La superficie articular es un indicador pronóstico del éxito del implante osteocondral criopreservado y podría constituirse en parámetro para el control de la calidad del proceso de almacenamiento de este tipo de tejidos. Objetivos: fotografiar la superficie articular de injertos osteocondrales frescos, crear un sistema de clasificación de los principales aspectos morfológicos de la superficie condral de los injertos y determinar los cambios que en ellos produce la congelación a - 40 ºC y la criopreservación a -196 ºC según la escala diseñada. Metodología: se empleó un microscopio electrónico de barrido ambiental para fotografiar la superficie condral sin técnicas de fijación. Se clasificaron los principales aspectos morfológicos y se validó la escala según variabilidad inter e intra-observador. Las imágenes de los injertos congelados y criopreservados se obtuvieron siguiendo la misma metodología. Conclusiones: el microscopio de barrido ambiental es una herramienta útil para fotografiar la superficie de injertos osteocondrales frescos, congelados y criopreservados. La superficie articular de los injertos frescos no es totalmente lisa, hallándose diversos aspectos clasificables en un sistema cualitativo para la detección de cambios en situaciones experimentales o patológicas. La superficie del injerto congelado presenta aumento de colinas y protuberancias al compararlos con los injertos frescos y criopreservados, así como un mayor número de lagunas condrocíticas vacías. La superficie del injerto criopreservado muestra aumento de colinas y protuberancias al compararlos con los injertos frescos. Los condrocitos del tejido criopreservado difieren del fresco algunas oportunidades, mostrando imágenes de posible lesión en su membrana asi como lagunas vacías.

A través d'aquest treball s'ha realitzat un estudi morfològic de la superfície osteocondral d'empelts osteocartilaginosos procedents del còndil intern de la raça de conill New Zealand. S'han dissenyat tres grups a estudi, un grup control, corresponent als empelts en estat fresc i dos grups a estudi que corresponen als empelts criopreservats mitjançant el medi RPMI sense L-glutamina i els empelts criopreservats mitjançant el medi Krebs-Henseleit modificat.L'objectiu d'aquest treball ha estat obtenir imatges de la superfície osteocondral dels empelts osteocondrals amb un microscopi electrònic de rastreig ambiental i avaluar i comparar els principals aspectes morfològics de la superfície articular d'empelts osteocondrals frescos amb empelts osteocondrals que han estat emmagatzemats amb els dos mètodes diferents de criopreservació, mitjançant un sistema de classificació validat, a partir de les imatges obtingudes amb un microscopi electrònic de rastreig ambiental. la conclusió de l'estudi ha estat que el medi Krebs-Henseleit modificat mostra imatges més pròximes a les obtingudes dels empelts en estat fresc que el seu homòleg en medi RPMI sense L-glutamina. / In this work a morphological study of the osteochondral surface of osteochondral grafts coming from the internal condile of the New Zealand rabbit race has been carried out. Three study groups have been designed, the control group that corresponds to the fresh state grafts, a second one cryopreserved with RPMI without L-glutamine method, and the third one cryopreserved with modified Krebs-Henseleit method. Surface's images of each group have been obtained by means of an environmental scanning electronic microscope and after that they have been classified using a validated scale. Later on we have proceeded to the evaluation and comparison of these images with a statiscally method. In this study we have concluded that the cryopreservation modified Krebs-Henseleit method shows images of environmental scanning electronic microscope more similar to the fresh state than those obtained with RPMI without L-glutamine method. / RESUMEN:A través de este trabajo se ha realizado un estudio morfológico de la superficie osteocondral de injertos osteocartilaginosos procedentes del cóndilo interno de conejo raza New Zealand. Se han diseñado tres grupos de estudio, un grupo control, que corresponde a los injertos en estado fresco y dos grupos a estudio que corresponden a los injertos criopreservados mediante medio RPMI sin L-glutamina y los injertos criopreservados mediante Krebs-Henseleit modificado.Se han obtenido imágenes de superficie de cada grupo mediante un microscopio electrónico de rastreo ambiental y se han clasificado utilizando un método validado por nuestro grupo de investigación, para proceder posteriormente a la evaluación y comparación de dichas imágenes. Se ha concluido en este estudio que el medio de criopreservación Krebs-Henseleit modificado muestra imágenes de microscopia electrónica de rastreo ambiental más próximas al estado fresco que su homólogo mediante RPMI sin L-glutamina.

La hipótesis amiloide de la enfermedad de Alzheimer fue la base, hace algunos años, para el desarrollo de una línea de investigación cuyo objetivo principal es la obtención de pequeñas moléculas peptídicas capaces de interferir en la formación de fibras amiloides de la proteína beta-amiloide, pretendiendo reducir de esta manera la toxicidad de la misma. Así mismo, se quiere verificar la existencia de una correlación entre la presencia de fibras amiloides y la neurotoxicidad de la proteína beta-amiloide.Como pequeñas moléculas peptídicas, nos planteamos inicialmente el diseño y síntesis de una serie de N-metilpéptidos con capacidad inhibidora de la toxicidad de beta-amiloide. Esta colección de compuestos, además, se enfocó de forma que permitiese identificar los factores que favorecen la interacción proteína-inhibidor y el carácter de dicha interacción, estudiando entre otros aspectos el papel que juega la esteroquímica de los aminoácidos de estos inhibidores (L ó D) en el reconocimiento molecular. Se planteó correlacionar la inhibición de la toxicidad con la formación/ausencia de fibras amiloides. Para ello se decidió evaluar y utilizar algunos de los métodos descritos en la bibliografía para la detección y cuantificación de fibras amiloides. Para la evaluación de los inhibidores, se decidió obtener un modelo simplificado del proceso de fibrilogénesis de la proteína que tiene lugar durante la enfermedad de Alzheimer. La puesta a punto del mismo ha de permitir ensayar de forma paralela la capacidad de diversos compuestos para inhibir la toxicidad de la proteína in vitro.Por último se planteó la puesta a punto de ensayos de estabilidad de los péptidos sintetizados frente a la acción de proteasas. Este tipo de experimentos permite predecir, de forma aproximada, la biodisponibilidad relativa de diferentes péptidos en medios biológicos, pudiéndose así extrapolar su comportamiento en condiciones in vivo.

El presente estudio constituye una importante contribución al conocimiento de la ultraestructura de la espermiogénesis y del espermatozoide de los Platelmintos parásitos. Los caracteres ultraestructurales de la reproducción, particularmente los del espermatozoide, son de gran utilidad para la Sistemática, la Taxonomía y la Filogenia de diversos grupos zoológicos, entre ellos el de los Platelmintos. Por ello, se ha estudiado ultraestructuralmente la espermiogénesis y el espermatozoide de siete especies de Platelmintos parásitos de distintas familias: cuatro Digénidos [Scaphiostomum palaearcticum Mas-Coma, Esteban et Valero, 1986 (Brachylaimidae), Fasciola hepatica, Linnaeus, 1758 y Fasiola gigantica Cobbold, 1856 (Fasciolidae) y Notocotylus neyrai González Castro, 1945 (Notocotylidae)] y tres Cestodos Cyclophyllidea [Joyeuxiella pasqualei (Diamare, 1893) y Joyeuxiella echinorhynchoides (Sonsino, 1899) (Dipylidiidae) y Taenia parva Baer, 1926 (Taeniidae)].Los helmintos, aislados tras disección de los hospedadores, han sido procesados según la metodología pertinente para los estudios ultraestructurales a que van encaminados. En el caso de F. gigantica se ha aplicado la técnica citoquímica de Thiéry para evidenciar la presencia de glucógeno en el gameto masculino. En el estudio de F. hepatica, dada la procedencia del material de la rata negra (Rattus rattus), hemos podido diseccionar el hospedador en el laboratorio y aplicar más fácilmente otras técnicas como son: 1) las técnicas inmunocitoquímicas para evidenciar la tubulina en el citoesqueleto del espermatozoide y 2) las de "whole mount" y de microscopía electrónica de barrido destinadas a la observación de espermatozoides enteros. Las técnicas inmunocitoquímicas de inmunomarcaje ultraestructural nos han permitido de detectar la presencia de las tubulinas contenidas en el citoesqueleto del espermatozoide mediante la utilización de anticuerpos monoclonales (anti-alfa-tubulina, anti-beta-tubulina, anti-tubulina acetilada y anti-tubulina tirosinada).Los resultados obtenidos en relación las especies estudiadas forman parte de las seis publicaciones expuestas en la Memoria. El estudio de S. palaearcticum es el cuarto trabajo realizado sobre la ultraestructura del gameto masculino en la familia Brachylaimidae y el primero de la subfamilia Ityogoniminae. En el caso de N. neyrai, el presente estudio constituye la primera aportación ultraestructural para la familia Notocotylidae. En la familia Fasciolidae se ha realizado un estudio comparado de la ultraestructura de la espermiogénesis y del espermatozoide de F. hepatica (parásito de Bos taurus en España y de Rattus rattus en Córcega) con la de F. gigantica (parásito de Bos indicus en Senegal). Para el género Joyeuxiella y, por extensión, para la familia Dipylidiidae, se establece el modelo general de la espermiogénesis y del espermatozoide dada la existencia de datos en dos de los tres géneros incluidos en esta familia. En el caso de T. parva, los resultados aportados contribuyen a la determinación de las características ultraestructurales del espermatozoide para las especies de la familia Taeniidae.Se efectua una completa revisión y discusión al respecto de diversos caracteres ultraestructurales del espermatozoide de los Digénidos, como son las ornamentaciones externas de la membrana y los cuerpos espinosos. Por otra parte, se describe la formación de una expansión citoplasmática dorso-lateral en el transcurso de la espermiogénesis en F. gigantica y F. hepatica. En el caso de los Cestodos, se describe por primera vez la formación de la vaina periaxonemal durante la espermiogénesis de Joyeuxiella spp. Además, ciertos caracteres de la espermiogénesis de los Digénidos y de los Cestodos primitivos como son la presencia de raíces estriadas y de rotación flagelar son igualmente observados respectivamente en los Cyclophyllidea Joyeuxiella spp. y T. parva.