Também apresentaram exatidão e linearidade no intervalo avaliado. Os delineamentos não apresentaram diferença significativa quanto a precisão. Os resultados foram comparados através da determinação de índices de capacidade do sistema de medição. A análise estatística demonstrou que não há diferença significativa entre os resultados obtidos pelos delineamentos 5 x 1, 2 x 2 e 3 x 1, sendo equivalentes e intercambiáveis. / Gentamicin is a broad-spectrum antibiotic complex produced by actinomycetes belonging to Micromonospora genus and classified among aminoglycoside antibiotics, used in the treatment of serious infections derived from Gram-negative microorganisms. Alterations of their antimicrobial activity not shown in chemical assays can be evaluated through microbiological assays. The aim of this work was to compare 5 x 1, 2 x 2 and 3 x 1 experimental designs, evaluating validation parameters of specificity, linearity, range, precision, and accuracy for each experimental design in different levels of concentration, presentation, and lots. It consisted of 81 assays (in 3 replicas) of gentamicin microbiological dosage. The concentrations of the solutions used were employed in a range from 1.0 µg/ml to 5.0 µg/ml, diluted in phosphate buffer 0.1 M pH 8.0. Antibiotic medium number 11 was used, with Staphyloccocus epidermis (ATCC 12228)21ml of medium were used as base layer and 4 ml of medium inoculated at 1% were used as surface layer. The plates were incubated for 16-18 hours at 37 ± 1 ºC. The three designs employed showed adequate specificity for analysis of dermatological cream and injectable solution containing gentamicin sulphate. They also showed accuracy and linearity in the range evaluated, but not a significant difference concerning precision. The results were compared by means of the determination of the rates of measurement system capacity. The statistical analysis demonstrated that there is no significant difference among the results obtained.