O ensaio turbidimétrico tem como princípio a redução da densidade óptica em suspensões microbianas, decorrente o incremento na concentração do antibiótico. No ensaio convencional trabalha-se com tubos de ensaio que demandam longo tempo para visualização da resposta. Assim, o método empregando microplacas com leitura cinética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizado. O objetivo deste trabalho é desenvolver o método de doseamento microbiológico de vancomicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, assim como validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, exatidão e precisão. Adicionalmente foi contemplado desenvolvimento paralelo entre o método convencional e o cinético, de forma a permitir respaldo positivo quanto à validação. Sendo assim, através do estudo dos parâmetros de validação do método cinético, trabalhou-se em condições estabelecidas abrangendo curva-padrão de vancomicina com concentrações entre 0,6 e 1,0 µg/mL, e emprego de meio de cultura caldo de caseína-soja inoculado com Bacillus subtilis (ATCC 6633) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios em 5 horas de incubação. Conclui-se que o ensaio em microplacas permite avaliar, com vantagens, a atividade do antibiótico frente ao microrganismo-teste, permitindo facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados. / The principle of the turbidimetric assay is to reduce the optical density of microbial suspensions, due to the increase in the concentration of antibiotic. In the conventional test works with tubes that require long time to display the answer. Thus, the method using microplates with kinetic reading for the dosage of antibiotics is of considerable interest, since it allows possible to reduce the amount of material and analysis time required and allows for testing of large numbers of samples simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to develop the method of microbiological assay of vancomycin using microplates and kinetic reading mode, and to validate the method developed by evaluating the parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, accuracy and precision. Also included was the parallel development between the conventional method and the kinetic, to enable positive support for the validation. Thus, by studying the validation parameters of the kinetic method, worked under conditions laid down covering vancomycin standard curve with concentrations between 0.6 and 1.0 mg / mL, and soybean-casein broth inoculated with 5% of Bacillus subtilis (ATCC 6633). Satisfactory results were obtained with 5 hours incubation. In conclusion, the microplate assay allows to evaluate, with advantages, the activity of the antibiotic against the microorganism, allowing greater operational ease and rapidity of obtaining results.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:55:58Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Danielle Araujo Agarrayua.pdf: 1130280 bytes, checksum: 6f617528add99a8da87014401d68f7a9 (MD5) Danielle Araujo Agarrayua.pdf.txt: 151796 bytes, checksum: 7c3e723a7d1342ed44f813ea78d87c0c (MD5) Danielle Araujo Agarrayua.pdf.jpg: 3661 bytes, checksum: 9892714258c31df68fc2e9bb66227e80 (MD5) Previous issue date: 2010-06-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Silver sulfadiazine (SDAg), the drug of choice for topical treatment of infected burns, possesses a broad spectrum of action and the incidence of resistance is considerably lower than with most antibiotics. In the presence of water SDAg undergoes a partial hydrolysis with formation of free sulfadiazine and silver, which has been previously shown to be photoreactive. This work presents as main objective evaluated the microbiological activity of SDAg associated with nanocapsules prepared from poly(-caprolactone), using capric and caprylic acid triglycerides and butyleneglicol cocoate as oily phase. The suspensions were prepared by interfacial deposition of pre-formed polymer and were characterized in term of SDAg contents, associated drug within the nanoparticles, pH, mean size of particles and zeta potentials of nanocapsules with SDAg, and evaluated the influence of the types of oils (capric and caprylic acid triglycerides and butyleneglicol cocoato) on nanocapsules physico-chemical caracterization. The microbial activity of SDAg nanocapsules were analyzed against microorganism Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) by the method of agar diffusion. The dosage technique of SDAg in HPLC was validated in all analyzed parameters and the results obtained met the specifications for linearity, precision, and accuracy. The suspension containing capric and caprylic acid triglycerides presented average size of 225 nm (±1,71), zeta potential of 26 mV (±1,09) and pH values of 5,6. This sample showed an 100 % of drug entrapment. The values size particle of the suspension containing butyleneglicol cocoato was 221,4 nm (±2,3), zeta potential of 27,9 mV (±1,7) and pH 5,7. Suspension with miglyol® SDAg contents were 77 % and 97,96%, determined by HPLC and microbiological assay, respectively, being higher when compared with suspension butyleneglicol cocoato, 38,5 % e 87,26 % demonstrating that the extraction of SDAg used is more efficient for the nanocapsules suspension with capric and caprylic acid triglycerides as oil core. Through the results, it is possible to conclude that the silver sulfadiazine nanocapsule suspensions are an alternative for the corporation in topical formulations. / Sulfadiazina de prata (SDAg), é o fármaco de escolha no tratamento tópico de infecções em queimaduras, possui um amplo espectro de ação e a incidência de resistência é consideravelmente menor do que a maioria dos antibióticos. Na presença de água a SDAg sofre hidrólise parcial com formação de sulfadiazina livre e prata, que tem mostrado ser previamente fotorreativa. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito anitimicrobiano da SDAg associada a nanocápsulas preparadas a partir de poli(-caprolactona), usando triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico e cocoato de butilenoglicol como fase oleosa. As suspensões foram preparadas pelo método de deposição interfacial de um polímero préformado e foram posteriormente caracterizadas através da determinação do teor de SDAg, taxas de associação, diâmetro médio das partículas, polidispersão e do potencial zeta das nanocápsulas contendo SDAg. Foi avaliada a influência dos óleos utilizados (Triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico ou cocoato de butilenoglicol) sobre a caracterização físicoquímica das nanocápsulas. A atividade antimicrobiana das nanocápsulas contendo SDAg foi analisada contra o microrganismo Pseudomonas aeruginosa(ATCC 27853) pelo método de difusão em ágar. A técnica de doseamento da SDAg por CLAE foi validada em todos os parâmetros analisados e os resultados atenderam as especificações de linearidade, precisão e exatidão. As suspensões contendo triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico apresentaram tamanho médio de 225 nm (±1,71), potencial zeta de - 26 mV (±1,09) e valores de pH de 5,6. Estas amostras apresentaram 100% de taxa de associação. Os valores do tamanho de partícula da suspensão contendo cocoato de butilenoglicol foram de 221,4 nm (±2,3), o potencial zeta foi 27,9 (±1,7) e o pH 5,7. A suspensão preparada com triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico apresentou teor de SDAg de 77 % e 97,96 %, determinada por CLAE e ensaio microbiológico, respectivamente, sendo maior quando comparada com a suspensão preparada com cocoato de butilenoglicol, 38,5 % e 87,26 %, demonstrando que o processo de extração da SDAg utilizado é mais eficiente para a suspensão de nanocápsula com triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico como núcleo oleoso. Através dos resultados, pode-se concluir que as suspensões contendo nanocápsulas de sulfadiazina de prata podem ser uma alternativa para a incorporação em formulações de uso tópico.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-15T13:23:42Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_DaielleAraujoAgarryua.pdf: 1132186 bytes, checksum: 3379cc72a5bc22d01ddce8ebea0eb66a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_DaielleAraujoAgarryua.pdf: 1132186 bytes, checksum: 3379cc72a5bc22d01ddce8ebea0eb66a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2010-06-24 / Silver sulfadiazine (SDAg), the drug of choice for topical treatment of infected burns, possesses a broad spectrum of action and the incidence of resistance is considerably lower than with most antibiotics. In the presence of water SDAg undergoes a partial hydrolysis with formation of free sulfadiazine and silver, which has been previously shown to be photoreactive. This work presents as main objective evaluated the microbiological activity of SDAg associated with nanocapsules prepared from poly( -caprolactone), using capric and caprylic acid triglycerides and butyleneglicol cocoate as oily phase. The suspensions were prepared by interfacial deposition of pre-formed polymer and were characterized in term of SDAg contents, associated drug within the nanoparticles, pH, mean size of particles and zeta potentials of nanocapsules with SDAg, and evaluated the influence of the types of oils (capric and caprylic acid triglycerides and butyleneglicol cocoato) on nanocapsules physico-chemical caracterization. The microbial activity of SDAg nanocapsules were analyzed against microorganism Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) by the method of agar diffusion. The dosage technique of SDAg in HPLC was validated in all analyzed parameters and the results obtained met the specifications for linearity, precision, and accuracy. The suspension containing capric and caprylic acid triglycerides presented average size of 225 nm (±1,71), zeta potential of – 26 mV (±1,09) and pH values of 5,6. This sample showed an 100 % of drug entrapment. The values size particle of the suspension containing butyleneglicol cocoato was 221,4 nm (±2,3), zeta potential of – 27,9 mV (±1,7) and pH 5,7. Suspension with miglyol® SDAg contents were 77 % and 97,96%, determined by HPLC and microbiological assay, respectively, being higher when compared with suspension butyleneglicol cocoato, 38,5 % e 87,26 % demonstrating that the extraction of SDAg used is more efficient for the nanocapsules suspension with capric and caprylic acid triglycerides as oil core. Through the results, it is possible to conclude that the silver sulfadiazine nanocapsule suspensions are an alternative for the corporation in topical formulations. / Sulfadiazina de prata (SDAg), é o fármaco de escolha no tratamento tópico de infecções em queimaduras, possui um amplo espectro de ação e a incidência de resistência é consideravelmente menor do que a maioria dos antibióticos. Na presença de água a SDAg sofre hidrólise parcial com formação de sulfadiazina livre e prata, que tem mostrado ser previamente fotorreativa. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito anitimicrobiano da SDAg associada a nanocápsulas preparadas a partir de poli( -caprolactona), usando triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico e cocoato de butilenoglicol como fase oleosa. As suspensões foram preparadas pelo método de deposição interfacial de um polímero préformado e foram posteriormente caracterizadas através da determinação do teor de SDAg, taxas de associação, diâmetro médio das partículas, polidispersão e do potencial zeta das nanocápsulas contendo SDAg. Foi avaliada a influência dos óleos utilizados (Triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico ou cocoato de butilenoglicol) sobre a caracterização físicoquímica das nanocápsulas. A atividade antimicrobiana das nanocápsulas contendo SDAg foi analisada contra o microrganismo Pseudomonas aeruginosa(ATCC 27853) pelo método de difusão em ágar. A técnica de doseamento da SDAg por CLAE foi validada em todos os parâmetros analisados e os resultados atenderam as especificações de linearidade, precisão e exatidão. As suspensões contendo triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico apresentaram tamanho médio de 225 nm (±1,71), potencial zeta de - 26 mV (±1,09) e valores de pH de 5,6. Estas amostras apresentaram 100% de taxa de associação. Os valores do tamanho de partícula da suspensão contendo cocoato de butilenoglicol foram de 221,4 nm (±2,3), o potencial zeta foi – 27,9 (±1,7) e o pH 5,7. A suspensão preparada com triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico apresentou teor de SDAg de 77 % e 97,96 %, determinada por CLAE e ensaio microbiológico, respectivamente, sendo maior quando comparada com a suspensão preparada com cocoato de butilenoglicol, 38,5 % e 87,26 %, demonstrando que o processo de extração da SDAg utilizado é mais eficiente para a suspensão de nanocápsula com triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico como núcleo oleoso. Através dos resultados, pode-se concluir que as suspensões contendo nanocápsulas de sulfadiazina de prata podem ser uma alternativa para a incorporação em formulações de uso tópico.

O ensaio turbidimétrico tem como princípio a redução da densidade óptica em suspensões microbianas, decorrente o incremento na concentração do antibiótico. No ensaio convencional trabalha-se com tubos de ensaio que demandam longo tempo para visualização da resposta. Assim, o método empregando microplacas com leitura cinética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizado. O objetivo deste trabalho é desenvolver o método de doseamento microbiológico de vancomicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, assim como validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, exatidão e precisão. Adicionalmente foi contemplado desenvolvimento paralelo entre o método convencional e o cinético, de forma a permitir respaldo positivo quanto à validação. Sendo assim, através do estudo dos parâmetros de validação do método cinético, trabalhou-se em condições estabelecidas abrangendo curva-padrão de vancomicina com concentrações entre 0,6 e 1,0 µg/mL, e emprego de meio de cultura caldo de caseína-soja inoculado com Bacillus subtilis (ATCC 6633) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios em 5 horas de incubação. Conclui-se que o ensaio em microplacas permite avaliar, com vantagens, a atividade do antibiótico frente ao microrganismo-teste, permitindo facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados. / The principle of the turbidimetric assay is to reduce the optical density of microbial suspensions, due to the increase in the concentration of antibiotic. In the conventional test works with tubes that require long time to display the answer. Thus, the method using microplates with kinetic reading for the dosage of antibiotics is of considerable interest, since it allows possible to reduce the amount of material and analysis time required and allows for testing of large numbers of samples simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to develop the method of microbiological assay of vancomycin using microplates and kinetic reading mode, and to validate the method developed by evaluating the parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, accuracy and precision. Also included was the parallel development between the conventional method and the kinetic, to enable positive support for the validation. Thus, by studying the validation parameters of the kinetic method, worked under conditions laid down covering vancomycin standard curve with concentrations between 0.6 and 1.0 mg / mL, and soybean-casein broth inoculated with 5% of Bacillus subtilis (ATCC 6633). Satisfactory results were obtained with 5 hours incubation. In conclusion, the microplate assay allows to evaluate, with advantages, the activity of the antibiotic against the microorganism, allowing greater operational ease and rapidity of obtaining results.

As tetraciclinas são encontradas no mercado sob várias formas farmacêuticas, sendo provenientes de diversos laboratórios farmacêuticos. Com o objetivo de avaliar a qualidade destes medicamentos, foram realizados os ensaios de dissolução in vitro e determinação quantitativa. Um total de 38 amostras de cápsulas de cloridrato de tetraciclina, fosfato de tetraciclina e cloridrato de oxitetraciclina e drágea de cloridrato de doxiciclina, englobando 12 fabricantes, foram analisadas. A dissolução do princípio ativo foi determinada para todas as amostras, conforme o método recomendado pela USP XXIII. Das amostras, duas foram reprovadas e outras quatro foram aprovadas após o reteste. A variação dos valores individuais obtidos no ensaio de dissolução para cada amostra, foi significativa, apresentando coeficiente de variação de até 14,2 %. A determinação quantitativa através do método microbiológico turbidimétrico empregando Staphylococcus aureus ATCC 29737, resultou em duas amostras de um mesmo fabricante com potência muito abaixo do limite especificado de 90 a 125 % do valor rotulado, com 55.5 e 68,7 %. Estudo comparativo desta metodologia com o método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi realizado. Para isto, o método da USP XXIII foi escolhida após o ensaio preliminar, seguido de determinação dos parâmetros de validação e adequação do método. O sistema cromatográfico estabelecido consistiu de coluna de fase reversa SYMMETRYTM C8 e fase móvel composta de oxalato de amônio 0,09 M, dimetilformamida e fosfato dibásico de amônio 0.18 M (64:32:4.7) com pH entre 7,6 e 7.7. Os resultados para determinação de cloridrato de tetraciclina confirmaram os valores obtidos no ensaio microbiológico, sendo reprovadas duas amostras. O teor máximo encontrado de 4-epianidrotetraciclina foi de 0,5 %, abaixo do limite de 3 % especificado na USP XXIII. Na comparação entre os dois métodos, foram observados resultados sempre superiores para o método microbiológico. A análise estatística destes resultados mostrou diferença significativa entre as médias das determinações obtidas a partir de cada método. / Tetracyclines are avaiable under several pharmaceutical forms and manufactured by different laboratories. Aiming at the evalution of the quality of these medicines, assays of in vitro dissolution and quantitative determination have been performed in 38 samples of tetracycline hydrochloride and phosphate and oxytetracycline hydrochloride capsules and docycycline hydrochloride coated tablet taken from 12 manufactures. The range of dissolution of the substance was determined in all the samples, according to the method recommended by USP XXIII. On the whole, only two of samples were rejected and all the others approved without restrictions, except four of them, wich required a retest. The evaluation of the individual values obtained in the assay of dissolution in each sample was significant, with a variation coefficient of up to 14.2%. The quantitative determination through the turbidimetric microbiological method employing Staphylococcus aureus ATCC 29737, resulted in two samples of tetracycline hydrochloride from the same manufatures with potency of 55.5 % and 68.7 % below the specified limit from 90 % to 125 % the labeled value. A comparative study of this method and the HPLC one was then performed. The USP XXIII method was chosen after a preliminary assay, followed by the determination of its validation parameters and system suitability. The established chromatographic method employed reversed phase column SYMMETRYTM C8 (octylsilane chemically bounded to totally porous sílica particles) and mobile phase consisting of ammonium oxalate 0.09 M, dimethyformamide and dibasic ammonium phosphate 0.18 M (63.9:32:4.7) adjusted to pH 7.6-7.7. The results confirmed the values obtained in the microbiological assay. When this method (HPLC) was used for the determination of 4-epianidrotetracycline, a maximum of 0.5 % was found, below the limit of 3% specified in the USP XXIII. The comparison between both methods reavealed constant superior results in the microbiological one, and the difference between the averages of the determinations from the methods was meaningful.

As tetraciclinas são encontradas no mercado sob várias formas farmacêuticas, sendo provenientes de diversos laboratórios farmacêuticos. Com o objetivo de avaliar a qualidade destes medicamentos, foram realizados os ensaios de dissolução in vitro e determinação quantitativa. Um total de 38 amostras de cápsulas de cloridrato de tetraciclina, fosfato de tetraciclina e cloridrato de oxitetraciclina e drágea de cloridrato de doxiciclina, englobando 12 fabricantes, foram analisadas. A dissolução do princípio ativo foi determinada para todas as amostras, conforme o método recomendado pela USP XXIII. Das amostras, duas foram reprovadas e outras quatro foram aprovadas após o reteste. A variação dos valores individuais obtidos no ensaio de dissolução para cada amostra, foi significativa, apresentando coeficiente de variação de até 14,2 %. A determinação quantitativa através do método microbiológico turbidimétrico empregando Staphylococcus aureus ATCC 29737, resultou em duas amostras de um mesmo fabricante com potência muito abaixo do limite especificado de 90 a 125 % do valor rotulado, com 55.5 e 68,7 %. Estudo comparativo desta metodologia com o método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi realizado. Para isto, o método da USP XXIII foi escolhida após o ensaio preliminar, seguido de determinação dos parâmetros de validação e adequação do método. O sistema cromatográfico estabelecido consistiu de coluna de fase reversa SYMMETRYTM C8 e fase móvel composta de oxalato de amônio 0,09 M, dimetilformamida e fosfato dibásico de amônio 0.18 M (64:32:4.7) com pH entre 7,6 e 7.7. Os resultados para determinação de cloridrato de tetraciclina confirmaram os valores obtidos no ensaio microbiológico, sendo reprovadas duas amostras. O teor máximo encontrado de 4-epianidrotetraciclina foi de 0,5 %, abaixo do limite de 3 % especificado na USP XXIII. Na comparação entre os dois métodos, foram observados resultados sempre superiores para o método microbiológico. A análise estatística destes resultados mostrou diferença significativa entre as médias das determinações obtidas a partir de cada método. / Tetracyclines are avaiable under several pharmaceutical forms and manufactured by different laboratories. Aiming at the evalution of the quality of these medicines, assays of in vitro dissolution and quantitative determination have been performed in 38 samples of tetracycline hydrochloride and phosphate and oxytetracycline hydrochloride capsules and docycycline hydrochloride coated tablet taken from 12 manufactures. The range of dissolution of the substance was determined in all the samples, according to the method recommended by USP XXIII. On the whole, only two of samples were rejected and all the others approved without restrictions, except four of them, wich required a retest. The evaluation of the individual values obtained in the assay of dissolution in each sample was significant, with a variation coefficient of up to 14.2%. The quantitative determination through the turbidimetric microbiological method employing Staphylococcus aureus ATCC 29737, resulted in two samples of tetracycline hydrochloride from the same manufatures with potency of 55.5 % and 68.7 % below the specified limit from 90 % to 125 % the labeled value. A comparative study of this method and the HPLC one was then performed. The USP XXIII method was chosen after a preliminary assay, followed by the determination of its validation parameters and system suitability. The established chromatographic method employed reversed phase column SYMMETRYTM C8 (octylsilane chemically bounded to totally porous sílica particles) and mobile phase consisting of ammonium oxalate 0.09 M, dimethyformamide and dibasic ammonium phosphate 0.18 M (63.9:32:4.7) adjusted to pH 7.6-7.7. The results confirmed the values obtained in the microbiological assay. When this method (HPLC) was used for the determination of 4-epianidrotetracycline, a maximum of 0.5 % was found, below the limit of 3% specified in the USP XXIII. The comparison between both methods reavealed constant superior results in the microbiological one, and the difference between the averages of the determinations from the methods was meaningful.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work presents the development and validation of analytical methods to assay daptomycin injection. Daptomycin is a drug of a new class of antibiotics, known as cyclic lipopeptides. It was approved in USA in 2003 and in Brazil in 2009. Up to now, there are no reports about methods to assay the drug in pharmaceutical products, both in scientific literature or in official compendia. Methods to identify daptomycin in raw material were realized as solubility, melting point, infrared spectrophotometry (IR), ultraviolet spectrophotometry (UV) and differential scanning calorimetry (DSC) and they showed appropriate results. The following methods to assay daptomycin injection were developed and validated: high performance liquid chromatography (HPLC), microbiological assay (turbidimetric) and UV-spectrophotometry. All of them were validated according current guidelines, by the following parameters: specificity, linearity, precision, accuracy and robustness, being all the requirements met. The mean values of daptomycin assay by the three methods were: 100,23 ± 0,59% (HPLC); 100,96 ± 2,58% (turbidimetric assay) and 98,98 ± 1,35% (UV-spectrophotometry). They were compared by ANOVA, which indicated that HPLC and turbidimetric assay are interchangeable. The stress testing showed that daptomycin is very susceptible to alkaline medium and that the degradation follows first order kinetic, in the conditions adopted. It was found that the degradation product(s) of daptomycin do not have antimicrobial activity. Considering their characteristics, HPLC and turbidimetric assays can be used in routine quality control and in stability studies of daptomycin injection. / Este trabalho apresenta o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para o doseamento da daptomicina injetável. A daptomicina é um antibiótico pertencente a uma nova classe de antimicrobianos, conhecidos como lipopeptídeos cíclicos. Foi aprovada para comercialização nos Estado Unidos em 2003 e no Brasil em 2009. Até o momento, não foram relatados métodos de quantificação para o fármaco em produtos farmacêuticos, tanto na literatura científica quanto em compêndios oficiais. Foram realizados métodos para a caracterização da matéria-prima como solubilidade, ponto de fusão, espectrofotometria no infravermelho (IV) e na região do ultravioleta (UV) e calorimetria exploratória diferencial (DSC), sendo que os mesmos permitiram a identificação do fármaco na matéria-prima. Os seguintes métodos para análise quantitativa da daptomicina injetável foram desenvolvidos e validados: cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), ensaio microbiológico (método turbidimétrico) e espectrofotometria na região do UV. Todos os métodos foram validados de acordo com as guias vigentes, frente aos parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão e robustez, tendo sido atendidos os requisitos estabelecidos. Os teores médios de daptomicina na formulação em estudo, pelos métodos desenvolvidos (n=12/método) foram: 100,23 ± 0,59% (CLAE); 100,96 ± 2,58% (ensaio microbiológico) e 98,98 ± 1,35% (espectrofotometria no UV). Esses resultados foram comparados pelo teste de ANOVA, que indicou que os métodos de CLAE e microbiológico são intercambiáveis. Pelo estudo de degradação forçada verificou-se que a condição que induz à maior degradação do fármaco é o meio alcalino, sendo que a reação segue cinética de primeira ordem nas condições usadas. Constatou-se ainda que a amostra degradada da daptomicina não tem ação antimicrobiana. Pelas suas características, os métodos de CLAE e microbiológico podem sem usados no controle de qualidade de rotina e em estudos de estabilidade da formulação injetável de daptomicina.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Luciana_Conceicao.pdf: 1166387 bytes, checksum: 74e97c6a817eb6fb90d26b94051d237d (MD5) Previous issue date: 2012-12-20 / The application of a material after periodontal surgery is recommended to reduce postoperative bleeding, to protect the wound area and to avoid the formation of excessive granulation tissue. The current trend is the development of new biomaterials eugenol-free for surgical application. The aim of this study was to develop and characterize a periodontal dressing based on photopolymerizable methacrylate monomers. For this purpose, a screening was made to determine the best formulation based on the ease of handling and the use of Exothane 8 , camphorquinone, silica and quartz particles. Three groups were tested: Gperio (Group of periodontal dressing Periobond®, Dentsply); Gbar (Group of periodontal dressing Barricaid®, Caulk), which served as the reference group and Gexp (Group of experimental material). The physical-mechanical performance of the experimental composite and the commercial references Periobond® and Barricaid® (control group) were tested using in vitro tests of tensile strength (n = 15) and sorption and solubility (n = 10). Cytotoxicity (MTT colorimetric assay) and genotoxicity by micronuclei (MN) tests were performed in a cell lineage of mouse fibroblasts 3T3/NIH, in triplicate, in order to characterize the biological response of these materials. Microbiological test assess the amount of viable bacteria of Enterococcus faecalis anaerobic and aerobic and total microorganisms. Data were subjected to statistical analysis based on the model of normal distribution and equal variance One-Way ANOVA, considering the value of P<0.05 as statistically significant. There were no statistically significant differences between the median values of Gexp and Gbar, for ultimate tensile strength. Regarding the sorption there was statistical difference between Gperio and Gexp and between Gperio and Gbar (P=<0.001). There was no difference when comparing Gbar and Gexp. The solubility showed no statistical difference between groups. In general, the cytotoxic effects of the materials were time dependent according to eluate extraction periods (24h, 48h and 7 days). No statistical difference at 24h between Gexp and Gperio. At 72h, differences were observed between Gexp and Gperio (P<0.001) with Gexp showing the best results. Similar results were seen between Gbar and Gperio (P<0.001). At 7 days, statistical difference was observed between Gbar and Gperio (P<0.05). In genotoxicity test no difference was found among the groups. In microbiological assay no statistical difference was found for E. faecalis anaerobic, E. faecalis aerobic and for total microorganisms. We conclude that Gexp experienced similar behavior to the commercial samples and can be possibly used as a periodontal dressing; however, more studies are needed at pre-clinical and clinical levels / A aplicação de um material após a cirurgia periodontal é recomendada para reduzir o sangramento pós-operatório, proteger a área da ferida e evitar a formação excessiva de tecido de granulação. A tendência atual é o desenvolvimento de novos biomateriais para aplicação cirúrgica livres de eugenol. O objetivo do presente estudo foi desenvolver e caracterizar um material cirúrgico periodontal baseado em monômeros metacrilatos fotopolimerizável com formação de polímero de alta flexibilidade. Para isso, foi realizado um screening para se determinar a melhor fórmula baseada na facilidade de manuseio do material e considerando a utilização de Exothane 8 , canforoquinona, e partículas de sílica e quartzo. Três grupos foram testados; Gperio (Grupo cimento periodontal Periobond®, Dentsply); Gbar (Grupo cimento periodontal Barricaid®, Caulk, que serviu como grupo de referência comercial) e Gexp (Grupo do material experimental). Foi avaliado o desempenho físico-mecânico do compósito experimental e das referências comerciais: Periobond® e Barricaid® (grupos controle), através dos ensaios in vitro de resistência à tração (n=15) e sorção e solubilidade (n=10). Testes de citotoxidade (ensaio colorimétrico com MTT) e de genotoxicidade através do ensaio de micronúcleos (MN) em linhagem celular de fibroblastos de camundongo 3T3/NIH, foram realizados em triplicata, com o intuito de caracterizar a resposta biológica desses materiais. Teste microbiológico para avaliar a quantidade de bactérias viáveis de Enterococcus faecalis anaeróbicos, aeróbicos e micro-organismos totais. Os dados obtidos foram submetidos ao método estatístico baseado no modelo de distribuição normal e igualdade de variância (ANOVA 1 via), considerando-se o valor de P<0,05 como estatisticamente significante. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os valores medianos do Gexp e Gbar, em relação à resistência máxima a tração. Em relação à sorção houve diferença estatística entre Gperio e Gexp e entre Gperio e Gbar (P<0,001). Não houve diferença estatisticamente significante quando comparamos Gbar e Gexp. Em relação à solubilidade não houve diferença estatística entre os grupos. Em geral, os efeitos citotóxicos dos materiais foram dependentes do tempo de extração do eludato (24h, 48h e 7 dias). Foi encontrada diferença estatística no tempo de 24h entre Gexp e Gperio. No tempo de 72h houve diferença entre Gexp e Gperio (P<0,001), tendo o primeiro melhor comportamento, da mesma forma entre Gbar e Gperio (P<0,001). Em 7 dias, houve diferença estatística entre Gbar e Gperio, tendo resultado de P<0,05. No teste de genotoxicidade não foi encontrada diferença estatística entre os grupos. No ensaio microbiológico não foi encontrada diferença estatística para E. faecalis anaeróbicos, E. faecalis aeróbicos ou micro-organismos totais. Concluímos que Gexp teve comportamento semelhante aos controles podendo ser utilizado como material para recobrimento de feridas cirúrgicas periodontais, sendo necessários mais estudos de fase pré-clínica e clínica.

Itraconazole is a triazole antifungical agent with a broad spectrum of activity belonging to the class of azole, indicated in the treatment of different types of mycotic infections systemic and local. Its mechanism of action is based on the ability to inhibition of synthesis of ergosterol which is a component of vital importance to the cell membrane of the fungi. This drug has only official methodology for raw material, described in British and European Pharmacopeia. In this paper, following the main guidelines for validation, were developed and validated quantitative analytical methods that can be applied both for the raw materials as the finished product containing itraconazole capsules through a high performance liquid chromatography (HPLC) with detection in the ultraviolet (254 nm, C8 reversed-phase column, mobile phase acetonitrile : water (65:35), the temperature of 25 °C) and microbiological assay by agar diffusion, with planning 3x3, employing Candida Albicans ATCC 10231 as microorganism testing in the culture medium antibiotic N° 19 in the region of the ultraviolet spectrophotometry (256 nm, with final solutions in 0.1 mol l-1 hydrochloric acid). All methods showed appropriate linearity, precision, accuracy, robustness and specificity. / O itraconazol é um antifúngico triazólico de amplo espectro de ação pertencente à classe dos azóis, indicado no tratamento de diferentes tipos de infecções micóticas sistêmicas e superficiais. Seu mecanismo de ação baseia-se na capacidade de inibição da síntese do ergosterol que é um componente de vital importância para a membrana das células dos fungos. Este fármaco possui metodologia descrita, somente, para matéria-prima, que se encontram oficializadas nas Farmacopéias Britânica e Européia. Neste trabalho foram desenvolvidos e validados, em conformidade com guias nacionais e internacionais, métodos analíticos quantitativos que podem ser empregados tanto para matéria-prima quanto para forma farmacêutica de cápsulas contendo itraconazol. Utilizaram-se as metodologias: cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE) com detecção na região do ultravioleta (UV) em 254 nm, coluna de fase reversa C8, fase móvel acetonitrila : água (65:35), na temperatura de 25 °C; Ensaio microbiológico por difusão em ágar com planejamento 3x3, empregando Cândida Albicans ATCC 10231 como microrganismo teste em meio de cultura antibiótico n°19 e Espectrofotometria na região do ultravioleta, no comprimento de onda de 256 nm , com soluções finais em ácido clorídrico 0,1 mol.l-1 . Todos os métodos apresentaram linearidade, precisão, exatidão, robustez e especificidade adequados.