Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-11-22T17:47:36Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2690624 bytes, checksum: 510c039d99315e52653361f40c93b221 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-22T17:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2690624 bytes, checksum: 510c039d99315e52653361f40c93b221 (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O milho (Zea mays L.), além de ser um dos grãos de maior importância econômica no mundo, é um importante modelo em diversos estudos com plantas. Em virtude da sua grande importância econômica, a minimização da perda na produtividade tem sido priorizada em pesquisas e em programas de melhoramento dessa cultura. O advento do uso de defensivos agrícolas é uma das alternativas adotadas mundialmente para assegurar aumento de produtividade, principalmente em plantações de milho. Os pesticidas são muito eficazes no controle das pragas e na manutenção do nível de produção, mas podem gerar danos a nível genético na planta. Uma forma de avaliar a ocorrência de danos na molécula de DNA tem sido pelo uso da técnica de ensaio cometa, ou eletroforese de célula única. A aplicação dessa metodologia é relativamente rápida, sensível e simples para quantificar danos e reparo no DNA, conforme verificado com sucesso em testes com células humanas e de diversos outros organismos. Portanto, torna-se imperativo e de grande importância a padronização desta técnica para a avaliação da genotoxicidade em plantas, principalmente em culturas de grande importância econômica. O presente trabalho adaptou a metodologia de ensaio cometa em milho, utilizando tanto folha como raízes. Nas adaptações envolvendo raízes, foram avaliados dois métodos de isolamento nuclear, utilizando protoplasto e chopping, incluindo testes para verificar o efeito da sincronização nuclear com hidroxiureia (HU) nas raízes. O uso de núcleos oriundos de protoplasto se mostrou mais eficiente nos ensaios, bem como o tratamento com HU gerou núcleos sincronizados sem danos detectáveis no DNA. Tal procedimento foi útil para padronização do tamanho dos núcleos analisados. Nas adaptações metodológicas envolvendo núcleos oriundos de folhas, o ensaio cometa foi utilizado para avaliar a genotoxicidade associada ao tratamento com Roundup®, herbicida a base de glifosato, em dois híbridos de milho, um resistente à aplicação do herbicida e ou suscetível ao mesmo. Ambos os híbridos apresentaram danos nas moléculas de DNA. A planta não-resistente apresentou sinais de genotoxicidade associado a todos os tratamentos com glifosato. Já o híbrido resistente só teve danos genotóxicos nos tratamentos com as doses mais altas, indicando que a dose recomendada para uso do herbicida não gera danos no DNA deste híbrido. / Maize (Zea mays L.), besides being one of the greater economic importance grains in the world, is an important model in several studies with plants. Due to its great economic importance, the minimization of productivity loss has been prioritized in research and in breeding programs of this crop. The advent of the use of pesticides is one of the alternatives adopted worldwide to ensure increased productivity, especially in maize plantations. The pesticides are very effective in controlling pests and maintaining the production level, but can cause genetic damage to the plant. One way to assess the occurrence of DNA molecule damage has been through the use of the comet assay technique, or single cell electrophoresis. The application of this metodology is relatively fast, sensitive and simple to quantify DNA damage and repair, as successfully verified in tests with human cells and several other organisms. Therefore, it is imperative and of great importance the standardization of this technique for genotoxicity evaluation in plants, especially in great economic importance crops. The present work adapted the comet assay methodology in maize, using both leaf and roots. In the adaptations involving roots, two methods of nuclear isolation were evaluated, using protoplast and chopping, including tests to verify the effect of nuclear synchronization with hydroxyurea (HU) on the roots. The use of protoplast nuclei proved to be more efficient in the assays, as well as the treatment with HU generated synchronized nuclei without detectable DNA damage. Such procedure was useful for standardizing the size of the nuclei analyzed. In the methodological adaptations involving nuclei originating from leaves, the comet assay was used to evaluated the genotoxicity associated with Roundup® treatment, glyphosate-based herbicide, in two maize hybrids, one resistant to herbicide application and the other susceptible to it. Both hybrids showed DNA molecules damages. The non-resistant plant showed genotoxicity signs associated with all glyphosate treatments. However, the resistant hybrid only had genotoxic damages in the highest doses treatments, indicating that the recommended dose for use of the herbicide does not generate damage in the DNA of this hybrid.