Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-09-19T14:50:46Z No. of bitstreams: 1 2017_JéssicaMouraPacheco.pdf: 1070128 bytes, checksum: 784ffc01c25ed859eea16c8e02f29507 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-26T19:27:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_JéssicaMouraPacheco.pdf: 1070128 bytes, checksum: 784ffc01c25ed859eea16c8e02f29507 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_JéssicaMouraPacheco.pdf: 1070128 bytes, checksum: 784ffc01c25ed859eea16c8e02f29507 (MD5) Previous issue date: 2017-09-26 / O presente estudo avaliou o efeito citotóxico do extrato de semente de uva (ESU) em contato direto e transdentinário com células de cultura primária de polpa humana, em diferentes concentrações e tempo de exposição. Células pulpares assim como discos de dentina foram obtidas a partir de terceiros molares de adultos com idades entre 18 e 25 anos. Culturas primárias foram estabelecidas e cultivadas até a obtenção do número adequado de células. O ESU foi diluído previamente ao início de cada experimento. Após a quarta passagem, no teste de contato direto, dez mil células foram semeadas em placas de 96 poços e após 24 horas receberam os tratamentos. Na primeira fase, testou-se diferentes concentrações formando os seguintes grupos: G1: controle negativo celular (D-MEM); G2: controle negativo de tratamento (Hepes); G3: 6,5% de ESU; G4: 0,65% de ESU; G5: 0,065% de ESU; G6: 0,0065% de ESU; G7: controle positivo com peróxido (H2O2 a 20%). Após uma hora de contato, as soluções experimentais foram removidas e novo meio de cultivo (DMEM) foi adicionado. Na segunda fase foram testados diferentes tempos de exposição das melhores concentrações da “fase 1” (0,65% ESU e 0,0065% ESU). Para tal os grupos experimentais foram: G1: controle celular (DMEM) por 1 hora, G2: controle de tratamento (Hepes) por 1 hora, G3: ESU por 1 hora, G4: ESU por 30 minutos, G5: ESU por 10 minutos, G6: ESU por 1 minuto, G7: controle peróxido (H2O2 a 20%) em contato por 1 hora. No teste transdentinário, foram semeadas cinquenta mil células em discos de dentina adaptados a um dispositivo de câmara pulpar artificial em placas de 24 poços. Os seguintes grupos permaneceram por 24h em contato com o ESU: G1: controle negativo celular (D-MEM); G2: controle negativo de tratamento (Hepes); G3: 0,65% de ESU; G4: controle peróxido (H2O2 a 20%). Transcorridos os tempos experimentais de contato, as soluções testadas foram removidas e novo meio de cultivo (DMEM) foi adicionado. Para compor a analise de citotoxicidade, o metabolismo celular foi avaliado por meio do teste de produção de desidrogenase succínica (MTT) 24 e 72 horas após o tratamento; o estresse oxidativo foi avaliado por meio do ensaio de óxido nítrico (ON) 24 e 72h após os tratamentos, e foi realizada microscopia eletrônica de varredura para ilustração dos melhores grupos. Os resultados foram analisados por testes paramétricos (ANOVA e Tukey) ou nao paramétricos (Kruskall-Wallis e Mann-Whitney; α=0,05). De acordo com os dados obtidos, foi possível observar que a menor concentração de extrato de uva testada (0.0065%) apresentou resultados favoráveis tanto para o metabolismo celular, com um aumento no período de 24 horas, quanto a produção de ON, com redução dessa produção no período de 72 horas. Nenhuma resultou em redução do metabolismo celular maior que 10% do controle, indicando a não toxicidade desse extrato tanto aplicado diretamente sobre a cultura primaria de células pulpares quanto na presença de barreira dentinária.O ESU foi capaz de estimular o metabolismo celular sem levar a um aumento do estresse oxidativo em todos os tempos avaliados e mesmo na menor concentração, sugerindo uma potencial bioatividade deste agente crosslinker sobre células pulpares. / The present study evaluated the cytotoxic effect of grape seed extract (GSE) in direct and transdentinal contact with cells of primary culture of human pulp, in different concentrations and time of exposure. Pulp cells as well as dentin discs were obtained from adults at the age of 18 years and 25 years. Primary cultures were established and cultured until adequate numbers of cells were obtained. GSE containing 95% proanthocyanidin was diluted in Hepes buffer before each experiment. After a fourth passage, on direct contact test, ten thousand cells were seeded in 96-well plates and after 24 hours, received treatments. In the first phase, different concentrations were tested to form the following groups: G1: cell negative control (D-MEM); G2: negative control of treatment (Hepes); G3: 6.5% GSE; G4: 0.65% GSE; G5: 0.065% GSE; G6: 0.0065% GSE; G7: Positive control with peroxide (20% H2O2). After one hour of contact, as experimental solutions were removed and new culture medium (DMEM) was added. In the second phase, different exposure times of the best concentrations of "phase 1" (0.65% GSE and 0.0065% GSE) were tested. G4: GSE for 1 hour, G3: GSE for 1 hour, G3: GSE for 1 hour, G3: GSE for 1 hour, G4: GSE for 1 hour G6: GSE for 1 minute, G7: control peroxide (H2O2 at 20%) in contact for 1 hour. In the transdentinal test, fifty thousand cells were seeded in dentin discs adapted to an artificial pulp chamber device in 24-well plates. The following groups remained for 24 hours in contact with the GSE: G1: cellular negative control (D-MEM); G2: negative control of treatment (Hepes); G3: 0.65% GSE; G4: peroxide control (20% H2O2). After the experimental times of contact, as tested solutions were removed and new culture medium (DMEM) was added. To compose a cytotoxicity analysis, the cellular metabolism, evaluated by means of the succinic dehydrogenase (MTT) test 24 and 72 hours after the treatment; Oxidative stress was evaluated by means of the nitric oxide (ON) test 24h and 72h after the treatments, and scanning electron microscopy was performed to illustrate the best groups. The results were analyzed by parametric (ANOVA and Tukey) or non-parametric testicles (Kruskall-Wallis and Mann-Whitney; α = 0.05). According to the data obtained, it was possible to observe that the lowest concentration of grape extract tested (0.0065%) presented favorable results both for the cellular metabolism, with an increase in the period of 24 hours, and for a production of NO, as Reduction of production in the 72-hour period. Although different behaviors were observed for the different concentrations, they resulted in reduction of the cellular metabolism greater than 10% of the control, indicating the non-toxicity of this extract both applied directly on a primary culture of cellular cells in the presence of dentin barrier. The GSE was able to stimulate cell metabolism without increasing oxidative stress at all correct times and even at the lowest concentration, suggesting a potential bioactivity of this crosslinking agent on pulp cells.

Orientadores: Nora Marcela Haun Quiros, Patricia da Silva Melo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anazetti_MaristellaConte_M.pdf: 6470098 bytes, checksum: e8af921549af2ef3a2641ca1d869e984 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Atualmente, morte celular por apoptose é objeto de intensa pesquisa devido à susceptibilidade de células tumorais, incluindo linhagens de células de leucemia e de linfoma, a sofrerem este tipo de morte celular em resposta a determinados agentes anti tumorais. O estresse oxidativo induzido, entre outros fatores, pela diminuição dos níveis de glutationa intracelular, está envolvido no mecanismo de ação de vários compostos, sinalizando as células ao processo apoptótico, envolvendo eventos mediados por cisteino proteases (caspases). Neste estudo, nós examinamos a indução de diferenciação morfológica e morte celular por apoptose pela dimetilamida-crotonina (DCR) em células da leucemia promielocítica humana HL60. A DCR é um derivado sintético da desidrocrotonina (DHC), uma diterpeno lactona extraída das cascas de Croton cajucara, uma planta da região amazônica. A DCR apresentou um efeito inibitório similar ao composto original conforme avaliado por diferentes parâmetros de citotoxicidade e ambos os compostos induziram diferenciação fenotípica em células HL60. Em contraste, não foram observadas citotoxicidade ou alterações morfológicas associadas com apoptose em linfócitos de sangue periférico humano após tratamento com os compostos em estudo nas concentrações utilizadas (O - 400flM). Com base nas alterações morfológicas, no padrão de &agmentação de DNA e na análise de simetria de membrana de células marcadas com anexina V liodeto de propídeo por citometria de fluxo, DHC e DCR induziram apoptose em células HL60 com a mesma eficiência. Ambos os compostos promoveram a ativação de caspases-2, -6 e -9. A ativação de caspase-9 pela DHC e DCR em células HL60 sugere indução de apoptose através da via mitocondrial. Com o intuito de analisar o possível envolvimento do estresse oxidativo no mecanismo de toxicidade dos compostos, foram determinados os níveis de glutationa e ocorrência de peroxidação lipídica. O nível de GSH diminuiu cerca de 30% e a produção de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) aumentou 4 vezes após o tratamento com ambos os compostos em concentrações próximas ao ICso (250 JlM). A suplementação do meio de cultura com 15 mM de GSH protegeu as células da toxicidade induzida pelos compostos em estudo. Nossos resultados indicam que a DCR e a DHC induzem apoptose em células HL60 em parte pela conjugação com GSH e indução de estresse oxidativo, o qual seria responsável pela peroxidação lipídica e ativação da cascata de caspases através da via mitocondrial. Além disso, resultados de espectroscopia UV Nis sugerem a formação de conjugados entre a GSH e o grupamento O=CH-CH=CH2, presente na DHC e na DCR. Desta forma, os compostos estudados possuem características almejadas para quimioterápicos desencadeando indução de diferenciação morfológica e de apoptose em células da leucemia HL60 / Abstract: Apoptosis is subject of intense research due to the susceptibility of tumor cells, including leukemia and lymphom celllines that have been found to undergo this kind of cell death in response to antitumor agents. The oxidative stress induced, by others factors, by the decrease of glutathione levels is involved in the action mechanism of several compounds, signalIing the celIs to apoptotic process, involving events mediated by cystein proteases (caspases). In this study, we evaluated the morphological differentiation and celI death by apoptosis induction by dimethylamide-crotonin (DCR) in human HL60 promylocitic leukemia cells. The DCR is a synthetic derivative of dehydrocrotonin (DHC), a diterpene lactone isolated ftom the Croton cajucara, an Amazonian planto The dimethylamide crotonin presented a similar inhibitory effect that its parent compound evaluated by different endpoints of cytotoxicity and both compounds induced morphological differentiation on HL60 cells. In contrast, no cytotoxicity or morphological alterations associated with apoptosis were observed in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) after treatment with these studied compounds in the concentrations used (0-400 flM). Based on morphological changes and the pattem of DNA ftagmentation and the symmetry analysis of cell membrane labelIed with annexin V /propidium iodide by flow cytometry, DHC and DCR induced apoptosis on HL60 cells with similar efficiency. Both compounds were effective in triggering the activation of caspase-2, -6 and -9. The caspase 9 activation by DHC and DCR on leukemic cells suggests apoptosis induction by the mitochondrial pathway. In attempt to analyse the possible involvement of oxidative stress on the toxicity action mechanism of these compounds, we determined the GSH levels and lipid peroxidation occurrence. The glutathione levels decreased around 30% and the thiobarbituric acid substance reactive (TBARS) increased 4 times after treatment with both compounds in concentrations around the IC50 value (250 1lM). The culture medium supplementation with 15-mM GSH protected the cells :tIom the toxicity induced by both compounds. The results indicate that DHC and DCR induce apoptosis on HL60 cells in part by conjugation with GSH and oxidative stress induction, which could be responsible for lipid peroxidation and caspases activation by the mitochondrial pathway. Moreover, the spectroscopic analyses of DHC or DCR in the presence of GSH 15 mM suggest the conjugate formation between GSH and O=CH-CH=CH2 of DHC or DCR In this way, the studied compounds have the desirable hemotherapic characteristics, triggering cell differentiation and apoptosis / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-30Bitstream added on 2014-06-13T20:01:19Z : No. of bitstreams: 1 camargo_sea_dr_sjc.pdf: 640663 bytes, checksum: 4cae675acd74b1d6da77301be420d2d3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Alguns materiais endodônticos são capazes de liberar componentes tóxicos que podem interagir com o tecido pulpar e/ou periapical. A proposta deste estudo foi avaliar in vitro, em nível molecular, os possíveis efeitos citotóxicos e genotóxicos de materiais endodônticos sobre cultura de células pulpares humanas transformadas (tHPC) e fibroblastos V79. Os espécimes de hidróxido de cálcio (HC, Hydro C, Dentsply, Brasil), MTA cinza (Angelus, Brasil), MTA branco (Angelus, Brasil) e polímero da mamona (POM, Poliquil, Brasil) foram misturados e colocados em meio de cultura (91,6 mm2 superfície /ml) por 24h em 37°C. Vitrebond (3M ESPE) foi utilizado como grupo controle positivo. As tHPC foram expostas aos extratos e diluições dos materiais e após 24h, a sobrevivência celular foi determinada pelo teste de cristal violeta. A liberação de espécies reativas de oxigênio (ROS) em tHPC foram mensuradas após 1h de exposição aos materiais. ROS foram detectados pelo manchamento das células com H2DCF-DA e a fluorescência foi mensurada por citometria de fluxo (FACS). A genotoxicidade foi determinada pela formação de micronúcleos em células V79 após 24h de exposição ao HC, MTA cinza, POM e etilmetano sulfanato (controle positivo). O atraso do ciclo celular normal de células V79 foi analisado, após a exposição ao MTA cinza, HC, POM e TEGDMA (controle positivo) por FACS. As diferenças entre a taxa de sobrevivência celular, fluorescência, número de micronúcleos e distribuição de células no ciclo celular foram estatisticamente analisadas pelo teste de Mann-Whitney-U (p<0,05). A citotoxicidade em relação ao grupo controle decresceu na seguinte ordem Vitrebond > HC > MTA branco = MTA cinza >>> POM. O POM causou indução da proliferação celular, enquanto o HC diminuiu a sobrevivência celular significativamente (p<0,05)... / Endodontic materials could release toxic components that may interact with pulp or periapical tissues. The purpose of this study was evaluated the cytotoxicity and genotoxicity of endodontic materials on transformed human pulp-derived cells (tHPC) and fibroblasts V79. Specimens of calcium hydroxide (Hydro C, Dentsply- Brazil), MTA gray (Angelus-Brazil), MTA white (Angelus-Brazil), and castor oil bean (COB, Poliquil-Brazil) were mixed and subsequently extracted in culture medium (91,6 mm2 sample surface/ml) for 24h at 37°C. Vitrebond (3M ESPE) served as a positive control. Exposure of tHPCs to dilutions of the extracts was stopped after 24h, and cell survival was determined photometrically after staining the cells with crystal violet. The generation of reactive oxygen species (ROS) was determined after a 1h exposure of the cells to extracts. ROS were detected by staining the cells with H2DCF-DA, and fluorescence was measured by flow cytometry (FACS). The genotoxicity as indicated by the formation of micronuclei was determined in V79 cells after a 24h exposure period. The modification of the normal cell cycle was analyzed by FACS. Differences between cell survival rates and fluorescence levels were statistically analyzed (Mann-Whitney-U test, p<0.05). The ranking of the cytotoxic effects based on EC50 values was as follows: Vitrebond > Hydro C > MTA gray = MTA white >>> COB. Extract of COB even induced cell proliferation, but Hydro C decrease cell survival in a doserelated manner. ROS production was not detected with any experimental material (p>0,05). Vitrebond increased ROS production about sevenfold (p<0,05). The increase in the number of micronuclei and cell cycle delay in V79 cells were not detected with any experimental material in relation to control group. COB and MTA (gray and white) did not negatively influence cell viability and ROS production. HC presented cytotoxic... (Complete abstract, click electronic access below)

Resumo: Receptores de células natural killer semelhantes à imunoglobulina (KIR) são expressos por células natural killer (NK) e subtipos de células T. Os genes KIR são altamente polimórficos e este complexo poligênico exibe variação em número de genes ativadores e inibidores, o que regula a atividade de células NK. Moléculas HLA de classe I servem como ligantes para KIR. As interações dos loci de KIR e HLA são importantes para o reconhecimento de alvos pelas células NK. Vários estudos de associação indicam que estes loci estão envolvidos em doenças infecciosas, desordens autoimunes/inflamatórias, câncer e reprodução. Dados funcionais suportam o mecanismo baseado na ação de receptores inibidores e ativadores através de diferentes combinações de genótipos KIR-HLA em doenças. A doença autoimune pênfigo vulgar (PV) é uma desordem bolhosa que afeta a pele em múltiplas camadas, causada por autoanticorpos contra desmogleína 1 e 3, já foi previamente associada com KIR. Neste estudo nós sugerimos que indivíduos KIR3DL2*001+ KIR3DL1+ e baixa frequência de genes ativadores em seu genótipo, exibem uma maior inibição de citotoxicidade quando na presença dos ligantes HLA-A*03/A*11 e HLA-Bw4. Resultados in vitro demonstraram que o cultivo de células NK de diferentes indivíduos com células T CD3 expressando HLA-A*03/A*11 e HLA-Bw4, levou a uma diminuição de citotoxicidade. Isto foi observado em indivíduos saudáveis e pacientes de pênfigo. O bloqueio com anticorpo anti-KIR3DL2 mostrou um aumento da citotoxicidade, corroborando para o potencial efeito inibidor deste gene nesta situação. Além disso, nós verificamos uma maior frequência de células NK (subtipo CD56bright) no sangue periférico de pacientes de PV quando comparado com indivíduos saudáveis. Estes dados em conjunto com a detecção de níveis aumentados de IL-6 e IFN-? nos ensaios de cultivo, contribuem para o entendimento e o papel de células NK na patogênese de pênfigo.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:18:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 321634.pdf: 2116644 bytes, checksum: cee06a3868398f6bac4784fc7b33b4c1 (MD5) Previous issue date: 2013 / O câncer foi considerado uma das principais causas de morte no mundo, no ano de 2013, sendo responsável por 7,6 milhões de mortes (cerca de 13% de todas as causas de mortes). Para 2030 estima-se 27 milhões de novos casos. Embora a quimioterapia ainda seja a principal terapia utilizada para o tratamento da doença, a morbidade associada aos quimioterápicos ainda é um obstáculo a ser superado. Dessa forma, a busca por compostos antineoplásicos, que tenham maior eficiência em induzir apoptose nas células tumorais e com insignificantes efeitos colaterais, tornou-se alvo de investigação acadêmica e da indústria farmacêutica. Os compostos derivados de imidas cíclicas vêm sendo descritos como promissores agentes antitumorais. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito dos derivados de imidas cíclicas sobre os mecanismos de resistência tumoral e apoptose sobre células de linhagem de melanoma murino (B16F10), de leucemia mieloide aguda humana (K562) e de leucemia linfoide aguda humana (Jurkat). Inicialmente, foi investigado o efeito citotóxico de nove derivados de imidas cíclicas sobre células de linhagem de melanoma murino (B16F10), e determinado suas CI50. O composto 2 foi o que apresentou melhor atividade citotóxica, com um valor de CI50 de 77,75 ?M (±1,3), por isso, foi selecionado para os demais experimentos. Os resultados mostram que esse composto apresenta atividade citotóxica concentração e tempo dependente, bloqueio das fases S e G2/M do ciclo celular, além do aumento de células na fase sub-G0G1, que sugere morte celular por apoptose. Como esses resultados foram considerados satisfatórios, o composto 2 e sete novos derivados de imidas cíclicas foram selecionados para uma nova triagem em células K562. Nessa nova etapa, o composto 15 demonstrou o melhor efeito citotóxico, por isso foi selecionado para modificações estruturais, que geraram cinco novos derivados (16, 17, 18, 19 e 20). O efeito citotóxico dos compostos (15, 16, 17, 18, 19 e 20) foi avaliado em células de leucemia aguda humana (K562 e Jurkat), e demonstram atividade citotóxica concentração e tempo dependente. Foi avaliado o efeito dos compostos (15, 16, 17, 18, 19 e 20) no ciclo celular, e estes demonstraram um bloqueio do ciclo celular na fase S para células Jurkat e na fase sub-G0/G1, para células K562 e Jurkat. A via de morte também foi avaliada por três diferentes metodologias, e os compostos demonstraram causar morte celular, via apoptose. Com esse conjunto de resultados os compostos 15, 17 e 19 foram selecionados para avaliar o seu efeito sobre o potencialmitocondrial, na expressão das proteínas AIF, Bcl-2, Bax, Fas, caspase-3 ativa, survivina, p53e Ki67. Os resultados demonstraram que os compostos (15, 17 e 19) causaram redução do potencial mitocondrial, aumento da expressão do AIF, diminuição da expressão da proteína antiapoptótica Bcl-2 e aumento da expressão da proteína pró-apoptótica Bax, sugerindo que o mecanismo de indução de apoptose desses compostos envolve a via intrínseca da apoptose. Ainda, nas células Jurkat, os compostos 15 e 17 também ativaram a apoptose pela via extrínseca, evidenciado pelo aumento da expressão do receptor Fas. Além disso, os compostos (15, 17 e 19) causaram aumento da atividade da proteína caspase-3 ativa, diminuição da expressão da proteína antiapoptótica survivina, aumento da expressão da proteína p53 e diminuição na expressão do marcador de proliferação celular Ki67. Também foi avaliado o efeito dos compostos (15, 17 e 19) sobre a expressão do gene abcc1, do fenótipo ABCC1 e do fenótipo LRP nas células K562 e Jurkat, e os resultados mostram que os compostos causaram diminuição da expressão constitutiva do gene abcc1 e da proteína LRP nas células K562 e Jurkat. Em conjunto, os resultados aqui expostos, sugerem que os compostos 15, 16, 17, 18, 19 e 20 causaram bloqueio do ciclo das células K562 e Jurkat, e, consequentemente, diminuição da proliferação celular, o que resulta na indução da apoptose via mecanismo intrínseco e/ou extrínseco, além de inibir os mecanismos de resistência à quimioterapia nessas células através da redução da transcrição do gene abcc1 e pela diminuição da expressão de LRP, Bcl-2 e survivina. <br> / Abstract : In 2008, cancer was considered a major cause of death in the world, accounting for 7.6 million deaths (around 13% of all causes of death). For 2030, 27 million new cases of cancer are estimated. Although chemotherapy is still the main therapy used for the treatment of this disease, the morbidity associated with chemotherapeutic drugs is still an obstacle to be overcome. Thus, the search for new anticancer compounds, with higher efficiency in inducing apoptosis in tumor cells with negligible side effects, has become an important target of the pharmaceutical industry. The compounds derived from cyclic imides have been described as promising with antitumor agents. The aim of this study was to investigate the effects of derivatives of cyclic imides on the mechanisms of tumor resistance and apoptosis in murine melanoma cells (B16F10), human acute myeloid leukemia cells (K562) and human acute lymphoblastic leukemia cells (Jurkat). First we have investigated the cytotoxic effect of nine derivatives of cyclic imides in murine melanoma cells (B16F10), and their IC50 have been calculated. Compound 2 has shown the best cytotoxic activity with an IC50 value of 77.75 ?M (±1.3), therefore, it was selected for further studies. The results have shown that this compound reduced the cell viability in a concentration and time-dependent manner, caused cell cycle arrest in S and G2/M phases and increased the number of cells in the sub-G0G1 phase, suggesting cell death by apoptosis. For these promising results, compound 2 and seven new derivatives of cyclic imides have been selected for a new screening in K562 cells. In this new stage, compound 15 has shown the best cytotoxic effect, so it was selected for structural modifications, which has generated five new compounds (16, 17, 18, 19 and 20). The cytotoxic effects of these compounds (15, 16, 17, 18, 19 and 20) have been evaluated in K562 and Jurkat cells, and they have demonstrated a cytotoxic concentration-and-time-dependent activity. The effects of these compounds (15, 16, 17, 18, 19 and 20) on cell cycle have demonstrated a blockage in S phase for Jurkat cells and in sub-G0/G1 phase in K562 and Jurkat cells. Apoptosis has been evaluated and confirmed by three different methodologies. Based on these results, compounds 15, 17 and 19 have been selected to evaluate their effects on the mitochondrial potential and on the expression of AIF, Bcl-2, Bax, Fas, caspase-3 active, survivin, Ki67 and p53 proteins. These compounds (15, 17, 19) have reduced the mitochondrial potential and have caused increased expression of AIF, decreased expression ofantiapoptotic protein Bcl-2 and increased expression of pro-apoptotic protein Bax, which suggests that the apoptosis caused by the compounds involves the intrinsic pathway. In Jurkat cells, apoptosis caused by compounds 15 and 17 also involves the extrinsic pathway, as it has been evidenced by the increased expression of Fas receptor. Furthermore, the compounds (15, 17, 19) have increased the activity of caspase-3 active and the expression of p53 protein, and they have decreased the expression of antiapoptotic survivin and the cell proliferation marker Ki67 proteins. The effect of these compounds (15, 17, 19) have also been evaluated on abcc1 gene expression, on ABCC1 phenotype and on LRP phenotype in Jurkat and K562 cells. The results have shown that the compounds reduced the constitutive expression of abcc1 gene and the expression of LRP protein in Jurkat and K562 cells. Together, these results suggest that compounds 15, 16, 17, 18, 19 and 20 cause cell cycle blockage in Jurkat and K562 cells and, therefore, decrease cell proliferation, which result in the induction of apoptosis by intrinsic and/or extrinsic pathways and in the inhibition of the resistance mechanisms to chemotherapy in these cells by reducing the transcription of abcc1 gene and by decreasing the expression of LRP, survivin and Bcl-2 proteins.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-07. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:32:50Z : No. of bitstreams: 1 000856194.pdf: 1439281 bytes, checksum: 5fe9509ffb73bb1a03c287f13ce29f09 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O câncer é um conjunto de doenças que têm em comum o crescimento celular desordenado que invade os tecidos e órgãos, podendo espalhar-se para outras regiões do corpo (metástase). Uma série de mudanças genéticas e epigenéticas, que são associadas ao DNA que influenciam a expressão genética, ocasionam o câncer. Nas últimas décadas, o câncer ganhou uma dimensão maior convertendo-se em um evidente problema de saúde pública mundial, sendo uma das principais causas de morte no mundo. O desenvolvimento de fármacos para o tratamento do câncer é possível de forma expressiva através da triagem de moléculas utilizando linhagens celulares tumorais ou métodos alternativos que reduzam o número de animais de experimentação. Em uma segunda etapa, ensaios in vivo em modelo convencional deverão garantir a segurança toxicológica e confirmar a biodisponibilidade da molécula. Desta forma, este estudo tem como objetivo, avaliar a atividade proliferativa frente às linhagens tumorais (HepG2, HeLa, MDA-MB-231, K-562, DU 145), o perfil mutagênico, a toxicidade em linhagem celular normal (MRC-5), pelo método alternativo (Artemia salina L.) e em camundongos BALB/c e a biodisponibilidade oral in vivo de compostos de coordenação (Mn, Co e Zn). Embora, todas as moléculas estudadas tenham apresentado efeito sobre as linhagens tumorais, os complexos de cobalto [Co(atc-Et)2]Cl e [Co(atc-Ph)2]Cl apresentaram os melhores Índices de Seletividade (IS). No ensaio de toxicidade aguda em Artemia salina L. apenas os três complexos [Mn(atc)2], [Mn(atc-Me)2] e [Co(atc-Ph)2]Cl se mostraram tóxicos para o microcustáceo, enquanto que na toxicidade aguda em camundongos apenas um complexo [Mn(atc-Me)2]. Os parâmetros bioquímicos analisados (enzimas ALT e AST), bem como o peso relativo dos órgãos dos animais, não mostraram diferença estatística significativa. No teste de Ames foi observado mutagenicidade apenas de três complexos de manganês... / Cancer is a group of diseases that have in common the uncontrolled cell growth that invades the tissues and organs and can spread to other parts of the body (metastasis). A number of genetic and epigenetic changes, that are associated with DNA and influence gene expression, cause cancer. In the last decades, cancer has gained a bigger dimension becoming an evident problem of global public health and is one of the leading cause of death worldwide. The development of drugs for the treatment of cancer is possible through screening of molecules using tumor cell lines or alternative methods that reduce the number of experimental animals. In a second step, in vivo assays in conventional model should ensure toxicological safety and confirm the bioavailability of the molecule. Thus, this study aims to evaluate the antiproliferative activity against the tumor cell lines (HepG2, HeLa, MDA-MB-231, K-562, DU 145), the mutagenic profile, toxicity in normal cell line (MRC-5) through the alternative method (Artemia salina L.) and BALB/c mice, and also, the coordination compound (Mn, Co and Zn) in vivo oral bioavailability. Although all the molecules studied have presented effect on tumor cell lines, and the cobalt complexes [Co(atc-Et)2]Cl and [Co(atc-Ph)2]Cl showed the best selectivity index (SI). In the acute toxicity test in Artemia salina L. only three complexes [Mn(atc)2], [Mn(atc-Me)2] and [Co(atc-Ph)2]Cl proved to be toxic to the microcrustacean, while that the acute toxicity in mice only one complex ([Mn(atc-Me)2]) presented toxic effect. Quantitative biochemical parameters (ALT and AST), as well as the relative weight of the organs of the animals showed no statistical difference. In the Ames test mutagenicity was observed only in three manganese complexes [Mn(atc-Me)2], [Mn(atc-Ch)2] and [Mn(atc-Ph)2]. As regards the quantification of the via ICP-OES oral bioavailability of plasma ...

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:04Z : No. of bitstreams: 1 000827368.pdf: 472014 bytes, checksum: 9454895a0e77c23b547713df1dc6e3fc (MD5) / Este estudo se propôs a avaliar a atividade antimicrobiana do princípio ativo Timol e de um enxaguatório bucal (LISTERINE® ZEROTM) sobre Candida albicans, Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans e também sua citotoxicidade e genotoxicidade em culturas de macrófagos (RAW 264.7). Após determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Microbicida Mínima (CMM) pelo método de microdiluição em caldo do extrato foi avaliada a ação antimicrobiana do Timol e do LISTERINE® ZEROTM em biofilme. A citotoxicidade do Timol e do LISTERINE® ZEROTM foi avaliada sobre as células pelo método MTT e também pela quantificação de TNF-α pelo método imunoenzimático ELISA. Ainda, a genotoxicidade foi determinada pela formação de micronúcleos nas células após 24 h de exposição ao Timol e 1min ao LISTERINE® ZEROTM e ao etilmetano sulfanato (controle positivo). Os dados foram avaliados pelos testes estatísticos ANOVA e complementado pelo teste de Tukey e Kruskal Wallis (nível de significância de 5%). Obtivemos resultados favoráveis quanto a ação antimicrobiana do princípio ativo para os micro-organismos testados sendo a CMM de 160 μg mL-1 eficaz para S. mutans e S. aureus e de 80 μg mL-1 para C. albicans, para LISTERINE® ZEROTM foi eficaz na concentração de 0, 3125 μg mL-1, em biofilme apresentou média de 1,85 ± 0,14 para Timol em S. mutans, 1,90 ± 0,07 para S. aureus e 6,66 ± 0,17 para C. albicans. A citotoxicidade do Timol foi observada acima de 5 μg mL-1, e o LISTERINE® ZEROTM foi tóxico para as células; quanto a genotoxicidade não foi observado dano ao nível de DNA. Desta forma concluímos que o princípio ativo Timol, possui ação antimicrobiana em concentrações mais elevadas, no entanto que nestas concentrações possui alta toxicidade celular, e o LISTERINE® ZEROTM possui ação antimicrobiana na menor concentração testada e é citotóxico / This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of the active ingredient thymol and a mouthwash (LISTERINE® ZEROTM) on Candida albicans, Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans and also their cytotoxicity and genotoxicity in macrophage cultures (RAW 264.7). After determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and Minimum Concentration Microbicide (CMM) by microdilution broth method extract was evaluated the antimicrobial action of thymol and LISTERINE® ZEROTM n biofilm. The cytotoxicity of thymol and LISTERINE® ZEROTM on the cells was evaluated by MTT method and also by quantifying TNF-α by ELISA immunoenzymatic method. Further, genotoxicity is determined by the formation of micronuclei in cells after 24 h of exposure to thymol and the LISTERINE® ZEROTM 1min and ethylmethane sulfonate (positive control). Data were analyzed by ANOVA and Tukey complemented by test and Kruskal Wallis (5% significance level). We obtained favorable results regarding the antimicrobial action of the active ingredient for the microorganisms tested with the CMM 160 mg L-1 effective for S. mutans and S. aureus and 80 mg L-1 for C. albicans to LISTERINE® ZEROTM was effective at levels of 0, 3125 mg L-1, biofilm had a mean of 1.85 ± 0.14 for thymol in S. mutans, 1.90 ± 0.07 to 6.66 ± S. aureus and 0, 17 for C. albicans. The cytotoxicity of thymol was observed above 5 mg L-1, and LISTERINE® ZEROTM was toxic to cells; as genotoxic damage was not observed at the level of DNA. Thus we conclude that the active ingredient thymol, has antimicrobial action in higher concentrations, however that these concentrations has high cellular toxicity, and the LISTERINE® ZEROTM has antimicrobial action in the smallest concentration tested and is cytotoxic

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-15Bitstream added on 2014-06-13T20:31:52Z : No. of bitstreams: 1 nakao_mp_me_sjc.pdf: 575104 bytes, checksum: 3e65e53ea5787201a2552f5be4884109 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A proposta deste estudo foi avaliar a citotoxicidade do peróxido de hidrogênio (PH) liberado por dois géis clareadores, utilizados para a técnica de consultório, sobre cultura de fibroblastos de polpa humana (FP5). As células foram cultivadas em DMEM. Foram utilizadas células entre a quinta e décima passagens. Colocou-se sobre as células meios de cultura condicionados de acordo com os grupos de estudo (n=4): G1- PH 35% sem fotoativação; G2- PH 35% ativado por luz alógena; G3- PH 35% ativado por diodo emissor de luz (LED); G4- PH 38% sem fotoativação; G5- PH 38% ativado por luz alógena; G6- PH 38% ativado por LED. Uma curva padrão de viabilidade e crescimento celular foi obtida a partir de células que não receberam tratamento (controle). O ensaio com MTT ocorreu após 0, 24 e 48 horas, para avaliar a viabilidade e crescimento celular. Paralelamente, mediu-se colorimetricamente a quantidade de PH liberado nas condições experimentais, utilizando-se solução tampão de acetato no lugar do meio de cultura. Os dados foram analisados através do teste de Dunnet, ANOVA e teste de Tukey. Todos os grupos apresentaram diferença significativa em relação ao controle. O PH 38% apresentou maior citotoxicidade e quantidade de peróxido de hidrogênio liberada que o PH 35% nas condições experimentais. A ativação por luz alógena ocasinou maior citotoxicidade e maior quantidade de PH liberado, e a ativação com LED foi estatisticamente semelhante à ausência de ativação. A avaliação após 48 horas apresentou diferença estatística das avaliações de 0 e 24 horas. Concluiu-se que: a citotoxicidade foi proporcional à concentração do agente clareador; a fotoativação com luz alógena aumentou a liberação de peróxido de hidrogênio, e o metabolismo celular foi menor imediatamente após o contato com o meio condicionado, aumentando após 24 e/ ou48 horas. / The propose of this study was to evaluate hydrogen peroxide (HP) cytotoxicity, from two in office bleaching agents, on human pulp fibroblasts (FP5) culture. The cells were cultured in DMEM. Only cells between fifith and tenth passages were used. Each well of culture plate, corresponding to experimental groups, received conditioned middle according to the experimental groups: G1- HP 35% without light activation; G2- HP 35% activated by halogen light; G3- HP 35% activated by LED; G4- HP 38% without light activation; G5- HP 38% activated by halogen light; G6- HP 38% activated by LED. Viability and growth standard curve was obtained from an untreated group and was used as control. MTT assay was performed in four wells for each group, in periods of 0, 24 or 48 hours, to measure cells viability and growth. Hydrogen peroxide leased in experimental conditions was also measured, using acetate buffer instead culture middle. Results were analyzed by Dunnet test, variance analysis and Tukey test. All experimental groups showed difference from control. The cytotoxicity and quantity of hydrogen peroxide was higher with 38% hydrogen peroxide (Opalescence Xtra Boost) than with 35% hydrogen peroxide (Whiteness HP). Activation by halogen light caused smaller cell growth and viability but higher hydrogen peroxide amount, and LED was statically similar to the group without activation. 48 hours evaluation was different then 0 and 24 hour evaluations. Conclusions: cytotoxicity was proportional to quantity of hydrogen peroxide leased; halogen light activation increased the leased hydrogen peroxide, and cell viability was lower immediately after contact with conditioned middle, increasing after 24 and/or 48 hours.

Orientador: Fernando Rogério Pavan / Banca: Victor Marcelo Deflon / Banca: Rosilene Fressatti Cardoso / Resumo: O câncer é um conjunto de doenças que têm em comum o crescimento celular desordenado que invade os tecidos e órgãos, podendo espalhar-se para outras regiões do corpo (metástase). Uma série de mudanças genéticas e epigenéticas, que são associadas ao DNA que influenciam a expressão genética, ocasionam o câncer. Nas últimas décadas, o câncer ganhou uma dimensão maior convertendo-se em um evidente problema de saúde pública mundial, sendo uma das principais causas de morte no mundo. O desenvolvimento de fármacos para o tratamento do câncer é possível de forma expressiva através da triagem de moléculas utilizando linhagens celulares tumorais ou métodos alternativos que reduzam o número de animais de experimentação. Em uma segunda etapa, ensaios in vivo em modelo convencional deverão garantir a segurança toxicológica e confirmar a biodisponibilidade da molécula. Desta forma, este estudo tem como objetivo, avaliar a atividade proliferativa frente às linhagens tumorais (HepG2, HeLa, MDA-MB-231, K-562, DU 145), o perfil mutagênico, a toxicidade em linhagem celular normal (MRC-5), pelo método alternativo (Artemia salina L.) e em camundongos BALB/c e a biodisponibilidade oral in vivo de compostos de coordenação (Mn, Co e Zn). Embora, todas as moléculas estudadas tenham apresentado efeito sobre as linhagens tumorais, os complexos de cobalto [Co(atc-Et)2]Cl e [Co(atc-Ph)2]Cl apresentaram os melhores Índices de Seletividade (IS). No ensaio de toxicidade aguda em Artemia salina L. apenas os três complexos [Mn(atc)2], [Mn(atc-Me)2] e [Co(atc-Ph)2]Cl se mostraram tóxicos para o microcustáceo, enquanto que na toxicidade aguda em camundongos apenas um complexo [Mn(atc-Me)2]. Os parâmetros bioquímicos analisados (enzimas ALT e AST), bem como o peso relativo dos órgãos dos animais, não mostraram diferença estatística significativa. No teste de Ames foi observado mutagenicidade apenas de três complexos de manganês... / Abstract: Cancer is a group of diseases that have in common the uncontrolled cell growth that invades the tissues and organs and can spread to other parts of the body (metastasis). A number of genetic and epigenetic changes, that are associated with DNA and influence gene expression, cause cancer. In the last decades, cancer has gained a bigger dimension becoming an evident problem of global public health and is one of the leading cause of death worldwide. The development of drugs for the treatment of cancer is possible through screening of molecules using tumor cell lines or alternative methods that reduce the number of experimental animals. In a second step, in vivo assays in conventional model should ensure toxicological safety and confirm the bioavailability of the molecule. Thus, this study aims to evaluate the antiproliferative activity against the tumor cell lines (HepG2, HeLa, MDA-MB-231, K-562, DU 145), the mutagenic profile, toxicity in normal cell line (MRC-5) through the alternative method (Artemia salina L.) and BALB/c mice, and also, the coordination compound (Mn, Co and Zn) in vivo oral bioavailability. Although all the molecules studied have presented effect on tumor cell lines, and the cobalt complexes [Co(atc-Et)2]Cl and [Co(atc-Ph)2]Cl showed the best selectivity index (SI). In the acute toxicity test in Artemia salina L. only three complexes [Mn(atc)2], [Mn(atc-Me)2] and [Co(atc-Ph)2]Cl proved to be toxic to the microcrustacean, while that the acute toxicity in mice only one complex ([Mn(atc-Me)2]) presented toxic effect. Quantitative biochemical parameters (ALT and AST), as well as the relative weight of the organs of the animals showed no statistical difference. In the Ames test mutagenicity was observed only in three manganese complexes [Mn(atc-Me)2], [Mn(atc-Ch)2] and [Mn(atc-Ph)2]. As regards the quantification of the via ICP-OES oral bioavailability of plasma ... / Mestre

Orientador: Samira Esteves Afonso Camargo / Co-orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Paula Elaine Cardoso / Resumo: Este estudo se propôs a avaliar a atividade antimicrobiana do princípio ativo Timol e de um enxaguatório bucal (LISTERINE® ZEROTM) sobre Candida albicans, Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans e também sua citotoxicidade e genotoxicidade em culturas de macrófagos (RAW 264.7). Após determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Microbicida Mínima (CMM) pelo método de microdiluição em caldo do extrato foi avaliada a ação antimicrobiana do Timol e do LISTERINE® ZEROTM em biofilme. A citotoxicidade do Timol e do LISTERINE® ZEROTM foi avaliada sobre as células pelo método MTT e também pela quantificação de TNF-α pelo método imunoenzimático ELISA. Ainda, a genotoxicidade foi determinada pela formação de micronúcleos nas células após 24 h de exposição ao Timol e 1min ao LISTERINE® ZEROTM e ao etilmetano sulfanato (controle positivo). Os dados foram avaliados pelos testes estatísticos ANOVA e complementado pelo teste de Tukey e Kruskal Wallis (nível de significância de 5%). Obtivemos resultados favoráveis quanto a ação antimicrobiana do princípio ativo para os micro-organismos testados sendo a CMM de 160 μg mL-1 eficaz para S. mutans e S. aureus e de 80 μg mL-1 para C. albicans, para LISTERINE® ZEROTM foi eficaz na concentração de 0, 3125 μg mL-1, em biofilme apresentou média de 1,85 ± 0,14 para Timol em S. mutans, 1,90 ± 0,07 para S. aureus e 6,66 ± 0,17 para C. albicans. A citotoxicidade do Timol foi observada acima de 5 μg mL-1, e o LISTERINE® ZEROTM foi tóxico para as células; quanto a genotoxicidade não foi observado dano ao nível de DNA. Desta forma concluímos que o princípio ativo Timol, possui ação antimicrobiana em concentrações mais elevadas, no entanto que nestas concentrações possui alta toxicidade celular, e o LISTERINE® ZEROTM possui ação antimicrobiana na menor concentração testada e é citotóxico / Abstract: This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of the active ingredient thymol and a mouthwash (LISTERINE® ZEROTM) on Candida albicans, Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans and also their cytotoxicity and genotoxicity in macrophage cultures (RAW 264.7). After determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and Minimum Concentration Microbicide (CMM) by microdilution broth method extract was evaluated the antimicrobial action of thymol and LISTERINE® ZEROTM n biofilm. The cytotoxicity of thymol and LISTERINE® ZEROTM on the cells was evaluated by MTT method and also by quantifying TNF-α by ELISA immunoenzymatic method. Further, genotoxicity is determined by the formation of micronuclei in cells after 24 h of exposure to thymol and the LISTERINE® ZEROTM 1min and ethylmethane sulfonate (positive control). Data were analyzed by ANOVA and Tukey complemented by test and Kruskal Wallis (5% significance level). We obtained favorable results regarding the antimicrobial action of the active ingredient for the microorganisms tested with the CMM 160 mg L-1 effective for S. mutans and S. aureus and 80 mg L-1 for C. albicans to LISTERINE® ZEROTM was effective at levels of 0, 3125 mg L-1, biofilm had a mean of 1.85 ± 0.14 for thymol in S. mutans, 1.90 ± 0.07 to 6.66 ± S. aureus and 0, 17 for C. albicans. The cytotoxicity of thymol was observed above 5 mg L-1, and LISTERINE® ZEROTM was toxic to cells; as genotoxic damage was not observed at the level of DNA. Thus we conclude that the active ingredient thymol, has antimicrobial action in higher concentrations, however that these concentrations has high cellular toxicity, and the LISTERINE® ZEROTM has antimicrobial action in the smallest concentration tested and is cytotoxic / Mestre