Submitted by Aelson Maciera (aelsoncm@terra.com.br) on 2017-06-12T19:03:09Z No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-06-12T19:44:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2017-06-12T19:44:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T19:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCFM.pdf: 6014577 bytes, checksum: 3206ee0e787d62e3dde8985abe54b0f3 (MD5) Previous issue date: 2016-04-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cancer is a group of diseases related to abnormal cell growth and ability to invade tissues. These skills result in the development of metastases, leading to death in many of the patients. During the process of invasion, the cells find a connective tissue rich in fibronectin and collagen in which they will have to go through in order to reach the blood vessels and then the metastatic site. Fibronectin adhesion receptors such as αvβ3 and α5β1 integrins are essential for cells to be able to move through the fibronectin fibers. Integrins bind to the extracellular matrix (ECM) proteins via the RGD motif present in fibronectin, making these cell types migration receptors a potential target for the study of cancer. Thus, the effect of DisBa-01, an RGD containing motif disintegrin, was investigated in two cell specialized on migration; fibroblasts (BJ) and oral squamous cell carcinoma (SCC25). DisBa-01 (1 and 2 μM) was able to reduce cancer cells migration speed and directionality, but not fibroblasts, on time-lapse experiments performed on fibronectin coated plates. In order to understand if the effect of DisBa-01 is associated with alterations in cellular adhesion, cells were plated on fibronectin and stained with anti-paxillin. Images acquired by confocal microscopy show changes in focal adhesions, which have become larger and more numerous. These data were confirmed, by time-lapse assays using Total Internal Reflection Fluorescence (TIRF) in cells transfected with paxillin. The expression of key fibronectin receptors, α5, β3 and αv is present similarly in both strains, while the β1 subunit is expressed in lower amounts in OSCC cells. To investigate the probable relationship of migration inhibition with integrin β3 level, this subunit was overexpressed in the OSCC cells and all parameters analyzed were restored. Taken together, these results demonstrate the ability of DisBa-01 to affect cell migration depending on integrin expression level and by modulating the dynamics of cell adhesions. / O câncer representa um conjunto de doenças relacionadas ao crescimento anormal de células e sua capacidade de invadir tecidos. Essas habilidades resultam no desenvolvimento de metástases, que levam muitos dos pacientes acometidos por essa doença, à morte. Durante o processo de invasão as células encontram um tecido conectivo rico em fibronectina e colágeno, o qual terão que atravessar a fim de chegar aos vasos sanguíneos e posteriormente ao sítio metastático. Receptores de adesão a fibronectica como a αvβ3 e α5β1 são essenciais para que as células sejam capazes de se movimentar sobre as fibras dessa protéína. A integrinas se ligam a fibronectina através do motivo RGD presente, fazendo desses receptores, potenciais alvos no estudo da migração celular durante o câncer. Assim, o efeito da DisBa-01, uma desintegrina com motivo RGD, foi investigado em duas células especializadas em migração; fibroblastos (BJ) e uma linhagem de carcinoma de células escamosas oral (SCC25). A DisBa-01 (1 e 2 μM) foi capaz de diminuir a velocidade de migração e a direcionalidade das células de câncer, mas não dos fibroblastos, em ensaios de time-lapse realizados em placas recobertas por fibronectina. Com o objetivo de entender se o efeito da DisBa-01 está relacionado com alterações na adesões celulares, as células foram plaqueadas sobre fibronectina e marcadas com anti-paxilina. Nas imagens adquiridas através de microscopia confocal é possível visualizar mudanças nas adesões, que se tornaram maiores e mais numerosas. Dados que foram confirmados em ensaios de time-lapse utilizando a microscopia de fluorescência de reflecção interna total (TIRF – Total Internal Reflection Fluorescence) em células transfectadas com paxilina. A expressão dos principais receptores de fibronectina, α5, αv e β3 está presente de forma similar nas duas linhagens, enquanto a subunidade β1 é expressa em quantidades menores nas células OSCC. Para investigar a provavel relação da inibição da migração com a expressão da integrina β3, a mesma foi superexpressa em nas células de OSCC e todos os parâmetros analizados foram normalizados. Em conjunto, esses resultados demonstram a capacidade da DisBa-01 de afetar a migração celular dependendo do nível de expressão de integrinas e através da modulação da dinâmica das adesões.