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Análise cromossômica por microarranjos em probandos com indicação clínica de Síndrome de Down sem alterações cariotípicas.Cunha, Damiana Mírian da Cruz e 16 March 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-03-16 / Genetically determined conditions affect millions of families worldwide. More than 40% of
cases of severe Intellectual Disability (ID) are caused by monogenic diseases or
chromosomal abnormalities. In Brazil, a country with 185 million people, some disability is
expected to affect about 25 million (14%) people, and of these, approximately 17 million
(68%) would have ID. Downs Syndrome (DS) was recognized and first described by John
Langdon Down in 1866. DS is the most common autosomal genetic abnormality, contributing
with approximately 18% of all cases of DI. The average prevalence rate is 1:650 live births,
which increases with advancing maternal age. DS aetiology is related to the excess of genetic
material from an extra chromosome 21. DS could also results from chromosomal
translocation resulting in trisomy 21 and post-zygotic mosaicism. The phenotype associated
with DS varies in signs and intensity. However, ID is a highly conserved feature on those who
are affected by the trisomy 21 and has a major impact on public health and individual quality
of life. Despite the phenotypic pathognomonic characteristics of DS, there is still a challenge
in the clinical diagnosis. The current study reported the laboratory investigation of 6
probands with complex phenotypes, which had features in common with the SD. However,
while the physical examination generated the clinical hypothesis, the cytogenetic laboratory
tests were not useful for diagnostic resolution. In this context, Chromosomal Microarray
Analysis (CMA) was used to support the laboratory diagnosis of cases with clinical indication
of SD whose karyotypes showed up without apparent numerical or structural chromosome
changes. In our study, laboratory diagnosis using CMA was not possible for 83.3% (5-6) of
the cases. For those, higher-resolution methods such as exon sequencing or new generation
sequencing must be used to assist elucidating the underlying genomic alteration behind the
observed the rare variant phenotypes. As discussed by Howell et al (2013), despite major
advances in diagnosis using neuroimaging, molecular, and metabolic strategies a significant
proportion of children with global developmental delay, with or without dysmorphic signs
will remain without a conclusive diagnosis of the underlying cause clinically recognized
phenotype. In our study, although there were no genomic changes suggestive of DS, the
analyzed cases showed a gain and losses of genomic material identified by the CMA that have
potential to explain the phenotype of probands and guide decision-making on the part of
families and the health care providers. The results presented and discussed in this
dissertation showed a detection rate of ~17%. However, no patient had DS, as suggested by
the clinical hypothesis, as there was no involvement of the critical region of Down Syndrome
on chromosome 21 in any case. The laboratory diagnosis rate for the DS was 78.5% in line
with expectations and trends in the diagnosis of this syndrome worldwide. The CMA allowed
establishing the genotype-phenotype correlation for one case, for which it was observed a
proximal deletion of SHANK3 gene whose haploinsufficiency is responsible for Phelan-
McDermid Syndrome. In this study we identified four genes that could be contribute to the
phenotypes of probands, namely: AGL12, MAGEA8, IL1RAPL1, and CNTNAP2, located in
22p13, Xq28, Xp21 and 7q35, respectively. This set of genes should be highlighted in
structural and functional genomic studies to pinpoint candidate genes correlated to rare
phenotypes. / Condições geneticamente determinadas acometem milhões de famílias no mundo. Mais de
40% dos casos de Deficiência Intelectual (DI) grave são causados por doenças monogênicas
ou anomalias cromossômicas. Com relação à DI, no Brasil, com 185 milhões de habitantes,
cerca de 25 milhões (14%) apresentam alguma deficiência. Desses, aproximadamente 17
milhões (68%) apresentam DI. A Síndrome de Down (SD) foi reconhecida e descrita pela
primeira vez por John Langdon Down em 1866, sendo a mais frequente anomalia genética
autossômica, contribuindo por aproximadamente 18% de todos os casos de DI. A incidência
média é de 1 em cada 650 nascimentos, que aumenta com avanço da idade materna. Sua
etiologia está relacionada ao excesso de material genético proveniente do cromossomo 21.
Em geral, há ainda possibilidade de ocorrer trissomia 21 por translocação cromossômica e
casos de mosaicismo pós-zigóticos. O fenótipo associado à SD seja variável em sinais e em
intensidade. Porém, a DI é a característica altamente conservada ente os afetados e tem um
grande impacto na saúde pública e na qualidade de vida individual. Apesar das características
fenotípicas da SD ser patognomónicas, ainda persiste na comunidade médica o desafio do
diagnóstico clínico. O presente estudo relatou a experiência da avaliação de 6 probandos com
fenótipos complexos, que apresentavam características em comum com a SD. No entanto,
embora o exame físico tenha gerado a hipótese clínica, os testes laboratoriais de citogenéticas
não foram úteis para a resolução diagnóstica. Neste contexto, foi aplicada a Análise
Cromossômica por Microarranjos (CMA) para a elucidação diagnóstica dos casos com
indicação clínica para SD cujos cariótipos apresentaram-se sem alterações cromossômicas
numéricas ou estruturais aparentes. Para cerca de 83,3% (5-6) dos casos apresentados no
presente estudo, ainda se faz necessário o uso de metodologias de maior resolução como o
sequenciamento de exomas ou o sequenciamento e nova geração para tentar elucidar a
alteração genômica subjacente aos achados fenótipos dos pacientes, que devem ser,
subsequentemente, confirmados com estudos funcionais e epidemiológicos para estes
fenótipos variantes raros. Conforme discutido por Howell e colaboradores (2013), apesar dos
grandes avanços no diagnóstico usando estratégias de neuroimagem, moleculares e
metabólicas, uma proporção significante de crianças com atraso global do desenvolvimento,
com ou sem sinais dismórficos, permanecerão sem um diagnóstico conclusivo da causa
subjacente ao fenótipo clinicamente reconhecido. No presente estudo, mesmo não
apresentando alterações sugestivas para SD, os casos analisados apresentaram diversas
alterações identificadas pelo CMA que em conjunto possuem potencial para explicar os
fenótipos dos probandos e orientar as tomadas de decisões por parte famílias e dos
profissionais de saúde que as assistem. Os resultados apresentados e discutidos nesta
dissertação permitiram concluir que a taxa de detecção de alterações genômicas para o
diagnóstico dos casos apresentados foi de ~17%. No entanto, nenhum paciente apresentou a
SD, conforme sugerido pela indicação clínica, pois em nenhum caso houve o envolvimento da
região crítica da Síndrome de Down no cromossomo 21. A taxa de diagnóstico laboratorial
para a SD foi de 78,5%, em consonância com o esperado para as tendências de diagnóstico
desta síndrome no mundo. A CMA permitiu estabelecer a correlação genótipo-fenótipo para
um caso, para o qual foi observado deleção proximal do gene SHANK3, cuja
haploinsuficiência é responsável pela Síndrome de Phelan-McDermid. No presente estudo
foram identificados 4 genes que poderiam estar contribuindo com os fenótipos dos probandos,
a saber: AGL12, MAGEA8, IL1RAPL1 e CNTNAP2, localizados em 22p13, Xq28, Xp21 e
7q35, respectivamente. Este conjunto de genes merecem destaque em estudos detalhados de
genômica estrutural e funcional para apontar genes candidatos corelacionados aos fenótipos
raros.
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ANÁLISE CROMOSSÔMICA POR MICROARRANJO NA INVESTIGAÇÃO DE ALTERAÇÕES GENÔMICAS ESTRUTURAIS NO TRANSTORNO DO ESPECTRO AUTISTA - TEANascimento, Gustavo Rios 07 March 2017 (has links)
Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2017-06-13T13:15:16Z
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Previous issue date: 2017-03-07 / Autism spectrum disorder (ASD) is characterized by social impairments,
speech delay, and disruption of developmental imagination. These characteristics are
observed mainly at 3 years of age, resulting in developmental impairment in relation to
the expected expectation for age. Although the causes of ASD and the justifications for
influences of external and environmental factors have not yet been established, the best
evidence suggests that regressive behavior is genetically determined. The aim of this
study was investigate CNVs (gain and loss), by CMA technique (Chromosomal
Microarray Analysis), in patients with clinical indication for ASD. In order to screen
the clinical suspicion, 8 subjects were interviewed (CARS, Autism Diagnostic
Interview, Revised - Interview Of Diagnosis of Autism Revised). Then, they were
submitted to genetic tests: G-banding karyotype, fragile X research with Amplidex Kit
and CMA. The results revealed that of 8 individuals interviewed via CARS, 6
presented high score values. Regarding ADIR, 7 subjects presented comprehension in
at least 3 of the 4 areas of behavior evaluated. The screening test for X-fragile revealed
only 2 individuals with alterations so the CMA was done for six individuals. The CMA
approach showed a predominance of CNVs in chromosomes X, 14, 15, and 22. Among
all CNVs observed in this study, we observed a predominance of CNVs of gains in
relation to CNVs of losses and the genes that stood out were ST6GAL2, NUP155,
WDR70, CHRNA7, TPPP, ZNF630, SSX6, and SPACA5. With this, we observed that
there is a diversity of genes and CNVs related to individuals with ASD and that
although there is no established gene pattern it is possible to find gene regions that
repeat themselves favoring the phenotype. / O transtorno do espectro autista (TEA) é definido por atraso da capacidade de interação
social, de desenvolvimento da fala e do uso da imaginação. Estas características
são observadas principalmente a partir 3 anos de idade, resultando no comprometimento
do desenvolvimento em relação a expectativa esperada para idade. Embora ainda
não se tenha estabelecido as causas do TEA e as justificativas para influências de
fatores externos, a melhor evidência sugere que o comportamento regressivo seja determinado
geneticamente. Este trabalho tem como objetivo investigar CNVs (do inglês,
Copy Number Variation – Variação do Número de Cópias) de ganho e de perda, pela
técnica CMA (do inglês, Chromosomal Microarray Analysis – Análise Cromossômica
em Microarranjos), em pacientes com indicação clínica para TEA. Com finalidade de
triar a suspeita clínica, 8 indivíduos foram submetidos a entrevista (CARS do inglês,
Childhood Autism Rating Scale – Escala de Classificação de Autismo na infância/
ADIR do inglês, Autism Diagnostic Interview, Revised – Entrevista de Diagnóstico
de Autismo Revisado). Em seguida, foram submetidos a testes genéticos: Cariótipo
com bandeamento G, pesquisa de X-frágil por Amplidex modificado e CMA. Os resultados
revelaram que de 8 indivíduos entrevistados via CARS, 6 apresentaram valores
de score elevados. Quanto ao ADIR, 7 indivíduos apresentaram comprometimento em
pelo menos 3 das 4 áreas do comportamento avaliadas. Em relação aos testes genéticos
que antecederam ao CMA, apenas 2 indivíduos apresentaram alterações e ambos
no teste de triagem para X-frágil. Nos seis indivíduos avaliados para CMA observamos
predomínio de CNVs envolvendo os cromossomos X, 14, 15 e 22. Dentre todas
as CNVs observadas neste estudo observamos predomínio de CNVs de ganhos em relação
às CNVs de perdas e os genes que se destacaram foram: ST6GAL2, NUP155,
WDR70, CHRNA7, TPPP, ZNF630, SSX6 e SPACA5. Com isso, concluímos que existe
diversidade de genes e de CNVs relacionados a indivíduos com TEA e que apesar
de não haver um padrão gênico estabelecido é possível encontrar regiões gênicas que
se repetem favorecendo o fenótipo.
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Pesquisa de síndromes de microdeleção em pacientes com deficiência intelectual por meio da técnica de MLPA - Amplificação de Múltiplas Sondas Dependentes de Ligação / Pesquisa de síndromes de microdeleção em pacientes com deficiência intelectual por meio da técnica de MLPA Amplificação de Múltiplas Sondas dependentes de LigaçãoSabbag, Adriana Rosolia Costa 21 September 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1
4725.pdf: 4003213 bytes, checksum: c40eb861711bbe31a91e5b1600b14b63 (MD5)
Previous issue date: 2012-09-21 / Universidade Federal de Sao Carlos / Intellectual disability (ID) is manifest sign of more than 2,000 different clinical conditions and is present in 5% of the population. Because it is a heterogeneous group of clinical conditions, with different causal factors and simultaneously involved, about 50% of patients with ID have no defined etiology. Chromosomal microdeletions, situations in which there is loss of a fragment of up to 5Mb of the genome resulting in haploinsufficiency of one or multiple genes, are one of the possible causes of ID. The aim of this study was to standardize genetic testing with the technique of MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification) to investigate the presence of microdeletion syndromes in a sample of patients with idiopathic DI or with diagnosis not yet confirmed by molecular genetic testing. The MLPA kit used (SALSA® MLPA® P064-B2 MR1) detected, at the same time, 11 microdeletion syndromes: 1p36 deletion, Sotos, Miller-Dieker, 22q11.2 deletion, Saethre-Chotzen, Prader-Willi, Angelman, Williams, Alagille, Smith-Magenis and Canavan. We selected 57 patients with idiopathic ID and facial dysmorphias, with normal conventional karyotyping and normal brain imaging studies. The presence of microdeletion was identified in 4 patients (7%), 3 patients had Williams syndrome and 1 had 22q11.2 deletion. The results reinforce the usefulness of MLPA in the etiologic research of ID, helping in the clinical management and familial genetic counseling. / Deficiência intelectual (DI) é sinal manifesto de mais de 2.000 condições clínicas diferentes e está presente em 5% da população. Por se tratar de um grupo heterogêneo de condições clínicas, com fatores causais distintos e simultaneamente envolvidos, cerca de 50% dos pacientes com DI não têm sua etiologia definida. Entre as possíveis causas de DI estão as microdeleções cromossômicas, situações nas quais há perda de um fragmento de até 5Mb do genoma, implicando na haploinsuficiência de um ou múltiplos genes. O objetivo desse trabalho foi padronizar testes genéticos fundamentados na técnica de MLPA (Amplificação de Múltiplas Sondas dependentes de Ligação) para investigar a presença de síndromes de microdeleção em uma amostra de pacientes com DI idiopática ou com hipótese diagnóstica ainda não confirmada por teste genético molecular. O kit de MLPA utilizado (SALSA® MLPA® P064-B2 MR1) detectava, simultaneamente, 11 síndromes de microdeleção: deleção 1p36, Sotos, Miller-Dieker, deleção 22q11.2, Saethre- Chotzen, Prader-Willi, Angelman, Williams, Alagille, Smith-Magenis e Canavan. Foram selecionados clinicamente 57 pacientes com DI e dismorfias faciais, com cariótipo convencional e exame de imagem de encéfalo normais. A presença de microdeleção foi identificada em 4 pacientes (7%), tendo sido detectados 3 pacientes com síndrome de Williams e 1 com deleção 22q11.2. Os resultados reforçam a utilidade da técnica de MLPA na investigação etiológica da DI, ajudando no manejo clínico dos pacientes e no aconselhamento genético familiar.
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