Spelling suggestions: "subject:"mitocòndria"" "subject:"mitocôndria""
1 |
Clonatge, caracterització i regulació transcripcional del gen SA murí. Identificació de la proteïna i implicació de la mateixa en el metabolisme mitocondrialAresté i Calero, Cristina 21 June 2005 (has links)
Aquest treball està centrat en l'estudi i caracterització del gen SA de ratolí. Inicialment, en el nostre laboratori, es va identificar com un gen regulat per andrògens d'expressió exclusivament renal. Analitzant la distribució tissular del gen SA s'ha observat que s'expressa en altres teixits com el fetge, l'estómac o el testicle. S'ha aprofundit en l'estudi de la regulació del gen SA per part de les hormones sexuals, andrògens i estrògens, en el ronyó i el fetge de ratolí, òrgans a on s'expressa de forma abundant, especialment al ronyó.S'ha clonat el gen SA de ratolí complert, determinant l'organització genòmica i els límits exò/intrò; s'han obtingut diferents transcrits resultat de la transcripció del gen, la diferència entre ells es troba en la regió 5' gràcies a les diverses combinacions que es donen entre els tres primers exons no codificants del gen. S'han clonat 2 Kb del promotor pròxim del gen SA. Diferents fragments d'aquesta regió s'han fusionat al gen reportador luciferasa i les construccions obtingudes s'han utilitzat per determinar l'activitat promotora, en assajos de transfecció transitòria. Aquests assajos han permés definir i posteriorment analitzar possibles elements reguladors presents en el promotor SA, implicats tant en l'expressió basal com en la resposta andrògenica del gen, en vaires línies cel.lulars renals i una línia cel.lular hepàtica. S'han produït anticossos policlonals contra pèptids sintètics específics de la proteïna SA que han permés idenficar-la en extractes proteics de ronyó de ratolí. S'ha comprovat que la seva regulació androgènica és paral.lela a la del corresponent mRNA. La SA s'ha identificat com una medium-chain acyl-CoA synthetase mitocondrial, en aquest treball hem demostrat la seva localització mitocondrial en una línia cel.lular renal, així com, la seva activitat enzimàtica en front a un substracte hidrocarbonat com l'àcid octanoic. L'elevada homologia a nivell de seqüència aminoacídica que presenta la SA amb altres enzims acil-CoA sintetasa ens ha permés identificar un domini d'unió a l'àcid gras en la proteïna molt conservat en tots aquests enzims. Mitjançant tècniques de mutagènesi hem observat que algun dels aminoàcids que formen aquest domini podrien ésser essencials en l'activitat enzimàtica de la SA.Donat que la proteïna SA participa en el metabolisme dels àcids grassos, en aquest treball hem estudiat la possible implicació dels receptor nuclears PPAR sobre l'expressió del gen SA, realitzant estudis in vitro a nivell d'activitat promotora en assajos de transfecció transitòria i, realitzant estudis in vivo amb ratolins mascle que s'han sotmés al tractament farmacològic d'agonistes específics per aquests receptors. / This work is based in the study and characterization of the mouse SA gene. We had first identified the mouse SA gene on the basis of its strong androgenic regulation in mouse kidney. Analyzing the tissue distribution of the gene it has been observed that is expressed in other tissues like the liver, the stomach or the testicle. It has been study the regulation of the gene by sexual hormones, androgens and estrogens, in the kidney and the liver of mouse, organs where it are expressed of abundant form, specially in the kidney. The complete mouse gene has been cloned, determining the genomic organization and the exon/intron boundaries; they have been obtained different transcripts result from the transcription of the gene, the difference among them is in the region 5' thanks to the diverse combinations that occur between the three first untranslated exons of the gene. We have cloned 2 Kb of the SA gene promoter. Different fragments from this region have cloned to the reporter gene luciferasa vector and the obtained constructions have been used to determine the transcriptional activity, by transitory transfection. These tests have allowed to define and later to analyze some regulating elements in SA promoter, implied so much in the basal expression as in the androgenic regulation of the gene, in several kidney and liver cellular lines. Polyclonal antibodies raised against SA-specific peptides revealed it in mouse kidney extracts. The protein androgenic regulation is parallel that of the mRNA. The SA protein has been identified like a medium-chain acyl-CoA synthetase located in the mitochondria, in this work we have demonstrated its mitochondrial location in a renal cellular line, as well as, its enzymatic activity forehead to a hydrocarbon substratum like octanoic acid. The SA present elevated homology with other enzymes acyl-CoA synthetase has allowed us to identify a binding domain to fatty acid in the protein very conserved in all these enzymes. By means of mutagenic techniques we have observed that some of the amino acids that form this binding domain be able essential in the SA enzymatic activity. Since SA protein participates in the metabolism of fatty acids, in this work we have analised the possible implication of the PPAR's on the SA expression gene, having made studies in vitro of transcriptional activity by transitory transfection and, doing studies in vivo with mice male that have been put under the farmacologycal treatment of specific agonists for these PPAR's.
|
2 |
Regulation of transcriptional activation in response to heat stress and osmostressRuiz Roig, Clàudia 02 December 2011 (has links)
A Saccharomyces cerevisiae, un increment de la temperatura comporta diversos
efectes deleteris en l’organització interna de la cèl∙lula i indueix una inducció ràpida,
massiva i transitòria d’expressió gènica, que es controla principalment pels factors de
transcripció Hsf1 i Msn2/4. En aquest estudi, fent servir un crivatge genètic a gran
escala, hem identificat el conjunt d’activitats que es requereixen per a l’adaptació
cel∙lular a l’estrés tèrmic. A més, hem trobat que el complex de desacetilació
d’histones de Rpd3 és un component essencial per a l’adaptació i la supervivència a
l’estrés tèrmic, i que es requereix per a l’adequada regulació de l’expressió gènica.
Concretament, Rpd3 es necessita per a l’activació dels gens depenents de Msn2/4 en
resposta a estrés tèrmic. A més, hem trobat que és el complex gran de Rpd3, però no
el petit, el qui media l’adaptació cel∙lular.
Un increment en l’osmolaritat externa activa la quinasa activada per estrés (SAPK)
Hog1, que és essencial per induir diverses respostes adaptatives, com la regulació de
l’expressió gènica. Hog1 controla al menys cinc factors de transcripció. Aquí ensenyem
que els factors de transcripció Rtg1 i Rtg3 regulen l’expressió d’un conjunt de gens en
resposta a estrés osmòtic, d’una manera depenent de Hog1. En resposta a estrés
osmòtic, Hog1 es requereix per a l’acumulació nuclear del complex de transcripció de
Rtg1/3. Un cop al nucli, Hog1 es recluta als promotors i la seva activitat es requereix
per a la unió de Rtg1/3 a la cromatina. A més, la fosforilació de Rtg3 per Hog1 és un
pas important per a l’adequada activació transcripcional. / In Saccharomyces cerevisiae, increases in temperature lead to deleterious effects on
the internal organization of the cell, and lead to a massive and transient induction of
gene expression, mainly controlled by Hsf1 and Msn2/4 transcription factors. In this
study, by using a genome‐wide genetic screen, we identified the network of essential
activities required for cell adaptation to heat stress. Moreover, we found that the Rpd3
histone deacetylase (HDAC) complex is an essential component for adaptation and
survival to heat stress and it is required for proper regulation of gene expression.
Specifically, Rpd3 is needed for activation of the Msn2/4‐dependent genes in response
to heat stress. Moreover, we found that the large, but not the small Rpd3 complex
mediates cell adaptation.
Increases in the extracellular osmolarity activate the Hog1 stress‐activated protein
kinase (SAPK), which is essential for the induction of diverse osmoadaptive responses,
such as regulation of gene expression. At least five transcription factors have been
shown to be controlled by Hog1. Here we show that the Rtg1 and Rtg3 transcription
factors regulate the expression of a set of genes upon osmostress in a Hog1‐dependent
manner. In response to osmostress, Hog1 is required for the nuclear accumulation of
the Rtg1/3 transcription complex. Once in the nucleus, Hog1 is recruited at promoters
and its activity is required for the binding of Rtg1/3 to chromatin. Moreover, Rtg3
phosphorylation by Hog1 is an important step for proper transcriptional activation.
|
Page generated in 0.0391 seconds