Resumo: O estudo teve por objetivo determinar a prevalência da brucelose bovina entre fornecedores de leite de um laticínio situado no Município de Itirapuã, Estado de São Paulo, analisar fatores de risco eventualmente associados à ocorrência de brucelose nos rebanhos estudados e analisar o desempenho de testes sorológicos para detectar a infecção. De uma população de 942 bovinos adultos distribuídos em 55 rebanhos, situados nos municípios de Itirapuã e de Patrocínio Paulista, foi obtida uma amostra voluntária composta por 813 animais, distribuídos em 37 rebanhos cujos proprietários aceitaram participar do estudo. Foi aplicado um questionário, para a obtenção de informações sobre fatores que pudessem estar associados às taxas de prevalência. Foram colhidas amostras de soro sanguíneo de todos animais, as quais foram submetidas ao teste do antígeno acidificado tamponado (AAT), e as amostras positivas nesse teste foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC). Foram obtidas amostras de leite do conjunto de cada rebanho participante do estudo, que foram examinadas pelo teste do anel do leite (TAL). Das 813 amostras de soro sanguíneo colhidas, 26 (3,2%) resultaram positivas na aplicação em série dos testes de triagem (AAT) e confirmatório (RFC), e das 37 propriedades estudadas, 12 (32,4%) apresentaram pelo menos um animal positivo. Os fatores que se mostraram associados à ocorrência de brucelose foram número de animais no rebanho, não utilização da vacina B19 e compra frequente de animais. Não se observou boa concordância entre o TAL, que apontou resultado positivo em quatro (10,8%) dos 37 rebanhos, e os testes sorológicos individuais na detecção de rebanhos infectados / Abstract:The aim of this investigation was to verify the prevalence of bovine brucellosis among milk suppliers of a dairy industry located in the municipality of Itirapuã, state of São Paulo, Brazil, analyze risk factors eventually associated with the occurrence of brucellosis among the herds involved in the study, and compare the performance of serological tests in detecting infected herds. From a population of 942 adult cattle in 55 herds, in the municipalities of Itirapuã and Patrocínio Paulista, a voluntary sample of 813 animals was obtained in 37 herds whose owners agreed in participating in the study. A questionnaire about risk factors that could be associated to the prevalence rates was applied. Serum samples of all the 813 animals were collected and tested by the rose Bengal plate test (RBPT); positive samples were then tested by the complement fixation test (CFT). Milk samples were taken from each can at the industry and tested by the milk ring test (MRT). Of the 813 serum samples, 26 (3.2) tested positive in the serial application of RBPT and CFT, and of the 37 herds, 12 (32.4%) had at least one positive animal. Factors that showed association with the prevalence rate were number of animals in the herd, lack of vaccination with strain 19 and frequent introduction of animals. The agreement between individual serological tests and MRT to detect infected herds was not good, since MRT showed positive results in only four (10.8%) of the 37 herds / Orientador: Luis Antônio Mathias / Coorientador: Iucif Abraão Nascif Junior / Banca: Ângela Cleusa de Fátima Banzatto de Carvalho / Banca: Fernanda Senter Magajevski / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-07Bitstream added on 2014-06-13T19:55:40Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_mab_me_jabo.pdf: 498854 bytes, checksum: 73074b86ac0db45184c33210013d1ef4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O estudo teve por objetivo determinar a prevalência da brucelose bovina entre fornecedores de leite de um laticínio situado no Município de Itirapuã, Estado de São Paulo, analisar fatores de risco eventualmente associados à ocorrência de brucelose nos rebanhos estudados e analisar o desempenho de testes sorológicos para detectar a infecção. De uma população de 942 bovinos adultos distribuídos em 55 rebanhos, situados nos municípios de Itirapuã e de Patrocínio Paulista, foi obtida uma amostra voluntária composta por 813 animais, distribuídos em 37 rebanhos cujos proprietários aceitaram participar do estudo. Foi aplicado um questionário, para a obtenção de informações sobre fatores que pudessem estar associados às taxas de prevalência. Foram colhidas amostras de soro sanguíneo de todos animais, as quais foram submetidas ao teste do antígeno acidificado tamponado (AAT), e as amostras positivas nesse teste foram submetidas à reação de fixação de complemento (RFC). Foram obtidas amostras de leite do conjunto de cada rebanho participante do estudo, que foram examinadas pelo teste do anel do leite (TAL). Das 813 amostras de soro sanguíneo colhidas, 26 (3,2%) resultaram positivas na aplicação em série dos testes de triagem (AAT) e confirmatório (RFC), e das 37 propriedades estudadas, 12 (32,4%) apresentaram pelo menos um animal positivo. Os fatores que se mostraram associados à ocorrência de brucelose foram número de animais no rebanho, não utilização da vacina B19 e compra frequente de animais. Não se observou boa concordância entre o TAL, que apontou resultado positivo em quatro (10,8%) dos 37 rebanhos, e os testes sorológicos individuais na detecção de rebanhos infectados / The aim of this investigation was to verify the prevalence of bovine brucellosis among milk suppliers of a dairy industry located in the municipality of Itirapuã, state of São Paulo, Brazil, analyze risk factors eventually associated with the occurrence of brucellosis among the herds involved in the study, and compare the performance of serological tests in detecting infected herds. From a population of 942 adult cattle in 55 herds, in the municipalities of Itirapuã and Patrocínio Paulista, a voluntary sample of 813 animals was obtained in 37 herds whose owners agreed in participating in the study. A questionnaire about risk factors that could be associated to the prevalence rates was applied. Serum samples of all the 813 animals were collected and tested by the rose Bengal plate test (RBPT); positive samples were then tested by the complement fixation test (CFT). Milk samples were taken from each can at the industry and tested by the milk ring test (MRT). Of the 813 serum samples, 26 (3.2) tested positive in the serial application of RBPT and CFT, and of the 37 herds, 12 (32.4%) had at least one positive animal. Factors that showed association with the prevalence rate were number of animals in the herd, lack of vaccination with strain 19 and frequent introduction of animals. The agreement between individual serological tests and MRT to detect infected herds was not good, since MRT showed positive results in only four (10.8%) of the 37 herds

Made available in DSpace on 2015-03-26T14:02:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1285438 bytes, checksum: 9ee3885cc388e9abcdec1aac69248461 (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / The aim of this work was to verify the occurrence of bovine brucellosis in dairy cows in the municipalities of Unaí and Buritis using the milk ring test (TAL). 423 milk samples collected were analyzed for the period from February 5 to April 3, 2014, at the dairy receiving platform and in the milk producing communities. Of these 423 samples, 87 were derived from the municipality of Buritis and 336 from Unaí. Of the samples derived in Unaí, 200 were collected in the milk platform of different regions of the municipality; 92 of the community of Pico; and 44 in Associação do Funil. TAL was performed stratifying positive samples in crosses. Of total samples analyzed, 73 showed positive results, corresponding to 17.25% of total. In the samples of the municipalities of Buritis and Unaí, 18.30% and 16.96% of the results were positive, respectively. In the municipality of Unaí, Associação do Funil was the community with the highest occurrence of the disease, 38.64%, while in the community of Pico the incidence was of 16.30% and in the other regions of the municipality, 12.5% of the results were positive. The samples of Associação do Funil, with 38.64% of positive results, are from small farms producing up to 300 L of milk and storing the product in cans. It is likely, therefore, that the low volume of milk, acidification, the presence of milk with mastitis, and even with colostrum, have contributed to an increase in false-positive results in this Associação. The national program for prevention of brucellosis should be intensified in the associations of small milk producers and properties with a positive result with three crosses, since the program more safely reduces the occurrence of false-positive results; however, the AAT test should be performed as confirmatory. / O objetivo neste trabalho foi verificar a ocorrência de brucelose bovina em vacas leiteiras nos municípios de Unaí e Buritis utilizando-se teste do anel do leite (TAL). Foram analisadas 423 amostras de leite coletadas no período de 5 de fevereiro a 3 de abril de 2014,na plataforma de recepção do laticínio e nas comunidades produtoras de leite. Dessas 423 amostras, 87 foram oriundas do município de Buritis e 336, de Unaí. Das amostras obtidas em Unaí, 200 foram coletadas na plataforma de leite de diferentes regiões do município; 92, da comunidade do Pico; e 44, na Associação do Funil. O TAL foi realizado estratificando-se as amostras positivas em cruzes. Do total de amostras analisadas, 73 apresentaram resultados positivos, correspondendo a 17,25% do total. Nas amostras dos municípios de Buritis e Unaí, 18,30% e 16,96% dos resultados foram positivos, respectivamente. No município de Unaí, a Associação do Funil foi a comunidade com maior ocorrência da doença, 38,64%, enquanto na comunidade do Pico a incidência foi de 16,30% e nas outras regiões do município, 12,5% dos resultados foram positivos. As amostras da Associação do Funil, com 38,64% de resultados positivos, são oriundas de pequenas propriedades, produtoras de até 300 L de leite e que armazenam o produto em latões. É provável, portanto, que o baixo volume de leite, a acidificação, a presença de leite com mamite, e até com colostro, tenham contribuído para o aumento de resultados falso-positivos nessa associação. O programa nacional de prevenção à brucelose deve ser intensificado nas associações de pequenos produtores de leite e nas propriedades com resultado positivo com três cruzes, uma vez que o programa reduz com maior segurança a ocorrência de resultados falsos-positivos,no entanto, deve-se realizar o teste AAT como confirmatório.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The dissertation was divided in three studies. Our first study determined the correlation between high somatic cell counts and positive milk ring tests (MRT). The milk ring test was performed on 181 milk samples from expansion tanks located at various rural sites in the regions of Brazil. Somatic cell counts (SCC) via flow cytometry were also performed. MRT identified 11 positive samples (6%) where the majority were reactive and 5 (2.8%) were found in the 6x105 cel/mL range. The results showed that there was no statistical relationship between high somatic cell counts and positive milk ring tests. Our second study evaluated the efficiency of an enzyme linked immunosorbent assay kit (ELISA) in diagnosing brucellosis in collective milk samples. The indirect ELISA test was used on 181 samples of fresh milk and identified 42 positive, 11 suspect and 128 negative samples. These results were compared to the MR test, the only test approved for collective milk samples by the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento). The ELISA test had sensitivity of 72.7%, specificity of 78.6% and a Kappa concordance index of 0.22. Subsequently, random samples from lactating animals in nine herds were tested individually by the rose Bengal test (RBT) and the 2-mercaptoethanol 2(ME) tests. Positive animals were found only in herds that tested positive in both ELISA and MRT. The ELISA test was neither as sensitive nor as specific as reported in other countries where the ELISA test is used and where brucellosis outbreaks have been confirmed in dairy herds. Our third study used the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique to detect Brucella abortus in samples of fresh milk. Ninety samples were preselected for the PCR test including 45 that tested positive in ELISA and/or MRT, 11 suspect in ELISA and 34 negative in both tests. Extraction was carried out by enzymatic lysis followed by amplification using BAB and IS 711 primers, which amplify fragments of 498 base pairs. Visualization was accomplished with 1% agarose gel and an Alpha Digidoc Photo Documentation system. Brucella abortus DNA was not amplified in any of the samples, demonstrating that PCR is not the best screening technique for brucellosis in milk samples at the herd level, given that these microorganisms do not always escape into the milk. / A dissertação foi dividida em três estudos. O primeiro objetivou verificar a existência de correlação entre altas contagens de células somáticas e reações positivas no Teste do anel em leite (TAL). Foram coletadas 181 amostras de leite oriundas de tanques de expansão provenientes de diferentes propriedades rurais e submetidas ao Teste de Anel em Leite (TAL). Também foi realizada a contagem de células somáticas (CCS) através do método de citometria de fluxo. O TAL resultou em 11 amostras positivas (6%), da quais, 5 (45,4%) encontravam-se na faixa de 6x105 cel/mL. Os resultados das análises demonstraram não haver associação estatística entre altas contagens de células somáticas e reações positivas no Teste de Anel em Leite. O segundo estudo teve como objetivo avaliar a eficiência de um kit de teste imunoenzimático indireto (ELISA) para diagnóstico de brucelose em amostras coletivas de leite. Amostras de leite in natura, totalizando 181, foram submetidas ao teste ELISA indireto. O teste ELISA identificou 42 (23,2%) amostras positivas, 11 (6%) suspeitas e 128 (70,7%) negativas. Para comparação foi utilizado o TAL. O ELISA apresentou sensibilidade de 72,7%, especificidade de 78,6% e um índice de concordância Kappa de 0,22. Posteriormente 9 rebanhos foram selecionados para realização de testes individuais de Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e 2-Mercaptoetanol 2(ME), por meio de amostragem aleatória dos animais em lactação. Foram encontrados animais reagentes apenas em rebanhos considerados positivos no TAL e no ELISA simultaneamente. Constatou-se que o teste ELISA apresentou valores de sensibilidade e especificidade inferiores aos relatados em outros países onde o teste ELISA já é utilizado, assim como foi confirmada a existência de focos de brucelose em rebanhos leiteiros. No terceiro estudo, a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) foi empregada para detecção de Brucella abortus em amostras de leite in natura. Foram selecionadas 90 amostras para realização da técnica de PCR, sendo 8 positivas no TAL, 37 positivas no ELISA, 11 suspeitas no ELISA e 34 negativas em ambos os testes. A extração foi realizada por meio de lise enzimática, seguida de amplificação utilizando primers BAB e IS 711, que amplificam fragmentos de 498 pares de bases. A visualização foi realizada utilizando gel de agarose 1% em fotodocumentador Alpha Digi Doc. Não foi amplificado DNA de Brucella abortus, demonstrando a PCR não se a melhor técnica para o diagnóstico de brucelose em amostras coletivas de leite. / Mestre em Ciências Veterinárias